刘涛；张超；吕伟；刘佳；刘立业；甘露
目的 探讨熊果酸诱导人急性白血病细胞凋亡的作用机制.方法 将0、5、10、15、20 μmol/L的熊果酸作用于U937细胞6、12 h,观察昔效关系.用20 μmol/L熊果酸作用U937细胞1、3、6、9、12、24 h,观察时效关系.采用AnnexinV/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡.用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-9及Bcl-2家族基因Mcl-1、Bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bad的表达,用β-actin做内参照.20 μmol/L熊果酸作用于不同类型的急性自血病细胞(U937、Jurkat、HE60)12 h,用流式细胞仪检测细胞凋亡,并用Western blot方法 检测Caspase-3、Caspase-9、PARP的表达.结果 熊果酸作用于U937细胞引起细胞发生凋亡,并呈明显的量效和时效关系.Western blot结果表明,熊果酸引起凋亡蛋白酶Caspase-3、Caspase-9的降解/活化增加,促进凋亡作用底物PARP的降解增加.熊果酸还可引起抗凋亡蛋白Mcl-1的表达降低,但对Bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bad的表达均无明显影响.结论 熊果酸可诱导多种急性白血病U937、Jurkat、HL60细胞发生凋亡.Mcl-1的下调可能在熊果酸诱导急性白血病细胞凋亡中起着重要的作用,其作用机制可能为熊果酸引起Mcl-1的下调,随后引起凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9的降解/活化及PARP的降解,终促进细胞凋亡发生.
作者：王晓芹；曹波；高宁 刊期： 2009年第02期
目的 研究糖尿病大鼠胰腺绀织氧化应激的情况及福辛普利干预后胰岛功能及胰腺组织的免疫组化改变.方法 21只大鼠分对照组、糖尿病组、福辛普利干预组,糖尿病组用高脂进行喂养制作糖尿病模型,干预组喂以福辛普利(5 mg/kg),在病程小同时点测定血糖、体质量及胰腺组织中硝基酪氨酸的含量,并观察胰腺组织免疫组化改变.结果 糖尿病组0与正常对照组胰腺硝基酪氨酸含量比较明显增高(P＜0.01);福辛普利干预组与糖尿病组胰腺中硝基酪氨酸含量比较明显降低,氧化应激水平亦降低(P＜0.05).结论 精尿病大鼠胰腺组织的氧化应激存在异常,福辛普利时糖尿病大鼠胰腺氧化应激存在抑制作用.
作者：闫纪强；刘东方；周厚地；徐鑫 刊期： 2009年第02期
目的 体外细胞培养观察利胆药物熊脱氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)及其衍生物牛磺熊脱氧胆酸(tauroursdeoxycholic acid,TUDCA)或利福平(rifampicin,Rif)对多耐药相关蛋白3(multidrug resistance.associate protein 3,MRP3)及其核受体FTF(fetoprotein transcription factor)表达的影响.方法 用UDCA及其衍牛物TUDCA或Rif分别刺激培养的肝癌细胞 HepG2 后,抽提 HepG2 的总 RNA 与细胞总膜蛋白、核蛋白,分别用Quantitative real-time PCR和Westernblot检测MRV3和FTF mRNA 与蛋白水平表达的变化.结果 UDCA及其衍牛物TUDCA与Rif均可诱导HepG2细胞内核受体FTF表达增高,同时MRP3 mRNA和蛋白水平表达也相应增高.结论 UDCA及其衍生物TUDCA和Rif刺激肝癌细胞HepG2细胞膜转运蛋白MRP3表达上调可能与核受体FTF途径相关.
作者：柴进；吴晓平；夏锋；何宇；王槐志；肖天利；陈文生 刊期： 2009年第02期
目的 构建survivin特异性短发夹RNA(shRNA)的表达载体,探讨其对人膀胱移行细胞癌T24细胞的生物学行为的影响.方法 将构建survivin特异shRNA表达载体转染T24细胞,RT-PCR、Western blot检测survivin mRNA及其蛋白的表达水平;通过细胞生长曲线、随机运动实验、Matrigel穿膜实验检测肿瘤细胞生长、运动及体外侵袭能力.结果 经EcoR I和Hindm双酶切和测序鉴定,成功筛选含目的 DNA片段的重组载体pshRNA-survivin2,并成功转染T24细胞;转染pshRNA-survivin2后町显著抑制细胞中survivin mRNA及其蛋白的表达,抑制率分别为61.73%和73.27%;pshRNA-sur-vivin2组的细胞侵袭力与运动能力均有明显的下降,第3、5大时肿瘤细胞生长抑制率分别为59.13%、83.86%.结论 应用pTZU6+1质粒载体构建survivin的shRNA表达载体,能有效抑制其survivin mRNA及其蛋白的表达,并可抑制T124细胞的增殖、运动及体外侵袭能力.
