学术投稿

PCR-RFLP分析HBV核心启动子基因突变的临床意义

祝文彩;张冬雷;鞠少卿;王惠民;李立人;施健;徐云

关键词:PCR-RFLP, 乙型肝炎病毒, 核心启动子, 基因突变
摘要:目的建立聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测HBV核心启动子(BCP)基因突变的方法,并探讨其临床意义.方法PCR扩增HBV BCP区(nt1642-nt2027)基因片段,经限制性内切酶Mbo Ⅰ酶切,琼脂糖凝胶电泳分析BCP(nt1762/nt1764)基因突变情况,同时应用定量PCR测定了HBV DNA含量.结果149例临床样本的检测结果显示:BCP基因突变在HBeAb(+)慢性乙型肝炎患者(CHB)和HBV无症状携带者(ASC)中的检出率显著高于相应的HBeAg(+)组患者(P<0.01);在HBeAb(+)和HBeAg(+)重症乙型肝炎(Severe hepatitis B,SHB)组中差异无显著性(P>0.05);BCP变异患者血清中HBV-DNA含量比相同模式的野毒株感染高(P<0.05).结论PCR-RFLP检测HBV BCP基因突变方法简单方便,结果与测序分析一致,具有较好的特异性,适合临床应用;BCP区基因突变可能是HBeAb(+)患者HBV感染的重要原因之一;BCP变异可能与乙型肝炎重症化有一定关系.
现代检验医学杂志相关文献
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    目的建立灵敏度高、选择性好、基本无干扰的血清镁偶氮氯膦Ⅰ显色8-羟基喹啉-5-磺酸褪色测定法.方法在pH9.8的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲介质中,偶氮氯膦Ⅰ与镁络合显色,加入8-羟基喹啉-5-磺酸使镁解离,测定吸光度的下降来分析血清镁.对反应条件和方法性能进行系统研究.结果线性范围为0~3.0 mmol/L,回收率为98.5%~99.3%,平均98.9%.平均批内变异系数(CV)和批间变异系数(CV)分别为1.10%和1.88%.与甲基麝香草酚蓝比色法(MTB)(X1)比较:Y=1. 003X1-0.025,r=0.995;与Calmagite比色法(X2)比较:Y=0.991X2+0.014,r=0.993;胆红素高达420 μmol/L,血红蛋白10 g/L,钙10.0 mmol/L及intralipid高达12 g/L时均对该法无显著干扰.结论该法具有简便、快速、基本无干扰和灵敏可靠的优点,适合血清镁的手工测定和自动分析.

    作者:蒋兴亮;唐中 刊期: 2005年第01期

  • 康利AFT-300D电解质分析仪常见故障排除、保养及注意事项

    AFT-300D电解质分析仪是深圳康利公司生产的一种钾、钠、氯三项离子分析仪,因其有自动统计均差和斜率、自动校正、自动进样、自动储存质控结果等功能,且有结果重复性好、标本用量少、测试速度快等优点,为日常工作省出不少时间.但其在使用和保养不当时常出现一些故障,现将几种常见故障产生原因及排除方法介绍如下,以供同行参考:

    作者:曹贤;张静;吕云岗 刊期: 2005年第01期

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    贝克曼-库尔特CX7生化分析仪具有检测结果准确、重复性好、操作简便、故障率少等优点.我们在使用近4年过程中发现CX4冲洗站管道由于不完全堵塞,使反应杯清洗不干净,甚至反应杯内液体抽吸不完全,造成仪器停机故障一例介绍如下,供同行参考.

    作者:宋善勤;王学军 刊期: 2005年第01期

  • 自动酶标洗板的改进与洗涤效果观察

    洗板机是ELISA检测法中的重要工具,其洗涤效果直接影响到检测结果的准确性.DEM-III自动酶标洗板机在使用过程中,虽然洗涤效果很好,但还有值得改进的地方.

    作者:吴人凤;和勇;钱生发 刊期: 2005年第01期

  • 系统性红斑狼疮患者肿瘤坏死因子、白介素8水平及意义

    目的探讨抗ds-DNA抗体阳性红斑狼疮(SLE)患者血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素8(IL-8)水平及意义.方法采用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测了49例SLE患者血清TNF-α、IL-8含量.结果49例SLE患者血清TNF-α含量与对照组相比差别没有统计学意义(P>0.05),IL-8的含量显著高于对照组(P<0.01).结论IL-8参与SLE疾病过程,与疾病活动性相关.

