乔安意；钱以德；杨星；陈戎；黎介寿；彭兵
目的 研究绿色荧光蛋白(GFP)基因体外转染人脂肪基质细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能.方法 体外分离培养人脂肪基质细胞,用重组腺病毒载体Ad-GFP及脂质体介导质粒pEGFP-C1两种方法转染GFP基因,通过流式细胞术观察比较GFP转染和表达的结果;倒置显微镜下观察细胞生长情况;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况. 结果 重组GFP基因的腺病毒Ad-GFP转染的脂肪基质细胞的感染率达(42.5±1.5)%,16 h即有GFP表达,7 d时表达趋于稳定,感染6周时仍可见有GFP表达,明显优于脂质体转染组(转染效率高为11.4%).感染Ad-GFP后的脂肪基质细胞与未感染的对照组脂肪基质细胞成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)表达均逐渐增高,两组间差异无统计学意义(P>0.05);诱导21 d后两组均见到茜素红钙盐染色阳性.结论 重组GFP基因的腺病毒载体Ad-GFP可高效率感染脂肪基质细胞,基因转染后细胞的增殖分化能力未受到影响,可以作为一种高效可靠的人脂肪基质细胞标记方法.
作者：林云锋；敬伟；陈希哲；乔鞠；李志勇；严征斌；吴凌；田卫东 刊期： 2006年第05期
目的 研究铜绿假单胞菌rhlR表达产物的分子生物学特性,以及对小鼠的免疫保护作用.方法 以铜绿假单胞菌标准株PAO1的基因组DNA为模板,PCR方法 扩增rhlR基因.利用pGEX4T-1载体构建rhlR-pGEX4T-1重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用免疫印迹验证.同时用纯化的重组蛋白免疫小鼠,菌落计数法检测免疫组和对照组鼠肺对铜绿假单胞菌的清除率.结果 rhlR的全基因序列为726 bp,经序列分析和同源性比较,与GenBank中的rhlR基因(登录号:AE004768)完全一致.大肠杆菌BL21(DE3)转化重组质粒rhlR-pGEX4T-1后,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达的融合蛋白质相对分子质量为54×103,其中RhlR蛋白为27×103.体内实验中,免疫小鼠肺部对铜绿假单胞菌的清除率与未经免疫的正常组比较,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 构建的rhlR-pGEX4T-1重组质粒能够在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出具有生物学活性的RhlR蛋白.重组蛋白对小鼠表现出一定的保护作用.
作者：杜宝中；谢轶；贾文祥；杨发龙；曾蔚；杨维青；程曦；陈恬；张再蓉 刊期： 2006年第05期
目的 探讨铜绿假单胞菌(PA)临床分离株的粘附性、生物被膜形成能力及其与基因型的相关性.方法 采用改良的微量平板法对临床分离的48株PA生物被膜的形成进行定量分析;通过肠杆菌基因间重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)技术绘制48株PA的指纹图谱,应用计算机软件建立遗传相似性系数矩阵及聚类分析树状图.结果 48株临床分离PA菌株生物被膜的形成能力不同.生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性,PA 在17%遗传相似性系数上分为A、B、C、D、E五个基因型,生物被膜形成能力强的PA大都属于D 型,其遗传相似性系数为42%.结论 绝大多数临床分离的PA株具有较强的生物被膜形成能力;生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性;生物被膜形成能力较强的PA在基因型上表现出一定的相似性.
作者：程曦；杨维青；石磊；尹晓琳；谢轶；曾蔚；李心晖；苏建裕；寇亚丽；贾文祥 刊期： 2006年第05期
目的 观察胆汁反流引起食管粘膜的炎症损伤和组织细胞凋亡情况.方法 以手术制造的十二指肠胃食管混合反流(DGER)大鼠模型为基础,制备DGER(A 组)模型;DGER +Losec Mupus制剂灌注造成单纯十二指肠液食管反流(B组)模型;DGER+胆管接扎造成无胆汁的十二指肠胃食管反流(C组)模型.观察9周后各组大鼠食管病理学改变,TUNEL法观察食管粘膜凋亡指数,免疫组化观察Fas蛋白的表达.结果 A、B、C三组均发生反流性食管炎表现,炎症以A组重,其次为B组,C组轻.A、B两组均见Barrett's食管发生,发生率差异无统计学意义(P>0.05),C组无Barrett's食管发生;细胞凋亡结果示A组凋亡指数高,其后依次为B组和C组(P＜0.01);各组Fas蛋白表达均阴性.结论 不含胆汁的DGER所致食管损伤轻,胆酸可能与Barrett's 食管的发生密切相关;各病理组的凋亡情况均增加,但与Fas系统无关.
