邹翠兰；刘兴会；岳本明；付稼虹；何国琳
目的 研究TRAIL对卵巢癌SKOV3细胞生长及凋亡的影响.同时了解化疗药物对TRAIL受体表达的影响.方法 用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度TRAIL蛋白和顺铂(DDP)联合用药对SKOV3细胞生长的影响;化疗药物处理后用 RT-PCR方法检测细胞的TRAIL受体(DR4、DR5)表达的变化.结果 随着TRAIL蛋白浓度的升高,SKOV3细胞抑制率逐渐升高.TRAIL浓度达到10 ng/mL及以上浓度时,TRAIL+DDP联合组的抑制率比TRAIL组明显升高(P＜0.05).流式细胞仪检测SKOV3正常对照组、TRAIL组和TRAIL+DDP组细胞凋亡率分别为5.9%、 13.4%、 39.5%,各实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),TRAIL蛋白使细胞更多地停留在G0-G1期.RT-PCR检测发现DDP使SKOV3细胞DR5和 DR4水平明显升高,分别为对照的1.95倍和1.54倍(P＜0.05),而阿霉素、卡铂、5-FU处理后SKOV3细胞DR4、DR5表达无明显改变.结论 TRAIL蛋白单独使用对SKOV3细胞生长有抑制作用,肿瘤细胞凋亡率升高,TRAIL与DDP联合使SKOV3细胞抑制率明显升高,促凋亡作用更明显.DDP作用后SKOV3细胞DR4、DR5表达成倍增加.
作者：李春梅；彭芝兰；尹如铁；胡敏 刊期： 2006年第05期
目的 观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和促红细胞生成素(EPO)在大鼠血管性痴呆(VD)形成过程中的动态表达规律,探讨VD发生的可能机制.方法 采用大鼠双侧颈总动脉永久性阻断法(2-VO)建立VD动物模型,应用Y型水迷宫实验测定动物的学习记忆能力,采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区HIF-1α和EPO蛋白的表达.结果 ①随缺血时间的延长,痴呆组大鼠学习记忆能力进行性下降(P＜0.05);②痴呆组大鼠海马CA1区HIF-1α、EPO的表达于缺血1周时明显,此后缓慢下降,但与假手术组比较仍处于较高水平(P＜0.01);③痴呆组大鼠两蛋白表达与学习记忆能力呈高度正相关(P＜0.01).结论 HIF-1α和EPO参与了VD的发生发展过程,并可能在此过程中通过HIF-1/EPO缺氧信号转导途径发挥了保护作用.
作者：张蓓；吴海琴；张海雄；张桂莲；展淑琴 刊期： 2006年第05期
目的 探讨以白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)为靶点,阻断内毒素胞内信号转导后对大鼠移植肝脏再灌注损伤(I/RI)的影响并探索肝移植时可行的RNA干扰(RNAi)治疗途径.方法 两袖套法建立SD大鼠同种异体原位肝移植模型,随机分为冷缺血转染组、活体转染组及对照组.冷缺血转染组于冷缺血期经门静脉灌注转染携带IRAK-4-shRNA的质粒pSIIRAK-4;活体转染组在门静脉袖套吻合完成后,经门静脉分支注入pSIIRAK-4;对照组不予任何处理.按门静脉血流恢复后第0 min、60 min及180 min分为三个亚组,RT-PCR及Western-blot测定肝组织的IRAK-4 mRNA和蛋白表达水平;ELISA法测定受体血清TNF-α含量.采用TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化.结果 再灌注后冷缺血转染组的IRAK-4表达明显低于同时点的活体转染组及对照组(P＜0.01);同时,肝细胞凋亡指数、血清TNF-α含量及肝细胞、血窦内皮细胞损伤程度也明显低于后者.结论 以IRAK-4为靶点的冷缺血期shRNAs转染途径能有效阻断内毒素胞内信号转导,进而减轻肝移植时的I/RI程度.
作者：刘作金；李生伟；李旭宏；彭勇；游海波；李寿柏；龚建平 刊期： 2006年第05期
目的 探讨铜绿假单胞菌(PA)临床分离株的粘附性、生物被膜形成能力及其与基因型的相关性.方法 采用改良的微量平板法对临床分离的48株PA生物被膜的形成进行定量分析;通过肠杆菌基因间重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)技术绘制48株PA的指纹图谱,应用计算机软件建立遗传相似性系数矩阵及聚类分析树状图.结果 48株临床分离PA菌株生物被膜的形成能力不同.生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性,PA 在17%遗传相似性系数上分为A、B、C、D、E五个基因型,生物被膜形成能力强的PA大都属于D 型,其遗传相似性系数为42%.结论 绝大多数临床分离的PA株具有较强的生物被膜形成能力;生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性;生物被膜形成能力较强的PA在基因型上表现出一定的相似性.
