学术投稿

重组Akt腺病毒对CCl4诱导的肝硬化门静脉高压症大鼠模型的影响

邓刚;黄飞舟;刘浔阳;罗成群

关键词:肝硬化, 高血压, 门静脉, 重组腺病毒, 基因疗法
摘要:目的 研究重组Akt腺病毒对CCl4诱导的大鼠肝硬化门静脉高压症的影响及其作用机制.方法 以细胞内同源重组法构建重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt;采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压症大鼠模型.将大鼠模型分为二部分:用于组织学检测的大鼠,在制备大鼠模型的第2周和第6周自尾静脉导入Ad-myr-HA-Akt.第8周时应用Western blot法检测各组大鼠肝组织内Akt,p-Akt,Fas,DR5蛋白的表达.用于检测肝硬化门静脉高压症大鼠,在肝硬化模型的第9周自尾静脉导人生理盐水和Ad-myr-HA-Akt,3 d后测定各组的门静脉压力、平均动脉压和心率.结果 Ad-myr-HA-Akt治疗后Akt组组织学病变减轻,Fas蛋白的表达明显低于肝硬化组、生理盐水组和增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)组,血清ALT和AST及羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)均显著低于其他各组,p-Akt蛋白的表达明显高于其他各组,Fas和HSC活化的指标DR5蛋白含量降低.EGFP组在Ad-EGFP转染后,肝组织中可见大量绿色荧光,肺和肾组织中仅见少量荧光,而其他实质器官未见EGFP表达.结论 Akt重组腺病毒能够阻断大鼠肝硬化的发展,可能是防治肝硬化的一条有效途径.
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    目的 研究重组Akt腺病毒对CCl4诱导的大鼠肝硬化门静脉高压症的影响及其作用机制.方法 以细胞内同源重组法构建重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt;采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压症大鼠模型.将大鼠模型分为二部分:用于组织学检测的大鼠,在制备大鼠模型的第2周和第6周自尾静脉导入Ad-myr-HA-Akt.第8周时应用Western blot法检测各组大鼠肝组织内Akt,p-Akt,Fas,DR5蛋白的表达.用于检测肝硬化门静脉高压症大鼠,在肝硬化模型的第9周自尾静脉导人生理盐水和Ad-myr-HA-Akt,3 d后测定各组的门静脉压力、平均动脉压和心率.结果 Ad-myr-HA-Akt治疗后Akt组组织学病变减轻,Fas蛋白的表达明显低于肝硬化组、生理盐水组和增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)组,血清ALT和AST及羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)均显著低于其他各组,p-Akt蛋白的表达明显高于其他各组,Fas和HSC活化的指标DR5蛋白含量降低.EGFP组在Ad-EGFP转染后,肝组织中可见大量绿色荧光,肺和肾组织中仅见少量荧光,而其他实质器官未见EGFP表达.结论 Akt重组腺病毒能够阻断大鼠肝硬化的发展,可能是防治肝硬化的一条有效途径.

    作者:邓刚;黄飞舟;刘浔阳;罗成群 刊期: 2009年第01期

  • 脾蒂捆扎法在腹腔镜脾切除术中的应用

    自2001年2月以来,我们为31例原发性或继发性脾功能亢进和其他脾疾病患者行腹腔镜脾切除术(laparoscopic splenectomy,LS),其中对19例患者采用脾蒂捆扎处理脾脏血管,利用圈套器的原理进行改进:将结扎线绕过脾蒂拉出腹腔,用头部有线孔的圈套器金属杆打好滑结,送人腹腔内拉紧线结捆扎脾蒂.19例患者均顺利完成,无中转开腹,无术后出血、胰漏等并发症发生.我们认为腹腔镜脾切除术中采用脾蒂捆扎处理脾脏血管是一种安全、简单和快速的方法,适用于多种大小脾脏的切除,现分析如下.

