李代蓉；周清华；郭占林；袁天柱；朱文；王艳萍；陈晓禾
雷帕霉素(rapamycin,RPM)是一种强有力的免疫抑制剂,其免疫作用较环孢素A强100倍左右,并已广泛应用于肾移植中[1].本实验通过复制大鼠肾缺血再灌注(IR)模型,研究RPM对大鼠缺血冉灌注肾Fas、bcl-2蛋白表达的影响及对再灌注24 h的肾组织超微结构的影响,探讨RPM对肾缺血再灌注的保护作用及其机制.
作者：郑传东；苟欣；杨华安；刘莉；蒲晓峰；何卫阳 刊期： 2008年第13期
目的 探讨超生理剂量的地塞米松对官颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法 5～6周龄雌性BALB/c裸鼠皮下接种传代培养的HeLa肿瘤细胞,肿瘤长大后(接种后16 d)每天腹腔内注射超生理剂量的地塞米松(62.5 mg·kg-1·d-1),连续10 d,测量肿瘤直径,计算肿瘤体积及抑瘤率;对肿瘤进行透射电镜观察、原位细胞凋亡检测(TUNEL)、血管内皮生长因子(VEGF)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)检测.结果 超生理剂量的地塞米松体内注射能抑制官颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡;与对照组相比,治疗组肿瘤体积变小[(1.472±0.082)cm3vs(0.383±0.038)cm3,P<0.01],抑瘤率为73.99%,凋亡小体数目增多[(413±87)个vs(160±101)个,P<0.01)],VEGF灰度值降低[(172.833±12.978)vs(177.067±6.875),P<0.01],TNF-α灰度值无差异[(172.833±12.978)vs(177.067±6.875),P>0.05].结论 超生理剂量的地塞米松体内用药能显著抑制肿瘤生长,与诱导凋亡及抑制VEGF有关,而与TNF-α无关.
作者：曾建华；钟玲；徐波 刊期： 2008年第13期
目的 探讨脂肪组织来源的多能干细胞(adipose tissue-derived stromal ceHs,ADSCs)的多向分化潜能.方法 取小香猪腹部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等步骤分离培养ADSCs,经过原代培养和传代培养.分别加入成骨诱导剂和成脂诱导培养.经过倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,并通过Gomori改良钙钴法、yon Kossa染色和油红O染色对其成骨细胞和脂肪细胞表型进行鉴定,进一步比较细胞的转化率.结果 ADSCs呈成纤维细胞样贴壁生长,其经成骨、成脂诱导培养2周后形态、体积发生明显改变.Gomori改良钙钴法染色显示其细胞质内富含碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)颗粒,诱导后15 d和19 d,ALP阳性细胞分别为(25.0±7.5)%和(49.7±6.9)%,von Kossa染色表明聚集的细胞团中央能形成钙化结节;倒置显微镜,成脂诱导3、7、14 d后脂肪细胞转化率分别为(22.3±12.5)%、(49.6±7.1)%和(89.4±9.3)%.油红O染色可见细胞质内出现橙红色脂滴,14 d油红O染色阳性率高达(92.5±9.1)%.结论 ADSCs经体外诱导培养后可向成骨细胞和脂肪细胞分化,并具有明显的成骨和成脂表型,表明ADSCs具有多向分化潜能.
作者：黄宏；朱方强；孙宏振；冯帅南；王正国；朱佩芳；张波 刊期： 2008年第13期
目的 研究双歧杆菌脂磷壁酸(ipoteichoic acid,LTA)对血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达及其对大肠癌细胞株侵袭、转移能力的影响.方法 采用噻唑蓝比色(MTT)法检测经双歧杆菌LTA处理前后大肠癌细胞株LoVo和HT-29对人工基底膜(Matrigel)的黏附能力变化;Transwell小室体外侵袭迁移实验检测经LTA处理前后两株细胞侵袭、迁移能力的改变.RT-PCR和Western blot检测经LTA作用前后,VEGF在两株细胞中的表达差异.结果 经20、50、80μg/ml双歧杆菌LTA处理后,LoVo细胞和HT-29细胞在30、60、90、120 min时的黏附率明显低于对照组(P<0.01);经50μg/ml双歧杆菌LTA处理24 h后,LoVo细胞和HT-29细胞的侵袭能力及VEGF的mRNA和蛋白质的表达,与对照组比较有显著性差异(P<0.01).结论 双歧杆菌LTA能抑制大肠癌细胞黏附、侵袭、迁移的能力,下调其VEGF的mRNA和蛋白质的表达.
