杨华安；苟欣；郑传东；吴跃；何卫阳
雷帕霉素(rapamycin,RPM)是一种强有力的免疫抑制剂,其免疫作用较环孢素A强100倍左右,并已广泛应用于肾移植中[1].本实验通过复制大鼠肾缺血再灌注(IR)模型,研究RPM对大鼠缺血冉灌注肾Fas、bcl-2蛋白表达的影响及对再灌注24 h的肾组织超微结构的影响,探讨RPM对肾缺血再灌注的保护作用及其机制.
作者：郑传东；苟欣；杨华安；刘莉；蒲晓峰；何卫阳 刊期： 2008年第13期
目的 采用64排螺旋CT对创伤性脑损伤大鼠进行动态灌注扫描,以了解脑损伤后局部脑灌注改变.方法 45只成熟雄性SD大鼠分为3组:正常对照组、假手术组和实验组.3组均于大鼠脑损伤模型建立后1 h、6 h、24 h、3 d、7 d、14d、21 d分别行头颅CT灌注像(CT perfusion,CTP)扫描.选取伤侧损伤灶周围2 mm内及健侧镜像区为观察兴趣区.CTP后取脑做脑损伤区域石蜡固定切片,在光镜下观察大脑皮层损伤区的病理改变.结果 创伤后1 h损伤局部就有明显的脑血流量(cerebral blood flow,CBF)和脑血容量(cerebral blood volume,CBV)降低.伤后24 h CBF、CBV开始增高,伤后3 d时达到高峰;伤后14 d二者基本恢复正常.呈现损伤灶局部早期低灌注(1 h左右),随后呈现高灌注(6 h至7 d),晚期脑灌注倾于正常的动态脑血液动力学变化.健侧CBF在伤侧CBF伤后3 d明显增高时则呈下降趋势,而健侧CBV与正常组比较没有明显改变增高,反映了健侧完善的脑血管的自动调节功能.结论 对创伤性脑损伤行动态CTP能够了解脑损伤后的血液流变学规律和脑血管的自动调节机制,为脑外伤后继发性脑损害的救治提供有针对性的实验研究基础.
作者：刘科；唐文渊 刊期： 2008年第13期
目的 观察抑郁复合皮肤创伤大鼠创面肉芽组织的胶原含量,初步探讨抑郁影响创面愈合的可能机制.方法 根据建模方法将126只SD大鼠随机分为单纯皮肤创伤组、皮肤创伤复合抑郁组、抑郁复合皮肤创伤组,采用羟脯氨酸试剂盒检测创面组织的羟脯氨酸含量,苫味酸天狼猩红染色后偏振光显微镜下观察各组各时相点创面的胶原沉积情况.结果 抑郁复合皮肤创伤组大鼠创面肉芽组织中的羟脯氨酸含量及胶原沉积量持续低于其余两组(P<0.01,P<0.05),伤后18 d,与皮肤创伤复合抑郁组趋于一致.结论 抑郁复合皮肤创伤可显著降低创面组织羟脯氨酸的合成,减少胶原纤维沉积,从而延缓伤口愈合.
作者：周明芳；程天民；冯正直 刊期： 2008年第13期
目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响.方法 体外培养乳鼠心肌成纤维细胞,加入ox-LDL(10、20、50、100μg/ml)干预24 h,3H-胸腺嘧啶核苷掺人法观察细胞DNA合成,3H-脯氨酸掺入法观察胶原的合成,酶谱法测定基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,RT-PCR检测MMP-2、MMP-9的mRNA表达.结果 和对照组比较,ox-LDL作用于心肌成纤维细胞24 h后,呈浓度依赖性促进细胞DNA合成,同时抑制细胞胶原合成.ox-LDL显著增加MMP-2和MMP-9活性,但各组间作用无明显区别;同时MMP-2和MMP-9蛋白表达也显著性增加,以100μg/ml组作用强.50μg/ml ox-LDL能显著增加MMP-2和MMP-9的mRNA表达,100μg/ml组作用更强.结论 ox-LDL作用于心肌成纤维细胞能减少胶原的合成并增加胶原的降解,提示其在心肌重构过程巾起一定的作用.