作者：杜虎；吴小候；罗春丽；刘川；曾柯；何云锋；尹志康 刊期： 2009年第02期
目的 研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路与基质金属蛋白酶-26(ma-trix metalloproteinase-26,MMP-26)在肺腺癌表达的相关性及意义.方法 应用免疫组织化学(S-P)法检测pERK、pp38MAPK及MMP-26在44例肺腺癌组织巾的表达.Western blot柃测U0126阻断ERK信号通路后肺腺癌A549细胞MMP-26蛋白表达水平的变化.分析 pERK和MMP-26表达与肺腺癌预后的关系.结果 pERK、pp38MAPK及MMP-26蛋白在肺腺癌组织巾高表达率分别为59.1%、20.4%、54.5%,pERK与MMP-26表达存在正相关(r=0.63,P＜0.05),并与肺腺癌的临床分期及淋巴转移状况有统计学差异(P＜0.05),而与患者年龄、肿瘤大小无统计学差异(P＞0.05).pp38MAPK与MMP-26表达无关(r=0.01,P＞0.05),与患者年龄、淋巴转移、肿瘤大小、临床分期均无统汁学差异(P＞0.05).用ERK阻断剂U0126阻断ERK信号通路可降低MMP-26蛋白表达水平,并且随U0126浓度升高MMP-26蛋白表达水平逐渐降低.肺腺癌组织pFRK、MMP-26蛋白的表达与肿瘤的预后显著相关(分别为Log-Rank=5.52、Log-Rank=7.01,P=0.019、P=0.008).结论 ERK信号通路可能通过上凋MMP-26的表达促进肺腺癌的恶性进展,ERK信号通路可能是肺腺癌侵袭和转移的重要途径,pERK和MMP-26的表达可辅助用于肺腺癌的预后评估.
作者：黎联；梅同华；周向东；张新高；车德亚 刊期： 2009年第02期
目的 重组表达幽门螺杆菌(Helicobacterpriori,Hp)cagL基因,并制备兔抗多克隆抗体及阻断Hp黏附宿主细胞实验.方法 用PCR方法 扩增出cagL基因片段,将目的 基因构建至表达载体pET22b中并诱导表达.采用亲和层析法纯化蛋白,以纯化蛋白为抗原免疫家兔,制备兔抗CagL多克隆抗体血清,并用多克隆抗体血清进行阻断坳黏附宿主细胞实验及细胞因子IL-8活性分析.结果 成功构建表达纯化了CagL重组蛋白,制备CagL蛋白兔抗多克隆血清,并初步验证了多克隆抗体血清在体外和Hp黏附作用的关系.与对照菌相比,重组菌CagL在25 X 103.附近均出现新的蛋白表达条带,且诱导6 h时表达量高.UVP扫描分析目的 蛋白占菌体总蛋白的35%～40%.SDS-PAGE显示重组蛋白CagL主要以包涵体形式存在于超声沉淀中.ELISA结果显示兔抗CagL多克隆抗体的滴度为1:16 000 EU.Giemsa染色后显微镜观察可见坳菌与HeLa细胞呈典型的聚集性黏附,抗体中和后Hp与HeLa细胞未见黏附,加入DH5α的HeLa细胞也未见细菌黏附.结论 多克隆抗体血清对Hp黏附定植有一定阻断作用,并且可以减少Hp促进细胞分泌IL-8的能力.
作者：钟情；邹全明；郭刚；章金勇；张晓丽 刊期： 2009年第02期
目的 探讨由丹参诱导骨髓问充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)定向分化的神经细胞是否具有突触循环功能.方法 采用优化诱导方案对4～5代状态好的MSCs进行反复多次诱导,终止诱导后分别进行免疫荧光细胞化学、细胞内钙离子流及突触功能检测.以50 mmol/L KCl作为诱发动作电位的刺激因子,采用激光共聚焦显微镜(ISCM)埘Fluo-3/AM和SynaptoRed C-2荧光探针进行荧光激发,检测分化神经细胞存细胞外高钾刺激下细胞内钙流及细胞突触功能.结果 4次诱导5 h后,神经样细胞伸出突起并交互成复杂网状;免疫荧光细胞化学显示4次诱导5 h后TUJ-1表达率为(96.7 ±2.8)%,突触小泡蛋白(synaptophysin)表达率为(96.2 ± 2.1)%;LSCM显示4次诱导5 h后细胞在高钾刺激下细胞内钙流增加,细胞突触发生胞吞胞吐.结论 丹参可高效快速诱导MSCs分化为神经细胞,此细胞具有止常的突触循环功能.