作者：彭艳华；刘健龙；王跃；刘明方；陈淑惠 刊期： 2008年第13期
老年人常因合并心腩肺等多器官疾病,不能耐受胃肠镜等检查,而难以明确消化系统疾病诊断.胶囊内镜因其安全、无痛苦等优点,为老年人提供了一种较有价值的检查手段.兹将我院从2005年10月至2007年10月43例老年患者行胶囊内镜检查报告如下.
作者：李英姿；赵晓晏；王雷；樊超强 刊期： 2008年第13期
目的 构建人Toll样受体9(TLR9)全长序列与绿色荧光蛋白GFP的重组质粒,观察融合蛋白在HEK293T细胞内表达并检测其应答CpG DNA的能力.方法 PCR法扩增TLR9全长,限制性内切酶BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切绿色荧光真核表达质粒pcDNA3/GFP和TLR9全长,构建重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP,脂质体转染人胚肾293T细胞(HEK293T),荧光显微镜下观察绿色荧光融合蛋白在细胞内的表达与分布;将重组质粒与NF-κB荧光素酶报告质粒pGL2-luc共转染HEK293T细胞,CpG DNA(10 mg/L)刺激后,化学发光法检测细胞内荧光素酶活性.结果 成功构建pcDNA3-TLR9/GFP质粒,经酶切及测序分析证实载体构建正确;转染细胞后,在荧光显微镜下观察到TLR9/GFP融合蛋白大量表达;重组质粒与pGL2-luc共转染细胞,应用荧光报告系统检测显示,CpG DNA刺激后荧光素酶活性显著高于生理盐水对照组(P<0.01).结论 重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP在HEK293T细胞中表达的TLR9/GFP绿色荧光融合蛋白,能够识别CpG DNA并诱导增加胞内NF-κB转录活性.
作者：丁国富；吴翀；蒋为薇；李军；罗平；周红 刊期： 2008年第13期
目的 获得一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白(IRF-4-binding protein,IBP)的高效价特异性多克隆抗体.方法 通过生物信息学分析选择IBP特异片段(1228～1893 bp),目的 片段cDNA插入pET32a和pGEX-KG原核表达载体,分别转化B1221感受态细菌,IPTG诱导表达后组合应用阴离子交换层析、His、GST亲和层析技术获得免疫原(pET32a/IBP融合蛋白)及检测原(pGEX-KG/IBP融合蛋白).HPLC鉴定纯度.利用改良快速免疫法获得兔抗IBP多克隆抗血清,井经蛋白A柱纯化,非特异性扰体吸收.间接ELISA检测抗体滴度、Western blot和免疫组化实验检测抗体特异性.结果 表达并纯化的pET32a/IBP融合蛋白纯度达92%,pGEX-KG/IBP融合蛋门纯度达87%.IBP多克隆抗体滴度达1:51 200,能特异地和内源性IBP结合.结论 成功表达并纯化了 IBP融合蛋白,制备了高滴度、高特异性的抗IBP多克隆抗体.
作者：张竹君；周玉；李鹏；易维京；杨明珍；李淑慧；胡川闽 刊期： 2008年第13期
目的 通过RNA干扰(RNAi)阻断EJ细胞中survivin基因的表达,研究survivin基因沉默后对细胞生长和细胞凋亡的影响.方法 将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencer2.0线性质粒以T4 DNA连接酶连接,重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果.MTT法检测细胞生长的影响,流式细胞仪检测转染后EJ细胞的凋亡变化.结果 酶切及测序证实设计合成的DNA片段已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹检测实验表明:pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体均能有效地阻断EJ细胞中survivin基因的表达,使survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.01),后者抑制效果更佳.转染后的EJ细胞生长速度明显变慢.转染pSilencer2.0-SVV2实验组细胞的凋亡增加了17.0%.结论 重组真核载体能有效抑制EJ细胞的survivin表达,抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡.
