王健；沈茜
目的: 研究LAIR-1(CD305)及LAIR-2(CD306)推定配体在多种细胞系上的分布,为鉴定LAIR-1/LAIR-2推定配体提供了实验依据.方法:建立稳定表达LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白的细胞系.以纯化的融合蛋白进行活细胞免疫荧光染色,用流式细胞仪检测LAIR-1及LAIR-2推定配体在多种细胞系膜表面的表达,并比较LAIR-1和LAIR-2推定配体的分布及可能结合的位点.结果:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体均在人羊膜来源的上皮细胞系WISH上高表达,在人黑色素瘤细胞系C32、人胚肾上皮细胞系293T及人脐静脉内皮细胞系ECV304上有一定程度的表达.LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白与推定配体的结合,可分别被可同时识别LAIR-2和LAIR-1的单克隆抗体(mAb)FMU-LAIR-2.2和FMU-LAIR-2.1阻断.结论:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体的分布基本一致,主要表达于WISH、 C32、293T和ECV304细胞系.LAIR-1和LAIR-2可能拥有共同的配体.
作者：许晓光；王春燕；谢鑫；薛江楠；欧阳为明；菅金龙；金伯泉 刊期： 2005年第05期
目的: 探讨甘肃汉族人群中白血病的易感性与HLA基因多态性之间的关联.方法: 采用序列特异性寡核苷酸探针杂交技术(PCR-SSO),对57例白血病患者和45例健康对照组进行HLA-A、 -B及-DRB1基因分型.结果: 在等位基因HLA-A、 -B及-DRB1中,白血病患者的HLA-A01、 -B38及-DR15基因的基因频率高于正常对照组(P<0.05),而HLA-A11及-DR03基因的基因频率明显下降(P<0.05).结论: 甘肃省汉族人群基因HLA-A01、-B38及-DR15对白血病具有遗传易感作用; 而基因HLA-A11和-DR03对白血病具有遗传拮抗作用.
作者：周兰霞；赵丽 刊期： 2005年第05期
目的: 探讨P38MAPK和MCP-1的关系及其在糖尿病动脉粥样硬化中的作用以及硒的作用机制.方法: 分别以高葡萄糖、糖基化终末产物(AGE)、胰岛素或过氧化氢体外孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC),并以Westernblot法或RT-PCR法检测P38MAPK和MCP-1在HUVEC的表达.检测并比较有无P38MAPK特异抑制剂SB203580或硒预处理,以上4种因素对P38MAPK和MCP-1在HUVEC表达的影响.结果: 高葡萄糖、 AGE、胰岛素或过氧化氢均可独立激活P38MAPK,并增加MCP-1在HUVEC的表达.SB203580显著抑制MCP-1的表达.硒抑制P38MAPK的活化并减少MCP-1的表达.结论:P38MAPK是MCP-1的上游信号分子,表明P38MAPK可能是糖尿病动脉粥样硬化发生的始动信号之一.硒可能通过抑制P38MAPK磷酸化而抑制MCP-1表达,有预防动脉粥样硬化作用.
作者：李艳波；李为民；韩君勇 刊期： 2005年第05期
目的: 表达并纯化小鼠白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(mLAIR-1)胞膜外区与人IgG Fc段的融合蛋白,制备兔抗mLAIR-1胞膜外区的抗体.方法: 构建真核表达载体,表达并纯化mLAIR-1-Fc融合蛋白.以mLAIR-1-Fc融合蛋白免疫家兔,用偶联mLAIR-1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化多克隆抗体.用间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定多克隆抗体的特异性.结果:表达并纯化了mLAIR-1-hIg Fc融合蛋白.以其免疫家兔,用亲和层析的方法纯化得到兔抗mLAIR-1胞膜外区的抗体,能与转染细胞和细胞表面天然mLAIR-1分子结合.结论: 成功地构建了mLAIR-1胞膜外区基因的真核表达载体,表达并纯化了mLAIR-1-Fc融合蛋白.用偶联mLAIR-1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化的兔抗mLAIR-1胞外区抗体,具有高特异性和高效价,为进一步研究mLAIR-1分子的结构和功能提供了新的手段.