作者：肖华；季爱民；李志粱；宋旭东；陈爱华 刊期： 2008年第13期
目的 探讨在眼内炎的治疗中,脉络膜上腔置入曲安奈德壳聚糖药膜与玻璃体腔注射曲安奈德对视网膜的不同影响.方法 30只健康青紫蓝兔右眼玻璃体腔注射ATCC25923标准金黄色葡萄菌105CFU/ml混悬液0.1 ml建立眼内炎模型.24 h后随机将实验动物分为3组,每组10只眼进行不同干预,A(玻璃体腔万古霉素)组、B(玻璃体腔万古霉素+曲安奈德混悬剂)组、C[玻璃体腔万古霉素+脉络膜上腔置入壳聚糖缓释药膜(载药曲安奈德)]组.干预后每日间接眼底镜观察;注射细菌后24 h及干预后14 d所有实验动物行眼部玻璃体腔及视网膜B超检查;造模前及干预后14 d行视网膜电图(electroretinogram,ERG)检查,干预14 d后处死所有动物行光镜、电镜观察.结果 C组较A、B组炎症明显减轻.A、B、C各组临床炎症评分有显著性差异(P<0.05);B超显示视网膜脱离A、B、C各组间有显著性差异(P=0.015);ERG检查A、B组实验前后ERG b波波幅平均值有显著性差异(P=0.000);C组b波波幅平均值前后无显著性差异;A与B、B与C、A与C组间b波波幅有显著性差异(P=0.015、P=0.001、P=0.000);光镜下C组视网膜结构完整,层次分明,病理评分A、B、C各组间有显著性差异(P<0.05);电镜下观察视网膜色素上皮层C组细胞器结构完整,少见细胞质空泡化,B组细胞核染色质分布不均,细胞质空化,细胞器破坏.结论 脉络膜上腔置入壳聚糖药膜在眼内炎治疗中对视网膜具有明显正性保护作用.
作者：李立婕；金中秋 刊期： 2008年第13期
目的 观察精氨酸血管加压素(arginine vasopressin,AVP)抗失血性休克作用与Rho kinase的关系.方法 采用大鼠失血性休克模型,整体动物观察AVP对失血性休克大鼠去甲肾上腺素(NE)的升压反应和对肠系膜上动脉收缩反应性的影响,同时观察Rho kinase在其中的作用;离体血管环观察AVP对失血性休克大鼠肠系膜上动脉反应性和钙敏感性的影响,并观察Rho kinase在其中的作用.结果 失血性休克后大鼠对NE的升压反应性和肠系膜动脉对NE的收缩反应性明显降低,AVP0.4 U/kg可明显增加休克大鼠NE升压反应和肠系膜动脉的收缩反应性,Rho kinase特异性抑制剂Y-27632可明显拮抗由AVP引起的休克大鼠血管反应性的增加.在离体血管环研究表明,休克后血管反应性和钙敏感性明显降低,AVP在浓度为5 nmol/L和0.5 nmol/L可明显增加休克后血管反应性和钙敏感性,Y-27632可明显拈抗由AVP引起的血管反应性和钙敏感性的增加.结论 AVP可通过增加休克血管平滑肌细胞的钙敏感性和血管反应性发挥抗休克作用,通过激活Rho kinase发挥其抗休克作用.
作者：方玉强；李涛；刘良明 刊期： 2008年第13期
老年人常因合并心腩肺等多器官疾病,不能耐受胃肠镜等检查,而难以明确消化系统疾病诊断.胶囊内镜因其安全、无痛苦等优点,为老年人提供了一种较有价值的检查手段.兹将我院从2005年10月至2007年10月43例老年患者行胶囊内镜检查报告如下.
作者：李英姿；赵晓晏；王雷；樊超强 刊期： 2008年第13期
目的 研究CYP2E1基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性.方法 应用PCR-RFLP技术检测150例中国四川汉族肺癌患者和152例健康人的CYP2E1基因Rsa Ⅰ/Pst Ⅰ和Dra Ⅰ多态性的分布频率,并分析了这两种基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性,以及与吸烟在肺癌易感性中的交互作用.结果 ①CYP2E1基因Rsa Ⅰ/Pst Ⅰ和Dra Ⅰ多态基因型分布频率在2组间比较无显著性差异(分别为x2=3.186,P=0.203和x2=1.756,P=0.416);②按照吸烟因素分层,携带c1/c1基因型的不吸烟个体较携带突变基因型的个体肺癌风险显著增加(OR=2.453,95%CI=1.140～5.276,P=0.022);③与携带至少1个突变c2基因型的个体比较,携带c1/c1基因型的个体患肺腺癌的风险显著增加(OR=2.440,95%CI=1.235～4.820,P=0.01);④没有发现Dra Ⅰ多态性与肺癌风险之间的相关件.结论 ①CYP2E1的c1/c1基因型为中国四川汉族人群肺癌易感基因型;②Rsa Ⅰ/Pst Ⅰ多态性与中国四川汉族人群患肺腺癌的风险显著相关;③Dra Ⅰ多态性与中国四川汉族人群肺癌风险无相关性.