作者：胡琳燕；余加林；李芳；刘官信；李禄全 刊期： 2009年第02期
目的 探讨膜一细胞骨架联接蛋白Ezrin埘骨肉瘤细胞株UMR106成瘤及转移能力的影响.方法 为获得较好的干扰效果,针对大鼠Villin2基因(Ezrin编码基因)没计2个发夹式RNA(shRNA).合成后克隆入载体pGenSil-1,扩增并中量提取质粒,应用脂质体LipofectamineTM2000转染进UMR106细胞.采用逆转录聚介酶链反应(RT-PCR)和West-ern印迹检测Ezrin的表达.选取效果好的shRNA转染UMR106细胞并行G418筛选,传代扩增.扩增后细胞原位接种到SD大鼠胫骨结节,并设立正常细胞组和阴性对照组,观察记录肿瘤彤成和大鼠存活时间,计数肺表面转移灶数目,镜检定位增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)在原发灶和肺转移灶内的表达.结果 ①shRNAI干扰作用明显,下调达90%.②移植时稳定转染细胞数约50%.③实验组与对照组均100%成瘤,成瘤时间正常细胞组为(10.25±1.07)d,阴性对照组为(10.08 ±0.88)d,实验组为(10.30±1.08)d,三者间没有明显差别(P＞0.05);实验组存活时间(42.30±17.25)d明显长于正常细胞组(20.60±11.70)d(P＜0.01)和阴性对照组(22.40±7.42)d(P＜0.01);实验组肺转移灶数目明显低于正常细胞组(P＜0.01)和阴性财照组(P＜0.01),分别为(39.40±51.86)个、(124.60 ±39.78)个和(117.60±36.48)个;阴件对照组中原发灶和肺转移灶内均有EGFP表达,而实验组肺转移灶内末见EGFP表达.结论 Ezrin蛋白是骨肉瘤肺转移中的一个关键因子,干扰Ezrin蛋白表达能抑制其肺转移的发生,可以作为预防肺转移的靶点.
作者：王忠良；李旭良；张德文；李明；覃佳强；刘传康；刘星；曹豫江 刊期： 2009年第02期
目的 构建猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷株.方法 利用同源重组基因敲除方法 获得S. Suis 2强毒株05ZYH33荚膜合成基因cps2B敲除突变株,通过小鼠攻毒实验证实荚膜缺陷株对细菌毒力的影响.结果 PCR和Southern杂交结果均显示cps2B基冈完全被壮观霉素抗性基因替代,表明基因敲除突变体构建成功.电镜结果证实突变体荚膜合成能力缺失,小鼠致病性实验结果显示突变体毒力基本丧失.结论 成功构建05ZYH33荚膜缺陷株,提示菌体荚膜多糖成分对于猪链球菌2型侵袭和致病具有显著作用.
作者：胡丹；王长军；胡福泉；王晶；程功；李明；潘秀珍；唐家琪 刊期： 2009年第02期
原发性三叉神经痛(trJgeminal neuralgia,TN)是一种常见的颅面部疼痛[1],发病机制至今未明.TN可分为原发性和继发性2种.原发性TN治疗方法包括内科治疗和外科治疗,临床上在内科治疗无效或药物不良反应明显时多采用外科治疗,但理想的手术方式尚在进一步研究中.
作者：王典春；李栋平；朱兴宝；邓询鼎 刊期： 2009年第02期
目的 通过核磁共振弥散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)来反映南于正常老化弓I起的脑组织弥散及各项异性改变.方法 通过对年轻组及其年老组脑组织的弥散张量成像,获得腑组织的平均弥散(average diffusion coeffi-cient,ADC)图及部分各项异性(fractional anisotropy,FA)图,分别测量不同必趣部佗(region of interest,ROI)的ADC值及FA值,通过统计学分析来反映2组相应部位脑组织弥散及各项异性的差异,并探讨引起这种改变的原因.结果 分别对于年轻组和年老组的对称部位而言,左右侧的ADC值及FA值没有差异(P＞0.05).除内囊膝部外,年老组各个兴趣区的ADC值均大丁年轻组(P＜0.05);而对于FA值而言,所有测茸部位的FA值在年老组均比年轻组低(P＜0.05).结论 DTI 可以反映由于止常老化所引起的脑组织弥散、各向异性改变,从而反映腑组织微结构及完整性的改变.
