学术投稿

肝缺血再灌注细胞凋亡现象及Fas蛋白、PCNA 、p53、bcl-2 mRNA表达

卢绮萍;李德忠;王伟;吴在德;田磊

关键词:再灌流损伤, 细胞凋亡, 基因表达
摘要:目的探讨肝缺血再灌注肝细胞凋亡发生的时空分布、基因表达特点及意义.方法在观察SD大鼠(n=40)肝缺血0,30,45,60 min再灌注3,6,24 h存活率及病理形态基础上,重点观察大鼠(n=100)全肝血流阻断30 min再灌注0,0.5,1,3,6,12,24,48,72,96 h凋亡细胞分布(原位末端标记术,TUNEL),G0~G1期细胞、凋亡细胞、增殖细胞指数分布(流式细胞术),肝细胞显微及超微结构(光镜、电镜技术),Fas蛋白、PCNA蛋白(免疫组化)及p53、bcl-2基因mRNA表达(原位杂交).结果缺血30 min组多见细胞凋亡,细胞应答反应主要为三期:①急性期:再灌注0.5 h Fas蛋白首先在血管周围高表达;②亚急期(3~24 h):TUNEL阳性细胞在血管周围高分布,并向周围扩展;病理形态可见严重变性、细胞皱缩、细胞增殖三种变化;G1期细胞数大量减少,凋亡峰逐渐升高, 12 h后出现增殖峰,相关基因表达增强;③恢复早期(24~96 h): G1期细胞指数回升,凋亡峰和增殖峰持续并缓慢下降;相关基因表达陆续减弱.结论肝缺血30 min再灌注期机体可能通过下述基因调控途径影响细胞损伤应答反应:① Fas死亡基因与bcl-2存活基因的双重调控;②细胞凋亡与增殖双重调控;③经p53基因实现的细胞周期调控.
中华肝胆外科杂志相关文献
  • 肝细胞癌病人血清可溶性白细胞介素2受体水平变化及其临床意义

    目的研究肝细胞肝癌(HCC)病人血清可溶性白细胞介素2受体(SIL-2R)水平的变化情况及其临床意义.方法用酶联免疫吸附试验方法(ELISA)检测60例HCC病人、30例良性肝胆疾病病人以及20例健康对照者血清SIL-2R水平,结合临床资料分析其临床意义.结果 HCC组血清SIL-2R水平显著性高于其他两组(P<0.01),良性肝胆疾病组与健康对照组血清SIL-2R水平无显著性差异(P>0.05).HCC组中血清SIL-2R水平与疾病分期有较好的相关性,随HCC分期升高,SIL-2R水平增高.血清SIL-2R水平与AFP水平无相关性(r=0.197,P>0.05).血清SIL-2R水平可作为HCC早期诊断的良好指标,以100 pmol/L为切割值,其灵敏度为81.7%,特异度为100%,诊断符合率90%.血清SIL-2R水平变化受手术因素影响.术后SIL-2R水平先升高后降低,降低程度与肿瘤切除与否有关.术后肿瘤复发病人血清SIL-2R水平升高.结论血清SIL-2R水平可作为HCC病人早期诊断、病情判断、复发监测的重要指标.

    作者:何松青;陈孝平 刊期: 2001年第04期

  • 亲体部分肝移植二例

    在总结我院首次施行活体供肝源位部分肝脏移植的基础上,2001年1月6日2月18日我院再次开展2例亲体原位部分肝移植

    作者:王学浩;张峰;李相成;钱建民;孔连宝;黄祖瑚;徐鑫荣;傅诚章;刘存明;陈吉庆;何光;陆化;胡淑芳;林红军;李军;张浩;孙倍成 刊期: 2001年第04期

  • 组合性人工肝的临床研究现状

    因感染、药物或多器官功能衰竭等所致的肝功能衰竭,目前的发病率、死亡率仍然很高.其治疗仍局限于内科的护肝支持治疗,甚至原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT).基于这些治疗的局限性,近年来随着细胞学技术、生物工程学技术的发展,组合性人工肝(hybrid artificial liver)或称肝细胞支持系统(hepatocyte liver assist systems,LAS)的建立和临床试验成为研究热点,并已可望成为临时和长期肝支持治疗的方法.目前,由哺乳动物肝细胞培养系统与解毒装置如活性炭吸附柱共同构建的LAS已可以提供肝脏的解毒、分泌、合成与转化等功能,并且在肝功能衰竭病人中至少有3例临床试验已取得明显效果[1~3].美国食品与药品管理局(FDA)已批准一种LAS进行多中心临床试验[4].LAS的研究已取得巨大进展,当然仍有一些问题未能解决.本文将对其现状及临床应用作一综述.

