张松；金振晓；赵堃；陈涛；段维勋；贺清；邓超；赵荣
树突状细胞(DC)是目前已知功能强的专职抗原递呈细胞.外源抗原在进入DC的内体后,常规情况下会进入经典的MHCⅡ递呈途径.而经一些受体介导内吞的抗原会从内体释放进入胞质,经免疫蛋白酶体降解成肽段进入MHC Ⅰ类分子递呈途径,或在内体中被降解成抗原肽后与MHC Ⅰ类分子结合,直接转运到DC表面,这一递呈途径被称为交叉递呈.外源抗原交叉递呈对有效激活细胞毒性T细胞从而引发抗肿瘤、抗病毒免疫反应有着重要意义.本文对参与交叉递呈的DC表面内吞受体、交叉递呈途径及机制方面的研究进展进行简要总结.
作者：闫素仙；于辉；谢影哲；刘珍珍；杨章民 刊期： 2016年第09期
目的 探索脂多糖(LPS)调节树突状细胞(DC)的功能,促进T细胞免疫反应的机制.方法 应用CDllc+免疫磁珠分离小鼠脾脏DC.LPS处理DC后.流式细胞术检测DC表面的共刺激分子CD80和CD86的表达,ELISA检测DC培养上清中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-6、IL-12p40、IL-12p70、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测DC凋亡,Phos-flow技术检测核因子κB P65(NF-κB P65)磷酸化水平,实时定量PCR检测基因芯片变化差异明显基因的mRNA水平,DC经OVA323-329多肽处理后与和CD4+T细胞共培养,流式细胞术检测CD4+T细胞的增殖.结果 利用CD11c磁珠分离,可获得纯度为93％的DC,LPS可以上调DC表面CD80和CD86的表达,增强DC介导的CD4+T细胞的增殖.并且LPS能促进促炎细胞因子IL-12p40、TNF-α和IL-6的分泌,同时通过NF-κB通路抑制DC的凋亡.结论 LPS通过调节DC的存活和细胞因子的产生促进DC介导的CD4+T细胞的增殖.
作者：陈松；卢利莎；王伟强；薛婷；余娟；孙志娜；赵春晓；廖芳 刊期： 2016年第09期
转化生长因子β(TGF-β)是一种多功能的细胞因子,可以影响细胞的生长、分化和凋亡等,其中TGF-β对于CD4+T细胞分化的调节作用尤为重要.尽管多种细胞都可产生TGF-β,但它们主要以无活性的前体形式存在,必须被激活以后才能发挥生物学作用.因此,通过调节TGF-β的活化,可以控制TGF-β的作用.本文主要讨论TGF-β的存在形式、信号转导通路以及在整合素家族调控下的活化机制等.重点讨论TGF-β对CD4+T细胞分化的调节作用,以及这种调节作用与免疫相关疾病发生发展的关系.
作者：程苗苗；赵雅楠；刘雪艳；李雅林 刊期： 2016年第09期
目的 探讨抑制dachshund同源物1(DACH1)的表达对Capan-1胰腺癌细胞周期、凋亡、迁移及侵袭的影响.方法 设计合成针对人DACH1基因的4条小干扰RNA (siRNA),退火形成双链短发夹RNA(shRNA),插入pGenesil-1载体中,构建成重组质粒,进行酶切及测序鉴定,通过脂质体介导转染入Capan-1细胞,利用荧光显微镜、反转录PCR和Western blot法检测其转染表达效率.藻红蛋白标记的膜联蛋白Ⅴ和7-氨基放线菌素D(annexin Ⅴ-PE/7AAD)双标记结合流式细胞术检测Capan-1细胞凋亡和流式细胞术检测细胞周期,TranswellTM侵袭、迁移实验()测Capan-1细胞侵袭迁移能力.结果 成功构建并筛选出干扰质粒pshRNA-DACH1,将其转染Capan-1胰腺癌细胞后,成功下调Capan-1细胞DACH1水平,同时细胞凋亡明显增加,而对细胞周期无明显影响.下调DACH1表达后细胞侵袭和迁移能力均降低.结论 敲低DACH1基因表达能显著促进胰腺癌细胞Capan-1凋亡,抑制其侵袭及迁移.