作者：张茹；龚均；史冉庚；王涛；王莉 刊期： 2006年第05期
目的 探讨阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞线粒体膜电位的变化及其致肾损伤的作用机制.方法 60只SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、实验组(再分为胆总管结扎后15 d、21 d两个亚组),每组15只.胆总管双重结扎法建立阻塞性黄疸大鼠模型,切取肾脏行肾小球系膜细胞原代培养,流式细胞仪测定细胞线粒体膜电位平均荧光强度值,激光共聚焦显微镜法测定细胞浆[Ca2+]i浓度.结果 实验组大鼠肾小球系膜细胞线粒体膜电位平均荧光强度值明显下降(P＜0.05),肾小球系膜细胞胞浆钙浓度明显升高(P＜0.05).结论 [Ca2+]i内流引起的线粒体膜电位的下降在阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞损伤中起着重要作用.
作者：乔安意；钱以德；杨星；陈戎；黎介寿；彭兵 刊期： 2006年第05期
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)在人类肝门部胆管癌细胞系QBC939中的表达及经其配体吡格列酮 (pioglitazone) 激活后对QBC939细胞生长的影响.方法 培养QBC939细胞并分别加入不同浓度的吡格列酮进行干预培养,通过RT-PCR检测QBC939中PPAR-γ mRNA的表达;光镜下细胞计数了解吡格列酮干预后对细胞增殖的作用;流式细胞技术了解吡格列酮对QBC939细胞周期及凋亡的影响.结果 QBC939中有PPAR-γ mRNA表达;PPAR-γ经其配体激活后明显抑制细胞增殖,使细胞周期出现G2/M期停滞,并诱导细胞凋亡.结论 PPAR-γ经其配体激活后通过抑制细胞增殖及促使细胞周期G2/M期停滞而抑制细胞的生长,且诱导细胞凋亡的发生,因此PPAR-γ有可能成为胆管癌治疗的新的分子靶点.
作者：程文；程南生；熊先泽；夏庆杰；陈清英；闫乃红；敬静 刊期： 2006年第05期
目的 通过CCL20重组慢病毒整合的间充质干细胞,观察肿瘤原位高表达CCL20能否激发机体的抗肿瘤免疫.方法 构建小鼠CCL20重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导 BALB/c小鼠间充质干细胞(mMSCs),杀稻瘟素(blasticidin)筛选出稳定表达mCCL20的混合克隆,命名为lenti-mCCL20-mMSCs,与CT26混合后皮下接种至同系BALB/c小鼠,设lenti-null-mMSCs与CT26混合接种、mMSCs与CT26混合接种、CT26单独接种为对照,观察肿瘤生长情况.结果 构建了重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导 BALB/c小鼠MSCs,获得lenti-mCCL20-mMSCs,动物实验发现CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,但促进肿瘤生长.结论 CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,促进肿瘤生长,机制有待进一步研究.
作者：李红霞；陈平；王炼；徐健蓉；王国庆；贾永前；杨莉 刊期： 2006年第05期
目的 总结分析宫颈原位癌及早期浸润癌术前诊断的准确性,探讨诊断中存在的问题及提高诊断准确性的方法.方法 回顾性分析本院2000年1月至2004年12月收治的行子宫全切术的原位癌和早期浸润癌患者共203例的临床和病理资料,将术前诊断与术后病理进行比较分析.结果 病理类型诊断准确率为97.7%,组织学分级诊断准确率为96.4%,临床分期准确率分别为:0期86.5%,ⅠA期78.8%.结论 活检取材不准确是导致该期诊断出现误差的主要原因,术前行诊断性锥切有助于提高诊断准确率.
