学术投稿

实时荧光RT-PCR技术在黄热病快速检测中的应用

师永霞;相大鹏;郑夔;李小波;黄吉城;洪烨;幸芦琴;郭波旋

关键词:黄热病病毒, 5'端非编码区, 实时荧光RT-PCR, 快速检测
摘要:[目的]建立黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法并用于口岸黄热病的快速检测. [方法]体外转录黄热病病毒5-UTR的部分序列核酸作为阳性对照模板,设计实时荧光RT-PCR不同的反应程序和引物/探针浓度的组合,摸索佳反应体系条件并用于黄热病疫苗和入境发热患者标本的检测.[结果]建立的黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法佳反应体系为:2xRT-PCR缓冲液10 μl,正向引物5UTR-FP终浓度750 nM,反向引物5UTR-RP终浓度750 nM,探针5UTR-Probe终浓度500 nM,25xRT-PCR Enzyme Mix 0.8μl,RNA 5μl,用DEPC H2O补足到反应总体积20μl;Roche lightcycler仪器适用的扩增程序为:45℃10 min,95℃10 min;95℃5 s,56℃10 s(single),72℃15 s,45次循环.该方法低检测限约为20copies病毒/反应,与登革病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、基孔肯雅病毒等蚊媒病毒无交叉反应.应用该方法对黄热病疫苗、媒介蚊虫和入境发热患者的血清标本进行检测,结果为黄热病疫苗核酸阳性,其他标本为阴性.[结论]该实时荧光RT-PER方法灵敏度高,特异性强,适用于黄热病病毒的快速检验,防止该病在国境口岸的传入.
现代预防医学杂志相关文献
  • 大学生男男性接触人群艾滋病相关知识行为状况调查

    [目的]了解大学生男男性接触人群艾滋病知识知晓状况和相关行为特征.[方击]采用滚雪球法选择对象,对选择的大学生MSM人群进行面对面匿名问卷调查,所得资料运用SPSS13.0软件进行统计分析.[结果]300名调查对象来源于22所高校,平均年龄(20.8±1.3)岁;艾滋病知识知晓率UNGASS指标为56.0%;首次性行为平均年龄(17.9±1.8)岁,首次同性性行为平均年龄(18.2±1.7)岁;98.7%调查对象近6个月发生过同性性行为,平均同性性伴3个(中位数);近6个月发生同性性行为时坚持使用了安全套的比例为44.3%,近1次同性性行为时使用了安全套的比例为75.0%;9.7%的调查对象近1年出现过性病症状,50.0%近1年做过HIV检测;互联网、酒吧/会所、浴池、公园/公厕是寻找同性伙伴的主要场所,其中光顾互联网的频率为3d,光顾酒吧/会所的频率为15 d.[结论]MSM人群中普遍存在的艾滋病相关知识水平高而性伴多、安全套使用率低的知识与行为背离现象,在大学生MSM人群中也广泛存在,急需采取针对性干预措施.

    作者:周超;丁贤彬;刘芳;李萍 刊期: 2010年第04期

  • 气相色谱-质谱法测定奶粉中的环境雌激素

    [目的]建立奶粉中的环境雌激素(4-壬基酚、双酚A、巴烯雌酚、17a-乙炔基雌二醇)和内源性雌激素(17a-雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇、雌酮)的气相色谱-质谱(GG-MS)测定方法.[方法]样品经乙腈沉淀蛋白质后取上清液氮气流浓缩至干,经五氟丙酸酐(PFPA)衍生化后用GC-MS进行检测.[结果]该法测定的峰面积的日内相对标准偏差为1.25%~5.85%,检出限为0.02,4~1.40μg/kg.回收率为72.2%~102.5%.[结论]该方法准确、灵敏,精密度好,适于奶粉中环境雌激素的测定.