作者：张圆；庄然；金伯泉；欧阳为明 刊期： 2005年第05期
目的: 构建生物素-蛋白连接酶(BirA酶)基因的表达载体,并在大肠杆菌BL-21 (DE3)中表达具有生物学活性的BirA酶.方法:用PCR法扩增BirA酶基因.将PCR产物克隆入pGEX-4T-2中构建BirA酶-GST融合蛋白基因的重组表达载体pGEX-BirA.经测序验证后,在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,表达产物采用谷胱苷肽-琼脂糖层析柱进行纯化.以带有生物素酶底物肽(BirA substratepeptide,BSP)的HLA-A2-肽复合物为底物,用ELISA和Western blot鉴定表达产物的生物素化活性. 结果:构建了pGEX-BirA原核表达质粒,并在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达Mr为61 300 的BirA酶-GST融合蛋白,表达产物经谷胱苷肽-琼脂糖层析柱纯化后,得到N端带有GST标签的BirA酶蛋白. ELISA和Western blot的结果显示,表达产物能使HLA-A2-肽复合物生物素化. 结论: 成功地制备了具有生物学活性的BirA酶,为研究蛋白质分子的相互作用提供了有效的制剂.
作者：李青；吴雄文；熊敏；翁秀芳；卢小玲；梁智辉；龚非力 刊期： 2005年第05期
目的:构建病毒白细胞介素IL-10(vIL-10)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中表达.方法: 以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,用PCR扩增EB病毒BCRF1基因.PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切后,克隆至原核表达载体pET-28a中,以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,在IPTG诱导下表达目的蛋白.结果: 以终浓度为100 靘ol/L的IPTG于30℃诱导6h后,重组菌可高效表达相对分子质量(Mr)约为24 000的His-vIL-10融合蛋白.结论:成功地克隆vIL-10的编码基因并在大肠杆菌中高效表达,为制备抗vIL-10单克隆抗体(mAb)、分析vIL-10结构与功能的关系提供了条件.
作者：连云宗；李极品；吴玉水；程烽；朱忠勇 刊期： 2005年第05期
目的: 克隆细胞因子midkine(MK)基因,表达其融合蛋白,制备抗MK单克隆抗体(mAb)并检测MK在肿瘤细胞中的表达.方法:利用MK基因的特异性引物,通过RT-PCR从人肾癌组织mRNA中扩增人MK cDNA分子.将其定向克隆于原核表达载体中,在大肠杆菌中表达MS2-MK融合蛋白.以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用传统的杂交瘤技术,进行细胞融合、筛选、克隆化并制备mAb腹水.用ELISA法分析其Ig亚类,用免疫细胞化学染色法检测MK在肿瘤细胞中的表达.结果:成功地克隆出MK基因并表达了MS2-MK融合蛋白.通过免疫和筛选,获得2株分泌小鼠抗人MK mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb的Ig亚类分别为IgG1和IgG2a.免疫细胞化学染色显示,2株mAb与人胃癌细胞株MGC803和胃癌组织呈强阳性反应.结论:在原核细胞中获得MS2-MK融合蛋白的表达,并制备出抗MK的mAb,为研究MK的生物学活性提供了条件.
