目的 检测胆管癌和癌旁胆管组织中Survivin蛋白和mRNA的表达,探讨其在胆管癌发生发展中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测48例胆管癌和其中30例癌旁胆管组织中Survivin蛋白的表达,同时应用RT-PCR技术检测这些组织标本中Survivin mRNA的表达,并与临床病理资料进行相关性分析.结果 48例胆管癌组织中,Survivin蛋白阳性表达率为79.2%(38/48), 在癌旁胆管组织中Survivin蛋白阳性表达率6.7%(2/30),两者比较差异有显著性意义(P＜0.05).48例胆管癌组织中,有30例Survivin mRNA的表达高于配对正常组织, 胆管癌组织中Survivin mRNA的表达水平(2.18±1.21)明显高于正常对照组织(1.01±1.03) (P＜0.05).临床病理资料的相关性分析显示,胆管癌组织中Survivin蛋白和mRNA的表达分布与临床病理特征无相关性.结论 Survivin基因转录和蛋白表达可能参与胆管癌的发生发展过程,检测Survivin表达可能有助于阐明胆管癌的发生机制.
作者：左克强；艾开兴；郭兴军；宋自芳；陈立波；郑启昌 刊期： 2007年第02期
目的 观察丙泊酚对大鼠肠缺血再灌注(I/R)后肠组织损伤的影响.方法 SD大鼠随机分为4组,每组8只,①缺血再灌注组(I/R组):暴露腹腔后夹闭肠系膜上动脉(SMA)60 min,开放再灌注120 min;②丙泊酚预处理组(P1组):在肠缺血前10 min开始给予丙泊酚;③丙泊酚治疗组(P2组):在肠再灌注前10 min开始给予丙泊酚;④对照组(C组):仅暴露SMA,不行肠I/R及丙泊酚输注.丙泊酚首剂量为10 mg/kg,随后以10 mg/(kg·h)持续输注.所有动物于再灌注120 min时处死.行肠组织苏木精-伊红染色观察肠损伤程度并评分;检测血浆和肠组织二胺氧化酶(DAO);肠组织TUNEL染色检测细胞凋亡;并检测肠组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性的变化.结果 与C组比较,其余3组血浆DAO水平增加,肠组织DAO 水平降低,但仅在I/R组差异有显著性意义(P＜0.05).苏木精-伊红染色显示肠I/R后肠组织出现不同程度的损伤,与C组比较,其余3组损伤程度评分都显著增高(P＜0.01).肠I/R后肠组织细胞凋亡显著增加,3组分别与C组比较差异均有显著性意义.与C组比较,3组大鼠肠组织SOD活性降低,MDA水平升高,MPO活性升高,在I/R组差异有显著性意义,P1组与P2组这种改变有所减轻,P1组SOD活性和MDA水平与I/R组比较差异有显著性意义(均P＜0.05).结论 肠I/R后产生肠道损伤.给予丙泊酚,尤其在肠缺血早期前给予,可减轻肠损伤.其作用机制可能与丙泊酚的抗氧化作用有关.
作者：胡晓敏；吕阳；姚尚龙 刊期： 2007年第02期
目的 探讨儿童非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)病理组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的表达,以及两者表达间的相关性.方法 免疫组织化学SP染色方法检测47例NHL病理切片中的EMMPRIN和MMP-9的表达,采用Spearman等级相关分析方法分析EMMPRIN表达与MMP-9的相关性,同时分析其与临床分期及预后的关系.结果 ①EMMPRIN在儿童NHL的表达阳性率为81%(38/47),其中T细胞型NHL的强阳性率为76%(19/25),B细胞型NHL的强阳性率为36%(8/22),两者强阳性表达率差异有极显著性意义(P＜0.01).② MMP-9在儿童NHL中的表达阳性率为79%(37/47),其中T细胞型NHL的强阳性率为72%(18/25),B细胞型NHL的强阳性率为23%(5/22),两者强阳性表达率差异有极显著性意义(P＜0.01).③ EMMPRIN的表达与MMP-9有显著正相关性(rs=0.913,P＜0.05).④Ⅲ期+Ⅳ期组以及存活时间＜5年组EMMPRIN、MMP-9的强阳性表达率均分别高于Ⅰ期+Ⅱ期组和存活时间≥5年组.结论 儿童NHL细胞高表达EMMPRIN和MMP-9,且T细胞型NHL的表达明显高于B细胞型,两者表达强度与临床分期及预后有关,可能作为NHL预后判断指标之一.
