王全立
目的 建立可靠的HLA-DRB1等位基因全长序列的分子克隆和测序方法.方法 设计、合成HLA-DRB1基因全长序列PCR引物和探索PCR反应体系,采用长距离PCR技术,对10份经PCR产物直接测序、基因型已知的标本,扩增HLA-DRB1基因5′-UTR区、6个外显子、5个内含子和3′-UTR区,全长约11kb.PCR产物纯化后作长片段分子克隆,筛选阳性克隆,提取质粒DNA,采用自行设计的测序引物测序.结果 PCR扩增获得了特异性目的片段,克隆测序后获得了全部10种等位基因的全长序列.将HLA-DRB1等位基因全长序列划分为9个亚区,群体遗传学分析发现第2外显子的平均核苷酸变异率(π)8.653％,高于其他外显子,并且非同义突变率(dn)9.029％大于同义突变率(ds)7.846％.第5内含子的平均核苷酸变异率高达13.690％,DRB1* 09∶01∶ 02和DRB1*07∶01∶01∶02这2个等位基因第5内含子的序列与其他等位基因序列差别较大.结论 采用HLA-DRB1基因全长序列分子克隆及测序方法获得了HLA-DRB1基因各亚区多态性分布特点等基础资料.
作者：卢亮；徐筠娉；柳清；邓志辉 刊期： 2012年第06期
我们在新生儿溶血病产前检查中发现1名孕妇体内存在高效价IgG抗-A伴抗-D、抗-E的病例,现将检查结果分析报道如下.1 资料与方法1.1 标本来源 孕妇,26岁,“O”型,Rh(D)阴性,孕4流3,3年前曾经因流产大出血输注4URh阴性红细胞(未经测定RhC、c、E、e).产前检查血标本为怀孕3个月进行新生儿溶血病产前检查时抽取的静脉血标本.新生儿血标本为该孕妇进行保胎治疗至足月生产时所留取的脐带血标本.
作者：段福才；辛喜勤；李大元；张秦永 刊期： 2012年第06期
目的 探讨过期血液中血小板生长因子含量及促细胞增殖作用.方法 选取全血和浓缩血小板样品为研究对象,分别采用冻融法和CaCl2法处理保存d1、5、10的血小板,应用ELISA试剂盒测定样品中PDGF-AB、TGF-β1的含量,应用CCK-8试剂盒测定样品的促细胞增殖作用;在全血保存d1、10、21、35、40时取样,离心收集血浆,测定其血小板生长因子含量和促细胞增殖作用.结果 CaCl2法处理的d1、5、10血小板样品中PDGF-AB含量分别为86.56±19.66、76.15±18.55、70.65±24.13 ng/ml,TGF-β1的含量分别为86.40±19.92、79.80±16.54、92.45±17.59 ng/ml;冻融法处理的d1、5、10血小板样品中PDGF-AB含量分别为48.24±3.73、60.91±18.39、69.35±22.29 ng/ml,TGF-β1的含量分别为107.57 +46.48 149.33±24.78 154.26±38.99 ng/ml,同一处理方法d1、5、10血小板样品中生长因子含量无明显差别(P＞0.05);同一处理方法不同时间点血小板样品对细胞增殖作用无明显差别(P＞0.05);冻融法处理后样品在浓度20％时促细胞增殖率明显下降;不同时间点全血血浆促细胞增殖作用趋势线相近,在样品浓度达到20％时促细胞增殖率均明显下降.结论 过期血小板中血小板生长因子含量及促细胞增殖作用与新鲜血小板无显著差异,过期全血血浆中的血小板生长因子与新鲜全血相比也得到了相似的初步结果.
作者：于晶晶；王红；刘曦；袁理；刘嘉馨 刊期： 2012年第06期
血液安全关乎人民身体健康、社会安定和谐.为确保输血的安全和有效,预防和控制输血不良反应及输血传染病,国家及其卫生行政主管部门近10多年来制定并完善了一系列法律法规,其中2006年出台的《血站管理办法》(2006年3月1日实施)、《血站质量管理规范》(2006年4月25日实施)、《血站实验室质量管理规范》(2006年7月24日实施)3个法规性文件(简称“一法两规”),不仅是我国各级采供血机构建设的“法理”依据,而且标志着我国的血站管理由经验管理迈向全面质量管理的科学轨道.5年来随着“一法两规”的贯彻落实,血站管理实践证明了科学的全面质量管理模式和手段是临床输血安全、充足和有效的根本保障[1].