作者：张青云；杨敏；王雅明；徐建军 刊期： 2005年第05期
目的: 构建人E1A激活基因阻遏子(human cellular repressor of E1A-stimulated gene,hCREG)基因的原核表达载体,纯化重组的hCREG融合蛋白并制备兔抗hCREG抗体.探讨hCREG蛋白在人血管平滑肌细胞克隆株(HITASY)中的表达、定位.方法:用PCR技术,扩增hCREG并构建pGEX-4T-1/hCREG原核表达载体.诱导表达重组谷胱甘肽巯基转移酶(glutathioneS-transferase,GST)-hCREG融合蛋白.以GST-hCREG为抗原,制备兔抗人GST-hCREG的抗血清,并通过蛋白A和GST亲和层析纯化.用ELISA和Western blot法检测抗体的效价和特异性;用免疫荧光染色法检查去血清培养前后HITASY细胞中hCREG蛋白的表达及定位;用BrdU染色观察分泌型hCREG蛋白对HITASY细胞增殖的影响.结果:经鉴定证实构建的重组质粒正确.诱导后pGEX-4T-1/hCREG菌株可表达大量的GST-hCREG融合蛋白,层析纯化后其纯度达90%.Western blot检测表明,纯化的兔抗hCREG抗体可与hCREG蛋白特异性结合.ELISA测得该抗体的效价＞1∶105.免疫荧光染色检测显示,去血清培养诱导的HITASY细胞中hCREG蛋白的表达增加且定位在核周围.BrdU染色表明,hCREG可明显抑制HITASY细胞增殖.结论:成功地获得兔抗hCREG抗体.证实去血清培养的血管平滑肌细胞中CREG蛋白的表达上调.表达的hCREG蛋白可抑制HITASY细胞增殖,提示hCREG可能参与调控血管平滑肌细胞的增殖与分化.
作者：韩雅玲；刘海伟；闫承慧；康建；王效增；胡叶 刊期： 2005年第05期
目的: 构建原核表达质粒pHGhis/c-Aβ-c,并在大肠杆菌中表达,观察融合蛋白c-Aβ-c的免疫原性,为阿尔茨海默病(AD)基因工程疫苗的研究打下基础.方法: 采用PCR法,分别扩增编码HBcAg的1～71、88～144氨基酸的基因片断(HBc1～71和HBc88～144),以及编码淀粉样肽Aβ1-42的基因.将后者连接于HBc1～71和HBc88～144之间,构建重组质粒pGEMEX/c-Aβ-c,并将重组基因亚克隆于原核表达载体pHGhis中,构建表达质粒pHGhis/c-Aβ-c,通过温度诱导表达.用SDS-PAGE(考马斯亮蓝染色)检测融合基因的表达.以融合蛋白经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-Aβ抗体的滴度.结果: 经酶切鉴定、DNA序列测定证实,融合基因重组于表达质粒之中,表达质粒与理论设计相符.诱导表达后,表达蛋白约占细菌沉淀的16%.BALB/c小鼠经3次免疫后,其血清中抗-Aβ抗体的滴度可达1∶16 000,且检测不到抗-HBcAg抗体.结论: c-Aβ-c融合基因在大肠杆菌中可高效表达,表达的融合蛋白具有较强的免疫原性.
作者：冯改丰；胡海涛；李月英；韩华；王全颖；杨广笑 刊期： 2005年第05期
目的: 研究 125I标记的抗p185抗体(鼠mAb A21、人鼠嵌合抗体A21 scFv-Fc及单链抗体A21scFv)在体外的细胞代谢和在体内的生物学分布,为其在诊断和治疗高表达p185肿瘤的临床应用提供依据.方法:通过FACS检测抗体是否与高表达膜表面抗原p185的SKOV3特异结合.采用氯胺T法进行碘标记抗体,用细胞放射免疫分析实验,检测抗体在SKOV3细胞中的代谢.建立荷SKOV3裸鼠模型,以观察抗体的体内生物学分布.结果: 体外细胞代谢实验表明,抗体在与细胞膜表面结合后,进而被内吞入细胞,在细胞内降解和脱碘,后被分泌出细胞外.体内药物代谢实验表明,抗体在动物体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚,而无关抗体未出现放射性浓聚,呈全身分布.结论: mAb A21,A21 scFv-Fc和A21scFv对于高表达p185的卵巢癌在体内和体外都具有亲和力,可望用作高表达p185肿瘤的诊断和治疗.
