学术投稿

重组多价人精子表位肽的原核表达及其条件优化

谢琦;林军;白玲;石青峰;叶元;杨冰;刘永明

关键词:重组多价人精子表位肽, GST融合蛋白, 大肠杆菌, 表达条件
摘要:目的 构建重组多价人精子表位肽原核表达质粒,优化其在大肠杆菌中的表达条件.方法 用化学合成法合成多价人精子表位肽基因.该基因经PCR扩增,BamHI和XhoI双酶切后,克隆至GST融合表达载体PGEX-4T-1获得重组质粒.将该重组质粒转化E.coli BL21 (DE3),经IPTG诱导表达.利用SDS-PAGE电泳和AlphaEase凝胶电泳图像分析系统,观察在摇瓶发酵条件下改变培养基组成、诱导温度、诱导时机、诱导剂浓度和诱导时间等条件对GST-多价人精子表位肽融合蛋白表达量的影响.结果 构建了重组多价人精子表位肽原核表达载体.在摇瓶实验中,优化的表达条件为:TB培养基,诱导温度37℃,在菌体对数生长的中后期进行诱导,IPTG诱导终浓度0.05 mmol/L,诱导时间5h.优化后GST-多价人精子表位肽融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的30.2%,且主要以可溶形式表达.结论 成功构建重组多价人精子表位肽原核表达质粒,重组表达载体在E.coli BL21 (DE3)内主要表达可溶形式的GST-多价人精子表位肽融合蛋白,在优化条件下可获得较高的表达量.
现代预防医学杂志相关文献
  • 重急性症胰腺炎合并多脏器损伤34例临床分析

    目的 探讨急性重症胰腺炎合并多脏器损伤的临床治疗.方法 回顾分析34例急性重症胰腺炎合并多脏器损伤患者临床资料,结合文献,就诊疗过程加以总结.结果 34例患者有30例(88.24%)痊愈出院,4例死亡(11.76%).手术治疗5例,死亡2例;非手术治疗25例,死亡2例;并发症及死亡以多脏器衰竭为主.结论 治疗急性重症胰腺炎并发多脏器功能衰竭应采取个体化综合治疗,妥善选择手术时机,能够起到良好治疗效果,提高患者生存率.

    作者:叶浩波 刊期: 2012年第11期

  • 不同髋关节置换方法治疗髋臼骨折术后创伤性关节炎的远期疗效对比

    目的 探讨不同髋关节置换方法治疗髋臼骨折术后创伤性关节炎的远期疗效差异.方法 选自某院收入的髋臼骨折术后并发创伤性关节炎行髋关节置换术的患者共38例,患者根据治疗方式不同分为两组,THR组及HRA组,各19例.术后行Harris髋关节评分系统评分,并通过总分确定优良率.对术前、术后髋关节活动度进行对比、随访两组患者并发症发生情况,结果进行统计学分析.结果 THR组及HRA组患者术后1月、术后3年Harris评分显著高于术前,结果对比差异有统计学意义,P< 0.05.THR组优良率为84.2%,HRA组优良率为79.0%.THR组及HRA组患者术后3年髋关节屈曲、外展、内收、外旋及内旋与术前对比差异有统计学意义,P< 0.05.THR组患者经关节置换后1例术后3年出现Ⅱ区X线透亮带,1例出现Ⅲ期X线透亮带,4例患者未后存在深静脉血栓.HRA组患者3例患者术后出现深静脉栓塞.结论 对于骨缺损严重患者可选用全髋关节置换术治疗,而对于部分具备条件患者,选用全髋表面置换治疗可以为患者保留足够的骨量,并提供更佳的运动能力,从而为保证患者术后生存质量提供帮助.

    作者:何澄;郭慧 刊期: 2012年第11期

  • 改良PLDD治疗顽固性椎间盘源性腰痛

    目的 探讨改良的经皮激光椎间盘减压术(PLDD)治疗椎间盘源性腰痛的疗效.方法 某院自2007年1月~2010年6月对26例经MRI检查及椎间盘造影确诊椎间盘源性腰痛患者,32个椎间隙,采用日本SLT公司生产的Nd:YAG激光治疗机治疗,采用双侧入路多点照射的方法,激光功率5~10 W,每个激光脉冲持续1s,间隔1 s,照射总能量400~800J.米前、术后疼痛视觉模拟评分系统(The Visual analog scale,VAS)评分及奥斯维斯失能指数(Oswestry disability index,ODI)评价治疗效果.结果 手术时间25~45 min,平均30 min,术后住院时间0~7 d,平均3d.26例随访6~36个月,平均18个月,术前、术后VAS评分及ODI评分比较差异均有统计学意义(P<0.01).改良Macnab标准评价临床疗效优15例,良2例,可1例.无并发症发生.结论 改良PLDD技术治疗椎间盘源性腰痛有效、安全、微创.