    作者:蒋泽生;杨继震;高毅 刊期: 2001年第04期

  • 原发性肝癌误诊为布-加氏综合征一例

    患者,男性,37岁,因进行性纳差、腹胀2个月为主诉入院.查体发现全身皮肤及粘膜无黄染,未见肝掌及蜘蛛痣,表浅淋巴结未触及肿大.腹部检查见腹壁静脉明显曲张,肝脏及脾脏未触及肿大,叩诊有移动性浊音.实验室检查示HBsAg(+),AFP<400 μg/L,肝功能检查示:GOT 108 U,GPT 151 U,ALP 96 U,TB 23 μmol/L,DB 11 μmol/L,ALB 39 g/L.B超及CT检查示肝脏大小正常,未发现占位病变,腹腔内有中等量腹水,脾脏增大.在内科按肝硬化保守治疗1个月,腹水无明显减少,腹壁静脉曲张逐渐加重.血管造影检查时发

    作者:王锦波;王雁 刊期: 2001年第04期

  • 原代猪肝细胞培养体系及培养模式的初步探讨

    目的探索一高密度、高效率的原代猪肝细胞培养方法,为生物人工肝的生物材料提供一种有效的培养模式.方法采用改良Seglen二步胶原酶灌注法分离肝细胞,分别将5×106的肝细胞加入胎牛血清、猪门静脉血清的培养体系中进行方瓶静止培养及聚球培养.结果肝细胞在接种后呈明显的Cytodex-3聚集趋势.门静脉血清培养体系中肝细胞的Albumin、Urea合成能力明显高于胎牛血清组.在培养后的前3周门静脉血清培养体系中聚球细胞模式优于微载体静止培养模式.结论与胎牛血清培养体系相比,猪门静脉血清培养体系更适合原代猪肝细胞高密度培养.聚球培养是一种较为理想的原代猪肝细胞培养模式.

    作者:陈柯;高毅;杨继震 刊期: 2001年第04期

  • 逐步回归探讨影响肝癌分化、增殖、转移的有关因素

    目的探讨与原发性肝细胞肝癌(PHC)分化、增殖、转移的有关因素.方法采用逐步有序累积比数logistic回归(后退法)分析p53、N-ras、nm23H1、PCNA蛋白表达强度对癌分化、增殖、转移的影响,进行多因素筛选,建立回归方程.结果在F值水平为P≤0.1时,建立3个分别与癌分化、增殖、转移有关的回归方程,(1)logit pj=-αj+1.0436X4-0.7920X3(P<0.05);(2)logit pj=-αj-1.3595X3(P≤0.01);(3)logit pj=-αj-0.9124X3+1.4548X4(P<0.05).由方程中可见到影响PHC分化、增殖、转移的主要因素.PCNA表达强度与癌分级呈正相关,与癌转移呈正相关;nm23H1表达与癌分级、细胞增殖、癌转移均呈负相关.结论多因素分析能使我们更客观、全面地评价影响PHC分化、增殖、转移的有关因素.

    作者:陈莉;陈玉泉;王桂兰;施裕新 刊期: 2001年第04期

  • 副肝囊肿一例

    患者,女,23岁,因上腹部包块2个月住院,近一周来感胀痛,无畏寒发热.查体:T:37.8℃,BP:120/90 mmHg,皮肤粘膜、巩膜无黄染,无腹壁静脉曲张,上腹部局部隆起,无红肿,腹肌软,于剑突下偏右方可触及约10 cm×8 cm×10 cm包块,上缘边界不清,下缘表面光滑,质地中等,轻压痛,移动差,与皮肤无粘连,肝脾未触及,无移动性浊音,肠鸣音正常.实验室检查无异常.B超检查:肝脏前缘包块,包膜光滑完整,内呈不均质液性暗区.CT检查:上腹部包块边缘光滑,分界清楚,内呈不均质低密度球形阴影,CT值10 Hu,增强扫描未见强化表现,左肝轻度受压变形.电子胃镜检查:胃体、胃窦、十二指肠球部粘膜光滑完整,胃蠕动正常.术前诊断不