    作者:朱建军;朱水根;闻立平;商文忠;方海星;俞国灿;章小英 刊期: 2009年第01期

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    目的 通过动物实验,研究腹腔镜腹壁结构分离技术治疗腹腔内高压的效果.方法 8头巴马香猪于全麻下手术,通过腹腔灌注CO2建立腹腔高压(IAH)模型.于腹肌平面上方建立皮下隧道,在腹腔镜的监测下以超声刀切开腹外斜肌腱膜的止点,记录术前、单侧减压和双侧减压后的腹腔内压(IAP)、腰围(WL)、中心静脉压(CVP)、平均动脉压(MAP)和心率(HR)的变化.结果 建立IAH(25 mm Hg)后,WL为(65.3±2.5)cm,MAP为(88±14)mm Hg,HR为(115±9)次/min,CVP为(10.8±2.2)cm H2O.实施腹腔镜腹壁结构分离后,IAP降至(16.0±1.5)mm Hg(P<0.01),WL升至(83.1±1.9)cm(P<0.01),MAP升至(100±12)mm Hg(P<0.01),HR降至(97±7)次/min(P<0.01),CVP降至(7.3±1.8)cmH2O(P<0.01).结论 IAP的变化可引起巴马香猪的血液动力学改变,腹腔镜腹壁结构分离技术可显著降低其IAH,从而改善血液动力学.

    作者:李世宽;胡三元 刊期: 2009年第01期

  • Cattell Braasch去旋转手法在胰腺肿瘤手术中的应用

    目的 探讨Cattell Braasch去旋转手法在胰腺肿瘤手术中的操作技巧、应用价值及并发症情况.方法 对术中使用Cattell Braasch去旋转手法做为显露及探查手法的13例胰腺肿瘤的临床资料进行总结分析.结果 13例患者中胰头部肿瘤6例(腺癌4例,实性假乳头状瘤及内分泌肿瘤各1例),胰体尾肿瘤7例(腺癌4例,实性假乳头状瘤1例,内分泌肿瘤2例).行胰十二指肠切除6例,其中3例行肠系膜上静脉节段切除对端吻合术,血管切除长度3~7 cm;根治性胰体尾脾切除术7例,其中联合左肾切除1例.手术均获得成功,术中应用该手法的操作时间为10~15 min,手术时间为2.5~11 h.术中出血300~1000 ml,全部病例均未发生毗邻组织的意外损伤,术后无腹泻、系膜扭转、肠梗阻以及肠系膜上静脉血栓形成等严重并发症发生,无手术死亡病例.结论 Cattell Bransch去旋转手法是一种安全有效的外科手法,可以改善胰腺肿瘤的手术显露,简化局部解剖关系,避免意外损伤,增加手术的安全性;同时通过该手法可以松解肠系膜上静脉,有助于施行受侵犯的肠系膜上静脉长段切除后的直接对端吻合.

    作者:冷家骅;郝纯毅;张霁;崔明 刊期: 2009年第01期

  • ISO-1对小鼠大肠癌肝转移的影响

    目的 研究选择性巨噬细胞移动抑制因子(MIF)互变异构酶活性抑制剂ISO-1对BALB/c小鼠大肠癌肝转移的影响及其可能机制. 方法微孔迁移法检测ISO-1对CT26细胞体外侵袭的影响.盲肠造疝原位移植瘤块术建立小鼠大肠癌肝转移模型,将30只成功建模小鼠分为3组,每组10只.每周两次腹腔注射相同体积ISO-1(0.2 ml,20 mg/kg)、5%DMSO和无菌生理盐水(NS)溶液.治疗4周后处死小鼠,肝脏连续病理切片、HE染色,比较各组的肝转移率.L-多巴色素甲酯测定小鼠血清MIF互变异构酶活性;ELISA测定血清中血管内皮生长因子(VEGF)水平;CD31染色标记肿瘤微血管内皮细胞测定肿瘤微血管密度(MVD).结果 100 μmol/L ISO-1作用24 h后CT26细胞穿透聚碳酸酯膜细胞数显著减少[(151±19)比(178±9),P<0.01].ISO组比DMSO组小鼠血清MIF互变异构酶活性为51%比81%,P<0.01.ISO-1组、DMSO组与NS组肝转移率分别为10%、60%与70%(x2=8.30,P<0.05).ISO-1组、DMSO组与NS组小鼠血清VEGF的水平分别为(15±7)pg/ml、(63±10)pg/ml与(67±8)pg/ml,P<0.01.ISO-1组、DMSO组与NS组原位肿瘤组织MVD分别为17±4、36±7与38±5,P<0.01.结论 在体外ISO-1减少了CT26细胞的迁移,在体内降低了大肠癌肝转移的发生.其可能机制为ISO-1抑制MIF互变异构酶活性,下调VEGF表达,减少MVD.

