学术投稿

利用RTS500系统进行抗菌肽葛佬素蛋白的体外表达

罗平;许波;鲁永玲;周红

关键词:翻译系统, 抗菌肽, 葛佬素, 蛋白, 方法, 重组质粒, 体外表达, 裂解产物, 连接, 基因片段, 大肠杆菌, 表达载体, 重组子, 双酶切, 阳性, 扩增, 鉴定, 构建
摘要:目的:构建含目的基因葛佬素(Gloverin)的重组子并通过体外快速翻译系统RTS500(Rapid Translation System)对其进行表达.方法:采用PCR方法扩增gloverin cDNA,将其与表达载体pIVEX2.3连接;采用PCR及双酶切方法鉴定连接产物.将含目的基因片段的阳性重组质粒通过体外表达翻译系统RTS500,使其蛋白能在大肠杆菌(E. coli)裂解产物中进行表达.
四川生理科学杂志相关文献
  • 大安颗粒对戊巴比妥钠致小鼠睡眠的影响

    大安颗粒由白芍等12味中药组方,具滋阴血、宁心神等功效,在观察其对实验动物镇静作用的基础上,考察了对戊巴比妥钠致小鼠睡眠的影响.实验采用大安颗粒的流浸膏(3.0g(生药)·ml-1),系成都中医药大学科技中试中心研制提供.

    作者:王汉蓉;包旭;柳小秦;曹小霞;包定元 刊期: 2004年第04期

  • 抗金黄色葡萄球菌工程多肽体内外抗菌作用研究

    随着抗生素的问世和不断发展,以及临床广泛应用,细菌的获得性抗药性也逐年递增.近年来,抗耐药金黄色葡萄球菌有效的万古霉素也出现了耐药.耐青霉素金黄色葡萄球菌不只是医院内感染的大难题.正常人群中的感染发生率也一直在上升.因此寻找能对抗这些耐药菌株的新型抗菌素已经成为医学研究中必须立刻解决的燃眉之急.

    作者:张淑华;袁靖;欧真蓉;邱晓庆;李幼平 刊期: 2004年第04期

  • 阳离子多肽MP-1对脓毒症模型小鼠的保护作用及机制

    目的:观察阳离子多肽MP-1的体内外抗内霉素(LPS)活性并探讨其对脓毒症小鼠的保护机制.

    作者:郭毅斌;郑江;吕根法;曹红卫;卫国;王良喜 刊期: 2004年第04期

  • 铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药机制

    铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa即PA),为条件致病菌.是院内感染的常见致病菌.常引起菌血症、肺炎、泌尿系感染、烧伤感染和囊性纤维化继发感染等疾病.铜绿假单胞菌能够通过不同的机制对各类抗生素产生药物耐受性,导致抗生素治疗的失败[1].β-内酰胺类抗生素是一类在临床上应用广泛的抗生素,近年来铜绿假单胞菌对其耐药率不断升高.本文对铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药机制作一综述.

    作者:刘蓉;周黎明;王浴生 刊期: 2004年第04期

  • 双岐杆菌胞壁蛋白诱导人肠上皮细胞β-防御素-2基因的表达及NF-κB的活化

    本研究应用超声破碎和离心法分离获得双岐杆菌胞壁,2%SDS提取其胞壁蛋白,superdex-200柱层析获得多个蛋白组分.RT-PCR和Northern杂交检测到双岐杆菌全菌、胞壁、胞蛋白均可诱导人肠上皮细胞株HT-29 and Caco-2细胞表达人β-防御素-2(HBD-2)mRNA的显著表达.为了在蛋白质水平上检测其基因的增强表达,构建了HBD-2基因原核表达载体,并制备获得其重组制品的多克隆抗体,ELISA、Western blot和免疫细胞化学等技术均检测到双岐杆菌胞壁组分可刺激肠上皮细胞高效表达HBD-2.P65免疫细胞化学染色检测到在双岐杆菌胞壁蛋白刺激下NF-κB向细胞核移位,IκB和磷酸化IκBwestern blot检测到IκB发生磷酸化和降解,表明基因转录因子NF-κB的活化,提示双岐杆菌胞壁蛋白信号可能通过NF-κB信号转导通路诱导肠上皮细胞β-防御素-2基因的表达.

    作者:王国兴;吴琦;黄宁;王伯瑶 刊期: 2004年第04期

  • 铝负荷对小鼠脑内ChAT/AchE的影响及蜕皮甾酮干预作用

    目的:观察铝负荷对小鼠脑内胆碱乙酰化酶(ChAT)和胆碱酯酶(AchE)的影响及铝负荷对小鼠被动回避实验、空间辨别实验的影响以及蜕皮甾酮(Ecdysterone,ECR)的干预作用.