作者：程曦；杨维青；石磊；尹晓琳；谢轶；曾蔚；李心晖；苏建裕；寇亚丽；贾文祥 刊期： 2006年第05期
目的 观察胆汁反流引起食管粘膜的炎症损伤和组织细胞凋亡情况.方法 以手术制造的十二指肠胃食管混合反流(DGER)大鼠模型为基础,制备DGER(A 组)模型;DGER +Losec Mupus制剂灌注造成单纯十二指肠液食管反流(B组)模型;DGER+胆管接扎造成无胆汁的十二指肠胃食管反流(C组)模型.观察9周后各组大鼠食管病理学改变,TUNEL法观察食管粘膜凋亡指数,免疫组化观察Fas蛋白的表达.结果 A、B、C三组均发生反流性食管炎表现,炎症以A组重,其次为B组,C组轻.A、B两组均见Barrett's食管发生,发生率差异无统计学意义(P>0.05),C组无Barrett's食管发生;细胞凋亡结果示A组凋亡指数高,其后依次为B组和C组(P＜0.01);各组Fas蛋白表达均阴性.结论 不含胆汁的DGER所致食管损伤轻,胆酸可能与Barrett's 食管的发生密切相关;各病理组的凋亡情况均增加,但与Fas系统无关.
作者：张茹；龚均；史冉庚；王涛；王莉 刊期： 2006年第05期
目的 研究正畸牙移动中加力后P2X3 mRNA在三叉神经节(TG)的表达变化规律,以探讨P2X3受体在正畸牙移动疼痛机制中的作用.方法 以雄性SD大鼠为实验对象,模拟临床矫治的牙移动过程,应用原位杂交手段进行研究.结果 大鼠牙齿加力后,观察到TG内P2X3 mRNA杂交信号阳性标记神经元数量呈现一定的时间规律:实验后1 d开始出现变化,实验后3 d达高峰,7 d后下降至与对照组基本一致.结论 在大鼠牙移动过程中,TG的P2X3 mRNA表达变化是一过性变化,呈现短时上调的规律,推测P2X3与牙移动伤害表达密切相关.
作者：曹阳；赖文莉；陈扬熙 刊期： 2006年第05期
目的 探讨子痫前期患者血清中可溶性血管内皮生长因子受体-1(sVEGFR-1)水平和胎盘组织中膜型血管内皮生长因子受体-1(膜型VEGFR-1)的蛋白表达与子痫前期发病的相关性.方法 用ELISA法和免疫组化法检测10例轻度子痫前期,10例重度子痫前期和10例子痫患者以及10例正常对照血清中sVEGFR-1水平和胎盘组织中膜型VEGFR-1蛋白的表达.结果 子痫前期各组血清中sVEGFR-1水平明显高于正常对照组(P＜0.05),随子痫前期的病情加重血清中sVEGFR-1水平有上升趋势,轻度子痫前期＜重度子痫前期＜子痫期.膜型VEGFR-1在胎盘的表达主要位于绒毛滋养细胞胞膜,绒毛血管内皮细胞胞膜,羊膜上皮细胞胞膜上,间质有少量表达.子痫前期各组胎盘组织中膜型VEGFR-1蛋白表达均明显低于正常对照组(P＜0.05),随病情加重有下降趋势,轻度子痫前期>重度子痫前期>子痫期.子痫前期 sVEGFR-1/膜型VEGFR-1较对照组高,随病情加重有升高趋势,轻度子痫前期＜重度子痫前期＜子痫期.结论 子痫前期发病可能与血清中sVEGFR-1水平、胎盘组织中膜型VEGFR-1表达有关.膜型VEGFR-1在胎盘的表达可能与子痫前期有关.
作者：邹翠兰；刘兴会；岳本明；付稼虹；何国琳 刊期： 2006年第05期
放射性89锶(89Sr)的半衰期为50.5 d,发射纯β射线,对骨肿瘤有明显的辐射杀伤作用[1 4].89Sr不发射γ射线,用仪器在体外观察骨肿瘤内的生物学变化很困难,为了随访其对骨肿瘤的治疗作用,我们用89Sr韧致辐射显像观察了部分患者骨转移病灶的变化,现报道如下.