作者：马丽霞 刊期： 2012年第06期
目的 验证不同真空采血管、保存温度、时间等对核酸检测(NAT)结果的影响,为NAT检测的采血管选取、过程控制、检测策略等提供数据支持.方法 进行3个试验:1)标本保存温度、离心前保存时间及采血管对NAT联检试验结果的影响:将含HIV-1( 150 IU/ml)或HCV(60 IU/ml)或HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本按照保存温度分为30℃组、4℃组,之后依据标本离心前的保存时间不同分为4h,6h,8h,10 h,12 h,24h组,再依据采血管生产厂家不同分为A、B、C组,对所有标本进行NAT联检试验,利用卡方统计分析各因素对NAT联检试验结果的影响;2)标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响:将含HIV-1( 150 IU/ml)或HCV( 60 IU/ml)或HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本按照保存时间不同分为0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d组,再依据采血管不同分为采血管A、B、C组,对所有标本进行NAT鉴别试验,利用卡方统计分析标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响;3)保存时间对HCV阳性标本NAT定量结果的影响:选取9份浓度范围在1.04×102 IU/ml ～ 4.86×103 IU/ml之间的弱阳性标本,依据标本在4℃保存时间的长短不同,分为0d、ld、2d、3d、4d、5d、6d、7d组,进行定量HCVRNA检测,分析4℃保存条件下保存时间对血浆中HCV RNA浓度的影响.结果 试验1:对于全血标本,4℃或30℃的保存温度,4～24 h的离心前保存时间以及采用不同的采血管对弱阳性标本NAT检出率的影响差异均无统计学意义(P＞0.05).试验2:在4℃保存条件下,采用A采血管保存含HIV-1( 150 IU/ml)的弱阳性标本0～7d,保存后d3,d4、d5、d6、d7弱阳性标本的NAT检出率与0d相比,差异具有统计学意义(P＜0.01);采用B采血管保存含HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本0～7d,保存后d3和d7此标本的NAT检出率与保存前相比差异有统计学意义(P＜0.01);其余各组标本的NAT检出率与保存前相比差异没有统计学意义;试验3:9份HCV弱阳性标本的浓度7d内没有出现明显变化.变化范围均在0.56log之内,且有相同的变化趋势,即在4℃保存2d后,其浓度开始下降.结论 采用Procleix Ultrio Assay和Procleix Ultrio Discriminatory Assay分析系统,在不超过30℃的采血环境中,NAT标本采集后可以在24h内离心处理;为提高鉴别阳性率,建议4℃保存的献血者标本在NAT联检阳性后2d内完成NAT鉴别检测.
作者：姚凤兰；陈瑜；汪德海；冷婵；查祎；张莉；王中梅；杨海平；郑静；葛红卫 刊期： 2012年第06期
卫生部于2012年6月7日公布了《医疗机构临床用血管理办法》(卫生部令第85号)[1](以下简称《临床用血管理办法》),并将于2012年8月1日起施行,同时废止《医疗机构临床用血管理办法(试行)》(卫医发[ 1999]第6号)(以下简称《临床用血办法1999年版》).深入学习、理解和实施《临床用血管理办法》既是医疗机构,也是血站当前的1项重要工作.现将《临床用血管理办法》的研读体会整理如下,与输血界同仁交流并请批评指正.
作者：郭永建 刊期： 2012年第06期
目的 评估沈阳地区不同口腔颌面外科手术围术期用血状况,以了解血液保护取得的临床疗效和存在的问题.方法 2005年1月1日～2010年12月31日在本院行口腔颌面部外科手术,且在围术期接受输血患者共421名,采用回顾性研究方法比较不同手术种类不同年份临床输血趋势.结果 6年来红细胞悬液输入量随输血手术例数逐年增多而增多.红细胞悬液的平均输入量呈上升趋势,2010年比2005年红细胞悬液平均输入量增加0.66 U.红细胞悬液输入量的变化趋势与输血手术例数呈明显相关性P＜0.05;新鲜冰冻血浆输入量的变化趋势与输血手术例数呈无明显相关性P＞0.05.结论 血液保护工作在口腔颌面部外科手术围术期红细胞悬液输入中有一定成效,但对于新鲜冰冻血浆和血小板的合理使用还需要进一步改进.