作者：卜小娜；王川；姜政 刊期： 2016年第09期
目的 通过构建沉默犬转铁蛋白受体(TfR)基因慢病毒载体并感染Walter Reed犬(WRD)细胞,建立稳定感染沉默犬TfR基因的细胞系.方法 构建2条针对犬TfR基因的特异性短发夹RNA(shRNA),用慢病毒载体转染HEK293T细胞,包装、收集病毒并测定其滴度.用包装好的慢病毒感染WRD细胞,用实时荧光定量PCR和Western blot法检测TfR的mRNA和蛋白的表达水平以评价干扰效率,筛选沉默效果较好的靶点,并建立稳定沉默TfR基因的WRD/TfR-细胞系.结果 成功构建出TfR小于涉RNA慢病毒载体,成功包装2种不同靶点的沉默TfR基因的RNA干扰慢病毒,测定其病毒滴度均达到1×108转导单位(TU)/mL.选用沉默效果较好的pGMLV-TfR A2载体,建立TfR小干涉RNA慢病毒载体稳定感染的WRD/TfR-细胞系.结论 成功构建TfR小于涉RNA慢病毒载体并建立了稳定感染WRD/TfR-细胞系.
作者：白鲁根；李芳；张薇；闫琰；朱燕妮；孙玉宁 刊期： 2016年第09期
目的 分析CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)联合抗CD40抗体刺激后的调节性B细胞(Breg)对其免疫调节功能的影响.方法 用流式细胞分选仪分选小鼠脾脏CD5+ CD1dhigh Breg与CD5-CD1dlowB细胞亚群,CpG-ODN联合抗CD40抗体激活24h,再与纯化的CD4+T细胞共培养,流式细胞术检测活化后的Breg及对照CD5-CD1dlowB细胞亚群白细胞介素10(IL-10)的表达,以及共培养抗CD3抗体联合抗CD28抗体激活的CD4+T细胞的增殖与γ干扰素(IFN-γ)的水平.结果 CpG-ODN联合抗CD40抗体激活的CD5+CD1dhighBreg亚群与CD4+T细胞共培养时能明显抑制活化的CD4+T细胞的增殖,同时IFN-γ的水平降低;而CpG-ODN联合抗CD40抗体刺激后的对照B细胞亚群则不能抑制CD4+T细胞的增殖与IFN-γ分泌.CD5+ CD1dhighBreg亚群在CpG-ODN联合抗CD40抗体刺激24h,IL-10的表达水平明显高于CD5-CD1dlowB细胞亚群.结论 体外CpG-ODN联合抗CD40抗体刺激后的CD5+ CD1dhighBreg亚群通过分泌IL-10抑制CD4+T细胞的活化.
作者：王铿；陶磊；苏剑冰；张悦阳；邹斌华；王祎媛；李晓娟 刊期： 2016年第09期
目的 构建小鼠抗B7-H4胞外区核糖体展示单链抗体(scFv)库,并筛选出特异性高的抗体.方法 从A549细胞的cDNA中扩增B7-H4胞外区基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)中表达,获得B7-H4胞外区重组蛋白后纯化并免疫BALB/c小鼠.从免疫小鼠脾脏中提取总RNA,并利用反转录PCR、重叠延伸PCR(SOE-PCR)等技术扩增出重链可变区(VH)、轻链可变区(Vκ)、VH接头(VH-linker)序列和Vκ接头(Vκ-linker)序列,得到重轻链可变区基因的连接产物VH/Vκ.VH/Vκ与pUM19-T载体连接并转化至E.coli DH5α感受态菌株中,利用菌落PCR技术鉴定并测序.使用TNT(R) T7 Quick for PCR DNA试剂盒对构建出的抗体库进行体外翻译与筛选,采用Western blot法和间接ELISA对得到的抗体进行特异性鉴定.结果 经生物公司测序分析,得到序列正确的重链可变区(VH)、轻链可变区(Vκ)及二者连接产物(VH/Vκ),大小分别为439 bp、680 bp及1098 bp.经特异性实验分析,从得到的抗体库中筛选出的抗体与B7-H4具有高特异性结合能力.结论 成功构建出鼠抗B7-H4胞外区核糖体展示scFv库,并筛选出与B7-H4胞外区重组蛋白高特异性结合的目标scFv.