作者：李代蓉；周清华；郭占林；袁天柱；朱文；王艳萍；陈晓禾 刊期： 2008年第13期
目的 获得一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白(IRF-4-binding protein,IBP)的高效价特异性多克隆抗体.方法 通过生物信息学分析选择IBP特异片段(1228～1893 bp),目的 片段cDNA插入pET32a和pGEX-KG原核表达载体,分别转化B1221感受态细菌,IPTG诱导表达后组合应用阴离子交换层析、His、GST亲和层析技术获得免疫原(pET32a/IBP融合蛋白)及检测原(pGEX-KG/IBP融合蛋白).HPLC鉴定纯度.利用改良快速免疫法获得兔抗IBP多克隆抗血清,井经蛋白A柱纯化,非特异性扰体吸收.间接ELISA检测抗体滴度、Western blot和免疫组化实验检测抗体特异性.结果 表达并纯化的pET32a/IBP融合蛋白纯度达92%,pGEX-KG/IBP融合蛋门纯度达87%.IBP多克隆抗体滴度达1:51 200,能特异地和内源性IBP结合.结论 成功表达并纯化了 IBP融合蛋白,制备了高滴度、高特异性的抗IBP多克隆抗体.
作者：张竹君；周玉；李鹏；易维京；杨明珍；李淑慧；胡川闽 刊期： 2008年第13期
目的 探讨脂肪组织来源的多能干细胞(adipose tissue-derived stromal ceHs,ADSCs)的多向分化潜能.方法 取小香猪腹部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等步骤分离培养ADSCs,经过原代培养和传代培养.分别加入成骨诱导剂和成脂诱导培养.经过倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,并通过Gomori改良钙钴法、yon Kossa染色和油红O染色对其成骨细胞和脂肪细胞表型进行鉴定,进一步比较细胞的转化率.结果 ADSCs呈成纤维细胞样贴壁生长,其经成骨、成脂诱导培养2周后形态、体积发生明显改变.Gomori改良钙钴法染色显示其细胞质内富含碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)颗粒,诱导后15 d和19 d,ALP阳性细胞分别为(25.0±7.5)%和(49.7±6.9)%,von Kossa染色表明聚集的细胞团中央能形成钙化结节;倒置显微镜,成脂诱导3、7、14 d后脂肪细胞转化率分别为(22.3±12.5)%、(49.6±7.1)%和(89.4±9.3)%.油红O染色可见细胞质内出现橙红色脂滴,14 d油红O染色阳性率高达(92.5±9.1)%.结论 ADSCs经体外诱导培养后可向成骨细胞和脂肪细胞分化,并具有明显的成骨和成脂表型,表明ADSCs具有多向分化潜能.
作者：黄宏；朱方强；孙宏振；冯帅南；王正国；朱佩芳；张波 刊期： 2008年第13期
目的 构建人Toll样受体9(TLR9)全长序列与绿色荧光蛋白GFP的重组质粒,观察融合蛋白在HEK293T细胞内表达并检测其应答CpG DNA的能力.方法 PCR法扩增TLR9全长,限制性内切酶BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切绿色荧光真核表达质粒pcDNA3/GFP和TLR9全长,构建重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP,脂质体转染人胚肾293T细胞(HEK293T),荧光显微镜下观察绿色荧光融合蛋白在细胞内的表达与分布;将重组质粒与NF-κB荧光素酶报告质粒pGL2-luc共转染HEK293T细胞,CpG DNA(10 mg/L)刺激后,化学发光法检测细胞内荧光素酶活性.结果 成功构建pcDNA3-TLR9/GFP质粒,经酶切及测序分析证实载体构建正确;转染细胞后,在荧光显微镜下观察到TLR9/GFP融合蛋白大量表达;重组质粒与pGL2-luc共转染细胞,应用荧光报告系统检测显示,CpG DNA刺激后荧光素酶活性显著高于生理盐水对照组(P<0.01).结论 重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP在HEK293T细胞中表达的TLR9/GFP绿色荧光融合蛋白,能够识别CpG DNA并诱导增加胞内NF-κB转录活性.
