学术投稿

伴放线放线杆菌菌毛融合蛋白基因的克隆

李毅;孙宏晨;郭学军;冯书章

关键词:菌毛蛋白, 基因克隆, 伴放线放线杆菌
摘要:目的探讨克隆伴放线放线杆菌菌毛融合蛋白基因ltb-fap的方法.方法采用PCR方法扩增伴放线放线杆菌菌毛相关蛋白(Fap)和大肠杆菌不耐热性肠毒素B亚单位(Ltb)的融合蛋白基因ltb-fap,NcoⅠ/EcoRⅠ双酶切载体pET28a(+)及ltb-fap基因,连接形成重组质粒pETltb-fap,转化至大肠杆菌DH5α,扩增后提取质粒pETltb-fap进行PCR鉴定、酶切鉴定和序列分析.结果本实验扩增的ltb基因约为303 bp,fap基因约为228 bp,融合基因约为531 bp.重组质粒含外源基因片段约为531 bp,酶切鉴定可得到一条约531 bp带,DNA测序结果表明与GenBank中的fap基因序列有97.4%的同源性.结论成功克隆出融合蛋白基因ltb-fap,为进一步进行蛋白表达、制备抗体奠定基础.
华西口腔医学杂志相关文献
  • 大鼠骨髓间充质干细胞复合藻酸盐体内异位成软骨的初步研究

    目的探讨以藻酸盐为支架材料,经体外软骨向诱导的大鼠骨髓间充质干细胞为种子细胞,在体内异位形成组织工程化软骨的可能性.方法32只雄性SD大鼠随机平均分为实验组和对照组两组.实验组分离培养自体骨髓间充质干细胞,传至第3代经转化生长因子β等诱导因子诱导10 d后与藻酸钠复合,并滴加氯化钙使其成凝胶状后注入大鼠背部皮下.对照组只注入藻酸盐.术后4周、8周取材进行苏木精-伊红、奥新蓝染色及透射电镜观察.结果实验组术后8周肉眼可见软骨形成,苏木精-伊红、奥新蓝染色发现有大量软骨形成,软骨内可见细胞团,软骨细胞周围基质丰富,藻酸盐降解明显,未降解的藻酸盐松散的分布于软骨间.对照组未见软骨样组织形成.结论经软骨向诱导的自体骨髓间充质干细胞结合藻酸盐凝胶可在体内异位形成较理想的组织工程化软骨.

    作者:刘磊;陈润良;田卫东;闫征斌;陈希哲;李声伟;王涛 刊期: 2005年第01期

  • 伴放线放线杆菌菌毛融合蛋白基因的克隆

    目的探讨克隆伴放线放线杆菌菌毛融合蛋白基因ltb-fap的方法.方法采用PCR方法扩增伴放线放线杆菌菌毛相关蛋白(Fap)和大肠杆菌不耐热性肠毒素B亚单位(Ltb)的融合蛋白基因ltb-fap,NcoⅠ/EcoRⅠ双酶切载体pET28a(+)及ltb-fap基因,连接形成重组质粒pETltb-fap,转化至大肠杆菌DH5α,扩增后提取质粒pETltb-fap进行PCR鉴定、酶切鉴定和序列分析.结果本实验扩增的ltb基因约为303 bp,fap基因约为228 bp,融合基因约为531 bp.重组质粒含外源基因片段约为531 bp,酶切鉴定可得到一条约531 bp带,DNA测序结果表明与GenBank中的fap基因序列有97.4%的同源性.结论成功克隆出融合蛋白基因ltb-fap,为进一步进行蛋白表达、制备抗体奠定基础.

    作者:李毅;孙宏晨;郭学军;冯书章 刊期: 2005年第01期

  • 非创伤性修复技术治疗老年根面龋的临床疗效

    牙根龋病是老年人常见的牙病,严重影响老年人口腔及全身健康,对老年人的龋病治疗已受到广泛重视[1,2].大多数老年人对口腔疾病的治疗恐惧,对钻牙时机器发出的噪音及钻牙时的酸痛感等难以承受.非创伤性修复治疗技术(atraumatic restorative treatment,ART),是采用手动器械去除龋坏组织,再用与牙体组织有粘接性的材料修复[3].这种修复治疗可以避免钻牙时的痛苦,易于被老年人接受.作者采用ART技术治疗老年根面龋,观察治疗后3个月、1年的疗效,并对ART技术治疗老年根面龋的效果进行评价.