作者：邵峦峦；徐超超；纪洪帅；毛伟平；王盈盈；刘小绪；朱岩岩 刊期： 2016年第09期
目的 原核质粒表达耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)细胞膜20肽重组蛋白SA0587.方法 构建pET28a-SA0587-GFP重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中;挑取单菌落培养活化后诱导表达目的蛋白SA0587;SDS-PAGE及Western blot法鉴定SA0587蛋白.结果 利用基因工程技术成功构建重组质粒pET28a-SA0587-GFP,转染大肠杆菌后,成功表达出目的蛋白SA0587.结论 成功在大肠杆菌表达MRSA细胞膜20肽重组蛋白SA0587.
作者：李振；崔凡；李良怿；徐元宏 刊期： 2016年第09期
目的 观察右美托咪定对兔单肺通气期间肺组织损伤及Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)、细胞间黏附分子1(ICAM-1) mRNA表达的影响.方法 30只新西兰白兔随机分为3组:双肺通气组(T组)、单肺通气组(O组)、右美托咪定联合单肺通气组(D-O组),每组10只.T组行双肺通气3.5h,O组、D-O组于双肺通气30 min后行右单肺通气3h.D-O组于气管切开前静脉泵注右美托咪定1μg/kg(10 min泵注完毕),随后以1μg/(kg·h)的速度持续泵注;T组、O组则持续泵注等容量的生理盐水.各组于实验结束后处死动物,取下左侧肺组织,进行肺组织湿/干(W/D)质量比测量;采用HE染色,光镜下观察双侧肺组织病理学改变;并采用实时定量PCR法检测左侧肺组织TLR4、NF-κB p65、ICAM-1 mRNA的表达.结果 与T组比较,O组和D-O组左肺W/D比均显著增加;与O组比较,D-O组左肺W/D比显著降低.与T组比较,O组、D-O组肺组织病理学损伤程度均明显加重,但D-O组肺损伤程度明显较O组减轻.与T组比较,O组肺组织中TLR4、NF-κB p65、ICAM-1 mRNA的表达均显著升高,而D-O组肺组织中TLR4、NF-κB p65、ICAM-1 mRNA表达则显著低于O组.结论 右美托咪定通过抑制TLR4、NF-κB p65 mRNA的水平,减轻炎症和兔单肺通气所致的肺组织损伤.
作者：卞清明；顾连兵；许仄平；李彭依；钱燕宁；朱东亚 刊期： 2016年第09期
目的 检测儿童癫痫患者外周T淋巴细胞活化状态以及细胞因子水平变化.方法 选取20名儿童癫痫患者和19名健康对照儿童,采集外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC),用细胞膜表面标记抗体流式细胞术检测T淋巴细胞表面共刺激分子CD69、CD25和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)的表达,用细胞内因子染色结合流式细胞术检测T细胞细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-17A的表达,利用细胞内因子染色结合流式细胞术检测调节性T淋巴细胞(Treg)表达IL-10的情况.结果 与对照组相比,儿童癫痫患者外周血中T淋巴细胞表面高表达共刺激分子CD69、CD25和CTLA4,活化的CD4+T细胞高表达IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-17A.在儿童癫痫患者高表达IL-10的Treg数目增加.结论 儿童癫痫患者外周T淋巴细胞活化并产生细胞因子.