作者：刘爱国；胡群；陶红芳；张柳清；周晟；胡迎 刊期： 2007年第02期
目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人胆管癌细胞株QBC-939中RASSF1A基因启动子区域甲基化状态及其表达的影响.方法 用5 μmol/L的5-Aza-CdR对QBC-939细胞进行化学干预24 h,用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测 RASSF1A基因启动子区域甲基化状态的改变,RT-PCR观察RASSF1A基因mRNA水平变化,Western blot检测RASSF1A蛋白的表达.结果 经5-Aza-CdR化学干预后,RASSF1A基因启动子区域由甲基化状态转变为非甲基化状态;RT-PCR和Western blot结果显示在干预组细胞中分别出现RASSF1A基因的DNA条带(280 bp)和蛋白质条带(40 kD),而对照组中没有相应条带出现.结论 DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR能够诱导RASSF1A基因启动子区域去甲基化,并通过该机制诱导RASSF1A基因在人胆管癌细胞系QBC-939中的表达.
作者：左石；陈勇军；徐立宁；唐启彬；邹声泉 刊期： 2007年第02期
目的 研究鼠神经干细胞在二维自组装多肽凝胶支架材料表面生长及分化情况,证明多肽凝胶可作为神经组织工程支架材料.方法 取新生1周内乳鼠的大脑皮质,机械分离出神经干细胞,无血清培养液(DMEM/F12+bFGF+EGF+B27)培养,免疫组化SABC法对神经干细胞进行鉴定;然后,将其接种到凝胶支架材料表面(实验组)及多聚赖氨酸包被的盖玻片表面(对照组),倒置相差显微镜观察干细胞的生长及分化情况.结果 免疫组化法鉴定:培养的细胞为神经干细胞, Nestin(+).神经干细胞可分化为神经元及星形胶质细胞,NSE(+),GFAP(+).倒置相差显微镜观察:实验组中,接种的神经干细胞生长良好,7 d后可分化为有突起神经细胞;对照组中,7 d后未发现长出突起神经细胞.结论 二维自组装多肽凝胶对神经干细胞有良好细胞相容性,可作为神经组织工程支架材料.
作者：庄正陵；郑启新；宋玉林；郭晓东；吴永超；肖锋 刊期： 2007年第02期
目的 考察苛求芽孢杆菌(ATCC 26904)分泌型尿酸酶的特性和将其应用于直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸的有效性.方法 苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶经DEAE-cellulose层析纯化后,用于以积分法分析尿酸酶反应曲线预测反应体系本底的直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸.结果 苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶只含1种肽链,分子量为34.7 kD(1kD=0.992 1 ku),其米氏常数为(0.22±0.01)mmo1/L(n=11),黄嘌呤抑制常数为(36±3) μmo1/L(n=4).用此尿酸酶,只要被分析反应曲线终点的底物浓度低于起点的30%,应用积分法就能可靠预测本底;直接测定反应前吸收,可使直接动力学尿酸酶法不受常见血清成分、酶活性变化和15 μmo1/L黄嘌呤等干扰.监测0.025 U/ml尿酸酶反应5 min的数据,其线性响应范围为1～50 μmol/L;所得临床标本血清尿酸含量(Ck)与过氧化物酶偶联间接终点平衡法(Ce)正相关(Ck=-0.008+1.046Ce,r=0.996,n=206),但Bland-Altman法分析表明两种方法不一致.结论 苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶可用于直接动力学尿酸酶法测定尿酸,并可保障其优势.
作者：赵运胜；赵利娜；杨根庆；陶佳；卜友泉；廖飞 刊期： 2007年第02期
目的 研究大鼠糖尿病性白内障(diabetic cataract, DC)晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LECs)水通道蛋白-1(aquaporin-1, AQP1)表达水平的变化.方法 链脲佐菌素(streptozotocin, STZ) 60 mg/kg体重一次性尾静脉注射制作大鼠糖尿病模型,分别在造模后不同时间点摘取模型组及对照组大鼠的眼球,制作石蜡切片,应用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术对晶状体囊膜下上皮细胞AQP1进行检测.结果 透明晶状体和DC 各期晶状体囊膜下上皮细胞膜均有AQP1阳性表达.图像分析显示:在造模2周糖尿病大鼠晶状体尚透明,LECs的AQP1平均吸光度(A)值即下降,与对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05);DC各期LECs的AQP1表达均显著低于对照组 (均P＜0.01),随着白内障的发展,A值逐渐下降.除DCⅡ期与Ⅲ期之间A值差异无显著性意义外,其余DC各期之间差异均有极显著性意义(均P＜0.01).结论 LECs胞膜AQP1表达量减少先于DC的发生,DC早期AQP1的表达量显著下降,AQP1表达改变可能在DC发生发展中起一定作用.