    作者:陈秀梅;周学东;郭斌;陈思娅;杜玉石 刊期: 2005年第01期

  • 中外著名医学出版机构携手推出《国际牙科名著系列》

    作者: 刊期: 2005年第01期

  • Ⅰ、Ⅱ、Ⅹ型胶原及碱性磷酸酶在鼠胚髁突软骨发生中的意义

    目的探讨髁突软骨发生中Ⅰ、Ⅱ、Ⅹ型胶原及碱性磷酸酶(ALP)的组织学分布特征及髁突软骨内成骨的分子机制.方法取14~18 d鼠胚,分别行Ⅰ、Ⅱ、Ⅹ型胶原及ALP抗体免疫组织化学染色.结果胚胎第14天,髁突形成的位置可见间充质细胞聚集并与骨膜相连,间充质细胞及骨膜中Ⅰ型胶原及ALP阳性;第15天,肥大软骨细胞中Ⅹ型胶原表达阳性,其周围的间充质细胞中Ⅰ、Ⅱ型胶原阳性,ALP在两种细胞中均呈阳性;第16天,软骨膜、纤维层间充质细胞至肥大软骨细胞上层中Ⅰ型胶原表达阳性,多形细胞层下方至肥大软骨细胞下层中Ⅱ型胶原表达阳性,Ⅹ型胶原仅表达于肥大软骨细胞,ALP在软骨膜及肥大软骨细胞中呈阳性,但在多形细胞层呈阴性或弱阳性.结论髁突软骨的发生机制与长骨不同,其软骨内成骨的早期Ⅰ、Ⅱ、Ⅹ型胶原均有表达,可能始发于ALP阳性的下颌骨膜间充质细胞.

    作者:李晓箐;刘来奎;易新竹;洪宇娟;韩碧洁 刊期: 2005年第01期

  • 正畸弓丝回弯器的制作及使用

    固定矫治器的使用中,唇弓丝穿出颊面管的末端及固定托槽唇弓丝的结扎丝常需回弯,以避免刺伤软组织.作者在临床工作中制作了一种简便的正畸弓丝回弯器,用于回弯唇弓丝和结扎丝十分方便,现介绍如下.

    作者:周福生 刊期: 2005年第01期

  • 多用途弓矫治高角深覆(牙合)的探讨

    深覆(牙合)是一种临床上常见的上下颌垂直关系异常,对于垂直生长型、长面的高角深覆(牙合)患者,矫治应首选切牙的压低,而不选择后牙的伸长[1].作者近6年应用多用途弓对20例高角深覆(牙合)患者进行矫治,取得满意效果.现报道如下.

    作者:武红梅 刊期: 2005年第01期

  • 德阳市成年人的口腔健康知识、态度及行为调查

    目的调查四川省德阳市城市、农村和城郊成年人的口腔健康知识、态度和行为,分析影响人群牙科卫生服务使用的因素.方法采用世界卫生组织基本口腔保健成年人问卷对1 010名德阳市城市、城郊和农村的35~44岁成年人进行面对面访谈,评价德阳市成年人的口腔健康知识、态度及行为,分析影响成年人2年内看牙医行为的因素.结果约半数成年人过去1年牙齿或口腔有疼痛,多数成年人的口腔健康态度较好,但对氟防龋的认识不足.城市成年人使用含氟牙膏的比例(61.3%)明显高于城郊及农村(6.9%、16.8%).从来没有看过牙医的比例农村及城郊高61.0%,71.5%,城市只有32.0%.Logistic回归分析表明,影响2年内看牙医行为的因素有地区类别和上1年有无牙痛.有牙痛成年人看牙医的OR值是无牙痛成年人的2.84倍.结论德阳市成年人对口腔健康知识认识不足,态度较好,牙科卫生服务使用较低,口腔健康知识和行为亟待改进.