作者：杨洁；虎崇康；江逊 刊期： 2016年第09期
目的 研究人tRNA甲基转移酶9样蛋白KIAA1456的高表达对HO8910PM细胞增殖及细胞周期的影响.方法 利用PCR扩增KIAA1456编码区片段,克隆插入载体Ubi-MCS-EGFP-IRES-puromycin中,构建Ubi-KIAA1456-EGFP-puromycin (LV-KIAA1456)慢病毒表达载体;将慢病毒表达载体包装生成慢病毒颗粒并感染HO8910PM细胞,72 h后观察绿色荧光蛋白(GFP)在HO8910PM卵巢癌细胞中的表达分布情况;反转录PCR检测HO8910PM细胞中KIAA1456 mRNA水平,Western blot法检测HO8910PM细胞KIAA1456蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期.结果 成功构建重组慢病毒表达载体LV-KIAA1456,慢病毒颗粒感染HO8910PM细胞后,细胞中KIAA1456的mRNA和蛋白均高表达.过表达KIAA1456的HO8910PM细胞增殖能力明显抑制、G1期细胞明显增加.结论 过表达KIAA1456显著抑制HO8910PM卵巢癌细胞增殖,细胞周期阻滞于G1期.
作者：陈怀梅；王佳；张应凤；高燕洪 刊期： 2016年第09期
目的 研究外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(exJSRV Env)对NIH3T3小鼠成纤维细胞增殖的影响.方法 构建含完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exISR V-env)的重组质粒pcDN A4/myc-His/ exJSR V-env,并鉴定其正确性.采用脂质体转染技术pcDN A4/myc-His/ exJSR V-env瞬时转染NIH3T3细胞,利用反转录PCR和Western blot法检测Env的表达,利用CCK-8法和平板克隆形成实验检测Env表达对NIH3T3细胞增殖的影响.结果 成功构建了含exJSRV-env的重组真核表达质粒pcDNA4/myc-His/ exJSRV-env;以重组质粒瞬时转染NIH3T3细胞,检测到JSRV Env蛋白的表达,CCK-8法和平板克隆形成实验结果表明转染pcDN A4/myc-His/ exJSR V-env的细胞增殖速度显著高于对照组(空白及阴性)细胞.结论 NIH3T3细胞表达的JSRV Env蛋白可促进NIH3T3细胞的增殖.
作者：杜方原；陈大勇；张宇飞；孙晓林；郭文庆；刘淑英 刊期： 2016年第09期
目的 研究Rab7在结核分枝杆菌毒力因子分泌性酸性磷酸酶(SapM)诱导的自噬体-溶酶体融合阻断中的作用.方法 采用Rab7小干扰RNA(siRab7)转染Raw264.7细胞,Western blot法检测P62蛋白水平.mCherry-SapM转染Raw264.7细胞后免疫荧光检测SapM与Rab7共定位情况,免疫共沉淀分析SapM与Rab7的关系.用3种SapM的突变体SapM △ARCA,SapM△FRED和SapM △CT转染Raw264.7细胞,分析SapM的不同突变体与Rab7的关系.结果 siRab7处理后,细胞P62水平显著增高;免疫组织化学染色结果显示SapM与Rab7在胞内共定位;免疫共沉淀分析显示SapM与Rab7可相互沉淀;3种不同突变形式的SapM中,只有SapM△CT不能与Rab7相互作用.结论 SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM与Rab7的相互作用.