作者：丁国富；吴翀；蒋为薇；李军；罗平；周红 刊期： 2008年第13期
颅内血管畸形是神经外科常见脑血管疾病之一.长期以来,都是依靠脑血管数字减影血管造影(digital subtraction angiography,DSA)作为主要诊断手段.近年来,三维CT血管成像(3D-CTA)技术日趋成熟,逐渐受到临床重视.本研究回顾性分析31例住院患者的临床资料,探讨64层3D-CTA在颅内血管畸形诊断及临床评估的应用价值.
作者：阮健；孙晓川；吕发金；唐文渊 刊期： 2008年第13期
目的 构建铜绿假单胞菌噬菌体内溶素重组原核表达载体,检测重组蛋白的酶学活性及抑菌活性.方法 利用重组技术将铜绿假单胞菌裂解性噬菌体PaP1内溶素基因构建到表达载体pQE31中,并在大肠杆菌M15(pREP4)中诱导表达,通过非变性方法纯化重组融合蛋白,利用酶潜电泳、抑菌实验等技术检测酶学活性及抑菌活性.结果 酶谱电泳方法结果显示重组融合蛋白对铜绿假单胞菌细胞壁肽聚糖有降解作用,抑菌活性检测结果显示重组融合蛋白对金黄色葡萄球菌有一定的抑菌效果.结论 该研究从实验方面证实了噬菌体PaP1内溶素基因的生物学功能.
作者：孙卫忠；胡晓梅；饶贤才；谭银玲；陈志谨；丛延广；胡福泉 刊期： 2008年第13期
目的 研究低氧(2%O2)对成年雄性SD大鼠心脏右心室血管紧张素转换酶2(angiotensin conversion enzyme2,ACE2)mRNA、蛋白水平表达的影响.方法 在常氧与低氧环境(模拟海拔5 000 m高原、23 h/d)下饲养sD大鼠,并随机分为缺氧1、3、30 d组和常氧对照组,每组10只,分别在模拟海拔5 000 m高原低压舱内(缺氧各组)和舱外(常氧对照组)测定肺动脉压、右心室功能、左右心室质量指数,采用RT-PCR、Western blot检测各组大鼠心脏右心室心肌ACE2mRNA、蛋白水平的表达变化.结果 缺氧组大鼠肺动脉压、右心室收缩压显著高于对照组(P<0.01),缺氧30 d组右心室明显肥大伴右心功能显著上调,同时右心室ACE2 mRNA、蛋白合成均有明显增加(P<0.01).结论 慢性低压低氧环境下SD大鼠心脏右心室心肌组织ACE2 mRNA表达、蛋白水平显著上调.
作者：王宇亮；高文祥；高钰琪；刘福玉 刊期： 2008年第13期
目的 通过RNA干扰(RNAi)阻断EJ细胞中survivin基因的表达,研究survivin基因沉默后对细胞生长和细胞凋亡的影响.方法 将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencer2.0线性质粒以T4 DNA连接酶连接,重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果.MTT法检测细胞生长的影响,流式细胞仪检测转染后EJ细胞的凋亡变化.结果 酶切及测序证实设计合成的DNA片段已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹检测实验表明:pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体均能有效地阻断EJ细胞中survivin基因的表达,使survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.01),后者抑制效果更佳.转染后的EJ细胞生长速度明显变慢.转染pSilencer2.0-SVV2实验组细胞的凋亡增加了17.0%.结论 重组真核载体能有效抑制EJ细胞的survivin表达,抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡.
作者：杨华安；苟欣；郑传东；吴跃；何卫阳 刊期： 2008年第13期
目的 通过对调控线粒体凋亡信号通路上相关分子表达的检测,了解高强度电脉冲诱导卵巢癌组织凋亡可能的线粒体途径.方法 人卵巢囊腺癌SKOV3细胞接种于裸鼠皮下建立肿瘤模型,待成瘤直径达1 cm,将20只裸鼠用随机数字表法分为实验组和对照组,每组10只,能量可控脉冲治疗仪用于实验组卵巢癌移植瘤,免疫荧光法检测电压依赖阴离子通道(voltage dependent anion channel,VDAC)的变化,Fluo-3/AM探针标记后激光共聚焦显微镜定位细胞内外Ca2+分布及其含量,RT-PCR测定Bcl-2的mRNA水平.结果 高强度电脉冲作用后,实验组卵巢癌细胞VDAC表达与埘照组相比显著下降(P=0.025);Ca2+向线粒体流动,其含量比对照组明显增加(P=0.042);Bcl-2在高强度电脉冲作用后mRNA显著低于对照组(P=0.038).结论 高强度电脉冲作为一种强的外界刺激信号,作用于线粒体外膜VDAC,使凋亡信号的细胞传导和发生效应增强,从而导致卵巢癌组织凋亡.