    作者:何兴祥;刘成勇;陈萌;郭海波;彭侠彪;全华斌 刊期: 2009年第01期

  • 人B7-1基因与GPI信号肽序列融和基因的原核表达载体的构建及表达

    目的 构建GPI锚定蛋白基因与B7-1分子融合的原核高效表达载体(GPI-B7-1),观察融合蛋白的抗肿瘤效应.方法 分别从新鲜胎盘和ConA刺激的外周血单核细胞中克隆人胎盘碱性磷酸酶(hPLAP-1)C末端信号肽序列(GPI)和CD80(B7-1)基因.利用PCR技术将GPI和B7-1胞外编码区基因进行融合,并将融合基因亚克隆入原核表达载体(pET-30a)中.重组载体pET-30a-GPI-B7-1转化表达菌株E.coli BL,纯化GPI-B7-1融合蛋白,SDS-PAGE、Western blot分析鉴定其免疫活性.结果 PCR和RT-PCR产物经电泳鉴定,在100~250 bp处可见到133 bp的GPI目的 条带.在750 bp左右可见到792 bp的B7-1胞外编码区基因目的 条带.重组载体pET-30a-GPI-B7-1经PCR检测获得900 bp左右的目的 片段,经EcoRⅠ、SAlⅠ双酶切鉴定,得到5000 bp和900 bp左右大小2个片段,实现了融合蛋白(GPI-B7-1)在大肠杆菌中的高效表达,在非变性条件下纯化该融合蛋白,SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为38 kDa,Western blotting证实38 kDa处出现一条特异的显色带,该融合蛋白即为目的 蛋白.结论 GPI-B7-1表达载体可在大肠杆菌中高效表达获取融合蛋白,为肿瘤免疫治疗奠定了基础.

    作者:王建伟;刘颖斌;曹岩菁;王许安;李江涛;孔颖;马孝明;彭淑牖 刊期: 2009年第01期

  • 胃癌合并肝硬化门静脉高压症手术治疗的体会

    胃癌合并肝硬化门静脉高压症的发病率低,外科处理比较棘手,手术复杂难度大,并发症多[-2].我院自1992年1月至2007年1月对24例胃癌合并肝硬化门静脉高压症患者施行手术治疗,现总结如下.

    作者:周宏众;韩少良;黄颖鹏 刊期: 2009年第01期

  • 主动脉夹层腔内隔绝术中支架移位的处理

    目的 探讨主动脉腔内治疗术中支架移位的原因及处理方法.方法 回顾性分析2001年5月至2007年12月完成的主动脉Ⅲ型夹层腔内隔绝术中发生支架移位的17例患者的临床资料,其中男13例,女4例,急性夹层15例,慢性夹层2例.发生支架后移11例,包括球囊扩张过程中支架后移2例,支架释放后撤鞘过程中将支架刮带后移1例,支架半释放时发生移位2例;支架前移6例,包括支架前移阻塞左锁骨下动脉3例,阻塞左颈总动脉3例,其中1例为后移支架被cuff输送器推向前方阻塞左颈总动脉,1例为cuff释放过程中前跳堵塞左颈总动脉. 结果支架后移的11例通过将支架向前顶推或放置cuff缓解,本组围手术期无死亡病例.支架前移6例,其中3例锁骨下动脉受阻,未做处理,其中1例术后因小脑梗塞死亡;另外3例覆盖左颈总动脉,2例使用球囊扩张拖拽,1例采用抓捕器牵拉左锁骨下动脉的导管,将支架向远侧牵拉,使左锁骨下动脉重新开放.结论 主动脉腔内隔绝术中支架移位除与技术因素有关外,还和解剖因素和支架设计有关.支架前移相对少见,但对患者危害更大.除用球囊扩张拖拽外,用抓捕器牵拉左锁骨下动脉导管是一种较好的补救办法.

    作者:张学民;张小明;李清乐 刊期: 2009年第01期

  • 直肠炎性肌纤维母细胞瘤

    炎性肌纤维母细胞瘤(inflammatory myofibroblastic tumor,IMT)是好发于青少年的一种少见的间叶肿瘤,现将我科收治的一例报告如下.

    作者:周学武;罗春芬;甘梅富 刊期: 2009年第01期

  • 原发性腹膜后黏液性囊腺瘤一例

    患者女,41岁,因左腹部感饱胀不适1个月,2个月内消瘦5 kg,2007年5月16日入院.查体:左上腹一直径10 cm可推动质韧肿块.B超示左上腹部208 mm×120 mm的囊实性肿块,与胰尾关系密切,边界清,有分隔,分隔及囊壁上数个等回声乳头状突起,大43 mm×35 mm,超声造影示囊壁及乳头状突起弥漫性不均匀增强.