作者：汪海洋；刘海波；董艳秋；杨建虹；程联胜；刘兢 刊期： 2005年第05期
目的: 构建t-PA活性不被PAI-1抑制的新一代t-PA突变体.方法: 根据t-PA的结构特点,去除t-PA分子中的指状区、表皮生长因子和Kringle1区,以含全长t-PA编码区序列的pUC18质粒为模板,经PCR扩增编码氨基酸1～3和176～527位的截短式t-PA DNA序列; 并将该t-PA分子中的PAI-1结合位点,即第373～384位核苷酸(AAG CAC AGG AGG)突变为(GCG GCC GCG GCG),相应的氨基酸KHRR则变为AAAA.结果:测序证实,t-PA突变体的DNA序列正确,将其克隆于大肠杆菌表达载体中,并在大肠杆菌中得到高效表达.表达蛋白占总菌体蛋白的30%,以包涵体形式存在.经蛋白质变性、复性,得到有活性的t-PA突变体.t-PA突变体与PAI-1反应后t-PA的活性未受到抑制.结论:t-PA突变体可能是一种用于治疗心肌梗死和脑血栓等血栓性疾病的强效且剂量要求低的新型生物工程药物.
作者：朱美财；占志；王雅静；刘成刚；石缨；蔡庆 刊期： 2005年第05期
目的: 构建共表达质粒pSLC-IRES-IL-2,并在COS-7细胞中表达.方法: 根据人SLC和IL-2 cDNA的序列分别设计、合成引物,构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的SLC和IL-2基因的真核表达质粒pSLC-IRES-IL-2,用电穿孔法以共表达质粒转染COS-7细胞.用Western blot检测SLC和IL-2的表达.结果: Western blot检测表明,以重组共表达质粒pSLC-IRES-IL-2转染的COS-7细胞能表达SLC和IL-2,表达产物的Mr同预期的结果相一致.结论:成功地构建SLC和IL-2基因的共表达质粒,以其转染COS-7细胞后,能分泌性表达SLC和IL-2,为肿瘤基因治疗的研究提供一定途径.
作者：侯丽；赵跃然；王来城；焦玉莲；张捷；马春燕；崔彬 刊期： 2005年第05期
目的: 探索细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在无血清体系中的增殖规律、表型变化及其抗瘤活性.方法: 不同培养基培养CIK细胞,采用活细胞计数法观察CIK细胞的增殖,流式细胞仪检测CIK细胞的表型,CytoTox96非放射性细胞毒试剂盒检测CIK细胞的细胞毒活性.结果:经过细胞因子和抗体刺激后,CIK细胞能明显增殖,无血清培养基加自体血浆组高可扩增473.28±27.53倍,无血清培养基组可扩增218.24±16.86倍,而RPMI1640加FCS只扩增11.52±1.04倍.CD3++CD8+、CD3++CD56+、CD226++CD11a+和CD305++CD11a+细胞随着培养时间的延长而增加,而CD3++CD4+细胞则明显减少.CIK细胞对肿瘤细胞的细胞毒作用明显高于LAK细胞(P<0.01),且其细胞毒活性随着培养时间的延长而增高.结论: CIK细胞在体外扩增能力强,对肿瘤细胞的杀伤活性高,有望成为新一代抗肿瘤过继免疫细胞制剂而应用于临床.
作者：曹建平；姜志明；张晓晨；蔺迪；陈伟；孙英慧；马东初 刊期： 2005年第05期
SARS冠状病毒(SARS-CoV)严重威胁人类的健康,对其深入研究具有重要的现实意义.许多研究表明,SARS-CoV的S糖蛋白(spike glycoprotein)为其主要抗原,在病毒与宿主细胞表面受体结合并介导病毒经膜融合进入细胞中起关键作用.
作者：秦宇；李梅；刘中华；石立莹；毛乃颖；许文波；李晓眠 刊期： 2005年第05期
目的: 探讨白藜芦醇(Res)抗肿瘤作用的免疫学机制.方法: 用MTT比色法测定肿瘤细胞生长抑制率,流式细胞术分析其细胞周期.分别采用MTT比色法、溶血分光光度法、改良的Mayer法及双抗体夹心ELISA法,检测荷瘤小鼠的免疫功能及细胞因子的水平.结果: Res可以时间-剂量依赖的方式抑制肿瘤细胞增殖、促进其凋亡,出现明显的凋亡峰和G0/G1期阻滞现象; 抑瘤率高可达42.76%.Res可增强NK细胞的杀伤力、 T细胞增殖、抗体的分泌及CH50活性,并呈剂量依赖性.Res还可显著提高IL-2和TGF-β1的含量; 减少IL-8和VEGF的分泌.结论: Res既可直接作用于肿瘤细胞,也可通过提高机体细胞与体液免疫应答的水平,调节细胞因子的分泌,而发挥抗肿瘤作用.