作者：杨华安；苟欣；郑传东；吴跃；何卫阳 刊期： 2008年第13期
目的 探讨脑缺血对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠认知功能的影响.方法 大鼠分为脑缺血组、AD组、AD+脑缺血组和对照组.大鼠右侧纹状体注射内皮素1(endothelin-1,ET-1)建立脑缺血模型;右侧海马齿状回注射凝聚态Aβ1-40建立AD模型;二者结合建立AD+脑缺血模型.穿梭箱和水迷宫实验检测各组大鼠的学习能力.结果 穿梭箱实验中AD+脑缺血组的主动、被动回避反应率低,AD组次之,对照组高(P<0.01,P<0.05).水迷宫定位航行实验中,AD+脑缺血组的平均逃避潜伏期长,AD组次之,对照组短(P<0.01);空间搜索实验中AD+脑缺血组初次找到平台的时间长,AD组次之,埘照组短(P<0.01);AD+脑缺血组跨越平台的次数少,AD组次之,对照纽多(P<0.01).结论 脑缺血后AD大鼠的认知功能下降更明显,脑缺血加剧了AD认知功能损害的进展.
作者：李静；周华东；王延江；张猛；方传勤 刊期： 2008年第13期
目的 初步研究转录因子Pax6(paired homebox 6)在大鼠触须毛囊中的表达.方法 运用免疫组织化学法检测Pax6蛋白在大鼠触须毛囊及培养的毛囊bulge细胞巾的表达,RT-PCR分析毛囊中Pax6两种亚型的表达情况.结果 大鼠触须毛囊细胞巾Pax6表达阳性,RT-PCR显示表达量以Pax6-5a为高,在体外培养细胞中表现出细胞增殖能力与Pax6在细胞中的表达部位相关.结论 Pax6在大鼠触须毛囊中表达,可能在其形成和功能的维持上发挥一定的作用.
作者：杨珂；杨恬；姜自玲 刊期： 2008年第13期
目的 构建Skp2基因的RNAi真核表达质粒,观察其对SIC-A-1肺癌细胞内Skp2基因表达及细胞生长的影响.方法 根据GenBank中Skp2cDNA序列设计针对Skp2基因的shRNA序列,合成序列并克隆人pGenSil-1质粒中,构建skp2 pshRNA重组质粒.脂质体介导重组质粒转染SPC-A-1肺癌细胞.RT-PCR检测肺癌细胞Skp2 mRNA的表达,Western blot检测Skp2蛋白表达.MTT检测各纽细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期改变.结果 重组质粒经酶切鉴定和测序,证实表达干扰质粒构建成功.转染重组质粒的肺癌细胞Skp2 mRNA和蛋白的表达明显下降(P<0.05),细胞生长增殖受到抑制,阻滞在G0/G1期的细胞比例增加,而进入S期的细胞比例明显下降(P<0.05).结论 构建的Skp2 shRNA表达质粒能有效下调Skp2基因的mRNA及蛋白的表达、抑制细胞的生长增殖.
作者：李胜；梅同华；黎联；张明川 刊期： 2008年第13期
目的 构建铜绿假单胞菌噬菌体内溶素重组原核表达载体,检测重组蛋白的酶学活性及抑菌活性.方法 利用重组技术将铜绿假单胞菌裂解性噬菌体PaP1内溶素基因构建到表达载体pQE31中,并在大肠杆菌M15(pREP4)中诱导表达,通过非变性方法纯化重组融合蛋白,利用酶潜电泳、抑菌实验等技术检测酶学活性及抑菌活性.结果 酶谱电泳方法结果显示重组融合蛋白对铜绿假单胞菌细胞壁肽聚糖有降解作用,抑菌活性检测结果显示重组融合蛋白对金黄色葡萄球菌有一定的抑菌效果.结论 该研究从实验方面证实了噬菌体PaP1内溶素基因的生物学功能.