作者：张霞；何晓帆；白晓峰；张倩 刊期： 2012年第06期
目的 了解丽水市无偿献血者Ph阴性的血清学表型和不规则抗体分布情况.方法 应用血清学方法对献血者进行Rh阴性筛选及确认、血清学表型鉴定及抗体筛选抗的检测分析.结果 在38 500人份标本中共确认Rh阴性151例,其中检出血清含有不规则抗体的标本有4例,Rh阴性献血者中ABO血型分布的结果:A型46例(30.4％),B型43例(28.4％),O型55例(36.4％),AB型7例(4.6％)及其血清学表型分布.结论 通过这次的筛查了解丽水市无偿献血者Rh阴性的血清学表型和不规则抗体的初步状况,并掌握丽水市Rh阴性血型频率,血清学表型分布及其不规则抗体的情况.
作者：庄杰；赵龙友；纪勇平；骆昊翠；孙敏；吴士定 刊期： 2012年第06期
目的 对血站NAT检测实验室的清洁消毒过程实施控制,采取监控措施对消毒效果进行评估,以满足核酸检测环境的需求.方法 采用空气下落法和物体表面擦拭法,每月采集NAT实验室工作前消毒后1h的环境和物体表面18个监控点的无菌生理盐水标本47份,以HBV DNA为参照物进行核酸检测并分析检测结果;结合实验室质控结果及NAT单阳性结果,分析检测实验列表有效率、假阳性率与监控结果的相关性.结果 2010年11月至2011年10月,11次清洁消毒监控结果中有2次监控合格率分别为95.5％、97.9％,均发生于NAT检测工作站出风口的监控点,其余均为100％,t=223.83,P＜0.05,有统计学意义;跟进消毒措施后,对阳性监控点跟踪监控结果均为阴性.分析检测实验列表有效率和假阳性率与监控结果合格率的相关性x2=0.234,P＞0.05,无统计学意义.结论 NAT检测工作站出风口监控点的反应性结果不会造成实验结果假阳性率的增高,设备维护保养中的清洁消毒工作可有效清除污染.NAT实验室现行清洁消毒方法有效,且符合生物安全实验室要求.
作者：王中梅；冷婵；姚凤兰；汪德海；郑静；杨海平；查祎；王瑞；葛红卫 刊期： 2012年第06期
目的 了解亲友互助献血小板者与自愿无偿献血小板者的初筛不合格差异原因.方法 将2种献血者采前征询、填表、查询、体检、初筛检验结果进行统计分析.结果 亲友互助献血小板组初筛不合格率(76.19％)明显高于自愿无偿献机采血小板组(6.5％).结论 自愿无偿献机采血小板者应为献血的主要群体,而亲友互助献血小板者可作为血源不足时的一种补充.
作者：吴次宁；汪彦；田浩；万浬科；罗勋；冯伟 刊期： 2012年第06期
目的 了解民营医院临床输血和临床输血质量管理的情况,为规范医院临床输血管理提供决策依据.方法 实地考察民营医院,全面了解与浙江省血液中心签订采供血协议的所有民营医院(15家)的基本情况、管理情况,并查阅临床输血病历了解临床输血规范化管理情况.结果 15家民营医院2011年1～11月总用血量2494.4 U,占同期所有用血医院的0.69％,15家医院均未建立临床输血质量体系.22例输血病例调研发现采用酶联免疫法检测HBsAg/抗-HCV仅2例,抗-HIV为11例,所有病例均未采用酶联免疫法检测梅毒螺旋体,符合输血指证的病例13例,占59.1％.结论 民营医院在临床输血管理中仍存在很多问题,必须制定临床输血准入、考核和退出机制,规范输血前传染性指标检测工作,全面提升临床输血的安全性.
作者：冯晴；孟忠华；虞容；吕杭军 刊期： 2012年第06期
当前我国平均人口献血率仅为0.84％,远远低于世界高收入国家的4.54％和中等收入国家的1.01％,而人口献血率未达到1％的,即说明献血量低于通常被视为必要的水平[1].我市为典型移民新兴工业城市,主要以钢铁企业带动城市发展,全市总人口近30万,全市人口献血率为1.7％,高于全国平均水平,在临床用血量以15％的比率逐年增涨的情况下,未出现明显的结构性、季节性缺血现象.在无偿献血人群分布上,相对于其它城市无偿献血人群主要以高校学生、部队官兵及流动人群为主不同,我市献血人群分布主要以企业职工为主,约占总献血人数的60％以上,不受如寒暑假、小长假、以及部队战备任务、务工人员流动性大等因素影响,并且在血液紧张,偏型及应急突发事件中发挥着积极作用.现将日常工作中针对以企业职工为主要献血人群的分布特点所采取的宣传和招募策略做以下粗浅的探讨.