作者：邓候富；李林；贾志云；杨晓川；青春 刊期： 2006年第05期
目的 对全国出生缺陷监测的肢体短缩畸形进行流行病学分析,了解我国肢体短缩畸形的变化趋势和影响因素.方法 全国出生缺陷监测采用以医院为基础的监测方案,1996～2000年全国31省、市、自治区的463～466所县级或以上的医院参加.监测对象为住院分娩的孕满28周的出生儿,日龄为生后7 d.监测资料逐级上报和审核,进行统计学统计.结果 1996～2000年全国肢体短缩畸形平均发生率为5.41/万,五年期间没有明显的变化趋势(χ2=4.08,P>0.05);农村发生率高于城市发生率,但发生率没有性别差异.南方与北方省份间以及东部、中部和西部间肢体短缩畸形发生率没有差异.单侧和双侧比例以及上肢和下肢比例没有差异.结论 我国肢体短缩发生率仍为高发国家,发生率有城乡差异.提高产前诊断比例有助于发生率的下降.
作者：朱军；代礼；周光萱；王艳萍；梁娟；缪蕾 刊期： 2006年第05期
目的 在已建立的小鼠囊胚-恶性肿瘤细胞体外共培养的基础上,将小鼠囊胚体外植入恶性肿瘤细胞的生物学行为和小鼠囊胚植入单层容受性子宫内膜上皮细胞的生物学行为进行比较性研究.方法 采用体外小鼠囊胚-恶性肿瘤细胞共培养体系和改进的小鼠囊胚-单层容受性子宫内膜上皮细胞共培养体系,光镜下观察小鼠囊胚在单层恶性肿瘤细胞和容受性子宫内膜上皮细胞贴壁、脱带、粘附及植入过程,HE染色,扫描电镜观察和免疫组织化学对两系统中囊胚植入的生物学行为进行比较性研究.结果 小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞Hepa1-6、CHO和B16共培养系统中的脱带率、贴附率和扩展率分别是69.74%、81.49%、90.15%;68.63%、79.86%、90.32%和68.94%、80.21%、89.53%.容受性子宫内膜上皮细胞共培养系统中的脱带率、贴附率和扩展率分别是69.52%、81.25%和91.51%,小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞与容受性子宫内膜上皮细胞体外植入比较,其脱带率、贴附率和扩展率差异无统计学意义(P>0.05),植入的形态学和滋养层细胞表达的MMP-9差异无统计学意义(P>0.05).结论 在体外贴壁细胞的共培养系统中,小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞和容受性子宫内膜上皮细胞共培养系统中的发育和植入行为差异无统计学意义,可能是早期生命在体外高适应和自我组织能力的一种体现.
作者：马芳；王智彪；王媛；赵劼 刊期： 2006年第05期
目的 探索羊膜组织来源的细胞向神经细胞分化的可能性,为神经移植探寻新的细胞来源.方法 采用组织块培养法培养羊膜细胞,酶消化法对细胞进行传代,应用免疫细胞化学的方法 对细胞进行鉴定.结果 从羊膜组织成功培养出细胞,细胞贴壁生长,在体外短期内可以稳定增殖和传代,传代细胞在神经干细胞的培养基中可以形成典型的球状结构,类似神经干细胞的神经球.细胞表达波形蛋白和巢蛋白两种神经干细胞的标志物,也表达神经元的标志物神经元特异性烯醇化酶和βⅢ管蛋白;大部分细胞表达多巴胺能神经元的标志物酪氨酸羟化酶.少数细胞表达星型胶质细胞的标志物胶质纤维酸性蛋白.部分细胞可以随机分化为平滑肌细胞,表达平滑肌肌动蛋白;在诱导条件下,羊膜细胞也可以分化为脂肪细胞.结论 羊膜组织来源的细胞可以表达神经细胞的标志物,能够分化为脂肪细胞和平滑肌细胞,这种细胞对于神经移植有潜在的应用前景.
作者：郑佳坤；杨立业；许曼丹；陈强；李文玉；汪朝阳 刊期： 2006年第05期
目的 探讨阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞线粒体膜电位的变化及其致肾损伤的作用机制.方法 60只SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、实验组(再分为胆总管结扎后15 d、21 d两个亚组),每组15只.胆总管双重结扎法建立阻塞性黄疸大鼠模型,切取肾脏行肾小球系膜细胞原代培养,流式细胞仪测定细胞线粒体膜电位平均荧光强度值,激光共聚焦显微镜法测定细胞浆[Ca2+]i浓度.结果 实验组大鼠肾小球系膜细胞线粒体膜电位平均荧光强度值明显下降(P＜0.05),肾小球系膜细胞胞浆钙浓度明显升高(P＜0.05).结论 [Ca2+]i内流引起的线粒体膜电位的下降在阻塞性黄疸大鼠肾系膜细胞损伤中起着重要作用.
