学术投稿

原代猪肝细胞培养体系及培养模式的初步探讨

陈柯;高毅;杨继震

关键词:细胞, 培养的, 动物, 实验
摘要:目的探索一高密度、高效率的原代猪肝细胞培养方法,为生物人工肝的生物材料提供一种有效的培养模式.方法采用改良Seglen二步胶原酶灌注法分离肝细胞,分别将5×106的肝细胞加入胎牛血清、猪门静脉血清的培养体系中进行方瓶静止培养及聚球培养.结果肝细胞在接种后呈明显的Cytodex-3聚集趋势.门静脉血清培养体系中肝细胞的Albumin、Urea合成能力明显高于胎牛血清组.在培养后的前3周门静脉血清培养体系中聚球细胞模式优于微载体静止培养模式.结论与胎牛血清培养体系相比,猪门静脉血清培养体系更适合原代猪肝细胞高密度培养.聚球培养是一种较为理想的原代猪肝细胞培养模式.
中华肝胆外科杂志相关文献
  • 肝内双向血流阻断与肝门血流阻断肝切除的临床比较

    目的对不同肝血流阻断法比较,探讨肝切除时肝血流阻断法合理选用.方法本文对肝内双向阻断法与肝门阻断法肝切除术病人术前病变大小,位置,术前及术后肝功能,术中出血量及术后平均出血量和引流量,术后上消化道出血及死亡等严重并发症进行比较分析.结果 68例肝切除中肝内双向阻断法28例,肝门阻断法40例,肝内双向阻断法肝切除术后转氨酶升高程度是65~560 U/L,恢复正常时间是3~8 d,胆红质恢复正常时间是4~14 d,术后Child A/B/C分级是3/8/17,术中平均出血量650 ml,术后总平均出血和引流量780 ml,术后无上消化道出血和死亡病例.肝门阻断法肝切除术后转氨酶升高程度是470~9?780 U/L,恢复正常时间是5~38 d,胆红质恢复正常时间是7~52 d,术后Child A/B/C分级中0/2/38,术中平均出血量950 ml,术后总平均出血量和引流量1?200 ml,术后上消化道出血4例,出血1例,死亡4例.结论肝切除时肝血流阻断方法的选用应用根据病变的位置,范围大小及手术类型和肝硬化等综合考虑而定.肝内双向阻断法较肝门阻断法肝切除肝损伤小,利于术后病人恢复,肝内双向阻断法更适用于肝硬变病人的肝切除.

    作者:贺修文;吴国举;韦军民;刘永生;刘庚午;王在同 刊期: 2001年第04期

  • 满足胆囊结石诊断漏诊胃癌八例

    近年来,由于B超等检查的普及应用,胆囊结石诊断率较前些年明显提高.但因满足于胆囊结石诊断,而漏诊其它疾病的情况时有发生,我科自1989年1月至1998年1月收治了因满足胆囊结石诊断而漏诊的胃癌8例,现分析如下.临床资料:本组8例,其中男3例,女5例,年龄38~65岁.漏诊时间短1个月,长12个月.本组病例均以右上腹或上腹疼痛为主要症状,其中6例有近期腹痛渐加重,抗炎治疗效果不佳的情况.伴有纳差、消瘦、反酸、呕吐者4例,贫血4例,黑便3例,上腹(或右上腹)压痛6例.B超提示:胆囊结石、慢性胆囊炎5例,胆囊结石、慢性胆囊炎急性发作2例,胆囊结石、萎缩性胆囊炎1例.大便隐血试验检查3例,阳性2例.本组胃癌诊断均经病理证实, 术

    作者:郎庆华;吕建一 刊期: 2001年第04期

  • 肝癌病人血浆皮质醇、睾酮含量和T淋巴细胞功能的相关分析

    肿瘤的发生、发展和机体内环境、免疫状态、神经内分泌调节等密切相关[1].恶性肿瘤病人细胞免疫功能明显低下.消化系统肿瘤病人常伴有下丘脑-垂体-性腺轴功能紊乱,表现为血浆睾酮水平的下降[2].本文对肝癌病人外周血T淋巴细胞丝裂原反应性和IL-2活性与血浆皮质醇和睾酮做了相关性分析,试图较全面地了解肿瘤细胞免疫功能与神经内分泌调节的关系,探讨二者对肿瘤发生发展的影响.