    作者:李可为;季福 刊期: 2009年第01期

  • 国人升主动脉及主动脉弓的CT解剖研究

    目的 通过CT血管造影(computed tomographic arteriography,CTA)方式回顾性研究中国人群升主及弓部血管的直径、长度特点;方法选择2006年9月至2007年9月接受胸主动脉CT血管造影的患者388例,使用GE公司AW4.2工作站测量升主、弓部、弓上分支的直径及长度数据,运用统计学软件进行分析.结果 冠脉开口以上至左锁骨下动脉以远的主动脉直径D1-D6分别为(34±5)mm;(34±5)mm;(33±4)mm;(30±4)mm;(28±3)mm;(26±3)mm.头臂干两处直径d1,d2分别为(13±2)mm;(13±2)mm.左颈总动脉两处直径d3,d4分别为(8.7±1.5)mm;(7.9±1.0)mm.左锁骨下动脉两处直径d5,d6分别为(10.7±1.7)mm;(9.3±1.3)mm.冠脉开口处至头臂干动脉开口近端的主动脉管腔长度L1为(5.4±1.2)cm;头臂干开口近端与左颈总动脉开口近端之间的主动脉管腔距离L2为(1.3±0.4)cm;头臂干起始处至右锁骨下动脉开口处长度11为(4.0±0.8)cm;左锁骨下动脉起始处至椎动脉开口处管腔长度I2为(3.8±0.8)cm;头臂干与左颈总动脉管壁之间距离I3为(0.39±0.23)cm;左颈总与左锁骨下动脉之间管肇距离I4为(0.7±0.5)cm.结论 得到中国人群升主及弓部血管直径和长度的数据,可为腔内修复升主动脉及主动脉弓的各类研究提供数据支持.

    作者:张敏宏;郭伟;刘小平;尹太;贾鑫;杜昕 刊期: 2009年第01期

  • 莫匹罗星软膏外科应用案例征集

    作者: 刊期: 2009年第01期

  • 早期手术治疗可降低暴发性急性胰腺炎的死亡率

    暴发性急性胰腺炎(fulminant acute pancreatitis,FAP)定义为:急性胰腺炎起病72 h内经积极非手术治疗(包括重症监护治疗)仍出现脏器功能障碍者[1].尽管目前重症监护治疗得到了长足的发展,使我们能够处理FAP的大多数系统性并发症,但该病的死亡率仍超过40%.目前对于该病的手术时机尚存争议.我们总结了我院治疗重症急性胰腺炎及手术治疗FAP的经验,现报告如下.

    作者:杨东杰;何裕隆;蔡世荣;彭建军;张常华;詹文华 刊期: 2009年第01期

  • 腋下汗腺黏液腺癌一例

    患者男,59岁.发现左腋下肿物3年,肿物生长缓慢,左上肢活动时腋下有异物感1个月就诊,查体发现肿块位于腋窝中部,约5 cm×3.5 cm×3 cm大小,肿块表面皮肤呈桔皮样改变,并有-1.0 cm×0.8 cm大小的隆起,表面充血,无触痛,边界清晰,活动好.

    作者:葛步军;黄琦;曾郁 刊期: 2009年第01期

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    静脉内平滑肌瘤病(intravenous leiomyomatosis,IVL)又称脉管内平滑肌瘤病,是一种少见的特殊类型子宫肿瘤.该肿瘤组织学上呈良性增生,但是具有侵及静脉和淋巴管的不良生物学行为,常常超出子宫范围,沿宫旁静脉、髂静脉延伸达下腔静脉,甚至累及右心或肺动脉,成为心脏内平滑肌瘤病(intracardiac leiomyomatosis,ICL).以下腔静脉或右心房病变为首发症状瘤病发展极为隐袭,临床表现多样且缺乏特异性,诊断非常困难.