作者：秦瑀；彭芝兰；杨开选 刊期： 2006年第05期
目的 在已建立的小鼠囊胚-恶性肿瘤细胞体外共培养的基础上,将小鼠囊胚体外植入恶性肿瘤细胞的生物学行为和小鼠囊胚植入单层容受性子宫内膜上皮细胞的生物学行为进行比较性研究.方法 采用体外小鼠囊胚-恶性肿瘤细胞共培养体系和改进的小鼠囊胚-单层容受性子宫内膜上皮细胞共培养体系,光镜下观察小鼠囊胚在单层恶性肿瘤细胞和容受性子宫内膜上皮细胞贴壁、脱带、粘附及植入过程,HE染色,扫描电镜观察和免疫组织化学对两系统中囊胚植入的生物学行为进行比较性研究.结果 小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞Hepa1-6、CHO和B16共培养系统中的脱带率、贴附率和扩展率分别是69.74%、81.49%、90.15%;68.63%、79.86%、90.32%和68.94%、80.21%、89.53%.容受性子宫内膜上皮细胞共培养系统中的脱带率、贴附率和扩展率分别是69.52%、81.25%和91.51%,小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞与容受性子宫内膜上皮细胞体外植入比较,其脱带率、贴附率和扩展率差异无统计学意义(P>0.05),植入的形态学和滋养层细胞表达的MMP-9差异无统计学意义(P>0.05).结论 在体外贴壁细胞的共培养系统中,小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞和容受性子宫内膜上皮细胞共培养系统中的发育和植入行为差异无统计学意义,可能是早期生命在体外高适应和自我组织能力的一种体现.
作者：马芳；王智彪；王媛；赵劼 刊期： 2006年第05期
目的 建立检测鸭疱疹病毒1型(鸭瘟病毒)的实时荧光定量PCR方法,为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础.方法 根据病毒DNA聚合酶基因的序列,设计引物和探针,采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR,用含有125 bp扩增产物的pMD 18-T载体质粒为阳性对照,构建标准曲线,对该方法的特异性、可重复性、敏感性进行评价,同时与传统PCR方法进行比较研究.结果 标准曲线表明在2.3×105～2.3×10拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999);实时荧光定量PCR少可检测到23个阳性质粒,说明有很好的敏感性;试验内及试验间变异系数分别为1.22～6.69以及2.09～8.84,说明有较好的重复性;对非鸭瘟病毒DNA无扩增,说明有很好的特异性;在对病毒DNA的检测方面,比传统PCR的敏感性高出104倍.结论 成功建立了针对鸭瘟病毒的特异、敏感、重复性强且可准确定量的实时荧光定量PCR方法.
作者：杨发龙；贾文祥；谢轶；曾蔚；杨维青；岳华 刊期： 2006年第05期
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)、结缔组织生长因子(CTGF)在尘肺病发生、发展中表达水平的变化及其意义.方法 采用双抗体夹心法,测定70例尘肺病患者(其中包括29例矽肺病患者和41例煤工尘肺病患者)和77例健康对照者血清TGF-β1、PDGF、CTGF的表达水平.结果 尘肺病患者血清TGF-β1、PDGF、CTGF含量分别为(44.95±23.72) ng/mL、(56.95±55.68) ng/mL、(346.70±259.49) pg/mL,对照组则分别为(6.81±4.99) ng/mL、(30.96±21.63) ng/mL、(307.49±235.40) pg/mL,病例组与对照组血清TGF-β1、PDGF含量差异均有统计学意义(P＜0.05),血清CTGF含量在两组间差异无统计学意义(P>0.05);矽肺病患者血清TGF-β1、PDGF含量均高于煤工尘肺病患者,差异有统计学意义(P＜0.05);尘肺病患者血清TGF-β1、PDGF含量随着期别的增加而降低,差异有统计学意义(P＜0.05);两变量相关分析显示TGF-β1与PDGF、CTGF与PDGF呈正相关关系(P＜0.05).结论 血清TGF-β1、PDGF表达水平与尘肺病的发生发展、病理类型及严重程度密切相关.
作者：姚武；冯斐斐；焦洁；王娜 刊期： 2006年第05期
目的 探讨人足月胎盘组织雌激素受体α、β(Erα、Erβ)的mRNA变异型种类及其在胎盘的组织细胞学定位.方法 采用逆转录聚合酶链反应技术和免疫组织化学技术检测正常足月妊娠胎盘组织中Erα、Erβ表达及细胞学定位.结果 人足月胎盘组织中有Erα、Erβ mRNA的表达,胎盘组织中Erβ mRNA的表达为ERβ5变异型;Erα表达定位于滋养层细胞滋养细胞核,Erβ表达定位于滋养层合体滋养细胞胞浆.结果ERβ5是胎盘组织Erβ的变异型种类,定位于胎盘合体滋养细胞,与胎盘合成和分泌雌激素有关.