    作者:金虎;高丽虹;孟庆润;刘睿智;侯宇川;赵雪俭 刊期: 2001年第04期

  • 肝细胞癌病人血清可溶性白细胞介素2受体水平变化及其临床意义

    目的研究肝细胞肝癌(HCC)病人血清可溶性白细胞介素2受体(SIL-2R)水平的变化情况及其临床意义.方法用酶联免疫吸附试验方法(ELISA)检测60例HCC病人、30例良性肝胆疾病病人以及20例健康对照者血清SIL-2R水平,结合临床资料分析其临床意义.结果 HCC组血清SIL-2R水平显著性高于其他两组(P<0.01),良性肝胆疾病组与健康对照组血清SIL-2R水平无显著性差异(P>0.05).HCC组中血清SIL-2R水平与疾病分期有较好的相关性,随HCC分期升高,SIL-2R水平增高.血清SIL-2R水平与AFP水平无相关性(r=0.197,P>0.05).血清SIL-2R水平可作为HCC早期诊断的良好指标,以100 pmol/L为切割值,其灵敏度为81.7%,特异度为100%,诊断符合率90%.血清SIL-2R水平变化受手术因素影响.术后SIL-2R水平先升高后降低,降低程度与肿瘤切除与否有关.术后肿瘤复发病人血清SIL-2R水平升高.结论血清SIL-2R水平可作为HCC病人早期诊断、病情判断、复发监测的重要指标.

    作者:何松青;陈孝平 刊期: 2001年第04期

  • 大鼠热缺血肝脏移植前活力的无损伤性评定

    目的研究不同程度热缺血的离体大鼠肝脏加氧低温灌流时ATP的再生能力,判断供肝活力.方法本实验采用18只SD大鼠,按不同热缺血时间随机分成三组:A组,0min;B组,30min;C组,60min.每组6只.冷保存2~2.5h,采用31P-NMR测定加氧低温灌流下的离体肝脏频谱.结果灌流30min时A、B、C三组大鼠肝脏ATP(β-NTP/MDP比值,x±s)平均峰值分别为0.423±0.059、0.387±0.065、0.138±0.156,A、B两组差异无显著性(P>0.05),A、B两组与C组比较差异有极显著性(P<0.01),C组有三例大鼠肝脏测不到ATP峰值,说明已丧失活力。各组灌流前后PME/Pi比值的改变与ATP改变存在一定程度的相似性。结论 测定加氧低温灌流离体大鼠肝脏ATP再生能力能反映热缺血肝脏损伤程度,该方法在热缺血供肝活力判断上具有一定参考价值。

    作者:蔡守旺;顾万清;冯玉泉;田建广;陈金明 刊期: 2001年第04期

  • 胆道术后并发急性十二指肠溃疡大出血

    胆道术后并发急性十二指肠溃疡大出血(massive hemorrhage from acute duodenal ulcer,MHADU)殊属罕见,既往文献未见报道,如果诊治贻误,将导致严重后果.兹将作者近年收治的两例病人报告如下.

    作者:何生;禹正杨;宋雪松 刊期: 2001年第04期

  • 肝细胞腺瘤的诊断与治疗

    肝细胞腺瘤(hepatocellular adenoma, HA )是一种肝细胞源性的良性肿瘤,临床少见.由于易同肝细胞癌混淆,在鉴别诊断方面比较困难.我科自 1991年1月至1999年4月经病理证实的HA 14例,现结合有关文献报告如下.

    作者:李美荣;叶观瑞;何友钊;李运福 刊期: 2001年第04期

  • 肝缺血再灌注细胞凋亡现象及Fas蛋白、PCNA 、p53、bcl-2 mRNA表达

    目的探讨肝缺血再灌注肝细胞凋亡发生的时空分布、基因表达特点及意义.方法在观察SD大鼠(n=40)肝缺血0,30,45,60 min再灌注3,6,24 h存活率及病理形态基础上,重点观察大鼠(n=100)全肝血流阻断30 min再灌注0,0.5,1,3,6,12,24,48,72,96 h凋亡细胞分布(原位末端标记术,TUNEL),G0~G1期细胞、凋亡细胞、增殖细胞指数分布(流式细胞术),肝细胞显微及超微结构(光镜、电镜技术),Fas蛋白、PCNA蛋白(免疫组化)及p53、bcl-2基因mRNA表达(原位杂交).结果缺血30 min组多见细胞凋亡,细胞应答反应主要为三期:①急性期:再灌注0.5 h Fas蛋白首先在血管周围高表达;②亚急期(3~24 h):TUNEL阳性细胞在血管周围高分布,并向周围扩展;病理形态可见严重变性、细胞皱缩、细胞增殖三种变化;G1期细胞数大量减少,凋亡峰逐渐升高, 12 h后出现增殖峰,相关基因表达增强;③恢复早期(24~96 h): G1期细胞指数回升,凋亡峰和增殖峰持续并缓慢下降;相关基因表达陆续减弱.结论肝缺血30 min再灌注期机体可能通过下述基因调控途径影响细胞损伤应答反应:① Fas死亡基因与bcl-2存活基因的双重调控;②细胞凋亡与增殖双重调控;③经p53基因实现的细胞周期调控.