    作者:张宏;王淑惠;杨立学;王婷婷;张红英;陈杏琴 刊期: 2010年第04期

  • 子宫内膜样腺癌中PTEN蛋白表达及MVD检测的意义

    [目的]研究子宫内膜样腺癌中PTEN蛋白(张力蛋白同源第十号染色体丢失的磷酸酶基因)表达及肿瘤血管形成的状况,探讨其在肿瘤发生发展中的可能作用. [方法]应用免疫组化S-P法检测20例正常子宫内膜和60例子宫内膜样腺癌中PIEN和CD34蛋白表达,计数相应的徽血管密度(MVD). [结果](1)正常子宫内膜中PTEN阳性表达率100%,癌组织中PTEN阳性表达率55%,差异有统计学意义(P<0.01). (2)癌组织中PIEN表达的缺失与组织学分级、肌层浸润深度及临床分期有关. (3)癌组织中MVD明显高于正常子宫内膜组织(P<0.05). (4)癌组织中PTEN表达与MVD呈负相关(r=-0.81,P<0.05). [结论]PTEN基因突变和/或缺失可能在子宫内膜样腺癌的发生、发展和血管形成中发挥重要作用.

    作者:刘建辉;高志安 刊期: 2010年第04期

  • 省文明班级与普通班级大学生心理健康状况的比较研究

    [目的]探究优秀集体的建设对大学生心理健康状况的影响.[方法]采用症状自评量表(SCL-90)对福建省大学生文明班级与普通班级的236人进行测试.[结果]①省文明班级大学生的心理健康水平在统计学意义上明显高于普通班级的大学生;②省文明班级和普通班级学生在性别、生源地和是否独生子女这些因素在某些因子上的得分差异具有统计学意义;③省文明班级大学生在SCL-90各因子上与全国大学生常模相比较,省文明班级大学生的心理健康水平在统计学意义上明显高于全国大学生的平均水平. [结论]优秀集体的建设对大学生心理健康水平的提高有促进作用.

    作者:蒋怀滨;林良章 刊期: 2010年第04期

  • 从需方的角度评价美沙酮门诊现状

    [目的]对自贡市美沙酮门诊的现状进行阶段性总结,为全国美沙酮门诊进一步发展提供一些依据. [方法]应用自填武间卷对参加自贡市美沙酮门诊治疗的药物成瘾者216人进行调查. [结果]药物成瘾者参加美沙酮门诊治疗前后在职业状况、人际关系、艾滋病高危行为等方面的改善均有统计学意义(P<0.05).但同时门诊工作也存在一些不足,如配套工作开展的并不理想、门诊服务利用的可及性相对有限、社区参与程度有待提高、对参加治疗者的管理困难等. [结论]自贡审美沙酮门诊基本达到了其应有的社会功效,但仍面临发展上的困难,建议继续完善相应制度、加强多部门合作.

    作者:赵首年;李群;董利民;邱培媛;马骁 刊期: 2010年第04期

  • 开封县原发性肝癌危险因素1:1配对病例对照研究

    [目的]通过开封县原发性肝癌(primary hepatoccllular carcinoma,HCC)病例对照研究,探讨肝癌发病的相关因素,从而采取积极合理的预防措施.[方法]以2006-9~2007-8在开封县新发的149名原发性肝癌患者为研究对象,按照性别相同、年龄与患者上下不超过3岁进行1:1配对,采用问卷调查进行病例对照研究.[结果]教育程度、家庭每月人均收入、饮酒频率、茶叶类型、较成的食物、较硬的食物、蔬菜在病例组与对照组有统计学差异(P<0.05),将上述因素引入多因素条件Logistic回归模型分析,结果显示:每天或几乎每天饮酒OR=2.629(95% CI:1.020~6.771),每周饮酒3~4次OR=10.424(95% CI:2.725~39.874);牧入在150元/人月以上OR=0.351(95% CI:0.141~0.873),收入在300元/人月以上OR=0.190(95% CI:0.053~0.678).[结论]饮酒频率与HCC呈正相关,家庭人均收入与HCC呈负相关,提倡适量饮酒或不饮酒,从而有效预防原发性肝癌的发生.