作者：王英 刊期： 2012年第06期
近年来,对血液检测实验室实施质量监控已经成为实验室的一项重要质量活动.实验室质量监控的要求也更多体现在行业法规中.《血站实验室质量管理规范》[1]规定,血站实验室“必须建立和持续改进实验室质量体系,并负责组织实施和严格监控”.美国临床实验室标准委员会CLSI-GP35的发布,更明确了实验室可采用质量监控指标,对检测过程和检测要素进行量化管理和监控,并将其作为改进和完善实验室质量管理体系的重要依据之一.目前,血站行业正在逐步实施血液核酸检测(NAT),建立核酸检测实验室(NAT实验室).相对于已经建立成熟质量监控指标体系的血清学检测过程,如何应用质量监控指标监控NAT检测过程,尚无报道.我们依据本中心NAT实验室基本状况,从过程分析入手,建立了总体类、过程类、资源类监控指标.用这些指标监控NAT过程和NAT实验室质量体系运行状况,以达到控制检测过程、持续改进质量体系的目的.
作者：汪德海；王瑞；葛红卫 刊期： 2012年第06期
目的 探索通过免疫亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化人α1-抗胰蛋白酶浓缩物的方法.方法 24℃下,将Cohn氏法组份Ⅳ用Tris缓冲液抽提0.5h后,离心4 750 g×15 min,上清液加入亲水型气相二氧化硅脱脂后,离心6 000 g×15 min,再用1.2 μm的滤膜过滤;通过GE公司新型的Alpha-1 Antitrypsin Select免疫亲和凝胶层析柱,对α1-抗胰蛋白酶进行纯化.用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;用SDS-PAGE鉴定α1-抗胰蛋白酶的纯度,并用Western Blot和串联质谱分析鉴定纯化的蛋白;通过发色底物法测定α1-抗胰蛋白酶活性.结果 纯化的α1-抗胰蛋白酶在非还原性SDS-PAGE图谱上呈现1条54 kD左右的蛋白带和1条约140 kD的多聚体蛋白带,经过还原性SDS-PAGE多聚体条带解聚,Western Blot也可以反应相关变化;在经过前处理和亲和层析后,α1-抗胰蛋白酶活性回收率为(60.35±1.39)％,α1-抗胰蛋白酶总活性回收率为(41.88±6.98)％,纯化倍数为(71.68±1.32)倍,比活性大约(1.00～1.05)PU/mg.结论 GE公司Alpha-1 Antitrypsin Select免疫亲和层析亲和层析可以从Cohn氏法组份Ⅳ中特异性捕获α1-抗胰蛋白酶浓缩物.
作者：张学俊；叶生亮；曹海军；王宗奎；杜晞；谢亦武；李长清 刊期： 2012年第06期
2010年血站核酸检测(NAT)试点实验室在部分血站开始试运行.在NAT实验室构建过程中,人员培训是检测过程顺利进行,获得高质量、高效率检测工作的重要保证[4,5].也是实验室构建质量体系过程中重要质量活动[6].对此本实验室根据血站实验室的法规要求[1,2],NAT检测技术对操作人员在理论和技能方面的需求,结合血站血液筛查工作的特点,设计了多内容、多模式、多角度的理论培训和实际操作紧密结合的滚动式培训框架.从人员角度保证了核酸检测实验室工作的顺利进行.
作者：郑静；姚凤兰；冷婵；王中梅；汪德海；杨海平；查祎；葛红卫 刊期： 2012年第06期
1 病例简介患者,女,89岁,汉族,无输血史,孕2产2,无新生儿溶血史.2009年因“糖尿病合并左下肢溃疡”在当地社区卫生服务中心治疗,连续服用SMZ 2年余.近期因头晕、恶心、四肢乏力3d来我院就诊,临床诊断为重度贫血(原因待查).入院时外周血常规检查结果:RBC 1.23×1012/L,WBC 7.1×109/L,Plt 145×109/L,Hb 45g/L,Hct 0.117.入院后给予对症治疗(包括输注悬浮红细胞),备血时,血型血清学检测红细胞血型:A型、RhD阳性,抗体筛查阳性;血液交叉配血试验:盐水介质法主侧、次侧均无凝集溶血,凝聚胺介质法主侧、次侧均凝集,进一步检测确认患者血清及放散液中检出类抗-DC类同种特异性自身抗体.