    作者:卢绮萍;李德忠;王伟;吴在德;田磊 刊期: 2001年第04期

  • 急性非结石性胆囊炎的外科治疗

    急性非结石性胆囊炎指病人有急性胆囊炎的临床表现和病理变化,但无胆囊结石的存在.过去以非手术治疗为主,手术历来很慎重.近几年来,本病呈上升趋势,若处理不当,胆囊坏死和穿孔率高.因此,有必要对治疗方法进行探讨.我院1996~1998年共收治胆囊良性疾病424例,发现急性胆囊炎64例,其中急性非结石性胆囊炎16例,现报告如下.一般资料:男5例,女11例.年龄35~75岁,60岁以上6例,平均年龄55岁.临床表现:本病症状和体征基本与急性结石性胆囊炎相似.B超检查胆囊明显增大,内无结石.全组病人开始先行保守治疗,其中13例在保守治疗无效后改行手术治愈,病理发现8例胆囊壁有局灶性坏死;另3例中2例保守治愈,1例未及时手术,胆囊穿孔死亡.发病原因:目前认为可能是由于胆囊管受阻造成胆汁潴留;浓缩的胆汁对胆囊壁造成化学刺激;继发细菌感染,促发无结石的胆囊炎症.在应激状态下可引起胆囊壁局部供血不足,造成局部缺血坏死.诊断:根据典型的临床表现和B超检查可以确诊.但必须仔细作好鉴别诊断,排除周围的重要病变;对反复发作者应排除胆囊功能异常,以免在胆囊切除术后,又有症状发作.治疗原则:临床观察发现一部分病人经保守治疗可暂时控制症状,但以后会反复发作;另有部分病人,发病急,病情不易控制,尤其是老年人和糖尿病病人容易引起胆囊穿孔.本组13例手术较晚,病理发现8例胆囊壁有坏死,1例未及时手术死亡.因此我们认为:为了防止胆囊坏死和穿孔的发生,对反复发作或有急性腹膜炎病人应尽早施行手术.

    作者:夏必顺;张舒生 刊期: 2001年第04期

  • 肝脏血管平滑肌脂肪瘤的临床特点与治疗

    目的探讨肝脏血管平滑肌脂肪瘤(HAML)这一肝脏罕见的良性肿瘤的临床特点,总结其治疗过程中出现的问题,以期提高对HAML的诊断与治疗水平.方法通过对5例经手术及病理证实和1例经肝穿活检证实的HAML的诊断及治疗过程的回顾性分析,结合文献找出HAML所具有的共同点及特异性.结果①在众多的辅助检查中,以CT平扫及增强扫描对HAML的诊断价值大;②对HAML的诊断不能仅靠单一的检查来确定,而要结合病史及多种化验和影像学检查来确立;③对HAML的手术治疗应注意操作,避免可能发生的并发症;④对症状轻微的HAML病人,随访观察是可行的.结论 HAML作为肝脏罕见的良性肿瘤,只要掌握其特征,做出正确的诊断与处理是完全可能的.

    作者:纪文斌;冯玉泉;刘永雄;张文智;于国 刊期: 2001年第04期

  • 逐步回归探讨影响肝癌分化、增殖、转移的有关因素

    目的探讨与原发性肝细胞肝癌(PHC)分化、增殖、转移的有关因素.方法采用逐步有序累积比数logistic回归(后退法)分析p53、N-ras、nm23H1、PCNA蛋白表达强度对癌分化、增殖、转移的影响,进行多因素筛选,建立回归方程.结果在F值水平为P≤0.1时,建立3个分别与癌分化、增殖、转移有关的回归方程,(1)logit pj=-αj+1.0436X4-0.7920X3(P<0.05);(2)logit pj=-αj-1.3595X3(P≤0.01);(3)logit pj=-αj-0.9124X3+1.4548X4(P<0.05).由方程中可见到影响PHC分化、增殖、转移的主要因素.PCNA表达强度与癌分级呈正相关,与癌转移呈正相关;nm23H1表达与癌分级、细胞增殖、癌转移均呈负相关.结论多因素分析能使我们更客观、全面地评价影响PHC分化、增殖、转移的有关因素.