作者：钟维佳；赵建农；吴伟；陈维娟 刊期： 2009年第02期
目的 探讨RNA T扰对胃癌细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)转录和蛋白表达的作用以及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建人HIF-1α基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并转染胄癌细胞BGC-823;采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α mRNA、蛋白表达水平;MTT法检测转染后对胃癌细胞生长的抑制;TUNEL法观察细胞的凋亡情况;流式细胞术分析转染后胃癌细胞的细胞周期和凋亡率.结果 成功构建了pshRNA-HIF-1α1和pshRNA-HIF-1α2重组质粒;转染BGC-823后,与空质粒组相比,pshRNA-HIF-1α1可有效抑制BGC-823细胞HIF-let基因转录和蛋白质表达,抑制率分别可达93.4%和55.7%;MTT法显示转染后细胞生长明显受到抑制;流式细胞术结果表明转染后,其凋亡率明显高于卒质粒绀(P＜0.05),BGC-823细胞增殖活性显著降低,G0～G1期细胞比例明显增加,S期与G2.～M期细胞比例减少;TUNEL法显爪转染后细胞核固缩,核染色质聚集或断裂;体内实验显示,pshRNA-HIF-1α1的抑瘤率为41.75%.结论 体内、外初步实验证实pshRNA-HIF-1α1能有效抑制胃癌细胞BGC-823 HIF-1α基因表达,抑制胃癌细胞增殖,诱导其凋亡.
作者：周炜；姜政；张滨；向廷秀；黄爱龙；王丕龙 刊期： 2009年第02期
原始神经外胚层瘤(primifive neuroectodermal tumor,PNET)是一组起源于神经嵴胚胎残留的高度恶性肿瘤,位于颅内幕上原始神经,极为罕见[1].现将我院误诊1例报告如下.
作者：黄毅；黄旭；崔高宇；冯华 刊期： 2009年第02期
目的 总结支架结合弹簧圈栓塞治疗颅内宽颈动脉瘤的技巧及结果.方法 采用支架结合弹簧圈栓塞治疗颅内宽颈动脉瘤20例.结果 栓塞程度:致密柃塞15例,栓塞90%以上3例,90%以下2例.术中出血2例,1例死亡.结论 采用支架结合弹簧圈可以明显提高颅内宽颈动脉瘤的致密栓塞率.
作者：陈立朝；许民辉；杨东虹；邹咏文；张云东 刊期： 2009年第02期
目的 探讨高血压病患者血压节律变化与左心室及颈动脉重构的关系.方法 选择原发性高血压患者149例,根据动态血压(ABPM)检测结果将昼夜血压节律曲线分为杓型和非杓型2组,将这2组患者的ABPM、超声心动图(UCG)及颈动脉超声的参数进行比较.结果 非杓型组比杓型组24 h SBP、24 h DBP、nSBP、nDBP、IVST、LVPWT、LAD、LVMI、A/E、IMT、D、RI及颈动脉斑块检出率明显增高(P＜0.05,P＜0.01),而PSV和EDV则显著下降(P＜0.05).左室构型上两者也有明显差异(P＜0.05,P＜0.01),非杓型组向心性重构或左窒肥厚者明显多于杓型组.结论 非杓型动态血压节律较杓型节律的高血压患者有更严重的心脏及大动脉损害.ABPM、UCG及颈动脉超声对高血压的诊断与治疗,评价预后及判断靶器官损害等方面都有重要的意义.
作者：徐幸；岳瑞华；沈均乐；唐渝萍；史若飞；黄凌 刊期： 2009年第02期
目的 应用CK20和CDX2检测直肠癌D3淋巴结微转移的规律.方法 将2006年12月至2008年6月在本科诊断为Dukes B期和Dukes C期的68例中低位直肠癌患者,分组行开腹和腹腔镜下直肠癌D1根治术,将切除的淋巴结做HE染色一抗为CDX2和CK20的免疫组化染色,判定转移和微转移情况.结果 68例病例共检出1 571枚淋巴结,平均每例23.1枚.其巾,侧方淋巴结微转移者7例,占10.3%,上方淋巴结微转移者6例,占8.8%,D3淋巴结微转移共13例,占19.1%.结论 通过CDX2和CK20的检测,Dukes B期和C期的中低位直肠癌患者D,淋巴结微转移的概率较大,应常规行D3根治术.