    作者:张韬;张小明 刊期: 2009年第01期

  • 腹膜后脂肪肉瘤的治疗进展

    脂肪肉瘤是一种少见但复发率较高的恶性肿瘤,常见于四肢,腹膜后间隙次之,约占成人腹膜后软组织肉瘤的40%[1].腹膜后脂肪肉瘤(retroperitoneal liposarcomas,RPLS)男女发生比例大致相等,发病年龄跨度较大,但多在40~60岁之间.由于腹膜后间隙较大,位置隐蔽,多数患者早期缺乏特异性症状和体征,就诊时肿瘤往往长得很大,给手术带来很大的困难.诊断主要依靠体格检查和影像学检查,穿刺活检并未为临床所推崇,因其可增加肿瘤沿针道种植、播散的风险[2].手术完整切除仍是RPLS的标准治疗方式.对于未能完整切除及高复发风险者,可选择结合放化疗的综合治疗,但其效果目前仍存在争议.

    作者:陈志辉;宋新明 刊期: 2009年第01期

  • 孤立性髂动脉瘤19例诊治经验

    目的 探讨孤立性髂动脉瘤(solitary iliac aneurysms,SIA)的诊治方法.方法 回顾性分析1985年1月至2008年1月23年间19例SIA患者的临床资料.其中,男性18例,女性1例,年龄39~77岁,平均(62±7)岁.19例患者中16例行择期动脉瘤切除、人工血管移植,1例行腔内修复术,1例破裂性SIA急诊行动脉瘤切除、人工血管移植,1例破裂性SIA未手术即死亡.结果 19例患者共有30个SIA,其中25个(83.3%)位于髂总动脉,4个(13.3%)位于髂内动脉,1个(3.3%)髂外动脉瘤.11例(57.9%)患者具有多发性动脉瘤,其中9例(47.4%)为双侧髂动脉瘤,另2例合并其他部位的动脉瘤.2例(10.5%)合并动脉闭塞性疾病.2例破裂SIA,1例抢救成功,1例抢救无效死亡.开腹手术的17例患者无围手术期死亡,无盆腔脏器缺血等并发症;1例腔内修复术治疗后无内漏等并发症.术后移植血管通畅,无新发动脉瘤形成早期诊断和治疗SIA非常重要,应通过CTA等方法明确诊断及有否合并多发性动脉瘤或动脉闭塞性疾病.SIA的手术效果良好,术后应长期随访,注意有否吻合口动脉瘤或新生动脉瘤.

    作者:冯勇;胡海地;陈喆;常青;刘翀;张健;段志泉;辛世杰 刊期: 2009年第01期

  • 促进内皮祖细胞生长的细胞外基质组织工程血管支架的研究

    目的 研究鼠骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)在不同类型细胞外基质支架上的生长特性,为EPCs生长寻找新的生物组织工程血管支架.方法 EPCs种植于细胞外基质支架(extracellular matrix,ECM)上.培养不同时间点用免疫荧光技术鉴定并细胞记数;电镜观察支架表面结构及EPCs的生长情况;Western blotting法、real-time PCR法检测VWF(von Willebrand factor)蛋白及mRNA表达变化.结果 在1、3、5 h 3个检测点的压缩组细胞贴壁率明显高于未压缩组(P<0.01).在1、3、7 d压缩组的细胞数明显高于未压缩组(P<0.05),10d后差异无统计学意义,且压缩组细胞形态较成熟,与内皮细胞相似,有一个较平整的细胞平面.Western blotting检测表明3、7、10 d VWF蛋白在压缩支架上表达比未压缩支架上强,14 d后两组表达相当.real-time PCR结果示3、7、10 d压缩组VWF基因表达量明显高于未压缩组(P<0.01),14 d后两组表达无差异.结论 压缩ECM更能促进EPCs黏附、增殖和分化,可作为一种新的合成人工血管的生物组织工程支架.

    作者:步雪峰;严玉兰;张志坚;吴浩荣 刊期: 2009年第01期

  • 布加综合征介入治疗合并下腔静脉破裂、心包填塞处理体会

    布加综合征(Budd-Clhiari syndrome,BCS)是指肝静脉和/或下腔静脉(inferior vena cava,IVC)肝段血流受阻而引起门静脉高压和/或IVC高压产生的一系列症候群.介入治疗是BCS的首选治疗方法,创伤小,恢复快,中远期疗效好.我院行BCS介入治疗已500余例,近期发生IVC破裂、心包填塞1例,经积极抢救处理,成功治愈,现报告如下.

    作者:周为民;高涌;唐震;李小军;卢冉;宋涛;周伟;蔡鑫;史晓俊 刊期: 2009年第01期

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    作者:杨振华;陈萃 刊期: 2009年第01期

中华普通外科杂志

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