作者：李覃；胜利；范桂香；袁育康；李彤 刊期： 2005年第05期
为了探讨血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和抗结核杆菌抗体(TB-Ab)在结核病病情转归中的意义,我们对60例痰菌阳性的初治肺结核患者和30例健康人血清中的TNF-α和TB-Ab分别进行了定量及定性检测,并对检测的结果做了评价.
作者：闫伯强；胡天勇；杨宜平 刊期： 2005年第05期
目的: 观察复方木鸡冲剂在慢性乙型肝炎中的疗效.方法: 选择28例服用复方木鸡冲剂及护肝药物的慢性乙型肝炎患者作为治疗组,31例仅用护肝药物的患者作为对照组,观察并比较两组治疗前、治疗结束时、治疗结束3月后临床症状改善率、肝功能、血清肝纤维化指标、部分免疫学指标、血常规及超声诊断参数的变化.结果: 复方木鸡冲剂可明显改善患者多项检测参数,包括ALT、 AST、 r-GT、 HA、 LN、PCⅢ、 IgG、 r-球蛋白、 AFP、血小板、脾厚度和肝光点异常率,部分作用较为持久.结论: 复方木鸡冲剂具有保护肝细胞、抑制肝纤维化、降低AFP水平和减轻脾肿大的作用,对慢性乙肝有良好疗效.
作者：韩捷；陈海燕；沈培辰；解慧；吴振彪；王维东；冷南 刊期： 2005年第05期
目的: 分析重组人源抗HBsAgFab的糖基化.方法: 应用PAS糖染色法和经酶切糖苷酶H去糖基后,用MALDI-TOF-MS质谱仪对重组人源抗HBsAgFab的糖基化进行分析.结果: PAS染色法的结果显示,毕赤酵母(Pichia pastoris)表达的重组人源抗HBsAgFab呈淡红色.用质谱仪测定P. pastoris表达的经内切糖苷酶H去糖基后的重组人源抗HBsAg Fab的相对分子质量(Mr),从50678.49降低到49 245,相差1 433.49(约相当于少了8个甘露糖基).结论: P. pastoris表达的重组人源抗HBsAgFab,为一种具有生物活性的低糖基化的蛋白,为深入研究其性质及功能奠定了基础.
作者：邓宁；向军俭；唐勇；王宏；粟宽源 刊期： 2005年第05期
抗金葡菌多肽(PH-SA)是利用金黄色葡萄球菌信息素(pheromone)和大肠杆菌Ia(colicin)人工合成的新的蛋白质工程多肽(pheromonicin),主要是针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methecillinresistant Staphylococcus aureus,MRSA)及其他致病菌的新型生物信息导向抗菌药物.
作者：肖毅；梅其炳；侯颖；周四元；丘小庆 刊期： 2005年第05期
目的: 分析纯化前后正常人血清IgG类抗角蛋白自身抗体对角蛋白的反应型式,探讨血清非IgG成分对自身AK autoAbs结合特性的影响.方法: 用间接ELISA检测正常人血清IgG类AK auto Abs纯化前后的滴度,Westernblot检测全血清和纯化IgG对自身角蛋白的反应特征.结果: 纯化前不同个体血清中IgG类AK auto Ab的滴度差异很大,反应型式高度异质;纯化后IgG的AK auto Ab滴度较纯化前明显升高.Western blot分析显示纯化后的IgG类AK autoAb识别的角蛋白成分条带增加,反应性增强,且个体之间的反应型式趋于一致.结论: 血清中IgG类AK autoAbs的反应型式受一些非IgG成分不同程度的影响; 个体之间高度一致的反应型式提示产生IgG类AK autoAbs的B细胞在发育过程中可能受正常机体一组自身抗原(角蛋白)的选择,而与机体接触的外来抗原无关.
作者：党育平；李巍；李承新；夏汝山；孙林潮；刘玉峰 刊期： 2005年第05期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