    作者:韩洁;时宝庆;王玲;王彦平;耿振新;马师;陆维权;吕全军 刊期: 2010年第04期

  • 沧州市居民艾滋病相关知识现状调查

    [目的]了解沧州市居民艾滋病相关知识现状,以便有针对性的开展艾滋病相关健康教育. [方法]调查沦州市居民3 491人,调查内容包括被调查者的基本情况、艾滋病的一般知识、传播途径、预防知识等. [结果]艾滋病相关知识各项内容的知晓率在9.9%~95.8%之间,其中对3条主要传播途径知晓率在82.5%~90.7%之间,艾滋病的非传播途径各项内容的知晓率在9.9%~53.8%之间,艾滋病的预防措施各项内容的知晓率在69.6%~86.1%之闻. [结论]被调查者艾滋病的一般知识各知识点的知晓率相差悬殊;艾滋病3条传播途径知晓率高,非传播途径知晓率低;艾滋病预防知识存在一定的差距.

    作者:张瑞兰;刘铁柱;许郑林;陈瑞玲;陈俊荣;刘立新 刊期: 2010年第04期

  • 马齿苋多糖对胎鼠大脑皮层细胞保护作用的研究

    [目的]证明马齿苋多糖对神经细胞的保护作用. [方法]用马齿苋水提多糖处理原代培养的胎鼠大脑皮层神经细胞,MTT法和PI-Hochest(33342)双染色法分析细胞成活率. [结果]马齿苋多糖能有效地提高谷氨酸和Aβ处理后的神经细胞相对成活率,马齿苋多糖对大脑神经细胞有促进作用,并星剂量影响;Western blot证明了马齿苋多糖对小鼠大脑细胞保护作用的机理可能是阻碍了由谷氨酸诱导的细胞凋亡通路中P35向P25的裂解.[结论]马齿苋多糖对神经细胞有保护作用.

    作者:康洁 刊期: 2010年第04期

  • 新升本院校本科生心理健康状况调查与思考

    [目的]了解新升本院校本科生心理健康状况. [方法]采用SCL-90症状自评量表对新升本院校1 559名本科生进行心理健康测试. [结果]有明显心理问题的本科生人数占全部本科生总数的25.9%,其中强迫、人际关系敏摩、偏执、忧郁为困扰大学生心理健康的四大问题,分别占总人数的39.4%、34.4%、23.1%和22.5%.有精神病性倾向的学生人数也占学生总数的14.2%. [结论]新升本院校本科生的心理健康教育值得关注.

    作者:丁雪红 刊期: 2010年第04期

  • 民族边远山区疾病预防控制中心人力资源现状分析

    [目的]了解公共卫生体制改革后少数民族边远山区县级疾病预防控制中心人力资源配置,为合理配置公共卫生人力资源提供参考. [方法]对百色市11个县级疾病预防控制机构进行调查,用SPSS13.0对其人力资源状况进行分析. [结果]县级疾病预防控制机构卫技人员数量不足(1.05人/万人)、小于25岁和25~35岁年龄组人员比例小于20%,本科及以上学历占3.23%,高级职称占1.08%,预防医学专业人员占25.34%,从事结核病、性病、艾滋病防制工作者数量不足.[结论]百色市县级疾病预防控制机构人力资源配置不足且欠合理,应加强人力资源规划和开发研究,全面提高疾病预防控制中心卫技人员整体素质.

    作者:黄照权 刊期: 2010年第04期

  • 用彗星试验评价两种保健食品的致突变和抗突变作用

    [目的]用TK6人类淋巴母细胞彗星试验评价两种保健食品的致突变和抗突变作用,为其安全性及保健功能的进一步开发提供依据. [方法]2种样品分别设阴性/溶剂对照、阳性对照、抗突变对熙组,以及致突变组和抗突变各4个剂量组,处理细胞4 h后按常规方法进行彗星分析. [结果]2种样品的致突变试验结果均为阴性,而抗突交试验则表现为阳性. [结论]两种保健食品均无诱导DNA损伤的作用.并可拮抗K2Cr2O7/MMC造成的DNA损伤.

