徐昉；刘琼；周发春；陈军
目的:探讨术前介入化疗对大肠癌Smad4表达的影响.方法:应用免疫组化SP技术对15例经术前介入化疗的进展期大肠癌标本进行Smad4检测,并以18例经全身静脉化疗及21例未经化疗进展期大肠癌作为对照.结果:在3个组中Smad4的表达呈递增趋势(P<0.05),其阳性率为未经化疗的空白对照组19.0%(4/21)、全身静脉化疗组61.1%(11/18)、介入化疗组93.3%(14/15)(P<0.05).结论:术前介入化疗可使进展期大肠癌组织中Smad4表达明显增高,术前介入化疗可作为比全身静脉化疗更为有效的一种治疗进展期大肠癌的辅助化疗手段.
作者：李毅；程勇；张伟 刊期： 2008年第05期
目的:改进大鼠原位小肠移植(small bowel tansplantation,sBT)的三套管血管吻合技巧.方法:动脉吻合采用供体带肠系膜上动脉(superior mesenteric artery ,SMA)的腹主动脉(Abdominal aorta,AA)段两端与受体的腹主动脉套管吻合,静脉吻合采用供体的肝门静脉(Hepatic portal vein,HPV)与受体左肾静脉套管吻合.结果:60例接受小肠移植的大鼠存活率为93.3%(56/60),整个手术用时1.5～2h,其中动脉吻合用时(4±1)min,静脉吻合用时1min,动、静脉吻合共用时(4±2)min.结论:改进三套管血管吻合技巧既加快了吻合速度,缩短了手术时间,又减少了手术并发症,提高了手术成功率.
作者：张国云；钱学华 刊期： 2008年第05期
目的:探讨眶颧骨折继发复视等畸形的有效治疗手段,缩小眶腔的有效方法,重建眶腔的参考标准.方法:术前三维CT眶径测量,术中测量、修复重建后测量对比,按测量值复位扩大的眶腔,使用材料衬垫眶壁,缩小眶容积.结果:术前CT测量值能更准确了解骨折移位及眶腔变化,手术前后测量对比是眶修复重建的重要依据.结论:眼球三维CT眶径测量简便实用,准确性高,术后效果好,对眶颧骨折继发畸形治疗、眶重建、缩小眶腔容积,治疗复视、眼球内陷有指导意义.
作者：邓诚；归来；肖水生；钟大文；何玫；李颖；陈金华 刊期： 2008年第05期
目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫应答及其对结核分枝杆菌(Mycobacteriun tubetculosisMTB)毒株感染的保护力.方法:Balb/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,皮内免疫8周后处死小鼠,流式细胞分析仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化;取小鼠脾淋巴细胞体外培养并用PPD刺激,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI);ELISA法检测培养上清液中IFN-?;免疫后第8周,用MTB毒株H37Rv经小鼠腹腔注射,4周后处死小鼠,测定小鼠肺脏荷菌量,观察免疫小鼠对MTB抵抗作用.结果:H37Ra免疫小鼠脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞的百分率分别为(41.63±1.68)%、(27.08±0.58)%,显著高于NS对照组(38.34±0.74)%、(24.37±1.60)%(P<0.05). H37Ra免疫组脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD8+T细胞的百分率均不同程度地高于BCG免疫组,但差异无统计学意义.脾淋巴细胞SI和IFN-?水平检测均发现H37Ra免疫组显著高于NS对照组(P<0.05),略高于BCG免疫组.感染4周后H37Ra组小鼠肺脏荷菌量与NS对照组比较下降0.954log10CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性(P>0.05).结论:H37Ba免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗结核的细胞免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相近.