作者：乔安意；钱以德；杨星；陈戎；黎介寿；彭兵 刊期： 2006年第05期
目的 构建霍乱毒素A亚基基因(ctxA)的融合表达载体,并在原核细胞中表达,为霍乱弧菌肠毒素A亚基(CTA)免疫原性的研究及其作为免疫佐剂的研究提供基础.方法 以霍乱弧菌DNA为模板,PCR扩增获得霍乱弧菌ctxA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),并经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-CTA融合蛋白, 用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定.结果 限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,我们扩增出了霍乱弧菌787 bp的ctxA基因,成功构建了重组质粒pET-ctxA,经SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒pET-ctxA在原核细胞中得到了高效融合表达.结论 霍乱弧菌ctxA基因在大肠杆菌中得到了高效表达.
作者：张莉；陈建平；张雷；王涛；刘德松；田玉 刊期： 2006年第05期
目的 利用蛋白自剪切功能原核表达系统构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 胞膜外段融合蛋白表达载体,并进行表达条件优化和初步纯化.方法 设计基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的TRAIL基因与经相同处理的载体pTWIN1相连接,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子.将鉴定(酶切及序列分析)阳性的重组子质粒转入大肠埃希菌ER2566表达菌中, 采用蛋白质SDS-PAGE 电泳方法 分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG) 、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白表达情况.结果 成功获得了包含TRAIL基因胞膜外段的双链cDNA序列,酶切及序列分析证实成功构建了TRAIL胞膜外段蛋白自剪切功能原核表达载体.采用0.3 mmol/L IPTG、15 ℃诱导过夜(14～16 h),目的蛋白获得较高表达量,且大部分为可溶性蛋白.结论 采用大肠埃希氏菌ER2566,TRAIL胞膜外段融合蛋白获得高表达,经简单后续处理即可获得不含任何额外氨基酸的可溶性目的蛋白.
作者：杨文理；陈守春；陈毅荣；覃扬 刊期： 2006年第05期
目的 评价异丙酚国人群体药代动力学参数之靶控输注系统(TCI)的准确性.方法 选择20例ASAⅠ～Ⅱ级并符合纳入标准的择期手术病人,行异丙酚TCI,待病人意识消失后,予芬太尼5 μg/kg,维库溴铵0.1 mg/kg诱导插管,TCI以设定靶血浆药物浓度(3 μg/kg)变速输注60 min,分时点间断采集动脉血90 min,应用气相色谱-质谱仪(GC-MS)测定异丙酚血药浓度.结果 靶血浆药物浓度达稳态约30 min,异丙酚输注期间及停止输注后实测浓度均明显低于预测浓度(P＜0.01),前者低32.7%～50.7%,后者低55.5%～59.5%,异丙酚输注期间及停止输注后系统偏离度、精确度分别>15%、>30%.结论 国产异丙酚靶控输注系统血药浓度实、预测值差异超出临床可接受范围,但二者间存在相当程度的平行关系,这种量化关系可用来指导临床工作.
作者：林彦俊；李羽；刘斌 刊期： 2006年第05期
目的 探讨大豆异黄酮(SIF)改善高脂高蔗糖膳食诱导大鼠胰岛素抵抗(IR)状态的作用及可能机制.方法 选用高脂高蔗糖饲料诱导的IR雄性SD大鼠,根据胰岛素抵抗指数(IRI)随机分为模型对照组和3个SIF组(50 mg/kg·bw、150 mg/kg·bw及450 mg/kg·bw).各组给予相应受试物1月后,酶法检测各组动物空腹血糖、放免法检测空腹血胰岛素、酶免法检测血抵抗素含量,实时定量RT-PCR法检测肾周脂肪组织抵抗素基因的mRNA水平.结果 与模型对照组比较,450 mg/kg·bw SIF组能明显降低大鼠肾周脂肪组织抵抗素基因mRNA的表达及血清抵抗素的含量.150 mg/kg·bw SIF和450 mg/kg·bw SIF组能显著降低空腹血胰岛素水平及IRI.3个SIF组的血糖与对照组比较差异无统计学意义.IRI与血清抵抗素水平存在着明显的正相关(r＝0.355,P＜0.05).结论 SIF可能具有通过下调抵抗素基因mRNA表达及降低血清含量而提高胰岛素敏感性的作用.