作者：罗丹；刘淑芸；邢爱耘 刊期： 2006年第05期
目的 探讨非甾体类抗炎药Celecoxib对人卵巢癌环氧合酶2(COX-2)表达的影响,以及其抗卵巢癌作用与COX-2表达之间的关系.方法 采用流式细胞技术(FCM)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western免疫印迹法,检测不同浓度Celecoxib(COX-2特异性抑制剂)加入人卵巢癌SKOV3细胞株中共同培养24 h后,SKOV3细胞COX-2的蛋白表达和mRNA水平变化,同时与非选择性COX-2抑制剂Aspirin相比较.采用免疫组化法检测Celecoxib对人卵巢癌裸鼠移植瘤组织中COX-2表达的影响.结果 RT-PCR显示,随药物浓度增加,COX-2 mRNA表达逐渐下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);FCM显示,Celecoxib(5×10-5 mol/L)和Aspirin(7×10-3 mol/L)组COX-2的平均荧光强度明显低于对照组(P＜0.05),尤以Celecoxib(5×10-5 mol/L)组更显著;Western blot检查结果相同;免疫组化发现,Celecoxib不同剂量(10、25、50 mg/kg·d)用于人卵巢癌裸鼠移植瘤后,其COX-2的IOD值均明显低于对照组(P＜0.05),且随药物剂量的增大,其IOD减小.结论 Celecoxib对人卵巢癌的抗肿瘤效应与COX-2表达下降有关,可能存在COX-2依赖和非依赖途径,值得进一步研究.
作者：王红静；刘小菁；杨开选；罗凤鸣；楼江燕；彭芝兰 刊期： 2006年第05期
目的 观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)及缺氧对体外培养的滋养细胞血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、E-选择素(E-selectin)表达的影响.方法 取正常妊娠早期(10～12周)绒毛滋养细胞进行原代培养.给予不同浓度的VEGF165(20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL)、VEGF165加肝素(1 μg/mL),分别培养6 h、14 h、24 h;或缺氧培养(2% O2) 14 h、24 h.采用流式细胞仪方法检测滋养细胞VCAM-1、E-selectin的表达.结果 不同剂量及不同培养时间的VEGF165对滋养细胞VCAM-1、E-selectin的表达无影响(P＞0.05).预先与肝素中和的VEGF165对滋养细胞VCAM-1、E-selectin的表达也无影响(P＞0.05).缺氧培养24 h后滋养细胞VCAM-1、E-selectin表达的平均荧光强度(5.02±1.93,4.21±1.36)显著低于对照组(8.85±3.11,9.58±3.24 ),差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 缺氧抑制了滋养细胞上血管内皮细胞特性的粘附分子VCAM-1、E-selectin的表达,可能参与调节了滋养细胞的浸润过程;而VEGF在此过程中的作用尚需更多的研究.
作者：邢爱耘；林凡；刘淑芸；姚强 刊期： 2006年第05期
目的 研究穿琥宁溶液的水解动力学特征.方法 使用HPLC法测定穿琥宁水溶液在不同药物浓度,不同pH值的缓冲溶液,不同缓冲对溶液,不同离子强度,不同温度下的水解动力学参数.结果 穿琥宁水解反应符合一级动力学方程.随着pH值增加,穿琥宁降解速率明显增加,在碱性条件下不稳定;随着缓冲溶液浓度的增加,穿琥宁降解速率显著增加;不同的缓冲溶液对穿琥宁降解的催化作用不同;离子强度对穿琥宁降解无显著影响.由阿仑尼乌斯曲线可以看到,温度对穿琥宁的稳定性具有重要影响,穿琥宁在pH 8、磷酸缓冲溶液、温度60～90 ℃下的活化能为95.68 KJ/mol.结论 穿琥宁水解属于一级降解反应.降解速率与溶液pH值、缓冲液的浓度、缓冲液的种类及温度有关,溶液pH值对穿琥宁水解影响显著.
作者：罗巍伟；贺英菊；王凌；莫毅；陈艳；林丽洋；闫根全 刊期： 2006年第05期
目的 探讨复合扩增mtDNA D-环HVⅠ、HVⅡ和细胞色素b片段进行种属鉴定的方法,以及在法医学生物检材种属鉴定中的应用价值.方法 收集包括人在内的17种动物的血痕或肌肉组织样本,提取DNA后定量,用三对引物复合扩增mtDNA D-环HVⅠ、HVⅡ片段和细胞色素b(cytb)片段,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染显色后分析结果.结果 人类DNA扩增产物为278 bp、358 bp、425 bp三条带,动物DNA扩增产物为一条带,在电泳谱中位置与人358 bp的条带存在差异.结论 复合扩增mtDNA D-环HVⅠ、HVⅡ和细胞色素b片段进行种属鉴定,方法简单,灵敏度较高,可应用于法医学实践.