作者：王淑玲；刘来成；卢贤瑜；冯文莉 刊期： 2008年第05期
目的:探索缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(Brain tissue extract of hypoxia-preconditioned mice,BHP)对NGF诱导分化的PC12细胞缺氧耐受性的影响及保护性作用的适合浓度.方法:复制小鼠急性重复缺氧模型,制备BHP,用考马斯亮蓝法定量蛋白.在分化PC12细胞中加入BHP使其蛋白终浓度分别为1.0、10.0、100.0ìg/ml(BHP组).以等蛋白终浓度正常小鼠脑匀浆提取液(Brain tissue extract of normal mice,BN)作为对照组(BN组).同时设置只加PBS的溶剂对照组(PBS组).缺氧(2%O2)培养24、48、72h后,采用回唑盐(MTT)比色法检测各组细胞活力(OD570nm值)和乳酸脱氢酶(LDH)透出率、缺氧72h晚期凋亡率.结果:缺氧24h时,蛋白终浓度为10.0、100.0ìg/ml的BHP组OD570nm值显著高于同浓度BN组和缺氧PBS组,其LDH透出率显著低于同浓度BN组和缺氧PBS组.随缺氧时间延长,其保护作用逐渐减弱.至缺氧72h时,仅蛋白终浓度为100.0ìg/ml的BHP组OD570nm值显著高于同浓度BN组,其LDH透出率、晚期凋亡率均显著低于缺氧PBS组.结论:BHP对分化PC12细胞缺氧耐受性的增强作用有浓度依赖性和时间依赖性,蛋白终浓度为100.0ìg/ml的BHP组保护作用稳定、持久.
作者：李宏；高钰琪 刊期： 2008年第05期
目的:采用经济,简易的方法制备早产儿视网膜病变(Retinopathy of prematurity,ROP)的可量化动物模型.方法:新生鼠仔44只称重随机分为2组,实验组于出生后7d置于75%±1%氧箱内饲养5d然后回到正常空气饲养5d,对照组于正常环境饲养.ADP酶法视网膜铺片了解视网膜血管的改变,组织切片HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数,免疫组化法观察视网膜各层血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果:持续高浓度氧使鼠仔视网膜血管收缩变窄甚至闭塞,视网膜中央部大片无灌溉区,相对缺氧使视网膜大血管明显扩张、迂曲,大量结构异常的新生血管形成.实验组平均每个切面突破视网膜内界膜的内皮细胞核数为(32.800 0±0.767 8)个,对照组平均为(2.750 0±0.716 4)个,两者比较差异有显著性意义(P<0.01);对照组VEGF染色较实验组减弱.结论:该模型可重复性强、稳定性高、可定量研究.是研究早产儿视网膜病新生血管发生机制及相关治疗的合适模型.
作者：张琴；韦红 刊期： 2008年第05期
目的:探讨不同温度体外循环(Cardiopulmonary bypass,CPB)对兔体感皮层诱发电位(Somatosensory cortical evokedpotential,SCEP)和皮层神经元超微结构的影响.方法:成年新西兰白兔30只,雌雄不拘,体重(2.2±0.5)kg,随机分成3组(n=10),常温组(A组,维持CPB温度36℃～37℃)、浅低温组(B组,维持CPB温度32℃～34℃)和深低温组(C组,维持CPB温度26℃～28℃).维持Hct在20%～25%,建立开胸体外循环模型,转流量逐渐增加至160ml/min;转流2h后,经坐骨神经刺激,记录体感皮层诱发电位;经颈动脉灌注固定液,取顶叶皮层组织行电镜检查.结果:C组潜伏期高于B组,B组潜伏期高于A组,A、B、C 3组间两两相比,P<0.01差异有统计学意义;C组体感皮层诱发电位的波幅值低,A、B、C 3组间波幅值两两相比,P<0.01差异有统计学意义;大脑皮层神经元细胞核肿胀,异染色质凝聚增多,核基质电子密度降低,核周间隙扩大,胞质肿胀.损伤程度3组间区别不明显.结论:体外循环温度越低对大脑皮层神经细胞体感皮层诱发电位的潜伏期和波幅抑制越明显;深低温体外循环对皮层神经元超微结构保护作用不显著.
作者：马建军；闵苏；张光新；魏珂 刊期： 2008年第05期
目的:探讨多西紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-related poptosis-inducing ligand,TRAIL)体外诱导胃癌细胞凋亡的作用及可能机制.方法:采用MTT法检测不同浓度(1、5、10、20、40ìg/ml),不同时间(12、24、36、48h)T多西紫杉醇的抗癌活性并计算其亚毒性剂量.用流式细胞仪检测多西紫杉醇(亚毒性剂量)及TRAIL(200ng/ml)单独及联合应用后SGC7901的凋亡率.RT-PCR法检测DR4,DR5在加药前后的表达.结果:对照组(C组)、亚毒性剂量的多西紫杉醇(P组)、TRAIL(T组)及二者联合(T+P)作用24h后胃癌细胞的凋亡率分别为2.09%、10.65%、7.79%和24.51%,T+P组凋亡率明显升高,与C组、T组、P组两两比较时,差异具有统计学意义(P<0.05):多西紫杉醇处理组DR5表达增加.结论:多西紫杉醇与TRAIL具有协同抗胃癌作用,其机制可能与DR5表达的上调有关.