    作者:张玲英;洪华;叶长林;袁红;谭太昌;王智斌 刊期: 2005年第01期

  • 日立7170S全自动生化仪一例故障的处理

    HITACH7170S型全自动生化分析仪具有效率高、试剂用量少、精密度好、操作简便、维护方便等优点,各种性能良好,并且在仪器故障时,仪器自动给出确切的提示,我科自1998年引进此生化分析仪后,获得了很好的社会效益和经济效益,参加卫生部和省生化质控成绩年年优秀.近期,我科遇到此机交叉污染的仪器故障,经多方面的分析,终于将此故障排除,现将过程介绍于下.

    作者:徐辉;李妙兵;叶杰英;钟国权;李介华 刊期: 2005年第01期

  • 三种不同血细胞分析仪检测系统检测常规血标本结果的分析

    目的通过同一临床实验室不同血细胞分析系统对新鲜血检测结果的比较,了解它们之间对同一标本检测结果的偏差是否在允许误差范围内.方法按照EP9-A文件的要求,以Coulter ACT-diff Ⅱ型血细胞分析仪为比对仪器,以Sys-mex XE-2100型血细胞分析仪、Coulter Gen-s型血细胞分析仪为实验仪器,用门诊病人的新鲜血对WBC、RBC、HB、MCV、PLT等项目进行检测,计算相关系数和直线回归方程,对它们之间的预期偏差和相对偏差进行评估.结果在所检测的5个项目中,检测结果的相对偏差都在允许误差范围内.结论当同一实验室内有不同系统的血细胞分析仪,尤其是系统不匹配的情况下,应以其中一台结果可靠的仪器为比对仪器,定期进行比对,了解检测结果的偏差,并进行校准,才能保证实验室内检测结果的准确稳定.

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    作者:顾向明;王胜岚;黄阶胜 刊期: 2005年第01期

  • K-4500全自动血细胞分析仪工作中故障及错误信息处理

    K-4500三分类全自动血细胞分析仪是日本东亚公司的产品,该仪器具有自动化程度高、操作简便、重复性好、故障率低等优点.但随着使用时间的延长,也会出现一些问题.现介绍几例故障及错误信息的处理过程,供同行参考.1仪器报警显示压力异常检查分析及处理:①进入压力调节菜单,观察压力显示屏,转动压力调节旋钮,发现压力数值无明显变化.②检查废液瓶瓶口密封胶圈,未发现漏气.检查进气孔和进气管,发现进气管内壁有许多黑色的灰尘且在进气管一端内有一小段竹片.将进气管内的灰尘及异物清理干净,再进行压力调节,仪器恢复正常,错误信息消除.原因是进气管内过多的灰尘及异物阻碍了气体的进入,使仪器达不到所需工作压力而显示压力错误.

    作者:韩文君;张瑞;陈海城;李继明 刊期: 2005年第01期

  • 关节液中HA检测

    HA(透明质酸)是关节滑液及软骨基质的主要成分,属黏多糖物质.应用HA进行关节腔内注射治疗在我院骨科临床应用研究已三年,检测关节腔中HA的含量对于临床指导用药具有极其重要的作用.

    作者:刘伶;赵巍松;蒋玲 刊期: 2005年第01期

  • 关于采用BACTEC血培养仪扩展厌养菌培养范围的可行性报告

    近年来,厌养菌在感染性疾病中越来越占有重要地位(蔡文城,实用临床微生物诊断学.第1版.南京:东南大学出版社,1998:620),其感染范围涉及临床各个科室.人体的各个组织和器官,在一定条件下都有可能发生厌养菌感染,其中大部分是与需氧菌混合感染,极少部分为厌养菌单独感染.过去对厌氧菌感染不够重视,只作需氧菌检查,导致单纯厌氧菌感染的病人查不到病源菌,混合感染的病人也只能培养出需氧菌.为此我科在1995年开始,采用BACTEC血培养仪做扩展厌氧菌培养范围的可行性研究,取得了令人满意的效果,现将情况介绍如下:

    作者:艾彪 刊期: 2005年第01期

  • 嗜血细胞综合征细胞形态学诊断分析

    嗜血细胞综合征(hemophagocytic syndrome,HPS)是一类少见的、死亡率很高的疾病[1],该病本质上属于良性疾病,但由于其病因多样,临床表现和病理改变与一些恶性疾病如恶性组织细胞增生症(malignant histiocytosis,MH)相似,加之我国对该病的研究较少,很多基层医务人员对HPS缺乏了解,经常造成误诊和漏诊,耽误治疗时机和佳治疗方案的采用,导致死亡率很高.为提高对该病的认识,我们对我院近期收治的一例患者进行全面分析,报告如下.

    作者:孔晋星;付荣明;周凤珍 刊期: 2005年第01期

  • HBeAg(EIA)质控品的配制

    随着临床免疫质控工作的正常化和规范化,乙肝标志物,尤其是HBeAg检测的室内质控体系的建立已刻不容缓.目前市售HBeAg质控品尚未像HBsAg质控品那样在临床普及使用.