作者：刘涛；张超；吕伟；刘佳；刘立业；甘露 刊期： 2009年第02期
目的 评价血清P53蛋白对原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断的临床价值,分析并探讨血清P53蛋白对HCC动态监测及治疗的临床意义.方法 采用ELISA检测血清P53蛋白的浓度,同时结合Western blot和免疫组化结果分析130例标本P53蛋白的表达情况,利用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)比较血清P53蛋白和AFP榆测结果.结果 ELISA检测显示HCC患者血清P53蛋白浓度显著高于健康体检者及肝硬化患者(P＜0.05);血清Western blot结果显示在53×103.处可检测到单一的条带,血清P53蛋白浓度升高与Western blot检测的光密度值密切相关.免疫组化检测P53蛋白阳性率为64.62%,血清P53蛋白检测与免疫组化检测结果符合率达84.62%;ROC曲线分析显示血清P53蛋白检测和AFP检测曲线下而积分别为0.910和0.954,二者Kappa:0.657,P=0.000,表明2种方法 的检测结果有止相关关系,检测结果吻合.结论 血清P53蛋白浓度升高能较好地反映p53基因的突变,对肝癌的临床诊断、治疗和动态监测有一定的临床意义,并可作为HCC手术后动态监测和指导临床治疗的一个的生物学指标.
作者：曹晓静；王东；张沁宏；仲召阳；李增鹏；王阁 刊期： 2009年第02期
目的 探讨抑癌基因PTEN、P27及转化生长因了β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在宫颈腺癌中的表达及三者之间的相关性.方法 采用免疫组化S-P法检测43例官颈腺癌,18例正常宫颈组织石蜡切片中 PTEN、P27及TGF-β1的表达.结果 43例宫颈腺痛组织PTEN、P27阳性表达率分别为62.79%、55.81%,均明显低于止常宫颈组织(P＜0.05).VFEN、P27的阳性表达率在临床分期为Ⅱa及以上官颈腺癌组织中明显降低(P＜0.01),且在高分化腺癌组织中呈高表达.TGF-β1.的阳性表达率在正常官颈组(11.11%)与宫颈腺癌组(5.88%)之间差异无统计学意义(P＞0.05),TGF-β1蛋白表达与官颈腺癌的临床及病理特征无统计学差异(P＞0.05).宫颁腺癌组织中PTEN与P27蛋白表达呈正相关(r8=0.808,P＜0.01),TGF-β1表达与PTEN、P27无关.结论 PTEN、P27对宫颈腺癌预后判断有一定参考价值.官颈腺癌的发生及进展nr能与TGF-β1蛋白表达无关.
作者：杨君；唐良萏；王彬 刊期： 2009年第02期
目的 检测CHO细胞中稳定表达人整合素β,对登革2型病毒(Dengue virus serotype 2,DV2)感染的影响.方法 将表达人整合素β3的质粒转染CHO细胞,通过G418筛选、流式细胞学检测和间接免疫荧光实验,建立稳定表达整合素β3的CHO细胞株;利用该细胞株进行感染实验,柃测人整合素β3稳定表达对DV2易感性的影响.结果 共获得了C9、C10、F8和H6 4个高表达整合素β3的细胞克隆,其中克降F8中整合素β3的表达水平高,是对照组的1.89倍.感染实验结果显示,进入整合素β3高表达细胞株的病毒数量均有所增高,增高的比例与整合素β3的表达增高趋势基本一致,进入F8细胞株的病毒量高,是财照细胞的2.63倍,说明整合素β3有助于DV2进入细胞..结论 在CHO细胞中外源性表达整合素β3可以提高DV2的感染率.
作者：张俊磊；高娜；陈炜；陈宗涛；徐小峰；安静 刊期： 2009年第02期
输卵管扭转是一种较为少见并缺乏特异性表现的急腹症,临床一时难以确诊,常被误诊为急性阑尾炎、卵巢肿瘤蒂扭转等,传统术式为切除患侧输卵管,这无疑增加了不孕症的发病率.本院收治1例青春期输卵管扭转并保留输卵管治疗成功,现报告如下.
作者：张流；冯惠玲 刊期： 2009年第02期
第三军医大学学报杂志
主管:第三军医大学
主办：第三军医大学
