王怡净；帅培强；张立实
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)在人类肝门部胆管癌细胞系QBC939中的表达及经其配体吡格列酮 (pioglitazone) 激活后对QBC939细胞生长的影响.方法 培养QBC939细胞并分别加入不同浓度的吡格列酮进行干预培养,通过RT-PCR检测QBC939中PPAR-γ mRNA的表达;光镜下细胞计数了解吡格列酮干预后对细胞增殖的作用;流式细胞技术了解吡格列酮对QBC939细胞周期及凋亡的影响.结果 QBC939中有PPAR-γ mRNA表达;PPAR-γ经其配体激活后明显抑制细胞增殖,使细胞周期出现G2/M期停滞,并诱导细胞凋亡.结论 PPAR-γ经其配体激活后通过抑制细胞增殖及促使细胞周期G2/M期停滞而抑制细胞的生长,且诱导细胞凋亡的发生,因此PPAR-γ有可能成为胆管癌治疗的新的分子靶点.
作者：程文；程南生；熊先泽；夏庆杰；陈清英；闫乃红；敬静 刊期： 2006年第05期
目的 探索利用H37Rv结核标准菌株构建豚鼠膝关节滑膜结核病理模型的方法.方法 对经过福氏佐剂免疫和致敏的豚鼠,行膝关节腔H37Rv菌株两种菌量(1×107/mL,50 μL及100 μL)的注射感染,观察豚鼠感染结核菌后膝关节滑膜组织及关节软骨与骨的病理变化,并行膝关节滑膜集菌培养.结果 豚鼠膝关节在行两种菌量的H37Rv菌株感染后,局部肿胀均较明显,但动物的全身反应都较轻微.两组动物的膝关节滑膜病理切片均显示有典型的结核结节及其内的干酪样坏死灶形成;切片抗酸染色均检出有抗酸染色阳性的分枝杆菌;两组动物的关节滑膜匀浆培养均有结核分枝杆菌生长.结论 通过在经预先免疫与致敏豚鼠的膝关节局部进行适当剂量的H37Rv结核菌株的注射感染,可以构建出与人类滑膜结核病理变化相似的豚鼠膝关节滑膜结核.
作者：李万里；宋跃明 刊期： 2006年第05期
目的 探讨大豆异黄酮(SIF)改善高脂高蔗糖膳食诱导大鼠胰岛素抵抗(IR)状态的作用及可能机制.方法 选用高脂高蔗糖饲料诱导的IR雄性SD大鼠,根据胰岛素抵抗指数(IRI)随机分为模型对照组和3个SIF组(50 mg/kg·bw、150 mg/kg·bw及450 mg/kg·bw).各组给予相应受试物1月后,酶法检测各组动物空腹血糖、放免法检测空腹血胰岛素、酶免法检测血抵抗素含量,实时定量RT-PCR法检测肾周脂肪组织抵抗素基因的mRNA水平.结果 与模型对照组比较,450 mg/kg·bw SIF组能明显降低大鼠肾周脂肪组织抵抗素基因mRNA的表达及血清抵抗素的含量.150 mg/kg·bw SIF和450 mg/kg·bw SIF组能显著降低空腹血胰岛素水平及IRI.3个SIF组的血糖与对照组比较差异无统计学意义.IRI与血清抵抗素水平存在着明显的正相关(r＝0.355,P＜0.05).结论 SIF可能具有通过下调抵抗素基因mRNA表达及降低血清含量而提高胰岛素敏感性的作用.
作者：陈世伟；张红敏；张立实；冯晓凡 刊期： 2006年第05期
目的 观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和促红细胞生成素(EPO)在大鼠血管性痴呆(VD)形成过程中的动态表达规律,探讨VD发生的可能机制.方法 采用大鼠双侧颈总动脉永久性阻断法(2-VO)建立VD动物模型,应用Y型水迷宫实验测定动物的学习记忆能力,采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区HIF-1α和EPO蛋白的表达.结果 ①随缺血时间的延长,痴呆组大鼠学习记忆能力进行性下降(P＜0.05);②痴呆组大鼠海马CA1区HIF-1α、EPO的表达于缺血1周时明显,此后缓慢下降,但与假手术组比较仍处于较高水平(P＜0.01);③痴呆组大鼠两蛋白表达与学习记忆能力呈高度正相关(P＜0.01).结论 HIF-1α和EPO参与了VD的发生发展过程,并可能在此过程中通过HIF-1/EPO缺氧信号转导途径发挥了保护作用.