作者：胡东；王婉；赵润鹏；徐雪维；邢应如；倪升发；徐从景；铁保贤；张荣波 刊期： 2016年第09期
目的 探讨B7家族分子B7-H6在脑胶质瘤干细胞样细胞(GSLC)中的表达及其意义.方法 使用亚克隆的方法并利用GSLC在体外形成神经细胞球的特性,从U87细胞株中筛选得到脑GSLC;通过实时定量PCR和流式细胞术检测干细胞标志分子c-myc、性别决定区基因Y盒2(Sox2)、CD133、神经上皮干细胞蛋白(nestin)、CXC趋化因子受体4(CXC R4)的表达;通过化疗药物多柔比星、顺铂、卡铂杀伤鉴定其是否具有耐药特性;通过实时定量PCR及流式细胞术获得脑GSLC中B7家族的表达;采用小干涉RNA(siRNA)干扰下调B7-H6表达,CCK-8法检测细胞增殖的变化.结果 使用亚克隆方法分离获得的脑GSLC能在体外形成神经细胞球,上调表达多种干细胞标志分子CD133、nestin、CXCR4,具有显著的耐药特性.B7家族分子B7-H1、B7-H3、B7-H4和B7-H6在得到脑GSLC中均表达,与原代U87细胞相比,细胞膜上的B7-H6的表达发生显著上调,使用siRNA干扰B7-H6表达后,细胞的增殖受到抑制,且c-myc基因的表达也下调.结论 U87细胞来源的脑GSLCB7-H6表达上调,并且与GSLC生物学特性相关.
作者：陈翰卿；时正朋；高兵；傅丰庆；张学光 刊期： 2016年第09期
Toll样受体7(TLR7)是一种广泛存在于机体免疫细胞内体膜上的模式识别受体.TLR7在识别结合病毒的单链RNA或人工合成的小分子嘌呤类化合物后,会招募特异接头蛋白,激活一系列信号级联反应,启动高水平的系统性适应性免疫应答,杀伤感染病毒的细胞,从而彻底清除病毒.临床上已经开始利用TLR7激动剂治疗慢性病毒性感染疾病,TLR7激动剂作为免疫佐剂在机体识别和杀伤肿瘤过程中的作用也在逐渐得到重视.
作者：王晓月；赵鹏翔；Adzavon Yao Mawulikplimi；马雪梅 刊期： 2016年第09期
目的 探讨杂合式肾脏替代治疗对急性肾功能衰竭伴全身炎症反应综合征高龄患者的临床疗效.方法 回顾性选取由重症肺炎、心脏疾病及脑血管意外引起的全身炎症反应综合征合并急性肾功能衰竭高龄患者38例,分为杂合式连续性静脉-静脉血液透析滤过联合血浆置换(CVVHDF-PE)组(n=20)及对照组(同时期患者或家属不愿接受血液净化治疗者,n=18),比较2种治疗方式对患者急性生理与慢性健康(APACHEⅡ)评分、血清肌酐(Scr)、白细胞介素10(IL-10)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,血气分析指标,CD4+T细胞、CD8+T细胞数量,CD4+/CD8+T细胞比率及患者存活率的影响.结果 与对照组相比,CVVHDF-PE组治疗后APACHEⅡ评分、Scr、IL-10、IL-6、TNF-α水平明显下降;pH值升高、pCO2升高、HCO3-升高;CVVHDF-PE组治疗后CD4+T细胞、CD4+/CD8+T细胞比例较前显著升高,CD8+T细胞较治疗前明显下降,对照组的上述免疫功能指标治疗前后无明显差异;CVVHDF-PE组存活率明显高于对照组.结论 重症肺炎、心脏疾病及脑血管意外引起的全身炎症反应综合征合并急性肾功能衰竭时,在常规治疗基础上,尽早应用杂合式肾脏替代治疗能有效清除体内多种毒素及炎症介质,纠正酸碱平衡紊乱,改善免疫抑制状态及临床症状,提高对高龄患者的救治成功率.
作者：谢先辉；万嘉豫；田茂露；佟小雅；冉燕；胡英；左丽；查艳 刊期： 2016年第09期
目的 研究Th17细胞和调节性T细胞(Treg)及相关细胞因子在维吾尔族自身免疫性肝炎(AIH)患者外周血中的表达水平,探讨Th17细胞和Treg在AIH患者发病中的作用.方法 应用流式细胞术检测AIH患者及正常对照者外周血Th17细胞和Treg的频数,ELISA检测血清中白细胞介素17(IL-17)和转化生长因子β(TGF-β)水平.结果 与正常对照组相比,AIH患者外周血Th17细胞的频数明显增加、Treg频数明显降低,Th17细胞/Treg的比率明显增加;AIH患者外周血IL-17水平显著升高、而TGF-β明显降低,IL-17/TGF-β比值明显增加.结论 AIH患者外周血中Th17细胞/Treg及其相关细胞因子的比值增加.