    作者:付爱军;刘刚;陈通;张志勇;李建民;朱军 刊期: 2012年第11期

  • 高效液相色谱法联合测定新生儿血中苯丙氨酸和酪氨酸的应用

    目的 建立完善的高效液相色谱(HPLC)测定苯丙氨酸(phe)和酪氨酸(tyr)的方法,用于高苯丙氨酸血症和酪氨酸血症的诊断和鉴别诊断.方法 将患者血标本处理后用Aglient 1200系列高效液相色谱仪分离出苯丙氧酸和酪氨酸并计算其含量,根据苯丙氨酸、酪氨酸的浓度以及其比值诊断和鉴别诊断高苯丙氨酸血症和醅氨酸血症.结果 此种方法日间精密度均<10%,符合本实验室对实验方法的要求,通过对489例正常新生儿的测定统计苯丙氨酸正常参考值范围为0.13~1.93 mg/dl,酪氨酸正常参考值范围为0.4~2.44 mg/dl,苯丙氨酸/酪氨酸正常参考值为0~1.81.使用高效液相色谱法和传统的时间分辨荧光法测定489例新生儿苯丙氨酸浓度,对两组数据进行两样本均数t检验,t=-5.79,P<0.005,两组数据差异无统计学意义.结论 高效液相色谱法是一种有效的测定苯丙氨酸、酪氨酸的方法,该实验方法操作简单,特异性和精密度高,适于常规临床实验室开展.

    作者:田丽萍;杨绪庆;卜晓萍 刊期: 2012年第11期

  • 53例人用狂犬病无佐剂纯化疫苗接种后抗体检测结果分析

    目的 观察暴露后人群接种国产人用狂犬病无佐剂纯化疫苗(Vero cell)的免疫效果.方法 对53例研究对象按照0、3、7、14和28 d程序进行暴露后免疫,采用WHO认可的RFFIT法检测免疫14 d,45d的血清抗体.观察每针次接种后72 h内局部和全身反应.结果 所有接种对象均未出现严重副反应.首剂免疫14 d,45 d ELISA法检测抗体阳性率分别为52.83%,94.34%,RFFIT法检测抗体阳性率分别为100%,100%.几何平均滴度(GMT)为17.74 IU/ml,15.50 IU/ml.结论 国产人用狂犬病无佐剂纯化疫苗(Vero cell)具有良好的安全性和免疫原性.

    作者:王余俊;王晓昱;石建方;宋婷婷;张秋娥;雷世光;王洪飚;王梅 刊期: 2012年第11期

  • 月经间期放置IUD后育龄妇女生活质量的变化情况

    目的 了解育龄妇女使用3种宫内节育器(IUD)后生活质量状况的变化情况.方法 2007.7~2008.8在我国6个省共11所县级计划生育服务站(研究中心),开展多中心随机比较观察性研究.在每所服务站对符合标准的育龄妇女随机放置IUD,采用健康状况问卷测量妇女使用IUD前、使用后3个月和10~12个月时的生活质量状况.本文使用其中7个中心的数据进行分析.结果 311例元宫铜300对象、309例TCu80A对象和321例活性165对象进入分析.3组对象放置IUD后健康状况总分和除一般健康状况外的其他7个维度得分均较基线时得分增加,仅一般健康状况维度两次随访得分与基线比较差异均无统计学意义.三组对象总得分及各维度得分较基线的变化情况相似,仅TCu380a使用者情感职能维度得分在10~12个月随访时的改变值略高于其他两组对象.结论 IUD的使用可以提高育龄妇女的生活质量,且三种IUD对生活质量的改善情况相似.

    作者:梁红;李丽;陈兴宝;吴尚纯;袁伟 刊期: 2012年第11期

  • 血液透析、血液灌流治疗急性百草枯中毒的比较研究

    目的 探讨血液透析、血液灌流治疗急性百草枯中毒的临床效果.方法 选取急性百草枯中毒患者92例,随机分为三组.其中A组41例,给予单纯血液透析+常规治疗;B组20例,给予单纯血液灌流+常规治疗;C组31例,给予血液透析联合血液灌流+常规治疗.结果 采取血液透析联合血液灌流进行治疗的患者有效率明显高于单纯采用血液透析或血液灌流进行治疗的患者;经联合治疗而终死亡的患者存活时间明显长于单纯采用血液透析或血液灌流进行治疗的患者,其间比较差异明显,差异有统计学意义(P< 0.05).结论 对急性百草枯中毒患者及时采取血液透析联合血液灌注治疗可以有效提高治疗效果.