作者：张蓓；吴海琴；张海雄；张桂莲；展淑琴 刊期： 2006年第05期
目的 探讨干预协同刺激信号对反复自然流产患者Th1/Th2转换的影响.方法 用人绒毛膜癌细胞株JEG-3制备滋养细胞抗原;用该抗原刺激反复自然流产患者外周血单个核细胞,并分为两组:实验组加入细胞毒性T细胞相关抗导4(CTLA4Ig,10 μg/mL组和1 μg/mL组),对照组加IgG(10 μg/mL组和1 μg/mL组),培养72 h,分别取24 h和72 h上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测上清液中白介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)的水平.结果 与同质量浓度的对照组相比,CTLA4Ig组产生的IL-4水平明显高于对照组(P＜0.05),而产生的IL-2水平明显低于对照组(P＜0.05),IFN-γ水平两组间差异无统计学意义(P>0.05).与CTLA4Ig 1 μg/mL组相比,CTLA4Ig 10 μg/mL组产生的IL-4水平明显升高(P＜0.05),IL-2水平明显降低(P＜0.05),IFN-γ水平两组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 CTLA4Ig能通过阻断CD80/CD86共刺激信号,使反复自然流产患者Th1/Th2细胞因子向Th2型细胞因子偏移.
作者：樊伟；李尚为；刘西茹 刊期： 2006年第05期
目的 探讨子痫前期患者血清中可溶性血管内皮生长因子受体-1(sVEGFR-1)水平和胎盘组织中膜型血管内皮生长因子受体-1(膜型VEGFR-1)的蛋白表达与子痫前期发病的相关性.方法 用ELISA法和免疫组化法检测10例轻度子痫前期,10例重度子痫前期和10例子痫患者以及10例正常对照血清中sVEGFR-1水平和胎盘组织中膜型VEGFR-1蛋白的表达.结果 子痫前期各组血清中sVEGFR-1水平明显高于正常对照组(P＜0.05),随子痫前期的病情加重血清中sVEGFR-1水平有上升趋势,轻度子痫前期＜重度子痫前期＜子痫期.膜型VEGFR-1在胎盘的表达主要位于绒毛滋养细胞胞膜,绒毛血管内皮细胞胞膜,羊膜上皮细胞胞膜上,间质有少量表达.子痫前期各组胎盘组织中膜型VEGFR-1蛋白表达均明显低于正常对照组(P＜0.05),随病情加重有下降趋势,轻度子痫前期>重度子痫前期>子痫期.子痫前期 sVEGFR-1/膜型VEGFR-1较对照组高,随病情加重有升高趋势,轻度子痫前期＜重度子痫前期＜子痫期.结论 子痫前期发病可能与血清中sVEGFR-1水平、胎盘组织中膜型VEGFR-1表达有关.膜型VEGFR-1在胎盘的表达可能与子痫前期有关.
作者：邹翠兰；刘兴会；岳本明；付稼虹；何国琳 刊期： 2006年第05期
目的 探讨WTK1细胞tk位点自发和诱发突变体的突变谱和突变热点.方法 用甲磺酸甲酯、丝裂霉素C和叠氮钠染毒WTK1细胞后,筛选出tk基因突变集落,用多重PCR方法对WTK1细胞tk基因突变谱进行分析.结果 三种受试物均能诱导WTK1细胞tk位点突变频率增高,且存在剂量-反应关系;所分析的突变体中绝大部分缺失tk基因外显子4和5-7.结论 三种受试物对WTK1细胞均有致突变作用;tk位点的突变存在明显的突变热点.
作者：王怡净；帅培强；张立实 刊期： 2006年第05期
目的 探讨以白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)为靶点,阻断内毒素胞内信号转导后对大鼠移植肝脏再灌注损伤(I/RI)的影响并探索肝移植时可行的RNA干扰(RNAi)治疗途径.方法 两袖套法建立SD大鼠同种异体原位肝移植模型,随机分为冷缺血转染组、活体转染组及对照组.冷缺血转染组于冷缺血期经门静脉灌注转染携带IRAK-4-shRNA的质粒pSIIRAK-4;活体转染组在门静脉袖套吻合完成后,经门静脉分支注入pSIIRAK-4;对照组不予任何处理.按门静脉血流恢复后第0 min、60 min及180 min分为三个亚组,RT-PCR及Western-blot测定肝组织的IRAK-4 mRNA和蛋白表达水平;ELISA法测定受体血清TNF-α含量.采用TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化.结果 再灌注后冷缺血转染组的IRAK-4表达明显低于同时点的活体转染组及对照组(P＜0.01);同时,肝细胞凋亡指数、血清TNF-α含量及肝细胞、血窦内皮细胞损伤程度也明显低于后者.结论 以IRAK-4为靶点的冷缺血期shRNAs转染途径能有效阻断内毒素胞内信号转导,进而减轻肝移植时的I/RI程度.