作者：张虹；张新芳；王芳；陈芳 刊期： 2007年第02期
目的 探讨氯化锂(lithium chloride, LiCl)对人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的A549细胞在细胞增殖和细胞周期方面的影响.方法 以不同浓度的LiCl作用A549细胞24 h后,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测各组细胞的增殖活性;利用流式细胞术进行细胞周期分析;免疫细胞荧光技术检测糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)在各组细胞中的表达;并通过Western blot检测LiCl对GSK3β、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)及Cyclin D1蛋白质表达水平的影响.结果 LiCl能提高A549细胞的增殖活性.且随着LiCl浓度的升高,处于G1期的细胞数量减少,而S期细胞数量增多,与正常对照组相比,差异具统计学意义(10 mmol/L组:P＜0.05;20 mmol/L组:P＜0.01).LiCl能使GSK3β表达降低而无酶活性的p-GSK3β表达升高;同时上调Cyclin D1的表达水平.结论 LiCl能加快A549细胞的G1/S期转换并促进增殖, GSK3β的活性受抑从而减少Cyclin D1的降解是其可能的机制.
作者：李建莎；朱敏；田丹；王满香；王芳；李娜萍；吴人亮 刊期： 2007年第02期
目的 构建含日本血吸虫相对分子质量为26 000的抗原(Sj26GST)基因的膜锚定表达DNA疫苗,观察其免疫BALB/c小鼠后的免疫应答效应.方法 用RT-PCR法,以血吸虫成虫RNA为模板,扩增获得Sj26的全长基因.利用重组PCR技术,在Sj26基因的5′端加上编码IL-2的信号肽核苷酸序列,3′端加上编码胎盘碱性磷酸酶的膜锚定序列,然后将其克隆入pIRES载体中,构建一个膜锚定型真核表达质粒pIRES-Sj26.将重组质粒转染HeLa细胞,通过RT-PCR及间接免疫荧光技术检测目的基因的表达.用构建的pIRES-Sj26疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,以ELISA试剂盒检测小鼠血清中的总IgG抗体浓度,脾细胞培养法检测脾淋巴细胞培养上清的干扰素γ(INF-γ)含量,淋巴细胞刺激指数(SI)反映淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测脾细胞CD4/CD8亚群.结果 经过酶切鉴定、PCR及测序证实重组质粒pIRES-Sj26构建成功,经转染HeLa细胞及免疫荧光检测证明质粒pIRES-Sj26能在体外进行表达.免疫小鼠后检测结果表明pIRES-Sj26组的血清总IgG抗体浓度、INF-γ的含量明显高于空白对照组和空载体组(均P＜0.01);其脾SI高于空白对照组和空载体组(P＜0.05);CD8+细胞百分比高于空白对照组和空载体组 (均P＜0.05), CD4+细胞百分比没有显著变化(P＞0.05).结论 成功构建日本血吸虫膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26, 表达的Sj26蛋白大部分锚定在细胞膜上.pIRES-Sj26疫苗能增强BALB/c 小鼠的免疫应答反应.
作者：杨平；戴五星；刘朔捷；郭萍；马彦彬；唐成武；程继忠 刊期： 2007年第02期
目的 研究神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在2～7月龄正常人胎脑大脑皮质和海马结构的表达情况.方法 采用免疫组织化学技术,光镜下观察nNOS在不同月龄正常人胎脑大脑皮质和海马结构的表达情况;利用计算机图像分析技术测量不同月龄额叶皮质和海马结构内嗅区皮质nNOS表达的平均吸光度.结果 光镜下2月龄时人胎脑大脑皮质和海马结构中没有nNOS表达,3月龄时上述部位开始出现nNOS阳性产物的表达,阳性产物主要存在于神经细胞的胞质和突起,胞核不着色.4月龄时阳性产物增多(P＜0.05),5月龄与4月龄之间相比变化不明显(P＞0.05),6、7月龄nNOS表达持续增强(P＜0.05).结论 nNOS在3～7月龄的人胎脑大脑皮质和海马结构中有表达,其表达与胎脑神经细胞的发育规律一致,表明其产物一氧化氮(NO)与人胎脑的发育密切相关.