    作者:黄荣柏 刊期: 2001年第04期

  • 术前介入动脉化疗对胰腺癌细胞凋亡和细胞增殖的影响

    目的检测术前选择性介入动脉化疗对胰腺癌细胞凋亡和细胞增殖的作用,探讨区域性化疗抑制胰腺癌生长的分子机制.方法采用原位末端标记法(ISEL)对32例术前行介入化疗和未化疗的胰腺癌患者的病理切片进行细胞凋亡指数和增殖指数的检测,同时测定细胞凋亡调控基因bcl-2和bax的表达水平.结果 (1)术前介入化疗组胰腺癌细胞凋亡率比未介入化疗组明显增高,两组的细胞凋亡率分别为(46.89±26.46)和(5.67±2.43)(P<0.01);而细胞增殖指数(PCNA)在术前介入化疗组与非化疗组之间无显著差异(P>0.05).(2)肿瘤细胞凋亡率与组织类型有关,高分化腺癌中的细胞凋亡率比低分化腺癌高(P<0.05).(3)术前介入化疗组bcl-2表达率低于未介入化疗组,bax表达率高于未介入化疗组(P<0.05).结论术前选择性的动脉介入化疗能够诱导胰腺细胞凋亡,诱导细胞凋亡是抑制胰腺癌细胞的生长重要途径.

    作者:陈汝福;衣龙海;张元;于竹成;邹声泉 刊期: 2001年第04期

  • 肝脏肿瘤的低温冷冻切除术

    实验研究表明,低温冷冻可导致肝脏细胞组织坏死.其机制大致有二:一是冷冻导致肝细胞的某些结构发生改变,如细胞内的冰晶形成、在解冻过程中的细胞膜脂蛋白复合物变性和细胞质膜内外渗透压的改变等使肝细胞碎裂坏死;二是冷冻使肝组织的营养障碍包括局部微血栓形成,组织缺血缺氧,微循环衰竭,肝脏微血管/肝窦的不可逆性灌注停止,不可避免地导致冷冻组织发生营养障碍性坏死.近年来,临床上逐步发展和完善了肝脏肿瘤的低温冷冻切除术,取得了令人满意的效果.现将该手术的方法介绍如下.

    作者:陈义发;陈孝平;裘法祖 刊期: 2001年第04期

  • 原发性肝细胞癌β-catenin基因突变的研究

    β-连环蛋白(β-catenin)不但在钙粘蛋白(cadherin)介导的细胞粘附,而且在细胞发育、分化、细胞骨架维持上起重要作用.β-catenin基因突变所致β-catenin蛋白异常与结肠癌、黑色素瘤等发生关系密切,被认为是候选的癌基因之一[1].有关β-catenin基因在肝癌中突变情况国外报道极少,国内尚未见报道.本文研究了上海医科大学肝癌研究所手术切除的34例肝癌标本中β-catenin基因突变,现报告如下.

    作者:崔健;周信达;刘银坤;汤钊猷 刊期: 2001年第04期

  • 门脉置管四氯化碳注射法制备狗肝硬化模型

    在肝硬化门脉高压症的研究中,动物模型种类繁多.常使用的致硬化药物为四氯化碳(CCl4).常见的腹腔用药途径可造成腹腔严重粘连,不利于进一步手术学研究.本实验采用血管内应用CCl4的方法,手术简单,肝脏针对性强,硬化形成较快,腹腔无粘连,非常适于联合术式及肝移植研究.