    作者:蔡祥址 刊期: 2005年第01期

  • 麻风杆菌检查室内质量控制

    在麻风病的防治工作中,检验室细菌直接涂片检查十分重要,因目前麻风杆菌体外培养没有成功,皮肤组织液直接涂片检查是临床诊断工作中不可缺少的检查项目.因此,必须作好检验室内麻风杆菌检查质量控制,要求检验人员除按照常规检查细菌程序操作外,还要有良好的检验条件和严谨科学的工作态度.

    作者:吕粉兰 刊期: 2005年第01期

  • OLYMPUS AU 640全自动生化分析仪常见故障分析及排除

    我科室自2000年9月份购进OLYMPUS AU 640全自动生化分析仪,使用至今已将近4年.在使用过程中,遇到了一些报警提示和仪器故障,都作了详细记录,现将其中较常见的报警提示、仪器故障的产生原因和排除方法加以总结,以期对大家有所帮助.

    作者:任伟宏 刊期: 2005年第01期

  • Sysmex SF-300O全自动血细胞分析仪对新生儿黄疸病人白细胞的检测

    新生儿黄疸,又称新生儿高胆红素血症,是指新生儿全身皮肤、黏膜及巩膜出现黄色的症候,分生理性和病理性两种.当血清胆红素高于85.5~102.5 μmol/L时,新生儿即呈现黄疸,使用Sysmex SF-3000血细胞分析仪测定新生儿黄疸病人的白细胞时,增高的胆红素会影响红细胞的溶解而产生较大的误差,本文探讨其检测失败的原因及其解决方法.

    作者:钱英超;梁映亮 刊期: 2005年第01期

  • 血沉自动化分析的质量控制

    红细胞沉降率(血沉)测定的经典方法是Westergren法.随着检验医学的飞速发展,血沉自动化分析仪已相当普及,血沉自动化分析虽避免了人为主观误差,可完整记录红细胞沉降的全过程,但结果的准确性却受许多因素影响,对仪器的校正、操作正确与否等因素都会影响自动化分析测定结果的准确性,操作步骤的标准化和质控品都是急待解决的问题.另外,目前使用的血沉仪既有进口产品,也有国产产品,为了有所比对,有所溯源,血沉检测的标准化和质量管理也成为紧迫的任务之一.笔者从分析前、分析中、分析后三个环节对血沉自动化分析的质量控制进行探讨.

    作者:朱学涛;杨海燕;史沛芹 刊期: 2005年第01期

  • Konelab20全自动生化分析仪维护及常见故障排除

    我院于2000年引进芬兰产Konelab 20全自动生化分析仪,该机应用windowsNT workstation操作系统,工作稳定,全开放试剂通道,可方便灵活的选择试剂和实验项目,且节省试剂,机内有完善的自检和故障报警系统,完备的质控系统,使结果稳定可靠.该机使用以来未出现大的故障,现将平时出现的小故障及排除方法做一介绍.

    作者:季之森;沙云风;商敏 刊期: 2005年第01期

  • 组织胞浆菌与黑热病杜利小体骨髓涂片几种染色方法鉴别

    组织胞浆菌病与黑热病分别是组织胞浆菌和黑热病杜利小体引起的疾病,临床表现相似,由于两病原体骨髓涂片中大小、形态接近,较难鉴别,极易引起误诊.笔者复习了相关文献并加以总结,发现组织胞浆菌与黑热病杜利小体骨髓涂片在瑞-姬氏染色、糖原染色(PAS染色)和HE染色中存在一定的差异,仔细辨别,可以将两者区分开.现报道如下,供同道们共飨.

    作者:卢其明 刊期: 2005年第01期

  • 连续监测法测定腺苷脱氨酶及临床应用

    目的探讨应用连续监测法测定腺苷脱氨酶(ADA)及其临床应用价值.方法根据测定条件的优化实验采用ADA作用于以腺苷为底物的连续监测法直接测定;同时测定200例健康人、32例肝炎病人血清及13例结核性穿刺液的ADA水平.结果批内CV<4.0%,批间CV<4.7%,总CV<4.3%,回收率达101.3%,线性:0~192 U/L(Y=0.9846X+1.1462,r=0.996 8);加入TG<5.6 mmol/L,BIL<165 μmol/L,Hb<100g/L,UA<420μmol/L时无显著干扰;血清正常参考范围(-x±s)3~25 U/L;肝疾病组血清ADA水平显著高于健康对照组(P<0.001),结核病组穿刺液ADA水平显著高于非结核病组(P<0.001).结论该法简便、准确、快速,对肝炎疾病及结核性穿刺液有一定的诊断价值.

    作者:袁平宗 刊期: 2005年第01期

现代检验医学杂志

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