    作者:刘斌;刘刚;李桂花 刊期: 2012年第11期

  • V型外斜视的手术治疗

    目的 探讨V型外斜视的临床特点和手术治疗效果.方法 分析某院手术治疗的48例V型外斜视患者,观察手术前、后眼位的变化和双眼单视功能的情况.结果 V型外斜视的常见原因为斜肌功能异常,包括原发性下斜肌功能亢进、先天性上斜肌麻痹继发下斜肌功能亢进.手术治疗除2例欠矫外余均正位,疗效满意.结论 V型外斜视是一种常见的斜视类型,发病原因以斜肌功能异常为主,常合并水平斜视.斜肌手术是矫正V型外斜视的主要措施之一.

    作者:谢明丽 刊期: 2012年第11期

  • 某院住院患者抗菌药物应用分析

    目的 了解抗菌药物专项整治活动开展以来,某院住院患者抗菌药物应用现状,分析评价其合理性.方法 随机抽取2011年7~9月出院病历159份,对其抗菌药物应用情况进行分析评价.结果 该院抗菌药物使用率为56%;使用较多为头孢菌素类及广谱青霉素类;微生物标本送检率低;在药物适应症,药物选择,用药疗程,Ⅰ类切口手术预防用药,药物更换和联合用药方面,仍存在较多不合理现象.结论 该院抗菌药物还存在较多不合理想象,应加大抗菌药物的培训、监督和干预力度.

    作者:张玉华 刊期: 2012年第11期

  • 家蝇幼虫抗菌肽diptericin_2基因的克隆及原核表达-鉴定

    目的 扩增出全长diptericin2基因,并构建表达pGEX-4T-1/diptericin2重组蛋白.方法 运用经典的5'末端扩增法(5'-Full RACE)法,通过双酶切、连接反应,将目的基因片段定向插入到表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠埃希菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析diptericin2重组蛋白的表达情况,蛋白质印迹实验(Western-blotting)对其进行了鉴定.结果 获得目的片段468bp的家蝇抗菌肽diptericin2基因(GENBANK登录号FJ795370),双酶切鉴定及DNA测序结果显示,目的基因diptericin2已成功连接到表达载体pGEX-4T-1上,SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为27 kDa.结论 扩增出了全长diptericin2基因并成功构建pGEX-4T-1/diptericin2重组蛋白原核表达系统,融合蛋白以包涵体形式在大肠埃希菌BL21中表达,为下一步研究其生物活性打下初步的基础.

    作者:杨小蓉;金小宝;丁彩屏;朱家勇 刊期: 2012年第11期

  • 社区居民院前急救培训模式及影响因素的调查分析

    目的 通过确定影响社区公众院前急教培训效果的因素,探讨普及院前急救培训的佳模式.方法 对武汉市金鹤园126名社区居民进行获取急救知识渠道和现场急救技能需求的调查.将这126名居民随机分配到3个不同培训模式小组进行专业急救知识培训,并评估培训后即刻、培训后1个月、培训后6个月的效果.结果 3组受训人员在培训前所掌握的急救知识和操作技能差异无统计学意义;以培训后即刻、培训后1个月、培训后6个月的得分进行偏相关分析,结果显示年龄、文化程度、培训间隔时间、培训模式和培训效果有一定的相关性.结论 武汉市已迈入老龄化城市,迫切需要对全民普及现场急救知识;利用佳的培训模式来提高全民的培训效果;不同年龄、学历的受训人员的培训效果不同:定期进行再次培训可强化记忆力,增强培训效果.

    作者:张梦娜;余桂林;吴婷婷;郑一瑾;程甦 刊期: 2012年第11期

  • 30例房间隔膨胀瘤彩色多普勒超声心动图分析

    目的 评价彩色多普勒超声心动图诊断房间隔膨胀瘤的价值及房间隔膨胀瘤的彩色多普勒超声心动图表现.方法 回顾性分析30例房间隔膨胀瘤患者的彩色多普勒超声心动图表现.结果 30例患者彩超均作出正确诊断,14例房间隔膨胀瘤合并风湿性心脏病,7例合并扩张型心肌病,4例合并缺血性心肌病,5例合并先天性心脏病.房间隔瘤均突向右房,大突出度为(17.0±1.8) mm,基底宽(21.0±4.2) mm.结论 经彩色多普勒超声对房间隔膨胀瘤诊断有较好的临床应用价值.