    作者:陈维;邹思颖;张立实 刊期: 2010年第04期

  • 副溶血性弧菌分子分型技术研究进展

    副溶血性弧菌广泛分布子近海岸的海水、海底泥沙、浮游生物和鱼、虾、贝类等海产品中,是引起急性胃肠炎的重要病原菌之一,尤其在夏秋季节的沿海地区,常常引起暴发性食物中毒.随着分子生物学的发展,分子分型技术越来越广泛地应用于病原微生物流行病学研究,在副溶血性弧菌感染的预防、控制及检测等方面发挥了重要的作用.本文就近年来国内外在副溶血性弧菌分子分型技术的应用综述如下.

    作者:刘李;段永翔;许欣 刊期: 2010年第04期

  • 依达拉奉治疗急性脑出血的临床疗效观察

    [目的]观察依达拉奉对急性脑出血的临床疗效和疗程. [方法]将136例脑出血患者随机分为A、B、C 3组,A、B两组为治疗组,C组为对照组.3组均给予脑出血的常规治疗,A组在脑出血常规治疗的基础上给予依达拉奉30 mg+生理盐水100 ml静脉滴注,30 min内滴完,每天2次,7 d为一疗程,B组依达拉奉疗程为14 d,其他治疗同A组,C组仅给予脑出血的常规治疗.治疗前及治疗后14 d分别对3组患者进行神经功能缺损评分. [结果]与治疗前比较,3组病人在治疗后14 d神经功能缺损评分(NIHSS评分)均有改善,治疗组A和B与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05),对照组C与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗组A与B在治疗后14 dNIHSS评分差异无统计学意义(P>0.05).[结论]依达拉奉治疗急性脑出血安全有效,疗程7 d、14 d疗效无区别.

    作者:高展;江锦霞;魏瑞鹏 刊期: 2010年第04期

  • 西安市2004~2007年肺结核病人发现及治疗转归分析

    [目的]分析西安市2004~2007年肺结核病人发现与治疗转归情况,为结核病防控的可持续发展提供依据.[方法]根据西安市2004~2007年结核病控制工作月报表、季报表进行病例发现及治疗管理水平分析. [结果]4年登记新涂阳肺结核病人70314例,占活动性肺结核病人的比例从2004年的19.42%提高到2007年的44.94%,登记率从2004年的16.62/10万上升到2007年的24.31/10万,平均治愈率为91.84%. [结论]西安市实施国家结核病控制策略(DOTS)以来,肺结核病人发现与治疗管理水平不断提高,取得了显著的成效.

    作者:尚淑琴;刘卫平 刊期: 2010年第04期

  • 实时荧光RT-PCR技术在黄热病快速检测中的应用

    [目的]建立黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法并用于口岸黄热病的快速检测. [方法]体外转录黄热病病毒5-UTR的部分序列核酸作为阳性对照模板,设计实时荧光RT-PCR不同的反应程序和引物/探针浓度的组合,摸索佳反应体系条件并用于黄热病疫苗和入境发热患者标本的检测.[结果]建立的黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法佳反应体系为:2xRT-PCR缓冲液10 μl,正向引物5UTR-FP终浓度750 nM,反向引物5UTR-RP终浓度750 nM,探针5UTR-Probe终浓度500 nM,25xRT-PCR Enzyme Mix 0.8μl,RNA 5μl,用DEPC H2O补足到反应总体积20μl;Roche lightcycler仪器适用的扩增程序为:45℃10 min,95℃10 min;95℃5 s,56℃10 s(single),72℃15 s,45次循环.该方法低检测限约为20copies病毒/反应,与登革病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、基孔肯雅病毒等蚊媒病毒无交叉反应.应用该方法对黄热病疫苗、媒介蚊虫和入境发热患者的血清标本进行检测,结果为黄热病疫苗核酸阳性,其他标本为阴性.[结论]该实时荧光RT-PER方法灵敏度高,特异性强,适用于黄热病病毒的快速检验,防止该病在国境口岸的传入.