作者：刘作金；李生伟；李旭宏；彭勇；游海波；李寿柏；龚建平 刊期： 2006年第05期
目的 对全国出生缺陷监测的肢体短缩畸形进行流行病学分析,了解我国肢体短缩畸形的变化趋势和影响因素.方法 全国出生缺陷监测采用以医院为基础的监测方案,1996～2000年全国31省、市、自治区的463～466所县级或以上的医院参加.监测对象为住院分娩的孕满28周的出生儿,日龄为生后7 d.监测资料逐级上报和审核,进行统计学统计.结果 1996～2000年全国肢体短缩畸形平均发生率为5.41/万,五年期间没有明显的变化趋势(χ2=4.08,P>0.05);农村发生率高于城市发生率,但发生率没有性别差异.南方与北方省份间以及东部、中部和西部间肢体短缩畸形发生率没有差异.单侧和双侧比例以及上肢和下肢比例没有差异.结论 我国肢体短缩发生率仍为高发国家,发生率有城乡差异.提高产前诊断比例有助于发生率的下降.
作者：朱军；代礼；周光萱；王艳萍；梁娟；缪蕾 刊期： 2006年第05期
目的 研究脱氧核酶在细胞水平调节Period1基因表达的作用及注射脱氧核酶对小鼠吗啡精神依赖的影响.方法 设计合成Period1 mRNA的10-23型脱氧核酶(DRz164),将pcDNA3-Per1和DRz164在脂质体介导下转染NIH3T3细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),流式细胞术(FCM)检测转染细胞内Period1基因表达水平.脑室注射DRz164,建立小鼠条件位置偏爱模型,观察对吗啡精神依赖的影响.结果 转染DRz164后,RT-PCR半定量检测Period1 mRNA与对照组相比减少42.4%.细胞内PER1蛋白表达减少57.2%.给予DRz164后小鼠未能形成对吗啡的位置偏爱.结论 脱氧核酶DRz164在胞内能够切割Period1 mRNA,抑制Period1基因表达,小鼠脑室注射DRz164可拮抗吗啡所引起的奖赏效应,缓解其对吗啡的精神依赖.
作者：周薇；刘延友；王跃；汪宇辉；肖静；朱彬；彭文珍；王正荣 刊期： 2006年第05期
目的 在已建立的小鼠囊胚-恶性肿瘤细胞体外共培养的基础上,将小鼠囊胚体外植入恶性肿瘤细胞的生物学行为和小鼠囊胚植入单层容受性子宫内膜上皮细胞的生物学行为进行比较性研究.方法 采用体外小鼠囊胚-恶性肿瘤细胞共培养体系和改进的小鼠囊胚-单层容受性子宫内膜上皮细胞共培养体系,光镜下观察小鼠囊胚在单层恶性肿瘤细胞和容受性子宫内膜上皮细胞贴壁、脱带、粘附及植入过程,HE染色,扫描电镜观察和免疫组织化学对两系统中囊胚植入的生物学行为进行比较性研究.结果 小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞Hepa1-6、CHO和B16共培养系统中的脱带率、贴附率和扩展率分别是69.74%、81.49%、90.15%;68.63%、79.86%、90.32%和68.94%、80.21%、89.53%.容受性子宫内膜上皮细胞共培养系统中的脱带率、贴附率和扩展率分别是69.52%、81.25%和91.51%,小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞与容受性子宫内膜上皮细胞体外植入比较,其脱带率、贴附率和扩展率差异无统计学意义(P>0.05),植入的形态学和滋养层细胞表达的MMP-9差异无统计学意义(P>0.05).结论 在体外贴壁细胞的共培养系统中,小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞和容受性子宫内膜上皮细胞共培养系统中的发育和植入行为差异无统计学意义,可能是早期生命在体外高适应和自我组织能力的一种体现.
作者：马芳；王智彪；王媛；赵劼 刊期： 2006年第05期
目的 利用蛋白自剪切功能原核表达系统构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 胞膜外段融合蛋白表达载体,并进行表达条件优化和初步纯化.方法 设计基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的TRAIL基因与经相同处理的载体pTWIN1相连接,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子.将鉴定(酶切及序列分析)阳性的重组子质粒转入大肠埃希菌ER2566表达菌中, 采用蛋白质SDS-PAGE 电泳方法 分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG) 、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白表达情况.结果 成功获得了包含TRAIL基因胞膜外段的双链cDNA序列,酶切及序列分析证实成功构建了TRAIL胞膜外段蛋白自剪切功能原核表达载体.采用0.3 mmol/L IPTG、15 ℃诱导过夜(14～16 h),目的蛋白获得较高表达量,且大部分为可溶性蛋白.结论 采用大肠埃希氏菌ER2566,TRAIL胞膜外段融合蛋白获得高表达,经简单后续处理即可获得不含任何额外氨基酸的可溶性目的蛋白.