    作者:陈莉;陈玉泉;王桂兰;施裕新 刊期: 2001年第04期

  • 原发性肝癌和肝内胆管细胞癌的TNM分期(一)

    适用于经组织学证实的原发性肝癌和肝内胆管细胞癌,根据物理检查、影像学检查和(或)手术探查确定T、N和M类别.T--原发肿瘤TX 原发肿瘤情况不明.T0 无原发肿瘤证据.T1 肿瘤单发,大径≤2 cm,未侵犯血管.T2 肿瘤单发,大径≤2 cm,侵犯血管;或肿瘤多发,局限于一叶,每个肿瘤大径均≤2 cm,无血管侵犯;或肿瘤单发,大径>2 cm,无血管侵犯.T3 肿瘤单发,大径>2 cm,侵犯血管;或肿瘤多发,局限于一叶,每个肿瘤≤2 cm,侵犯血管;或肿瘤多发,局限于一叶,肿瘤大径>2 cm,伴或不伴血管侵犯.T4 肿瘤多发,超过一个肝叶;或侵犯门静脉或肝静脉主要分支,或肿瘤直接侵犯除胆囊外的相邻器官,或肿瘤穿透脏层腹膜.N--区域淋巴结(在肝十二指肠韧带内的肝门淋巴结)NX 区域淋巴结情况不明.N0 无区域淋巴结转移.N1 有区域淋巴结转移.M--远处转移MX 远处转移情况不明.M0 无远处转移.M1 有远处转移.

    作者:吴志全 刊期: 2001年第04期

  • 门脉置管四氯化碳注射法制备狗肝硬化模型

    在肝硬化门脉高压症的研究中,动物模型种类繁多.常使用的致硬化药物为四氯化碳(CCl4).常见的腹腔用药途径可造成腹腔严重粘连,不利于进一步手术学研究.本实验采用血管内应用CCl4的方法,手术简单,肝脏针对性强,硬化形成较快,腹腔无粘连,非常适于联合术式及肝移植研究.

    作者:曹罡;黎一鸣 刊期: 2001年第04期

  • 缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤中MPO、TNF-α、ET、NO的影响

    目的探讨缺血预处理(IPC)对肝脏缺血再灌注(I/R)损伤中的中性粒细胞和某些细胞因子的影响.方法采用大鼠部分肝脏原位缺血再灌注损伤模型,30只Wistar大鼠随机分成:①正常对照组,②缺血再灌注对照组,③预处理组.②、③组均在60 min再灌注完成后取血及肝组织标本,检测血清AST、ALT、LDH、NO、 ET-1 、TNF-α、及肝组织中髓过氧化酶(MPO)活性和肝组织病理改变.结果预处理组与再灌注对照组比较,肝功明显改善,NO含量升高,ET-1、TNF-α浓度和MPO活性明显降低,两组比较差异具有显著性.结论缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤有明显保护作用,可能与提高内源性NO水平、减轻中性粒细胞在肝脏中的渗出和聚集、抑制ET-1、TNF-α的合成有关.

    作者:吕国庆;刘秉义;丁田贵;张英 刊期: 2001年第04期

  • 半乳糖基抗CD3单抗-TIL杀伤自体肝癌细胞的杀伤活性测定

    为增强肿瘤浸润淋巴细胞的趋肝性和杀伤靶细胞能力,我们将肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)与半乳糖基抗CD3单抗结合,制备了半乳糖基抗CD3单抗-TIL(McAb-TIL),并从形态学上证明McAb-TIL在体外有良好的趋肝细胞性和杀伤自体肝癌细胞能力[1,2],本研究进一步从定量检测杀伤活性角度探讨McAb-TIL杀伤自体肝癌细胞的能力.

    作者:蒋平;张平;何生;赵宗蓉 刊期: 2001年第04期

  • 肝脏结核样罕见肿瘤的诊治体会

    一些罕见的肝脏病变与肝结核表现非常相似,但并非结核而是肿瘤,若不注意,极易在临床中造成误诊误治.我们在1995年3月和1997年10月分别收治2例病人,在分子病理学检查确诊之前都曾多次做组织病理学检查误诊为肝结核.现结合文献资料将我们的诊治体会报告如下.临床资料:例1:患者女,41岁,3年前因肝占位病变在外院手术治疗,术中病理诊断为炎性病变而行无水酒精注射、微波固化、肝动脉栓塞化疗等治疗.术后病理报告为肝结核,给予正规抗结核治疗15个月,肿块继续增大,期间多次肝穿刺活检未发现癌细胞,拟诊为肝非特异性炎症性肉芽肿而先后7次行无水酒精注射治疗,但肿物仍继续增大,且近3个月来出现胸闷、气促、咳嗽等症状.患者既往无结核病史.查体:巩膜无黄染,肝于肋下6.0 cm.肝功能轻度异常,AFP、CEA均在正常范围,血沉加速.X线胸片右侧胸腔积液,未见结核病灶.胸水多次检查未找到抗酸