作者：李洪英；董大翠；张艳 刊期： 2007年第02期
目的 了解武汉地区肺炎链球菌的红霉素耐药机制.方法 收集152株肺炎链球菌,琼脂稀释法测定抗菌药物低抑菌浓度,红霉素-克林霉素双纸片扩散法检测耐药表型,聚合酶链式反应检测红霉素耐药基因ermB和mefA.结果 152株肺炎链球菌红霉素耐药率达84.21%(128/152),耐药表型主要为cMLSB (98.44%), 2株菌(1.56%)为M表型耐药.128株红霉素耐药肺炎链球菌ermB基因总检出率98.44%(126/128),其中40株菌(31.25%)同时检出ermB和mefA基因,2株菌(1.56%)仅检出mefA基因.结论 武汉地区红霉素耐药肺炎链球菌的发生率高,ermB基因是主要的耐药机制,介导cMLSB表型耐药,双纸片扩散法对此耐药表型的检测有很好的预见性.
作者：张璟；孙自镛 刊期： 2007年第02期
目的 探讨糖皮质激素对于活化大鼠嗜碱性白血病细胞(RBL-2H3,简称RBL)表达白细胞介素-4(IL-4)的影响.方法 分别利用抗原和钙离子载体A23187激活RBL,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测地塞米松和氢化可的松对活化RBL表达IL-4的影响.结果 经A23187活化的RBL,加入10-10和10-8mol/L地塞米松培养24 h后,其IL-4表达量分别降至对照的45.2%和14.5%,加入10-9和10-7mol/L氢化可的松后,其IL-4表达量分别降至对照的56.4%和9.0%.经抗原活化的RBL,加入10-8和10-6mol/L地塞米松后,其IL-4表达量分别降至对照的28.7%和12.0%,加入10-8和10-6mol/L氢化可的松后,其IL-4表达量分别降至对照的52.1%和11.5%.[HTH]结论糖皮质激素对于活化RBL表达IL-4具有极大的抑制作用,提示糖皮质激素在临床上治疗哮喘的作用与其抑制肥大细胞表达IL-4存在一定关系.
作者：张继成；吴健民；张才成；吕文利 刊期： 2007年第02期
目的 探讨高浓度氧暴露对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1(ND1)表达的影响.方法 早产SD新生大鼠生后1 d随机分为高氧组和空气组,高氧组持续暴露于≥85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中.分别取两组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14 d肺组织标本,采用免疫组织化学和Western blot 方法检测ND1蛋白的表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ND1 mRNA的表达.结果 ①高氧组和空气组各时间点均有ND1蛋白表达;与空气组相比,高氧组在1、4和7 d ND1 蛋白表达增高,随后其表达下降.②与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7 d ND1 mRNA表达显著增高(P＜0.05),其后ND1 mRNA表达逐渐下降,10 d和14 d时低于空气组,但两者相比差异无显著性意义(P＞0.05).③ ND1蛋白的表达变化趋势与ND1 mRNA的表达变化趋势一致.结论 高氧导致早产大鼠肺组织ND1表达改变,提示ND1可能参与了高氧肺损伤的病理生理过程.
作者：彭琼玲；常立文；卢红艳；李文斌；蔡成；姜娜 刊期： 2007年第02期
目的 研究外源性基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)抑制剂强力霉素在肺缺血再灌注损伤中的保护作用.方法 建立大鼠肺缺血再灌注模型,通过明胶酶谱法测定肺泡灌洗液(BAL)中明胶酶即MMP-2、MMP-9活性,免疫组化法测定肺组织中MMP-2、MMP-9的分布及含量,考马斯亮蓝比色法测定BAL中总蛋白的含量, 测定肺组织湿干重比值,观察肺组织病理学改变.结果 肺缺血再灌注后,MMP-2、MMP-9分泌及激活有显著提高,应用强力霉素30 mg/(kg·d)后,MMP-2、MMP-9分泌及激活被显著抑制,BAL中总蛋白含量显著降低,肺组织的病理改变显著减轻.结论 强力霉素通过抑制明胶酶的分泌及激活,降低基底膜的降解,减轻肺水肿,达到肺保护作用.