作者：苏艳新；王立 刊期： 2008年第05期
目的:观察RNAi沉默膀胱癌BIU-87细胞磷脂酶C-ε(Phospholipase C epsilon,PLCε)表达后对藏花素(Crocin)抑制人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响.方法:将携有siRNA基因的真核表达质粒PGenesil-PLC?转染BIU-87细胞后,分为5组:未转染组、pGenesil-NP阴性质粒组、pGenesil-PLC ε质粒组、Crocin组、pGenesil-PLCε联合Crocin组.MTT法观察不同处理组对BIU-87细胞的生长抑制作用.RT-PCR法检测转染后对PLCε mRNA表达的影响及各处理组PCNA(Proliferating cellnuclear antigen)、CyclinD1 mRNA表达.Western-blot检测PCNA、CyclinD1蛋白表达.结果:RNAi可抑制BIU-87细胞78.06%的PLCεmRNA表达.pGenesil-PLCε联合Crocin组可增强Crocin对BIU-87细胞的生长抑制作用,48h抑制率达45.30%,且与pGenesil-PLCε质粒组和Crocin组相比较有显著性差异(P<0.01).RT-PCR和Western-blot结果显示与RNAi沉默PLCε组比较,RNAi PLC?联合Crocin组明显下调了PCNA、Cyclin D1基因和蛋白的表达(P<0.05);较单独Crocin组比较,RNAiPLC ε联合Crocin组显著降低了PCNA基因和蛋白的表达(P<0.05),降低了Cyclin D1蛋白的表达(P<0.05),Cyclin D1 mRNA表达变化两组间无显著性差异(P>0.05).结论:沉默PLC ?基因可增强Crocin对BIU-87细胞的抑制作用,其机制与进一步下调PCNA、CyclinD1的表达有关.
作者：冀慧莹；吴绮思；郭永灿；吕纯芳；赵培；罗春丽 刊期： 2008年第05期
目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)复活促进因子A(Resuscitation-promoting factor,ARpfA)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化.方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfA基因(1 224bp),然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32aα(+)载体连接,转入大肠杆菌Top10;阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定.测序正确后,将重组质粒转化到的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由盯启动子调控表达了RpfA蛋白;利用His-tag in-gel Stain对表达蛋白进行鉴定,后对目的蛋白进行纯化.结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道一致.经SDS-PAGE分析和His-tag in-gel Stain鉴定均发现66ku处有特异性蛋白条带.结论:成功克隆并构建了RpfA基因的重组表达质粒pET32 α(+)-RpfA,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.
作者：徐蕾；帖儒修；王爽；王瑜伟；李娜；何永林；蒋仁举 刊期： 2008年第05期
目的:探讨兔VX2肺鳞癌模型的建立方法及其生物学特性.方法:自身接种传代保存的VX2肿瘤组织块,移植到健康兔肺内,建立兔肺鳞癌模型.通过肺部X片观察肿瘤生长情况,待其不同时间死亡后进行大体标本肺、心、肝、肾、脑和淋巴结形态学观察.结果:(1)建模成功率为100%.(2)形态学显示肺部肿瘤呈弥漫性分布,大小不等,呈结节样,表面鱼肉样.接种肿瘤6d时除脑组织外,心脏、淋巴结、肝脏和肾脏均见明显的转移瘤,并呈侵润性生长.(3)病理组织学和免疫组化证实为来源于上皮组织的鳞状细胞癌.结论:采用组织块移植法建造兔VX2肿瘤动物模型,不仅具有方法简单、无感染和成瘤率高的特点,而且VX2肿瘤的生物学行为与人类肿瘤相似,恶性程度高,对于大型动物建立肺癌模型具有较高的指导意义.