    作者:刘红春;范旭;胡德渝;李雪 刊期: 2005年第01期

  • 摆形矫治器矫治不同垂直骨面型安氏Ⅱ类错(牙合)的疗效评价

    目的探讨摆形矫治器矫治不同垂直骨面型安氏Ⅱ类错(牙合)的疗效及对牙颌面的影响.方法对30例样本(低角组、均角组、高角组各10例)治疗前后的24项X线头影测量指标进行测量和比较分析.结果上颌磨牙在不同的垂直骨面型中远中移动的距离不同,低角组移动小,高角组移动大;上颌磨牙在3组中均被压低,但差别无统计学意义;各组样本第一双尖牙向近中移动量和前牙覆盖增加量不同,低角组多,高角组少.结论摆形矫治器可有效远中移动磨牙,在不同的垂直骨面型磨牙均被压低,为摆形矫治器用于矫治Angle Ⅱ类高角患者提供了理论依据.

    作者:吴勇;罗颂椒;赵志河;袁晓;郑翼;刘颖;米晓晖;倪琳 刊期: 2005年第01期

  • 突发性严重绞锁颞下颌关节的压力测量和分析

    目的了解突发性严重绞锁患者颞下颌关节上腔中的压力特点及其变化规律,初步探讨该类型颞下颌关节紊乱病的治疗机理.方法用关节内压测量仪通过穿刺针进入突发性严重绞锁患者颞下颌关节上腔,分别测量张闭口位的关节上腔内压,记录其平均值和变化规律.结果突发性严重绞锁患侧关节上腔开口位压力平均为-9.947 kPa±8.854 kPa,闭口位压力平均为-6.475 kPa±4.147 kPa.结论突发性严重绞锁颞下颌关节上腔开闭口位压力明显降低,并有独特的变化规律.

    作者:许跃;张志光;郑有华 刊期: 2005年第01期

  • 健康成人戴用软(牙合)垫紧咬运动时脑激活区域的功能性磁共振成像研究

    目的应用功能性磁共振成像技术探讨戴软(牙合)垫紧咬运动时人脑功能活动区域定位,试图从中枢机制探讨(牙合)垫的治疗作用机理.方法选取10名健康成人受试者,采用时段设计,任务状态与休息状态交替.任务状态分2组设计,实验组为戴软(牙合)垫紧咬运动,对照组为不戴软(牙合)垫紧咬运动.采用Elscint/GE 2.0T磁共振系统成像,应用SPM99软件进行数据后处理及组分析.结果实验组10各受试者在单侧或双侧的运动皮层、感觉皮层、前额叶皮层、颞叶皮层、前运动皮层、脑岛、额盖、基底神经节壳核、顶叶皮层及扣带回等区域有明显激活.组分析结果显示双侧运动皮层(BA6)、右侧感觉皮层、双侧基底神经节壳核、双侧脑岛等区域均出现明显激活,其中左侧运动皮层的激活程度明显强于右侧.对照组紧咬运动组分析结果显示双侧运动皮层(BA6)、双侧感觉皮层、双侧基底神经节壳核、左侧顶叶皮层等区域均出现明显激活,其中运动皮层的激活双侧基本对称.结论戴软(牙合)垫后紧咬运动脑皮层激活区域尤其是运动皮层和感觉皮层的变化可能是(牙合)垫作用机理的中枢机制.

    作者:王玉玮;马绪臣;金真;张磊 刊期: 2005年第01期

  • 膜联蛋白Ⅰ和胞浆磷脂酶A2在小鼠腭突融合中的表达

    目的观察膜联蛋白Ⅰ(Annexin Ⅰ)和胞浆磷脂酶A2(cPLA2)在地塞米松致畸敏感性小鼠腭胚中的分布情况.方法沿小鼠胚胎头部的冠状平面切取切片,获得10周龄近交系小鼠妊娠的第14~16天的腭胚突.用免疫组化染色检测Annexin Ⅰ和cPLA2的分布情况.结果在小鼠胚胎腭突融合前后,Annexin Ⅰ、cPLA2的免疫组织化学染色在腭突上皮和间充质细胞中都为阳性,并且染色强弱呈时相性变化.结论Annexin Ⅰ和cPLA2在胚胎腭部发育进程中起一定的调节作用,可能是地塞米松诱导发生腭裂的重要介质.