作者：罗海燕；孙宗全；蒋雄刚；冯汉萍；孙图成；陈新忠；冯剑锷；江萍 刊期： 2007年第02期
目的 探讨钙调蛋白激酶Ⅱ特异性抑制剂KN-93抗肥厚心肌室性心律失常发生的机制.方法 雌性新西兰大白兔随机分为4组:假手术组(sham组)、心肌肥厚组(LVH组)、心肌肥厚+KN-93组(KN-93组)、心肌肥厚+KN-92组(KN-92组),每组14只.LVH组、KN-93组及KN-92组通过缩窄腹主动脉制备兔心肌肥厚模型.8周后, 制备兔左室楔形心肌块的灌注模型,同步记录心内、外膜动作电位及跨壁心电图,观察低钾(2 mmol/L)、低镁(0.25 mmol/L)蒂罗德液灌流及慢频率(2 000～4 000 ms)刺激条件下各组早期后除极(EAD)和尖端扭转型室性心动过速(Tdp)的发生率.采用胶原酶消化法分离单个心肌细胞,应用膜片钳技术记录动作电位(AP),观察低钾、低镁蒂罗德液灌流及慢频率(0.25～0.5 Hz)刺激条件下,各组EAD的发生率.结果 在低钾、低镁蒂罗德液灌流及慢频率刺激条件下, 兔左室楔形心肌块水平,sham组、LVH组、KN-92组(0.5 μmol/L)及KN-93组(0.5 μmol/L)EAD的发生率分别为0/10、10/10、9/10和5/10,Tdp的发生率分别为0/10、5/10、4/10和1/10.单个心肌细胞水平,Sham组、LVH组、KN-92组(0.5 μmol/L)及KN-93组(0.5 μmol/L)EAD的发生率分别为0/12、11/12、10/12和5/12.结论 钙调蛋白激酶Ⅱ介导心肌肥厚兔室性心律失常的发生,其主要作用机制是通过增加EAD的发生率,从而触发室性心律失常的发生.
作者：柯俊；张存泰；马业新；刘俊；刘念；阮燕菲；林立 刊期： 2007年第02期
目的 研究大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的培养扩增方法及用肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞(TAA/DC)的免疫学特性.方法 用含重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF)、重组大鼠白细胞介素-4(rrIL-4)和重组大鼠肿瘤坏死因子-α(rrTNF-α)的培养体系将近交系大鼠骨髓细胞诱导扩增为DC;用大鼠卵巢癌细胞的肿瘤细胞裂解物(TAA)致敏未成熟DC,获得TAA/DC;用流式细胞术分析DC、TAA/DC细胞的免疫表型.结果 含rrGM-CSF、rrIL-4和rrTNF-α的培养体系可在体外诱导大鼠骨髓单个核细胞分化为成熟的DC;TAA可促进DC的分化成熟,TAA/DC的细胞免疫表型显著增强.结论 大鼠骨髓细胞可在体外诱导为成熟的DC;负载肿瘤全抗原的DC表达与抗原提呈相关的分子增高,提示其抗原提呈能力增强.
作者：乔宝丽；张震宇；刘晋玮；翟妍 刊期： 2007年第02期
目的 构建小鼠内皮抑制素(endostatin)真核表达质粒,进行分泌性表达,研究其体外生物学活性,以进一步用于肿瘤的基因治疗.方法 人工合成小鼠Igκ轻链信号肽序列,RT-PCR获得小鼠内皮抑制素编码序列,一起克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,对其进行酶切鉴定和序列分析.重组质粒经脂质体介导转染受体细胞BHK-21,ELISA检测细胞培养上清中内皮抑制素的含量.用此上清作用于经bFGF刺激的ECV304内皮细胞和HepG2肝癌细胞,MTT法检测细胞的增殖.结果 经酶切鉴定及DNA测序分析,Igκ信号肽序列及内皮抑制素编码序列成功克隆到目的位点上,其转染细胞上清中可以检测到分泌出的内皮抑制素,含量为(65.5±10.9)ng/106细胞;并且可以抑制ECV304内皮细胞的增殖,抑制率约为29.2%,而对HepG2肝癌细胞增殖没有影响.结论 成功构建了小鼠内皮抑制素真核质粒,其分泌性表达产物可以抑制内皮细胞的增殖,具有较好的生物学活性.