作者：李聪；胡丽娜；董晓静；孙才新；米彦 刊期： 2008年第13期
目的 初步研究转录因子Pax6(paired homebox 6)在大鼠触须毛囊中的表达.方法 运用免疫组织化学法检测Pax6蛋白在大鼠触须毛囊及培养的毛囊bulge细胞巾的表达,RT-PCR分析毛囊中Pax6两种亚型的表达情况.结果 大鼠触须毛囊细胞巾Pax6表达阳性,RT-PCR显示表达量以Pax6-5a为高,在体外培养细胞中表现出细胞增殖能力与Pax6在细胞中的表达部位相关.结论 Pax6在大鼠触须毛囊中表达,可能在其形成和功能的维持上发挥一定的作用.
作者：杨珂；杨恬；姜自玲 刊期： 2008年第13期
目的 构建Skp2基因的RNAi真核表达质粒,观察其对SIC-A-1肺癌细胞内Skp2基因表达及细胞生长的影响.方法 根据GenBank中Skp2cDNA序列设计针对Skp2基因的shRNA序列,合成序列并克隆人pGenSil-1质粒中,构建skp2 pshRNA重组质粒.脂质体介导重组质粒转染SPC-A-1肺癌细胞.RT-PCR检测肺癌细胞Skp2 mRNA的表达,Western blot检测Skp2蛋白表达.MTT检测各纽细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期改变.结果 重组质粒经酶切鉴定和测序,证实表达干扰质粒构建成功.转染重组质粒的肺癌细胞Skp2 mRNA和蛋白的表达明显下降(P<0.05),细胞生长增殖受到抑制,阻滞在G0/G1期的细胞比例增加,而进入S期的细胞比例明显下降(P<0.05).结论 构建的Skp2 shRNA表达质粒能有效下调Skp2基因的mRNA及蛋白的表达、抑制细胞的生长增殖.
作者：李胜；梅同华；黎联；张明川 刊期： 2008年第13期
目的 研究Cx40、Cx43在失血性大鼠肠系膜上动脉内膜依赖的血管舒张反应性调节中的作用及其可能的调节机制.方法 以SD大鼠肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)为研究对象,采用体外缺氧模型,以Cx40或Cx43的反义寡脱氧核苷酸(Cx40/43 antisense oligodeoxyribonucleotide,Cx40/43 AODN)阻断SMA的CxdO或Cx43表达,观察Cx40/43 AODN对缺氧处理SMA舒张反应性、MLCP和MLCK活性等的影响.结果 Cx40 AODN可以显著增加SMA内膜依赖的舒张反应性(P<0.01);Cx43 AODN可以显著降低SMA内膜依赖的舒张反应性(P<0.01).Cx40/43 AODN对SMA的MLCK、MLCP活性无明显作用.结论 Cx40和Cx43参与了失血性休克后内膜依赖的血管舒张反应性的调节,其机制与血管的MLCK和MLCP活性无明显关系.
作者：明佳；张瑗；李涛；杨光明；徐竞；刘良明 刊期： 2008年第13期
目的 研究双歧杆菌脂磷壁酸(ipoteichoic acid,LTA)对血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达及其对大肠癌细胞株侵袭、转移能力的影响.方法 采用噻唑蓝比色(MTT)法检测经双歧杆菌LTA处理前后大肠癌细胞株LoVo和HT-29对人工基底膜(Matrigel)的黏附能力变化;Transwell小室体外侵袭迁移实验检测经LTA处理前后两株细胞侵袭、迁移能力的改变.RT-PCR和Western blot检测经LTA作用前后,VEGF在两株细胞中的表达差异.结果 经20、50、80μg/ml双歧杆菌LTA处理后,LoVo细胞和HT-29细胞在30、60、90、120 min时的黏附率明显低于对照组(P<0.01);经50μg/ml双歧杆菌LTA处理24 h后,LoVo细胞和HT-29细胞的侵袭能力及VEGF的mRNA和蛋白质的表达,与对照组比较有显著性差异(P<0.01).结论 双歧杆菌LTA能抑制大肠癌细胞黏附、侵袭、迁移的能力,下调其VEGF的mRNA和蛋白质的表达.
作者：彭艳华；刘健龙；王跃；刘明方；陈淑惠 刊期： 2008年第13期
第三军医大学学报杂志
主管:第三军医大学
主办：第三军医大学