    作者:师永霞;相大鹏;郑夔;李小波;黄吉城;洪烨;幸芦琴;郭波旋 刊期: 2010年第04期

  • 高血压病危险因素的社区干预研究

    [目的]研究社区干预在改善高血压病患者血压水平及减少并发症发生中的作用. [方法]214例高血压病患者随机分为社区干预组和对照组,对社区干预组进行为期2年的社区综合干预,比较干预前后患者在血压水平、并发症发生率并与对照组进行比较.[结果]干预组收缩压与舒张压的下降幅度均大于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).干预组的心脑肾并发症发生率低干对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.001).[结论]社区干预可有效有改善高血压病患者血压水平,减少并发症的发生,值得推广.

    作者:包晓红;王翠蓉;阎妍 刊期: 2010年第04期

  • 戊肝患者及其密切接触者血清标志物检测结果分析

    [目的]探讨戊肝患者及其密切接触者血清抗体的携带现状以及HEV与HBV重叠感染状况.[方法]用酶联免疫吸附试验(EUSA)法对94例戊肝患者及其密切接触者人群血清标本开展抗HAV-IgM、HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc、抗-HCV、抗HEV-IgM、抗HEV-IgG检测,对两组研究对象实验室检测结果用X2检验进行统计分析.[结果]病例组抗HEV-IgM和抗HEV-IgG阳性率分别为27.66%和89.36%,密切接触者组抗HEV-IgM和抗HEV-IgG阳性率分别为4.94%和64.20%,两组人群抗HEV-IgM和抗HEV-IgG阳性率差异有统计学意义(P<0.01).病例组与密切接触者组伴HBV感染率分别为34.04%和30.86%,差异无统计学意义(X2=0.20,P=0.65). [结论]戊肝密切接触者有较高的抗HEV-IgM和抗HEV-IgG阳性率,戌肝患者与密切接触者人群相比耒显示出较高的HBV感染率.

    作者:何义林;罗锋;马智龙;曹淑清;张俊岭;陆祥彬 刊期: 2010年第04期

  • 城市中青年人群休闲体育活动与生活质量关系的实证研究

    [目的]了解城市中青年人群休闲体育活动与生活质量的关系.[方法]通过文献资料法、调查问卷法、数理统计及逻辑分析等方法对经常参加体闲体育活动与不经常参加休闲体育活动人群的生活质量进行分析研究. [结果]休闲体育活动与生活质量有着密切的关系,尤其与丰富居民的业余活动、缓解精神压力、增加积极情感、提高身体活动能力等因子的相关性较为密切.[结论]休闲体育活动是提高生活质量的一个重要因素.

    作者:李睿恒;张学雷;张宝荣 刊期: 2010年第04期

  • 自杀死亡的发生与分布特征研究进展

    自杀日趋成为世界各国一个重要的社会问题.自杀的发生与自杀工具的易获性有关.自杀在不同的国家间、城乡间分布不同.自杀有明显的季节性.在中国,服毒自杀为多见,地点以在家中为主.自杀人群分布具有性别、年龄、职业分布、文化程度、婚姻状况、家庭经济状况和种族特征.目前国际上对自杀采取三级预防模式.

    作者:夏云;邹宇华 刊期: 2010年第04期

  • 大学生医疗保险需求调查以及制度分析

    [目的]掌握四川大学本科生的基本情况,分析可能的影响园素,结合相关政策,提出改善大学生医疗保障制度的建议.[方法]根据已经获得的数据,采用统计描述、卡方检验等方法.[结果]大学生医疗保障存在问题,大学生的经济、健康状态以及大学生的意识等因素是影响大学生参保的主要原因,当前主要工作加强对校医院的管理,建立合理的大学生医疗保障制度.[结论]加强对大学生的医疗保险知识宣传,建立合理的保障制度,扩大医保覆盖面,保障全民参保.

    作者:唐荣;苏维 刊期: 2010年第04期

现代预防医学杂志

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主管:国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会 四川大学华西公共卫生学院