    作者:彭莉 刊期: 2012年第11期

  • 连续指导性家访对农村高血压前期风险控制的研究

    目的 探讨社区连续性家访对高血压前期风险的控制效果,为实施社区干预提供依据.方法 随机选取2010年4月唐山市玉田县某社区30~75岁高血压前期患者200例,随机分为实验组和对照组,实验组进行连续指导性家访1年后评测效果.结果 103例实验组患者经过1年的连续家访后,其平均血压、体重指数(BMI)、腰围的测量值较对照组比较均有下降(P≤0.05),血脂异常人数、高血压发病率、脂肪肝发病率、遵医行为较对照组明显降低(P≤0.05).结论 通过连续指导性家访农村高血压前期患者高血压相关因素得到了有效控制,为农村地区高血压的防治提供科学依据.

    作者:项颖;白桂春;吴黎明 刊期: 2012年第11期

  • 青海省慢性病综合干预控制项目实施效果评价

    目的 通过慢病综合干预控制项目的实施,开展以“维持健康体重”和“控制血压”为核心内容的人群干预,探索人群超重、肥胖和血压控制模式,促进社区慢性病的综合防治,并进行效果评价.方法 以卫生部“维持健康体重和血压管理关键技术”社区试行项目的工作内容和实施方案为指导,对参加项目的社区居民采用“高危人群和慢病患者管理信息表”收集相关信息,并录入管理系统进行人群分类,按照人群分类结果,以体重和血压为核心指标对超重且中心性肥胖及高血压病人进行管理.结果 经过1年时间的干预,管理人群的吸烟率由干预前(2008年)的20.8%下降为干预后(2009年)的12.2%;高血压患者的知晓率、治疗率、控制率分别由干预前的68.2%、60.8%及14.6%上升为干预后的71.4%、63.0%及39.9%.超重且中心性肥胖人群的腰围均值由干预前的95.9 cm下降为干预后的91.1 cm.结论 在社区开展以“维持健康体重”和“控制高血压”为核心目标的慢病管理关键技术对控制体重和提高高血压患者的血压控制率是有效地.

    作者:李晓萍;周敏茹;王金桃;许志华;韦文会;郭淑玲 刊期: 2012年第11期

  • 启发式教学和互动式教学结合在消化内科见习医生教学中的应用

    目的 探讨启发式教学和互动式教学结合在消化内科见习医生教学中的应用.方法 本实验选取了120例2009年6月份~2011年10月份在某科室进行见习的医生为对象进行研究,把所有见习医生打乱分为40例A组(启发式教学和互动式教学结合组)、40例B组(启发式教学组)和40例C组(互动式教学组),后进行统计及比较各组见习医生教学后的考核成绩和教学前后的积极主动性、科学理论性、实践应用性的掌握情况.结果 A组见习医生教学后的考核成绩和教学前后的积极主动性、科学理论性、实践应用性的掌握情况明显高于B组和C组,P<0.05,差异有统计学意义.结论 启发式教学与互动式教学相结合提取了单纯启发式教学和单纯互动式教学的优点并弥补了不足之处,有效提高了见习医生的教学成效,是一种很好的教学模式,因此建议在消化内科教学中广泛应用.

    作者:苏健坤 刊期: 2012年第11期

  • 汕头市117名甲型H1N1流感疑似病例的流行病学分析

    目的 分析汕头地区117例甲型H1N1流感疑似病例的流行病学特点,为制定本地区甲型H1N1流感防控策略提供科学的依据.方法 对2009年11月~2010年4月汕头市报告的117名甲型H1N1流感疑似病例的临床表现、并发症及病毒核酸检测结果等进行分析.结果 117名疑似病例中,男70名,女47名,男女性别比为1.49∶1,中位数年龄为20.5岁(0.25~58岁).常见的临床症状为发热(在38.1℃~39℃之间为76例,占64.9%)、咳嗽(41例,35.0%),咽痛(42例,35.9%),头晕(34例,29.0%),头痛(38例,32.5%),乏力(45例,38.4%).其中重症病例为56例,占总病例数的47.8%.重症病例的肺炎并发症发生率和甲型H1N1流感病毒核酸检测阳性率分别为23.2%和69.6%,均远高于普通病例组.结论 本地区的甲型H1N1流感主要侵袭年轻人,以本地人群为主;普通病例报告水平不够,以致重症病例比例偏高,应加强监测工作;人群对甲型H1N1流感缺乏免疫力,容易出现症状较重的病例.