    作者:曹罡;黎一鸣 刊期: 2001年第04期

  • 大鼠热缺血肝脏移植前活力的无损伤性评定

    目的研究不同程度热缺血的离体大鼠肝脏加氧低温灌流时ATP的再生能力,判断供肝活力.方法本实验采用18只SD大鼠,按不同热缺血时间随机分成三组:A组,0min;B组,30min;C组,60min.每组6只.冷保存2~2.5h,采用31P-NMR测定加氧低温灌流下的离体肝脏频谱.结果灌流30min时A、B、C三组大鼠肝脏ATP(β-NTP/MDP比值,x±s)平均峰值分别为0.423±0.059、0.387±0.065、0.138±0.156,A、B两组差异无显著性(P>0.05),A、B两组与C组比较差异有极显著性(P<0.01),C组有三例大鼠肝脏测不到ATP峰值,说明已丧失活力。各组灌流前后PME/Pi比值的改变与ATP改变存在一定程度的相似性。结论 测定加氧低温灌流离体大鼠肝脏ATP再生能力能反映热缺血肝脏损伤程度,该方法在热缺血供肝活力判断上具有一定参考价值。

    作者:蔡守旺;顾万清;冯玉泉;田建广;陈金明 刊期: 2001年第04期

  • 肝脏结核样罕见肿瘤的诊治体会

    一些罕见的肝脏病变与肝结核表现非常相似,但并非结核而是肿瘤,若不注意,极易在临床中造成误诊误治.我们在1995年3月和1997年10月分别收治2例病人,在分子病理学检查确诊之前都曾多次做组织病理学检查误诊为肝结核.现结合文献资料将我们的诊治体会报告如下.临床资料:例1:患者女,41岁,3年前因肝占位病变在外院手术治疗,术中病理诊断为炎性病变而行无水酒精注射、微波固化、肝动脉栓塞化疗等治疗.术后病理报告为肝结核,给予正规抗结核治疗15个月,肿块继续增大,期间多次肝穿刺活检未发现癌细胞,拟诊为肝非特异性炎症性肉芽肿而先后7次行无水酒精注射治疗,但肿物仍继续增大,且近3个月来出现胸闷、气促、咳嗽等症状.患者既往无结核病史.查体:巩膜无黄染,肝于肋下6.0 cm.肝功能轻度异常,AFP、CEA均在正常范围,血沉加速.X线胸片右侧胸腔积液,未见结核病灶.胸水多次检查未找到抗酸

    作者:周兆锋;彭力辉;廖彩仙 刊期: 2001年第04期

  • 满足胆囊结石诊断漏诊胃癌八例

    近年来,由于B超等检查的普及应用,胆囊结石诊断率较前些年明显提高.但因满足于胆囊结石诊断,而漏诊其它疾病的情况时有发生,我科自1989年1月至1998年1月收治了因满足胆囊结石诊断而漏诊的胃癌8例,现分析如下.临床资料:本组8例,其中男3例,女5例,年龄38~65岁.漏诊时间短1个月,长12个月.本组病例均以右上腹或上腹疼痛为主要症状,其中6例有近期腹痛渐加重,抗炎治疗效果不佳的情况.伴有纳差、消瘦、反酸、呕吐者4例,贫血4例,黑便3例,上腹(或右上腹)压痛6例.B超提示:胆囊结石、慢性胆囊炎5例,胆囊结石、慢性胆囊炎急性发作2例,胆囊结石、萎缩性胆囊炎1例.大便隐血试验检查3例,阳性2例.本组胃癌诊断均经病理证实, 术

    作者:郎庆华;吕建一 刊期: 2001年第04期

  • 肝血管平滑肌脂肪瘤11例临床病理分析

    目的研究肝血管平滑肌脂肪瘤(HAML)的临床病理特点.方法收集临床相关资料,采用常规HE切片、特殊染色、免疫组化、电镜等方法对本院8例及会诊3例HAML进行研究.结果 11例HAML病人影像学及症状、体征均有其特征,病理形态学上均显示有血管周上皮样细胞,血管分厚壁及薄壁两种,上皮样细胞分为4种形态,形态与免疫表型有一定相关关系,PAS部分上皮样细胞胞浆阳性且抗淀粉酶消化,电镜下可见类似前黑色素小体的特殊晶体样结构及密体.结论 HAML是一种好发于中青年女性的良性肿瘤,肌动蛋白、HMB45阳性为HAML的特点,HAML因其特殊的光镜及电镜下形态、免疫组化特点及其临床特征而归入血管周上皮样细胞相关肿瘤.