作者：王闯；杨志惠；梁伟波；周斌；张林 刊期： 2006年第05期
目的 探讨广义估计方程在有序多分类重复测量资料中的应用,为临床试验中的重复测量资料的正确分析提供方法 学上的参考.方法 采用SAS软件包的GENMOD语句拟合广义估计方程,进行实例分析,并和独立logistic回归分析结果进行对比.结果 获得了各参数及其标准误的估计值,可以对各因素进行直观的参数估计.广义估计方程各参数估计值标准误普遍大于独立logistic回归估计值的标准误,从而使得检验结果发生了变化.结论 广义估计方程引入工作相关矩阵以处理非独立数据之间的相关性,可以有效地控制层次相关性、重复测量因素及其它混杂因素,为有序多分类重复测量资料提供了一种有效的分析方法.
作者：刘祥；张菊英 刊期： 2006年第05期
目的 研究乳糖酶活性及其mRNA在SD大鼠小肠中的分布特点.方法 3～4周龄SD大鼠15只,自十二指肠下连续剪取三段,每段约10 cm,分别测定乳糖酶活性及乳糖酶mRNA水平.结果 从十二指肠起,小肠乳糖酶活性逐段降低(上、中、下三段分别为0.179、0.160、0.151 U/mL匀浆,三组间两两比较,P＜0.05);三组间乳糖酶mRNA水平差异无统计学意义.从细胞图谱看,SD大鼠乳糖酶mRNA除主要沿肠线分布外,肠绒毛上也有不少散在的分布.结论 乳糖酶mRNA在各个肠段都有分布,但其活性部分主要分布在小肠上段.
作者：何伟；吕斌；黄承钰 刊期： 2006年第05期
目的 对全国出生缺陷监测的肢体短缩畸形进行流行病学分析,了解我国肢体短缩畸形的变化趋势和影响因素.方法 全国出生缺陷监测采用以医院为基础的监测方案,1996～2000年全国31省、市、自治区的463～466所县级或以上的医院参加.监测对象为住院分娩的孕满28周的出生儿,日龄为生后7 d.监测资料逐级上报和审核,进行统计学统计.结果 1996～2000年全国肢体短缩畸形平均发生率为5.41/万,五年期间没有明显的变化趋势(χ2=4.08,P>0.05);农村发生率高于城市发生率,但发生率没有性别差异.南方与北方省份间以及东部、中部和西部间肢体短缩畸形发生率没有差异.单侧和双侧比例以及上肢和下肢比例没有差异.结论 我国肢体短缩发生率仍为高发国家,发生率有城乡差异.提高产前诊断比例有助于发生率的下降.
作者：朱军；代礼；周光萱；王艳萍；梁娟；缪蕾 刊期： 2006年第05期
目的 探讨以白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)为靶点,阻断内毒素胞内信号转导后对大鼠移植肝脏再灌注损伤(I/RI)的影响并探索肝移植时可行的RNA干扰(RNAi)治疗途径.方法 两袖套法建立SD大鼠同种异体原位肝移植模型,随机分为冷缺血转染组、活体转染组及对照组.冷缺血转染组于冷缺血期经门静脉灌注转染携带IRAK-4-shRNA的质粒pSIIRAK-4;活体转染组在门静脉袖套吻合完成后,经门静脉分支注入pSIIRAK-4;对照组不予任何处理.按门静脉血流恢复后第0 min、60 min及180 min分为三个亚组,RT-PCR及Western-blot测定肝组织的IRAK-4 mRNA和蛋白表达水平;ELISA法测定受体血清TNF-α含量.采用TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化.结果 再灌注后冷缺血转染组的IRAK-4表达明显低于同时点的活体转染组及对照组(P＜0.01);同时,肝细胞凋亡指数、血清TNF-α含量及肝细胞、血窦内皮细胞损伤程度也明显低于后者.结论 以IRAK-4为靶点的冷缺血期shRNAs转染途径能有效阻断内毒素胞内信号转导,进而减轻肝移植时的I/RI程度.
作者：刘作金；李生伟；李旭宏；彭勇；游海波；李寿柏；龚建平 刊期： 2006年第05期
四川大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：四川大学