作者：胡金伟；张峰波；张丽；丁剑冰 刊期： 2016年第09期
目的 构建Drosha基因稳定沉默的胃癌细胞株并探讨其对表阿霉素敏感性的影响.方法 将靶向干扰Drosha的序列重组到慢病毒载体并感染MGC-803细胞;采用实时定量PCR检测Drosha mRNA水平、Western blot法检测Drosha蛋白水平;MTT法检测野生型MGC-803细胞对表阿霉素的半数抑制剂量(IC50);流式细胞术检测用IC50的表阿霉素处理后各组细胞的凋亡率,Westem blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白水平.结果 成功构建稳定Drosha基因沉默的MGC-803细胞株;下调Drosha后,经0.5 mg/L(IC50)表阿霉素处理,MGC-803细胞凋亡率明显增加,MGC-803细胞caspase-3、caspase-9、Bax表达上调,Bcl-2表达降低.结论 沉默细胞中Drosha表达能提高胃癌细胞对表阿霉素的敏感性.
作者：徐丽云；陈燕林；文思阳；杜燕娥；唐曦；柳满然 刊期： 2016年第09期
目的 观察snail因子在海人酸(KA)诱导癫痫持续状态(SE)小鼠皮层中的表达和分布,探讨snail在癫痫持续发作状态中的作用.方法 成年雄性C57/BL6小鼠64只,随机分成对照组和SE组,每组32只.对照组采用腹腔注射生理盐水,SE组采用KA腹腔注射诱发小鼠癫痫急性发作,并且各组分别在发作终止后的3、8、24、72 h进行取材.反转录PCR检测snail的mRNA表达水平,Western blot法检测snail的蛋白表达水平,免疫组织化学检测snail的形态分布,免疫荧光技术检测snail的定位.结果 与对照组相比,SE组snail mRNA和蛋白的表达水平明显上升,24 h达到高峰;免疫组织化学技术显示,在对照组,snail表达呈弱阳性.在SE组,snail在不同皮层神经元以及胶质状细胞都有广泛分布;免疫荧光技术进一步证明snail在神经元和星形胶质细胞均有表达.结论 Snail在KA诱导SE小鼠皮层神经元和星形胶质细胞内都有强表达,提示snail可能与癫痫的发作有一定的联系.
作者：王静；王法祥；杨云鹏；吴海琴 刊期： 2016年第09期
目的 探讨巨噬细胞在神经干细胞(NSC)体内和体外迁移中的作用.方法 体外分离、培养携带绿色荧光蛋白(GFP)小鼠的NSC,免疫荧光细胞化学染色检测神经上皮干细胞蛋白(nestin)表达;制作小鼠脊髓损伤模型,利用实时定量PCR检测组织巨噬细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA水平,在损伤区两侧局部微量注射携带GFP的NSC,于1周后观察NSC向损伤区迁移情况;体外培养巨噬细胞,用TranswellTM迁移实验检测其对NSC迁移的影响,用ELISA检测MCP-1的含量.结果 获得高表达nestin的NSC;与对照组相比,脊髓损伤组脊髓MCP-1 mRNA水平显著升高,注射入脊髓的NSC自注射区向损伤区迁移,并到达高表达F4/80区域.巨噬细胞可显著增加NSC体外迁移的数量,并分泌大量MCP-1.结论 巨噬细胞诱导NSC向脊髓损伤区迁移,其可能机制是通过MCP-1起作用.
作者：程志坚；祝文；李浩鹏；贺西京 刊期： 2016年第09期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