作者：鲍聿炜；黄崴；吴春芳；胡雷光；向东 刊期： 2012年第06期
无偿献血者绝大部分都是为了奉献爱心,是为社会做出自己应有的贡献,同时也存在一些矛盾和纠纷,这些消极的现象和绝大部分正面的积极的结果比起来只是风毛麟角.尽管有些还达到了很严重的程度,但对整个血站的采血工作和良好的工作秩序造成不同程度的影响.下面,我们就针对近年来发生较严重纠纷一些行为表现中存在的实例问题进行探讨和分析.
作者：薛斌利；叶世辉；宋王洁；洪丙炎；李晓玲；杨华；潘志伟；张建耕 刊期： 2012年第06期
目地 探索“五常法“在血站仓库管理中的应用效果.方法 通过运用”五常法“,将常组织、常整顿、常规范、常清洁、常自律运用于血站仓库管理中.结果 提高了血站仓库物资管理质量,有效的利用了仓储空间,减少物资的积压和浪费,保证了采供血物资的安全性.结论 运用“五常法”对血站仓库进行规范化管理,有利于提高物资质量,保障了原材料及时和充足的供应,物资进仓的合格率达到100％,仓储物资的保管零报废,提高了工作效率.
作者：杨华 刊期： 2012年第06期
目的 综合评价大学生和农民工无偿献血知识和动机.方法 通过调查石家庄市大学生和农民工无偿献血知识和动机认知现状,对大学生和农民工无偿献血知识和动机作出综合评价.结果 献血反应发生率很小、精神因素是献血反应发生的主要因素、献血是为了尝试体验一下献血过程、献血是迫于无奈或压力等回答正确率不高;免费用血、累计无偿献血达到一定数量者给予奖励、无偿献血不会影响健康和感染疾病以及奉献爱心,帮助需要用血的患者、献血可以体现社会价值、今后享受用血优惠、献血可以减肥等价值取向上,2类人群认知差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大学生的整体认知水平高于农民工,但2类人群的认知状况有待于进一步提高.
作者：宋任浩；赵莉华；何路军 刊期： 2012年第06期
目的 探讨不同温度和时间条件下保存对血液中丙型肝炎病毒核酸( HCV RNA)稳定性的影响.方法 采集12名丙型肝炎患者4ml的外周血,分装、保存在不同温度及相同温度下的不同时间,利用实时荧光定量PCR检测其不同时间点血浆HCV RNA的水平(log IU/ml),并与该血液标本的起始HCV RNA水平做比较分析.结果 当血液标本中的HCV RNA起始水平≥105 IU/ml时,在25℃放置6h后转至4℃保存18 h(a)、25℃放置12 h后转至4℃保存12 h(b)及4℃放置24 h(c)等3种保存条件,24 h时内检测到血液标本的HCVRNA水平105IU/ml组分别为(5.15±0.16)、(5.15±0.15)及(5.16±0.16) IU/ml (P＞ 0.05),107 IU/ml组分别为(7.45±0.21)、(7.44±0.23)及(7.45±0.24) IU/ml (P＞0.05);当血液标本中HCVRNA起始水平在临界范围[(3.38±0.14) IU/ml]时,在条件a、b保存24h血液标本的HCV RNA含量分别为(2.28±1.52) IU/ml、0(均为P＜0.01),而条件c保存24h血液标本的HCV RNA含量为(3.28±0.20) IU/ml (P ＞0.05);当血液标本中HCV RNA起始水平为103 IU/ml时,在4℃保存48h时HCVRNA含量为(2.31±1.54) IU/ml (P＜0.01).结论 当血液中HCVRNA起始浓度较低时,HCV RNA的稳定性较差,短时常温保存都会造成病毒核酸的降解.
作者：熊玉娟；周华友 刊期： 2012年第06期
中国输血杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中国输血协会 中国医学科学院输血研究所