    作者:杨素芬;李昱;周岐新;龚其海;吴芹;石京山 刊期: 2004年第04期

  • 小青龙加减方药理作用研究摘要

    目的:研究小青龙加减方平喘作用及作用机理;方法:通过豚鼠药物引喘、豚鼠体外气管容积法、大鼠被动皮肤过敏反应PCA、DNCB所致小鼠DTH反应、对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响、角叉菜胶致足跖肿胀的影响、对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响、对小鼠棉球肉芽肿的影响、对致敏小鼠中脑单胺类神经递质含量的影响、对肥大细胞的影响、对小鼠炎症组织炎症介质、丙二醛及肝组织LPO含量的影响实验,研究小青龙加减方平喘、抗过敏、抗炎及平喘作用机理的重要参数;

    作者:唐灿;曾南;沈映君 刊期: 2004年第04期

  • 甲磺酸齐拉西酮注射液人体药代动力学

    齐拉西酮通过抵抗多巴胺D2和5HT2受体而显现治疗精神病的疗效.文献报道单剂肌注齐拉西酮的生物利用度为100%,达峰时间为60min.t 1/2为2~5h.本实验研究了重庆圣华日曦药业有限公司研制甲磺酸齐拉西酮注射液人体药代动力学.

    作者:周远大;何海霞 刊期: 2004年第04期

  • 大蒜黄酮的分离及抗内毒素活性的评价

    目的:筛选和评介大蒜提取成分的抗内毒素作用.方法:通过离子交换-高效液相色谱等方法从大蒜中筛选出2个成分(大蒜黄酮1、2);采用动态浊度法测定其体外中和内毒素的能力;观察对内毒素(20mg/kg)攻击小鼠的保护作用.结果:大蒜黄酮2能直接中和内毒素,对内毒素攻击小鼠有显著的保护作用.结论:大蒜黄酮2具有显著的抗内毒素活性.

    作者:蒋栋能;郑江 刊期: 2004年第04期

  • 果糖二磷酸钾盐对大鼠冠脉结扎所致缺血再灌注心律失常的治疗作用研究

    目的:研究果糖二磷酸钾盐对大鼠冠脉结扎所致缺血再灌注心律失常的治疗作用.方法:采用冠脉结扎法,建立大鼠缺血再灌注心律失常模型.将模型成功的60只大鼠随机分为模型对照组、果糖二磷酸钾盐小剂量组、中剂量组、大剂量组、1,6-二磷酸果糖组、氯化钾组.分离股静脉,插管,于冠脉结扎致心肌缺血10分钟后给予相应的药物.

    作者:杨辉;周远大;何海霞;王弛 刊期: 2004年第04期

  • 异鼠李素对肺癌的影响及其抗肿瘤机制的初步探讨

    目的:探讨异鼠李素体外对人肺癌细胞A549、体内Lewis肺癌增殖的影响及初步研究其抗肿瘤机制.方法:以不同浓度异鼠李素加入体外培养的A549细胞中,用MTT比色法,细胞计数法,细胞生长曲线的测定、细胞形态学变化、克隆形成、3H-TdR掺入实验等观察测定体外抗肿瘤活性,用流式细胞仪、基因组DNA片段分析,彗星电泳、免疫组化等观察其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用;采用Lewis细胞C57BL/6鼠移植瘤,观察药物对移植瘤的影响.

    作者:朱玲;王正荣;杨春蕾;周黎明;万莉红;任福强;赵研研 刊期: 2004年第04期

  • 果糖二磷酸钾盐对血钾、细胞内钾浓度的影响研究

    目的:研究果糖二磷酸钾盐对低钾血症家兔血清钾浓度、细胞内钾浓度的影响.方法:24只新西兰家兔,建立低钾血症模型,随机分为四组,模型对照组、氯化钾组、门冬氨酸钾镁组、果糖二磷酸钾盐组.四组动物均静脉滴注含有相同钾浓度的相应四种药物,测定给药后60分钟、120分钟的血清钾浓度,120分钟后,Ficoll液分离外周血淋巴细胞,4%胃蛋白酶破坏淋巴细胞,用钾离子选择性电极直接测定淋巴细胞内钾浓度.

    作者:杨辉;周远大;何海霞;王弛 刊期: 2004年第04期

  • 丹黄保肝胶囊对小鼠保肝降酶作用的实验研究

    目的:探讨丹黄保肝胶囊保肝降酶的作用.方法:取小鼠60只,雌雄各半,随机分成6组,每组10只,雌雄各半.设正常、模型、阳性对照组(联苯双酯组)和丹黄保肝胶囊三个剂量组(高、中、低三个剂量).