    作者:钟定荣;申明识;纪小龙 刊期: 2001年第04期

  • 缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤中MPO、TNF-α、ET、NO的影响

    目的探讨缺血预处理(IPC)对肝脏缺血再灌注(I/R)损伤中的中性粒细胞和某些细胞因子的影响.方法采用大鼠部分肝脏原位缺血再灌注损伤模型,30只Wistar大鼠随机分成:①正常对照组,②缺血再灌注对照组,③预处理组.②、③组均在60 min再灌注完成后取血及肝组织标本,检测血清AST、ALT、LDH、NO、 ET-1 、TNF-α、及肝组织中髓过氧化酶(MPO)活性和肝组织病理改变.结果预处理组与再灌注对照组比较,肝功明显改善,NO含量升高,ET-1、TNF-α浓度和MPO活性明显降低,两组比较差异具有显著性.结论缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤有明显保护作用,可能与提高内源性NO水平、减轻中性粒细胞在肝脏中的渗出和聚集、抑制ET-1、TNF-α的合成有关.

    作者:吕国庆;刘秉义;丁田贵;张英 刊期: 2001年第04期

  • 肝细胞腺瘤的诊断与治疗

    肝细胞腺瘤(hepatocellular adenoma, HA )是一种肝细胞源性的良性肿瘤,临床少见.由于易同肝细胞癌混淆,在鉴别诊断方面比较困难.我科自 1991年1月至1999年4月经病理证实的HA 14例,现结合有关文献报告如下.

    作者:李美荣;叶观瑞;何友钊;李运福 刊期: 2001年第04期

  • 多电极射频治疗肝肿瘤的安全性和可靠性分析

    目的探讨多电极射频治疗原发性及继发性肝癌的安全性、可靠性.方法对67例肝肿瘤病人进行了80次多电极射频治疗,及治疗前后影像及病理观察.结果并发症率7.4%,包括结肠穿孔1例、皮肤烧伤2例、血胸2例,无一例死亡.治疗后增强CT、彩超及病理复查近90%病人病灶呈凝固性坏死表现.结论多电极射频用于治疗原发性及继发性肝癌是安全且可靠的.

    作者:马宽生;董家鸿;陈敏;黄晓兰;蔡景修 刊期: 2001年第04期

  • 钙离子超载对低温保存人肝细胞的损伤作用的研究

    目的研究分离培养的成人肝细胞在低温保存状态下(0~4℃)的钙离子代谢特点和钙离子超载的损伤作用机制.方法胶原酶消化法制备分离的成人肝细胞,钙离子荧光探针Flou-3标记, 流式细胞仪检测.结果低温保存下,细胞内游离钙迅速升高,逐渐达到稳态水平;随细胞内钙离子的升高,细胞的存活率也逐渐下降,但在含0.5 mmol/L CaCl2 的保存液组,保存效果明显好于其它两组;在含1.5 mmol/L CaCl2的保存液组,继发的钙离子超载峰值出现早,而且要高于原发的钙超载峰.结论低温保存可以引起成人肝细胞的钙超载,细胞外钙是细胞钙超载的主要来源,继发超载是缺血再灌注损伤的主要原因.

    作者:李先亮;刘永锋;王凤山;梁建;赵宁;何三光 刊期: 2001年第04期

  • 胃粘膜肝总管异位一例

    病人,男,59岁,因阵发性右上腹痛20 d,加重2 d入院.发病期间无发热、寒战、黄疸、呕血及黑便.查体:生命体征平稳,巩膜无黄染,结膜无苍白,心肺无异常:右上腹压痛,莫菲征(-),肝胆脾未触及,移动性浊音(-),肠鸣音正常.化验肝功全项正常;B超:胆囊大小106 mm×30 mm,壁厚3 mm,胆总管内径7.5 mm,于胆囊颈见8 mm×5 mm光团,后有声影,肝胰肾未见异常.择期行胆囊切除术:发现胆囊管外上3.0 mm×1.5 mm囊性肿物,壁厚0.5 mm,与肝门下肝总管连接,穿刺抽出淡黄色稀薄液体,术中化验胆红素增高,考虑为重复胆囊,于其根部结扎,切除肿物;术后病人恢复顺利;病理结果: 慢性胆

    作者:赵海平;李冠世;张秀梅;郭利萍 刊期: 2001年第04期

中华肝胆外科杂志

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