    作者:林杰;黄建云;王普生;姚丽君;肖敏;林洁敏;江素红;许璐;陈敬鸿 刊期: 2012年第11期

  • 阿尔茨海默病和多发梗死性痴呆患者脑影像学改变与临床智能精神检查相关性研究

    目的 探讨阿尔茨海默病和多发梗死性痴呆患者CT检查改变与临床智能精神检查的相关性.方法 选取近2年某院收治的37例阿尔茨海默病患者和35例多发梗死性痴呆患者为研究对象,探讨两种疾病CT影像学改变与临床智能精神检查得分的相关性.结果 ①阿尔茨海默病组前角、后角、基底池、外侧裂、三脑室、四脑室、侧脑室以及脑沟等部位的大宽度值均大于多发梗死性痴呆组,比较差异有统计学意义(P<0.05).②多发梗死性痴呆组MMSE评分为16.79±5.48,DRS评分为0.832,均高于阿尔茨海默病组(13.24±2.38,0.673),比较差异有统计学意义(P<0.05).③阿尔茨海默病组MMSE评分与外侧裂和侧脑室宽度呈负相关;DRS评分与前角和四脑室宽度呈正相关(P<0.05).④多发梗死性痴呆组MMSE评分与DRS评分与脑室系统无明显相关性(P>0.05).结论 CT检查脑室系统影像学改变是鉴别阿尔茨海默病与多发梗死性痴呆的主要方面,脑室系统病理性改变与临床智能精神改变有直接关系.

    作者:黎胜强 刊期: 2012年第11期

  • 内镜黏膜下剥离术对120例食管胃黏膜下病变的诊疗价值

    目的 探讨内镜下黏膜下切除治疗食管胃黏膜下隆起性病变的诊断、治疗价值.方法 比较120食管胃黏膜下隆起性病变的内镜和病理诊断结果符合率.采取由镜黏膜下剥离术治疗食管胃黏膜下隆起性病变,观察治疗效果.结果 食管黏膜下隆起性病变以平滑肌瘤多见,而胃底、胃体部间质瘤多见,胃窦病变性质较为多样化.患者超声内镜检查结果与病理活检结果相比较,食管部病变的诊断符合率较高,但胃窦部隆起病变的诊断符合率较低.表明内镜黏膜下剥离术对食管胃黏膜下隆起性病变有较好的诊断和治疗作用.结论 内镜黏膜下剥离术不仅能为食管胃黏膜下隆起性病变患者提供有效的病理诊断,而且还能较好地切除病变组织,对食管胃黏膜下病变有较高的诊疗价值.

    作者:常廷民;李贞娟;张利利;李秀敏 刊期: 2012年第11期

  • 留置导尿在无痛分娩中的必要性研究

    目的 探讨留置导尿在无痛分娩中的必要性.方法 采用随机分组的方法对60例接受腰硬麻醉无痛分娩的产妇进行病例对照研究,对照组(30例)在腰硬麻醉后常规给予立即插尿管留置导尿;观察组(30例)腰硬麻醉后来插尿管,而是通过专责助产士在产程进展中积极鼓励和协助患者排尿,产后通过B超观察膀胱残余尿量和尿液培养评估产后尿潴留和尿道感染情况,观察两组的区别.结果 观察组在分娩过程中有19例(63.33%)能够成功自行排尿,发生产后尿潴留3例,尿道感染1例;对照组发生产后尿潴留14例,尿道感染6例.结论 无痛分娩过程中无需常规持续留置导尿,积极鼓励、指导和协助患者排尿,可以减少尿道感染和产后尿潴留的发生.

    作者:陈意坚;龚桂芳;符芳 刊期: 2012年第11期

  • 磷霉素钠结合中药治疗慢性肺心病急性加重期的疗效观察

    目的 观察磷霉素钠注射液联合自拟肺心Ⅰ号方治疗慢性肺源性心脏病(CPHD)急性加重期的疗效.方法 全部122例患者随机分为2组,治疗组82例,对照组40例,在常规应用吸氧、止咳、解痉平喘、强心、利尿、纠正电解质和酸碱失衡基础上,对照组给予头孢哌酮钠舒巴坦钠注射液及血塞通注射液静脉滴注,治疗组给予磷霉素钠注射液静脉滴注,并口服肺心Ⅰ号方.于治疗后检查动脉血气、血浆D-二聚体、血红蛋白和血液流变学等.结果 治疗组总有效率93.90%,对照组总有效率62.50%,两组相比,差异有统计学意义(P<0.01),治疗组治疗后各项实验室指标改善均较对照组明显(P< 0.05或P<0.01).结论 磷霉素钠联合中药治疗CPHD急性加重期疗效肯定,并发症少,复发率及死亡率低,且副作用小.

    作者:张振国;邱作成;李志钢;乐德行 刊期: 2012年第11期

现代预防医学杂志

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主管:国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会 四川大学华西公共卫生学院