    作者:杨莉娟;王张;熊玉霞;孟宪丽 刊期: 2004年第04期

  • AngⅡ对ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱研究

    目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV304),实验分AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组.采用改良MTT法、Fenton反应和硝酸酶还原法分别观察不同浓度AngⅡ在4h、12h和24h时对ECV304细胞的增殖率和细胞产生ROS(·OH和NO)的量.应用基因芯片技术和光镜分别检测0.0625和1μmol/LAngⅡ作用12h时ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱和细胞形态学变化.

    作者:谢利霞;褚微微;张恒丽;李莉;张旋;王殿华 刊期: 2004年第04期

  • The Pharmacological activities of the aqueous extract from the stem of U. macrorrhiza on nociceptive response using writhing, hot plate and formalin test in mice and the antipyretic activity in yeast-induced fever,anti-inflammatory effect in carageenin induced paw edema in rats, were examined. The LD50 value of intraperitoneally injected U.

    作者: 刊期: 2004年第04期

  • BWYJ扩张血管与抗血小板聚集效应及其机理研究

    目的:观察萘哌地尔衍生物BWYJ对高血压大鼠血压、家兔血管活动与血小板聚集的影响,并就其血管活性进行机理探讨.方法:1.通过静脉给药,观察BWYJ对高血压大鼠血压的影响.2.采用家兔主动脉等张收缩的方法,观察BWYJ对去甲肾上腺素(NA)、5-羟色胺(5-HT)和高钾量效曲线的影响.

    作者:王会玖;黄燮南;吴芹;余丽梅;孙安盛 刊期: 2004年第04期

  • HMGN2抗菌结构域的研究

    目的:本室从人外周血单个核白细胞分离获得一个新的抗菌多肽,其氮端氨基酸序列与人HMGN2相同.本研究HMGN2的抗菌谱和其功能结构域.方法:OMIGA蛋白结构软件分析HMGN2的二维结构.合成HMGN2氮端和碳端肽片段和α-螺旋结构域,检测各合成肽片段的抗菌活性.同时构建HMGN2全肽和α-螺旋结构域编码基因原核表达载体及制备其大肠杆菌重组表达产品,检测重组全肽和α-螺旋结构域的抗菌活性.

    作者:冯云;黄宁;吴琦;鲍朗;王伯瑶 刊期: 2004年第04期

  • 青刺抗炎、降血脂药理作用初步研究

    目的:本文通过对青刺的抗炎、降血脂作用的筛选,为青刺进一步的化学研究和药效学研究奠定基础.方法:(1)采用小鼠毛细血管腹腔通透性,小鼠耳肿胀的试验方法,来观察青刺的抗炎作用;(2)采用高脂饲料法,建立实验性高脂血动物模型;采用小鼠腹腔注射75%蛋黄乳液建立高血脂模型,测量总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)观察青刺的降血脂作用.

    作者:王兰;杜娟;余芍静;张艺 刊期: 2004年第04期

  • 盐酸非那吡啶片剂人体生物等效性试验

    1方法设计本试验采用双制剂、两周期、双交叉试验设计,单剂量口服给药.将18名受试者随机分为A、B两组,每组9名,在Ⅰ、Ⅱ阶段分别交叉口服国产药或进口药,交叉服药前经一周清洗期.试验前禁食12小时后,于次日晨8时空腹吞服200mg国产非那吡啶或进口非那吡啶(200ml温开水服药).服药当日统一进标准餐.受试期间禁止大量活动,禁止吸烟、饮酒及含酒精、咖啡因类饮料,试验期间禁止一切非国产药物.

    作者:周远大;何海霞;邱峰 刊期: 2004年第04期

  • 以Tau蛋白为靶点治疗阿尔茨海默病的药物发展

    阿尔茨海默病(Alzheimer'disease,AD)是老年人中痴呆主要的原因,以不可逆进行性记忆和认知功能障碍为主要临床症状.目前AD的病因和发病机制尚未完全阐明,其主要神经病理特征包括:神经细胞外以β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积为核心形成的老年斑(senile plaques,SP);神经细胞内以过磷酸化的tau蛋白为核心形成的神经元纤维缠结(neurofibrillary tangle,NFT)和神经细胞丢失.NFT以成对螺旋丝样结构(paired helical filament,PHF)存在,与临床痴呆症状呈正相关[1].PHF具有不溶解性和对蛋白酶解的抵抗性,tau蛋白是组成PHF/NFT唯一的必需成分,在AD的发病机制中起重要作用[2].

    作者:杨云霞;包定元;包旭;周黎明;彭英 刊期: 2004年第04期

四川生理科学杂志

四川生理科学杂志

主管:四川省科学技术协会

主办:四川省生理科学会