作者：陈世伟；张红敏；张立实；冯晓凡 刊期： 2006年第05期
目的 探讨术前输注TGF-β1基因修饰的供者树突状细胞(dendritic cell,DC)对大鼠肝移植免疫排斥的抑制作用及相关机制.方法 TGF-β1重组腺病毒转染供者DC,静脉输注受体大鼠,1周后建立大鼠肝移植免疫排斥模型并鉴定表达,记录存活时间,凝胶电泳迁移率试验法检测脾T细胞、Kupffer 细胞NF-кB活性及相关细胞因子TNF的表达,观察移植肝排斥病理改变.结果 Ad-TGF-β1-DC输注组移植大鼠的T细胞、Kupffer细胞活性及TNF表达明显低于对照组,排斥病理改变明显减轻,存活时间延长,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1-DC能有效降低T细胞和Kupffer细胞活性,提高移植肝免疫耐受,延长存活时间.
作者：刘宁；段体德；郑南 刊期： 2006年第05期
目的 探讨WTK1细胞tk位点自发和诱发突变体的突变谱和突变热点.方法 用甲磺酸甲酯、丝裂霉素C和叠氮钠染毒WTK1细胞后,筛选出tk基因突变集落,用多重PCR方法对WTK1细胞tk基因突变谱进行分析.结果 三种受试物均能诱导WTK1细胞tk位点突变频率增高,且存在剂量-反应关系;所分析的突变体中绝大部分缺失tk基因外显子4和5-7.结论 三种受试物对WTK1细胞均有致突变作用;tk位点的突变存在明显的突变热点.
作者：王怡净；帅培强；张立实 刊期： 2006年第05期
目的 通过对荷瘤小鼠进行以腺病毒为载体的可溶性血管内皮生长因子Ⅱ型受体(soluble vascular endothelial growth factor receptor-2,sFLK-1)基因治疗联合伽玛刀治疗,了解两者的协同治疗作用.方法 构建表达sFLK-1基因的腺病毒,在293细胞中扩增、纯化、鉴定.建立负载大鼠C6胶质瘤细胞的BALB/c裸小鼠的动物模型,实验分为空载病毒组、重组腺病毒组、伽玛刀组、重组腺病毒+伽玛刀联合治疗组,肿瘤细胞接种后12 d(体积增至约110 mm3)联合治疗组及伽玛刀组应用伽玛刀(13 Gy)对荷瘤小鼠进行治疗;肿瘤细胞接种后7、14 d联合治疗组及重组腺病毒组尾静脉注射重组腺病毒(Ad-sFLK-1 )1×109 PFU;观察荷瘤小鼠存活率,测量肿瘤大小,免疫组化法测肿瘤组织微血管密度,Tunel法检测凋亡小体.结果 联合治疗组不仅能明显抑制肿瘤组织的生长,而且能明显延长小鼠的生存期,与其他三组比较减少肿瘤组织中微血管密度,Tunel法显示凋亡小体明显增多,P均＜0.05.结论 对负载大鼠C6胶质瘤细胞的荷瘤小鼠,sFLK-1基因治疗联合伽玛刀能够抑制小鼠肿瘤生长和肿瘤血管生成,起到协同作用.
作者：陈兢；王正荣；李浩；魏于全；王伟；朱彬 刊期： 2006年第05期
目的 研究绿色荧光蛋白(GFP)基因体外转染人脂肪基质细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能.方法 体外分离培养人脂肪基质细胞,用重组腺病毒载体Ad-GFP及脂质体介导质粒pEGFP-C1两种方法转染GFP基因,通过流式细胞术观察比较GFP转染和表达的结果;倒置显微镜下观察细胞生长情况;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况. 结果 重组GFP基因的腺病毒Ad-GFP转染的脂肪基质细胞的感染率达(42.5±1.5)%,16 h即有GFP表达,7 d时表达趋于稳定,感染6周时仍可见有GFP表达,明显优于脂质体转染组(转染效率高为11.4%).感染Ad-GFP后的脂肪基质细胞与未感染的对照组脂肪基质细胞成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)表达均逐渐增高,两组间差异无统计学意义(P>0.05);诱导21 d后两组均见到茜素红钙盐染色阳性.结论 重组GFP基因的腺病毒载体Ad-GFP可高效率感染脂肪基质细胞,基因转染后细胞的增殖分化能力未受到影响,可以作为一种高效可靠的人脂肪基质细胞标记方法.
作者：林云锋；敬伟；陈希哲；乔鞠；李志勇；严征斌；吴凌；田卫东 刊期： 2006年第05期
四川大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：四川大学