    作者:王(龙夭);石冰;左晖;黄磊 刊期: 2005年第01期

  • 口腔鳞癌浸润方式与颈淋巴结转移关系的组织学研究

    目的探讨口腔鳞癌不同浸润方式和颈淋巴结转移的关系.方法利用Yamamoto的浸润方式分型法,对200例临床和病理资料完整的口腔鳞癌患者进行组织学回顾性研究和分析.结果鳞癌的浸润方式与鳞癌的颈淋巴结转移明显相关(P<0.001).Ⅰ型~Ⅳd型浸润方式相对应的颈淋巴结转移率分别为0、5.9%、14.3%、63.0%和82.9%.在80例Ⅲ~Ⅳd型浸润方式的转移患者中,Ⅳd型浸润方式常伴随N2期转移(P<0.05),而Ⅲ型和Ⅳc型浸润方式则更常伴有N1期转移(P<0.05).Ⅳc型浸润有41.2%的Ⅰ级平面和79.4%的Ⅰ~Ⅱ级平面转移机率,而Ⅳd型浸润的转移平面较为弥散,两者间有显著性差异(P<0.05).结论不同的口腔鳞癌浸润方式有着截然不同的颈淋巴结转移机率、转移分期和转移平面.对口腔鳞癌原发灶肿瘤-宿主边缘浸润方式的分型研究,有助于判断口腔鳞癌的区域性淋巴结转移情况,提供临床治疗方案设计和预后预测的依据.

    作者:杨湛;普苹;温玉明;付红梅;李继梅 刊期: 2005年第01期

  • 小沟聚合物探针实时检测变形链球菌和远缘链球菌

    目的寻求一种快速检测变形链球菌(S.mutans)和远缘链球菌(S.sobrinus)的方法,研究变形链球菌群在儿童猛性龋患者口中的分布.方法设计并合成针对S.mutans和S.sobrinus葡糖基转移酶基因(gtf)的特异性引物和小沟聚合物探针(MGB探针),对9株变形链球菌群参考菌株直接提取DNA及扩增纯培养后提取DNA分别进行检测,比较二者检测结果的异同.采集92例猛性龋儿童菌斑样本,用MGB探针进行实时检测.结果采用MGB探针可以特异性地鉴别S.mutans和S.sobrinus,直接检测和扩增纯培养后的定性检测结果完全一致,前者荧光出现的时间略迟.92例猛性龋患儿中S.mutans检出率为96.7%,S.sobrinus检出率为32.6%,所有检出S.sobrinus的菌斑样本均可检出S.mutans.结论采用特异性MGB探针方法可以对菌斑中S.mutans和S.sobrinus进行实时检测,提高检测效率.

    作者:凌均棨;林家成;唐志英;陈罕;高燕 刊期: 2005年第01期

  • 两种不同铸圈衬层厚度对铸件铸造精度的影响

    目的研究两种不同铸圈衬层厚度对铸件变形量的影响.方法采用预制标记点的圆盘形蜡型,用同一种铸圈(GC No.2铸圈,内径39.5 mm,高50 mm)及包埋料,分别用0.70 mm和0.45 mm两种厚度的陶瓷纤维铸圈衬层对蜡型进行包埋铸造,测量相应标记点方向上铸件与蜡型的线性变化率△L,研究铸圈不同方向上的膨胀特性及不同的衬层厚度对铸造精度的影响.结果铸圈内包埋料表现为各向异性膨胀,径向膨胀量大于轴向(P<0.01);两种厚度的铸圈衬层对铸件变形量的影响不具有统计学意义(P>0.05).结论在本实验的研究条件下,所采用的两种厚度的衬层材料尚不能消除铸件的不均匀变形现象.

    作者:王魏新;巢永烈 刊期: 2005年第01期

  • 纳米羟磷灰石/聚酰胺66对牙髓细胞生物学作用的实验研究

    目的探讨新型纳米羟磷灰石/聚酰胺66复合生物材料(nHA-PA66)对牙髓细胞的生物学作用.方法采用细胞培养技术、倒置显微镜观察、四唑盐比色法(MTT)、流式细胞术、碱性磷酸酶活性检测和实时定量RT-PCR(QRT-PCR)等实验技术及方法,从细胞分子水平研究nHA-PA66对体外培养的人牙髓细胞生长及功能的影响.结果牙髓细胞在nHA-PA66浸提液作用下,细胞外形无明显改变;nHA-PA66对牙髓细胞增殖、细胞周期、碱性磷酸酶活性及牙本质涎磷蛋白(DSPP)mRNA的表达无明显促进或抑制作用.结论nHA-PA66作为一种新型纳米生物材料,对牙髓细胞的生长和功能无不良影响,有较好的生物相容性,但未见到明显的细胞生物活性作用.