作者：杨文理；陈守春；陈毅荣；覃扬 刊期： 2006年第05期
目的 研究绿色荧光蛋白(GFP)基因体外转染人脂肪基质细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能.方法 体外分离培养人脂肪基质细胞,用重组腺病毒载体Ad-GFP及脂质体介导质粒pEGFP-C1两种方法转染GFP基因,通过流式细胞术观察比较GFP转染和表达的结果;倒置显微镜下观察细胞生长情况;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况. 结果 重组GFP基因的腺病毒Ad-GFP转染的脂肪基质细胞的感染率达(42.5±1.5)%,16 h即有GFP表达,7 d时表达趋于稳定,感染6周时仍可见有GFP表达,明显优于脂质体转染组(转染效率高为11.4%).感染Ad-GFP后的脂肪基质细胞与未感染的对照组脂肪基质细胞成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)表达均逐渐增高,两组间差异无统计学意义(P>0.05);诱导21 d后两组均见到茜素红钙盐染色阳性.结论 重组GFP基因的腺病毒载体Ad-GFP可高效率感染脂肪基质细胞,基因转染后细胞的增殖分化能力未受到影响,可以作为一种高效可靠的人脂肪基质细胞标记方法.
作者：林云锋；敬伟；陈希哲；乔鞠；李志勇；严征斌；吴凌；田卫东 刊期： 2006年第05期
目的 研究穿琥宁溶液的水解动力学特征.方法 使用HPLC法测定穿琥宁水溶液在不同药物浓度,不同pH值的缓冲溶液,不同缓冲对溶液,不同离子强度,不同温度下的水解动力学参数.结果 穿琥宁水解反应符合一级动力学方程.随着pH值增加,穿琥宁降解速率明显增加,在碱性条件下不稳定;随着缓冲溶液浓度的增加,穿琥宁降解速率显著增加;不同的缓冲溶液对穿琥宁降解的催化作用不同;离子强度对穿琥宁降解无显著影响.由阿仑尼乌斯曲线可以看到,温度对穿琥宁的稳定性具有重要影响,穿琥宁在pH 8、磷酸缓冲溶液、温度60～90 ℃下的活化能为95.68 KJ/mol.结论 穿琥宁水解属于一级降解反应.降解速率与溶液pH值、缓冲液的浓度、缓冲液的种类及温度有关,溶液pH值对穿琥宁水解影响显著.
作者：罗巍伟；贺英菊；王凌；莫毅；陈艳；林丽洋；闫根全 刊期： 2006年第05期
目的 动态观察在胫骨应力性骨折发生发展过程中X线与99mTc核素骨显像的序列变化的组织学基础;并在其组织学基础上对两种诊断方法的价值及其特点进行探讨,为临床实践提供参考与帮助.方法 采用电刺激下主动跑跳诱发的兔胫骨应力性骨折模型,运用组织学、X线及99mTc核素骨显像方法对不同时期胫骨组织的变化做动态观察.结果 随着动物训练时间的延长,X线与核素骨显像结果表现出明显的连续性;不同时期的影像学检查结果的类型及分布不同;相同的影像结果具有共同的组织学基础.结论 在应力性骨折的诊断中,X线和99mTc核素骨显像各有其侧重,不能彼此替代;骨显像诊断分级仅能说明应力损伤存在和骨组织改建状况,不能直接反应损伤程度.
作者：李程；李国平；裴福兴 刊期： 2006年第05期
目的 探索羊膜组织来源的细胞向神经细胞分化的可能性,为神经移植探寻新的细胞来源.方法 采用组织块培养法培养羊膜细胞,酶消化法对细胞进行传代,应用免疫细胞化学的方法 对细胞进行鉴定.结果 从羊膜组织成功培养出细胞,细胞贴壁生长,在体外短期内可以稳定增殖和传代,传代细胞在神经干细胞的培养基中可以形成典型的球状结构,类似神经干细胞的神经球.细胞表达波形蛋白和巢蛋白两种神经干细胞的标志物,也表达神经元的标志物神经元特异性烯醇化酶和βⅢ管蛋白;大部分细胞表达多巴胺能神经元的标志物酪氨酸羟化酶.少数细胞表达星型胶质细胞的标志物胶质纤维酸性蛋白.部分细胞可以随机分化为平滑肌细胞,表达平滑肌肌动蛋白;在诱导条件下,羊膜细胞也可以分化为脂肪细胞.结论 羊膜组织来源的细胞可以表达神经细胞的标志物,能够分化为脂肪细胞和平滑肌细胞,这种细胞对于神经移植有潜在的应用前景.