    作者:周兆锋;彭力辉;廖彩仙 刊期: 2001年第04期

  • 肝脏肿瘤的低温冷冻切除术

    实验研究表明,低温冷冻可导致肝脏细胞组织坏死.其机制大致有二:一是冷冻导致肝细胞的某些结构发生改变,如细胞内的冰晶形成、在解冻过程中的细胞膜脂蛋白复合物变性和细胞质膜内外渗透压的改变等使肝细胞碎裂坏死;二是冷冻使肝组织的营养障碍包括局部微血栓形成,组织缺血缺氧,微循环衰竭,肝脏微血管/肝窦的不可逆性灌注停止,不可避免地导致冷冻组织发生营养障碍性坏死.近年来,临床上逐步发展和完善了肝脏肿瘤的低温冷冻切除术,取得了令人满意的效果.现将该手术的方法介绍如下.

    作者:陈义发;陈孝平;裘法祖 刊期: 2001年第04期

  • 原代猪肝细胞培养体系及培养模式的初步探讨

    目的探索一高密度、高效率的原代猪肝细胞培养方法,为生物人工肝的生物材料提供一种有效的培养模式.方法采用改良Seglen二步胶原酶灌注法分离肝细胞,分别将5×106的肝细胞加入胎牛血清、猪门静脉血清的培养体系中进行方瓶静止培养及聚球培养.结果肝细胞在接种后呈明显的Cytodex-3聚集趋势.门静脉血清培养体系中肝细胞的Albumin、Urea合成能力明显高于胎牛血清组.在培养后的前3周门静脉血清培养体系中聚球细胞模式优于微载体静止培养模式.结论与胎牛血清培养体系相比,猪门静脉血清培养体系更适合原代猪肝细胞高密度培养.聚球培养是一种较为理想的原代猪肝细胞培养模式.

    作者:陈柯;高毅;杨继震 刊期: 2001年第04期

  • 多电极射频治疗肝肿瘤的安全性和可靠性分析

    目的探讨多电极射频治疗原发性及继发性肝癌的安全性、可靠性.方法对67例肝肿瘤病人进行了80次多电极射频治疗,及治疗前后影像及病理观察.结果并发症率7.4%,包括结肠穿孔1例、皮肤烧伤2例、血胸2例,无一例死亡.治疗后增强CT、彩超及病理复查近90%病人病灶呈凝固性坏死表现.结论多电极射频用于治疗原发性及继发性肝癌是安全且可靠的.

    作者:马宽生;董家鸿;陈敏;黄晓兰;蔡景修 刊期: 2001年第04期

  • 剥离法治疗第Ⅷ段肝海绵状血管瘤九例

    肝血管瘤是肝脏常见的良性肿瘤.肝叶切除是目前治疗肝海绵状血管瘤常用且有效的方法,但手术难度大、死亡率高、肝脏损伤严重、并发症多,给手术带来很大风险,尤其是第Ⅷ肝段切除更为困难而危险.自1990年1月至1998年10月我们采用包膜外钝性剥离术治疗第Ⅷ肝段海绵状血管瘤9例,取得良好效果,现报告如下.一般资料:9例中男2例,女7例,年龄31~57岁.肿瘤全部为单发,位于肝包膜下,大直径14 cm,小直径6 cm,平均9.2 cm.全部病例无肝硬化表现,术前肝功能正常.术中输血400~600 ml.施行入肝血流阻断,阻断时间为15~35 min.无手术死亡.术后2例肝功能呈一过性损害.全部病例未出现黄疸、腹水、胆瘘及膈下感染.术后随访7例,肿瘤切除部位无复发.手术方法:本组病例均采用静脉复合麻醉.右侧肋缘下斜切口4例,以右侧为主的双肋缘下切口5例,为了充分显露肿瘤以利于剥离有效控制出血,我们充分游离右侧半肝,将右半肝尽量托

    作者:王炜;苏刚;徐强;景生虹;马德强;马健文 刊期: 2001年第04期

中华肝胆外科杂志

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主办:中华医学会