作者：张会军；王莎莉 刊期： 2008年第05期
目的:采用星点设计-效应面法(central composite design-response surface methodology,CCD-RSM),考察蒽酮-硫酸法测量白芨多糖含量的可行性和适用条件.方法:以葡聚糖T20为标准品,以多糖溶液与蒽酮试剂比例、水解显色时间、室温冷却时间为自变量,621.0nm处的吸光度为因变量,对自变量各水平进行多元线性回归和二项式拟合,考察因变量和自变量间的相互关系,采用效应面法优化蒽酮-硫酸法测量白芨多糖含量的适用条件.结果:当多糖溶液与蒽酮试剂比例为1:2,水解显色时间8.00min,室温冷却放置15.00min时,测定葡聚糖T20和白芨多糖含量具有良好的相关性.结论:星点设计-效应面法可以用于评估以葡聚糖T20为标准品、蒽酮-硫酸法测量白芨多糖含量的可行性,并优化测量含量的适用条件.
作者：匡扶；朱照静；马俐丽；程安媛 刊期： 2008年第05期
目的:探索离体大鼠海马脑片培养方法,观察培养脑片的形态变化和细胞反应性.方法:选择生后6～9d的Wistar鼠,分离海马,切成400ìm厚的脑片,转移至带有微孔膜插件的6孔培养板内,人37%的CO2培养箱中进行培养.通过肉眼、倒置相差显微镜观察培养海马脑片的形态学变化;用免疫组化染色检测脑片神经细胞内Fos蛋白表达变化,以判断培养脑片有无对外界伤害性刺激的应激反应能力;用膜片钳技术检测神经细胞的电生理活动,以判断培养海马脑片的活性和生理功能.结果:(1)随着体外培养时间延长,培养脑片内神经细胞数目增多,而脑片明显变薄,至培养4周时厚度约150ìm厚.(2)致癫痫样发作药物匹罗卡品作用于脑片后,导致培养海马脑片CA1区细胞内Fos蛋白表达增高.(3)利用膜片钳技术,在培养1、2、3、4周的4个时点对海马脑片CA1区锥体细胞作全细胞记录,皆记录到细胞电流变化图形.结论:本方法在体外培养的海马脑片至少可存活4周,且具备良好的活性和一定的生理功能.
作者：何志慧；蒋莉；陈恒胜；张晓萍 刊期： 2008年第05期
目的:探讨产前用地塞米松(Dexamethasone,Dex)对胎鼠肺和肝组织维生素A(Vitarain A,VA)水平的影响.方法:健康清洁级SD大鼠随机分为Dex组和生理盐水(NoHnal saline,Ns)对照组,妊娠第16、17、18d连续3d分别给予药物干预后,第19d剖宫取出胎鼠,测定肺和肝组织VA水平,观察Dex对组织VA水平的影响.结果:(1)胎鼠肺和肝单位组织VA水平Dex组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),尤以肺单位组织VA水平升高明显(P<0.01).(2)胎鼠肝组织VA总水平两组比较差异无统计学意义(P>0.05),而肺组织VA总水平Dex组仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:产前用Dex可以提高胎鼠肺和肝单位组织VA水平,同时提高胎鼠肺组织VA总水平,但对胎鼠肝组织VA总水平无显著影响.
作者：房春晓；陈贻骥；瞿平；刘友红 刊期： 2008年第05期
目的:观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的成熟3T3-L1脂肪细胞分泌视黄醛结合蛋白4(Rtinol BindingProtein 4,RBP4)的影响.方法:体外培养3T3-L1细胞,待细胞完全融合后两天进行诱导分化为成熟脂肪细胞,应用不同浓度的重组TNF-α干预,采用放射免疫分析法检测干预后不同时间成熟脂肪细胞RBP4的分泌量.结果:(1)不同浓度TNF-α(0.2、1.0、5.0、10ng/ml)对脂肪细胞RBP4的分泌均有抑制作用,其抑制效应呈剂量依赖性:随着TNF-α浓度的增加,RBP4水平降低越加明显.(2)各实验组随着干预时间延长,RBP4虽有降低之趋势,但组内各时间点差异无统计学差异.(3)二元回归分析提示TNF-α对RBP4有影响.结论:TNF-α能抑制成熟脂肪细胞RBP4的分泌,其抑制效应有剂量依赖性,而与干预时间无关.