作者：郑佳坤；杨立业；许曼丹；陈强；李文玉；汪朝阳 刊期： 2006年第05期
目的 观察大鼠肠肌间神经元胃动素受体(MTLR)的表达,并探讨胃动素引起神经元内钙信号的机制.方法 采用免疫荧光双标技术观察大鼠肠肌间神经元MTLR的表达;应用激光共聚焦显微镜技术检测不同药物处理组胃动素引起的单个神经元内Ca2+荧光强度的变化.结果 大鼠肠肌间神经元呈MTLR免疫反应阳性表达;在Hank's液中,10-6 mol/L胃动素可引起神经元内Ca2+浓度的显著升高,其峰高(峰值减去静息值) 为30.6±3.7,荧光强度相对变化百分比为(100.8±18.4)%.在D-Hank's液(去除细胞外Ca2+)中或用L型钙离子通道阻断剂维拉帕米预处理细胞后,胃动素可轻度升高胞内Ca2+浓度.与单独应用胃动素组相比差异有统计学意义(P＜0.05).当分别用G蛋白拮抗剂NEM和PLC抑制剂Compound 48/80预处理细胞后再加入胃动素,胞内Ca2+浓度升高的程度明显降低,与单独应用胃动素组相比差异有统计学意义(P＜0.05).当用PKC抑制剂D-鞘氨醇预处理细胞后,再加入胃动素,其峰高和荧光强度相对变化百分比同单独应用胃动素组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 大鼠肠肌间神经元能自身表达MTLR.胃动素可明显升高神经元内Ca2+浓度,胞内Ca2+浓度的升高既源于外钙的内流又源于内钙的释放.外钙的内流主要通过L型Ca2+通道,G蛋白偶联型MTLR-PLC-IP3途径参与细胞内钙的释放.
作者：杨侠；董蕾；杨浩 刊期： 2006年第05期
放射性89锶(89Sr)的半衰期为50.5 d,发射纯β射线,对骨肿瘤有明显的辐射杀伤作用[1 4].89Sr不发射γ射线,用仪器在体外观察骨肿瘤内的生物学变化很困难,为了随访其对骨肿瘤的治疗作用,我们用89Sr韧致辐射显像观察了部分患者骨转移病灶的变化,现报道如下.
作者：邓候富；李林；贾志云；杨晓川；青春 刊期： 2006年第05期
目的 通过CCL20重组慢病毒整合的间充质干细胞,观察肿瘤原位高表达CCL20能否激发机体的抗肿瘤免疫.方法 构建小鼠CCL20重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导 BALB/c小鼠间充质干细胞(mMSCs),杀稻瘟素(blasticidin)筛选出稳定表达mCCL20的混合克隆,命名为lenti-mCCL20-mMSCs,与CT26混合后皮下接种至同系BALB/c小鼠,设lenti-null-mMSCs与CT26混合接种、mMSCs与CT26混合接种、CT26单独接种为对照,观察肿瘤生长情况.结果 构建了重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导 BALB/c小鼠MSCs,获得lenti-mCCL20-mMSCs,动物实验发现CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,但促进肿瘤生长.结论 CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,促进肿瘤生长,机制有待进一步研究.
作者：李红霞；陈平；王炼；徐健蓉；王国庆；贾永前；杨莉 刊期： 2006年第05期
目的 探讨术前输注TGF-β1基因修饰的供者树突状细胞(dendritic cell,DC)对大鼠肝移植免疫排斥的抑制作用及相关机制.方法 TGF-β1重组腺病毒转染供者DC,静脉输注受体大鼠,1周后建立大鼠肝移植免疫排斥模型并鉴定表达,记录存活时间,凝胶电泳迁移率试验法检测脾T细胞、Kupffer 细胞NF-кB活性及相关细胞因子TNF的表达,观察移植肝排斥病理改变.结果 Ad-TGF-β1-DC输注组移植大鼠的T细胞、Kupffer细胞活性及TNF表达明显低于对照组,排斥病理改变明显减轻,存活时间延长,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1-DC能有效降低T细胞和Kupffer细胞活性,提高移植肝免疫耐受,延长存活时间.
作者：刘宁；段体德；郑南 刊期： 2006年第05期
四川大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：四川大学