    作者:苏勤;叶玲;周学东 刊期: 2005年第01期

  • 大学生中牙科恐惧症与人格焦虑症的相关性研究

    目的探讨牙科恐惧症(DF)与人格焦虑症(PA)的相关关系.方法采用人格焦虑量表和Corah问卷等对成都市1 975名1~3年级的大学生进行人格焦虑症和牙科恐惧症的调查,并对调查数据进行统计分析.结果DF与PA、重度DF与PA均相关(x2分别为3.97、6.23,P<0.05);DF分值与15问分值及副反应分值均相关(r分别为0.913、0.409,P=0.000).结论DF与PA具有相关性.

    作者:于海洋;蔡炜;江帆;罗倩;陈智 刊期: 2005年第01期

  • 口腔癌根治性颈淋巴清扫术的合理术式

    转移是恶性肿瘤基本的生物学特性之一.淋巴道转移是上皮源性恶性肿瘤常见、重要的转移播散途径之一.口腔癌是头颈部常见的恶性肿瘤,约90%以上为上皮源性癌肿,具有较高的区域性淋巴结转移率[1].根据国内大宗病例的分析报道,我国颊癌和舌癌在口腔癌构成比中一直位居前位[2],其颈部区域性淋巴结的转移率分别高达39.9%[3]和38.07%[4],故颈部转移灶的控制是口腔癌根治所必须考虑的重要方面.虽然口腔癌的颈部转移可出现在病程的任何阶段,但转移灶可较长时间停留在颈部发展,这就为治疗提供了极为有利的时机.

    作者:温玉明 刊期: 2005年第01期

  • 天然药物五倍子提取物对致龋菌生长的影响

    目的研究五倍子中分离得到的不同组分对致龋菌生长的影响,以期寻找五倍子防龋的有效成分.方法通过系统溶剂法对五倍子总鞣质分离得到4个组分,采用液体稀释法研究五倍子不同组分对6种主要致龋菌(变形链球菌,血液链球菌,唾液链球菌,内氏放线菌,粘性放线菌,乳酸杆菌)生长的影响,并使用活菌计数法测量五倍子总鞣质及1和3组分对变形链球菌生长的影响.结果五倍子总鞣质对细菌生长的抑制作用强;五倍子分离物中2,4组分对实验菌的抑制作用较分离物中1,3组分强,与总鞣质相当;五倍子1和3组分对变形链球菌生长均有较好的抑制作用,作用1 h后效果更明显.结论五倍子各组分对实验菌都有一定的抑制作用,五倍子对变形链球菌的抑制作用可能通过抑制细菌代谢所需的酶类而产生,而对细菌没有直接杀灭作用.

    作者:谢倩;李继遥;左渝陵;周学东 刊期: 2005年第01期

  • 不同型号记忆合金牵张器对牙槽嵴增高高度的影响

    目的探讨不同牵张力、不同固定脚间距的钛镍记忆合金牵张器对牙槽嵴增高高度的影响.方法用钛镍记忆合金丝加工成A、B、C 3种不同型号的牵张器,其固定脚间距和大复形力分别为20mm、700 g,15 mm、1 000 g,20mm、1 000 g.选用成年杂种犬15只,按使用牵张器型号随机分为A、B、C组,拔除两侧下颌全部前磨牙和第一磨牙,1个月后用不同的全埋置的钛镍记忆合金牵张器完成牵张手术.在术前及术后5周连续测量术区颌骨高度,拍摄X线片.结果A、B、C组在术后1周牙槽嵴增高的高度分别为(7.55±1.00)mm、(4.97±0.34)mm、(8.54±0.82)mm,5周时为(7.20±1.05)mm、(4.93±0.21)mm、(8.04±0.78)mm.A、C组增高的高度间差异无统计学意义,B组与其他两组间的差异有统计学意义,组内术后不同时期的高度差异无统计学意义.X线片可见术后有明显的牵张间隙,5周时牵张区骨密度增高,有新骨生成.结论在允许的牵张力范围内,牙槽嵴增高的高度与钛镍记忆合金牵张器的大小即固定脚间距有关.

    作者:谢旻;胡敏;刘洪臣;姚军;周宏志 刊期: 2005年第01期

华西口腔医学杂志

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