作者：未友能；青华；段炼；梅玫；程庆丰；李启富 刊期： 2008年第05期
目的:构建LMP-3功能区真核表达重组质粒.方法:设计合成LMP-3活性区引物,应用PCR方法,扩增其基因片段,亚克隆至真核表达质粒pEGFP-N1,终构建重组表达质粒pEGFP-N1-LMP-3,同时进行酶切鉴定和测序.结果:PCR扩增LMP-3基因序列正确,构建的重组表达质粒pEGFP-N1-LMP-3经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切及测序鉴定正确.结论:成功获得真核表达重组质粒pEGFP-N1-LMP-3,为进一步研究其成骨功能奠定基础.
作者：杨渝勇；倪卫东 刊期： 2008年第05期
目的:了解重庆地区变应性鼻炎的常见变应原.方法:采用11种吸人性变应原和10种食人性变应原对重庆地区738例变应性鼻炎患者进行皮肤点刺试验.并比较不同年龄段和不同性别在变应原阳性率分布上的差异.结果:吸入组多见的变应原依次为室尘(91.33%)、螨(83.88%)、早春花粉(68.97%)、晚春花粉(66.67%)、夏秋花粉(61.25%)、烟草(58.94%)、蟑螂(55.28%).食人组变应原以海虾(62.47%)和螃蟹(60.43%)为主.结论:室尘、螨、早春花粉、晚春花粉、夏秋花粉是重庆地区重要的变应原.
作者：钱迪；洪苏玲；杨玉成；王档琴；董小琴；柯霞；朱丽敏 刊期： 2008年第05期
目的:探讨噪声对生长发育期大鼠学习记忆能力的影响及其机制.方法:将24只Wistar幼鼠,随机分为噪声组和对照组,噪声组在90dB(A)噪声下持续暴露1个月,用Morris水迷宫测定大鼠的空间学习记忆能力,用免疫组化法观察其海马区氨基丁酸(Aminobutyric acid,GABA)阳性神经元的表达.结果:在Morris水迷宫试验中,噪声组寻找平台的潜伏期较对照组延长(P<0.05),末次跨台次数较对照组减少(P<0.01).噪声组海马区GABA阳性神经元的数量及染色强度较对照组显著降低.结论:噪声可使生长发育期大鼠学习记忆能力下降,这可能与海马区GABA的合成减少,使神经元的突触抑制效应减弱,LTP的诱导和维持受损有关.
作者：汤艳；程淑群；袁海艳；涂白杰 刊期： 2008年第05期
目的:探讨永生化人支气管上皮细胞(HPV-18 immortalized human bronchial epithelial cells,BEP-2D)恶性转化过程中p16基因甲基化改变.方法:选取正常BEP-2D细胞及经过烟草悬凝物处理后的15周(week-15,W-15)、25周(W-25)、38周(W-38)和43周(W-43)的BEP-2D细胞作为研究对象,采用巢式MSP(Nested-methylation-specific PCR,Nested-MSP)检测各细胞株中p16基因的甲基化改变情况.结果:正常BEP-2D细胞p16基因未发生甲基化,而烟草悬凝物处理后的15周、25周、38周和43周的BEP-2D细胞p16基因发生甲基化.结论:p16基因甲基化改变可能发生在肺癌形成的早期,检测p16基因甲基化可以作为肺癌早期辅助诊断的生物标记物之一.
作者：张诚；吴庆琛；李强；朱茂祥；杨陟华；潘秀颉；谢俊豪 刊期： 2008年第05期
目的:探讨高强度聚焦超声(High intensity focused ultrasound,HIFU)治疗子宫腺肌瘤的有效性和安全性.方法:16例典型子宫腺肌瘤进行高强度聚焦超声治疗,超声实时监控.以彩超或增强MRI比较治疗前后子宫腺肌瘤体积、血供变化,以及随访治疗前后患者月经、痛经程度和血红蛋白变化来判断治疗效果.结果:高强度聚焦超声治疗子宫腺肌瘤后,子宫腺肌瘤血供明显减少甚至消失,体积缩小明显(57.16%),月经周期和月经期缩短,月经量减少50%,所有患者的痛经症状均完全缓解,Hb水平全部恢复正常,无不可接受的并发症.结论:高强度聚焦超声治疗子宫腺肌瘤具有良好的安全性和有效性.
作者：彭松；周崑；张炼；黎克全；杨炜；金成兵；冉立峰；朱辉；陈文直；王智彪 刊期： 2008年第05期
重庆医科大学学报杂志
主管:重庆市教育委员会
主办：重庆医科大学