作者：孙卫忠；胡晓梅；饶贤才；谭银玲；陈志谨；丛延广；胡福泉 刊期： 2008年第13期
目的 研究Cx40、Cx43在失血性大鼠肠系膜上动脉内膜依赖的血管舒张反应性调节中的作用及其可能的调节机制.方法 以SD大鼠肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)为研究对象,采用体外缺氧模型,以Cx40或Cx43的反义寡脱氧核苷酸(Cx40/43 antisense oligodeoxyribonucleotide,Cx40/43 AODN)阻断SMA的CxdO或Cx43表达,观察Cx40/43 AODN对缺氧处理SMA舒张反应性、MLCP和MLCK活性等的影响.结果 Cx40 AODN可以显著增加SMA内膜依赖的舒张反应性(P<0.01);Cx43 AODN可以显著降低SMA内膜依赖的舒张反应性(P<0.01).Cx40/43 AODN对SMA的MLCK、MLCP活性无明显作用.结论 Cx40和Cx43参与了失血性休克后内膜依赖的血管舒张反应性的调节,其机制与血管的MLCK和MLCP活性无明显关系.
作者：明佳；张瑗；李涛；杨光明；徐竞；刘良明 刊期： 2008年第13期
目的 探讨CO2人工气腹对子宫内膜癌裸鼠移植瘤β1-整合素与E-钙黏素表达的影响.方法 取30只裸鼠分为3组:开腹组(10只),进腹后将小肠外置腹腔5 min放回腹腔并缝合,右下腹腔注射肿瘤细胞.40 min后排除气体.40 min气腹组(10只),经腹腔内灌注CO2气体形成4 mmHg的腹腔压力建立人工气腹5 min后,右下腹腔注射肿瘤细胞.40 min后排出气体.80 min气腹组(10只),形成气腹80 min后排出气体.记录每只裸鼠成瘤时间,4周后,取出移植瘤,一部分进行石蜡切片,HE染色观察移植瘤组织形态,一部分进行冰冻切片,用免疫荧光法检测各组肿瘤标本中的β1-整合素与E-钙黏素的表达,进行定量分析.结果 2个气腹组成瘤时间均比开腹组短(P<0.05),HE染色中气腹组肿瘤组织中血管多.β1-整合素在子宫内膜癌裸鼠移植瘤组织的表达,2个气腹组的平均光密度(OD)值均显著小于开腹组(P<0.01),80 min组表达低于40 min组(P<0.05).E-钙黏素在子宫内膜癌裸鼠移植瘤组织的表达与β1-整合素的相似,开腹组的OD值高于气腹组(P<0.01),40 min组与80 min组之间无显著差异(P>0.05).结论 CO2气腹环境能影响肿瘤细胞表面黏附分子β1-整合素和E-钙黏素等的表达,进而增加子宫内膜癌细胞的转移黏附能力.
作者：陈石；梁志清；阎军玲 刊期： 2008年第13期
经皮穿刺臭氧注射治疗椎间盘突出症是近几年来在欧洲兴起的微创介入治疗技术.动物实验证实了该技术的有效性和安全性[1,2].现将我院开展该项技术治疗122例腰椎间盘突出症患者疗效报告如下.
作者：唐拥军；曾凡伟；池雷霆 刊期： 2008年第13期
目的 探讨厄贝沙坦对大鼠实验性心肌梗死的保护作用.方法 通过结扎左冠状动脉前降支(LAD)制作大鼠急性心肌梗死模型,观察厄贝沙坦对实验性心肌梗死大鼠心肌梗死面积(MIS)及血清心肌酶学的影响,并从自由基及体内血管活性因子等变化分析其可能的作用机制.结果 厄贝沙坦可使实验性心肌梗死大鼠的MIS明显缩小,血清肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转换酶(AST)活性及丙二醛(MDA)含量明显降低,血清超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性明显增加,亦可使血浆血栓素A2(TXA2)水平明显下降,前列环素(PGI2)水平及PGI2/TXA2值明显增高.结论 厄贝沙坦对大鼠急性心肌梗死具有明显保护作用,可能与其增强抗氧化酶活性,减少自由基对心肌的氧化损伤,纠正心肌缺血时PGI2/TXA2值失衡等机制有关.
作者：杨春梅；李小平；赵学忠；王绚卉；睢大员 刊期： 2008年第13期
目的 采用64排螺旋CT对创伤性脑损伤大鼠进行动态灌注扫描,以了解脑损伤后局部脑灌注改变.方法 45只成熟雄性SD大鼠分为3组:正常对照组、假手术组和实验组.3组均于大鼠脑损伤模型建立后1 h、6 h、24 h、3 d、7 d、14d、21 d分别行头颅CT灌注像(CT perfusion,CTP)扫描.选取伤侧损伤灶周围2 mm内及健侧镜像区为观察兴趣区.CTP后取脑做脑损伤区域石蜡固定切片,在光镜下观察大脑皮层损伤区的病理改变.结果 创伤后1 h损伤局部就有明显的脑血流量(cerebral blood flow,CBF)和脑血容量(cerebral blood volume,CBV)降低.伤后24 h CBF、CBV开始增高,伤后3 d时达到高峰;伤后14 d二者基本恢复正常.呈现损伤灶局部早期低灌注(1 h左右),随后呈现高灌注(6 h至7 d),晚期脑灌注倾于正常的动态脑血液动力学变化.健侧CBF在伤侧CBF伤后3 d明显增高时则呈下降趋势,而健侧CBV与正常组比较没有明显改变增高,反映了健侧完善的脑血管的自动调节功能.结论 对创伤性脑损伤行动态CTP能够了解脑损伤后的血液流变学规律和脑血管的自动调节机制,为脑外伤后继发性脑损害的救治提供有针对性的实验研究基础.
作者：刘科；唐文渊 刊期： 2008年第13期
目的 研究CYP2E1基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性.方法 应用PCR-RFLP技术检测150例中国四川汉族肺癌患者和152例健康人的CYP2E1基因Rsa Ⅰ/Pst Ⅰ和Dra Ⅰ多态性的分布频率,并分析了这两种基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性,以及与吸烟在肺癌易感性中的交互作用.结果 ①CYP2E1基因Rsa Ⅰ/Pst Ⅰ和Dra Ⅰ多态基因型分布频率在2组间比较无显著性差异(分别为x2=3.186,P=0.203和x2=1.756,P=0.416);②按照吸烟因素分层,携带c1/c1基因型的不吸烟个体较携带突变基因型的个体肺癌风险显著增加(OR=2.453,95%CI=1.140～5.276,P=0.022);③与携带至少1个突变c2基因型的个体比较,携带c1/c1基因型的个体患肺腺癌的风险显著增加(OR=2.440,95%CI=1.235～4.820,P=0.01);④没有发现Dra Ⅰ多态性与肺癌风险之间的相关件.结论 ①CYP2E1的c1/c1基因型为中国四川汉族人群肺癌易感基因型;②Rsa Ⅰ/Pst Ⅰ多态性与中国四川汉族人群患肺腺癌的风险显著相关;③Dra Ⅰ多态性与中国四川汉族人群肺癌风险无相关性.
作者：李代蓉；周清华；郭占林；袁天柱；朱文；王艳萍；陈晓禾 刊期： 2008年第13期
目的 探讨枪弹伤后大鼠皮肤MMP-1和MMP-3随时间变化的表达情况,为枪弹伤后的损伤时间判断提供依据.方法 建立大鼠对照组和实验组模型.对照组断颈处死后直接取材;实验组分别于枪弹伤后0、1、3、6、12、18、24、48、72 h取材(n=3).取材后用Northern blot法对MMP-1和MMP-3的mRNA进行半定量检测.结果 MMP-1和MMP-3在枪弹伤后即刻其表达就有增加,以后表达继续升高,一直旱上升趋势(P<0.01,P<0.05);而阴性对照组几乎没有表达.结论 枪弹伤后大鼠皮肤MMP-1和MMP-3表达增加的规律性,对枪弹伤后损伤时间的推断有一定的价值.
作者：李红卫；万立华；马智华；李万军；何锐 刊期： 2008年第13期
颅内血管畸形是神经外科常见脑血管疾病之一.长期以来,都是依靠脑血管数字减影血管造影(digital subtraction angiography,DSA)作为主要诊断手段.近年来,三维CT血管成像(3D-CTA)技术日趋成熟,逐渐受到临床重视.本研究回顾性分析31例住院患者的临床资料,探讨64层3D-CTA在颅内血管畸形诊断及临床评估的应用价值.
作者：阮健；孙晓川；吕发金；唐文渊 刊期： 2008年第13期
第三军医大学学报杂志
主管:第三军医大学
主办：第三军医大学