作者：黎培员；林菊生；冯作化；贺宇飞；周鹤俊；田德安 刊期： 2007年第02期
目的 应用腺病毒介导的转基因技术,研究过表达线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)对WKY大鼠主动脉血管平滑肌细胞(rVSMCs)凋亡的影响并探讨其相关的信号通路.方法 体外培养rVSMCs,感染含有Mfn2基因的腺病毒载体(Adv-Mfn2-GFP).通过免疫组化染色显示细胞凋亡的形态学特征;采用琼脂糖凝胶电泳,Cell Death ELISA观察过表达Mfn2基因对细胞凋亡的影响;用Western blot检测感染Mfn2基因后不同时间点的磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)水平的变化.结果 rVSMCs感染Adv-Mfn2-GFP后能有效表达出相应蛋白;过表达Mfn2基因能明显促进rVSMCs凋亡,并抑制ET-1诱导的Akt活化和ERK活化,此作用显示出时间依赖性,且Akt活化受到的抑制更明显.结论 过表达Mfn2基因能明显促进WKY大鼠主动脉血管平滑肌细胞凋亡,其分子机制是抑制Ras信号途径的活化,分子作用靶点可能是Ras-PI3K-Akt信号通路.
作者：刘成；陈莉莉；王剑明；曹文静；陈光慧；郭小梅 刊期： 2007年第02期
目的 探讨褪黑素( melatonin, MT)对谷氨酸(glutamate,Glu)致痫大鼠海马cGMP水平的影响.方法 将健康SD雄性大鼠随机分为A、B、C、D 4组,每组10只,分别为对照组、Glu组、MT+Glu组和Luzidole+MT+Glu组.观察并记录动物行为学及脑电图(EEG)改变,应用放射免疫方法检测各组动物脑内cGMP水平.结果 行为学观察和EEG显示,B组和D组大鼠均出现痫性发作,并出现频发性痫性放电,C组大鼠痫性发作不明显,无频发性痫性放电出现;放射免疫分析结果显示,与A组比较,B、C、D组海马cGMP含量显著升高(均P＜0.05);C组较B组和D组cGMP水平明显降低(P＜0.05).结论 MT对Glu致痫有抑制作用,此作用可能是通过MT受体作用于cGMP实现的.
作者：周厚纶；袁远；卢敏；魏瑛 刊期： 2007年第02期
目的 探讨Survivin基因对卵巢癌细胞紫杉醇(Taxol)敏感性的影响.方法 构建Survivin正义全长真核表达质粒(pcDNA3.1-Survivin),经脂质体包裹转染人卵巢癌细胞A2780,以转染pcDNA3.1空载体的A2780细胞为对照.RT-PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测Survivin mRNA和蛋白质的表达;MTT比色法检测紫杉醇对两组细胞存活率的影响;流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡率.结果 ① RT-PCR和Western blot检测提示转染pcDNA3.1-Survivin组中Survivin mRNA和蛋白质表达明显高于空载体组.② MTT比色法和FACS检测提示转染pcDNA3.1-Survivin组细胞存活率明显高于空载体组,细胞凋亡率明显低于空载体组,差异均有显著性意义(P＜0.05).pcDNA3.1-Survivin转染后的A2780细胞对紫杉醇的敏感性明显降低.结论 卵巢癌对紫杉醇的耐药性可能与Survivin基因表达有关.
作者：马晓黎；邢辉；翁丹卉；宋晓红；卢运萍；马丁 刊期： 2007年第02期
目的 研究闹羊花毒素Ⅲ对豚鼠心室乳头肌收缩力和心室肌细胞钠电流、钙电流和钠-钙交换电流的作用.方法 采用离体器官实验法记录心室乳头肌收缩力;采用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞钠电流、钙电流和钠-钙交换电流.结果 ①闹羊花毒素Ⅲ(0.1、0.3、1.0 μmol/L)对心室乳头肌有浓度依赖性的正性肌力作用,乳头肌收缩力分别增加(27.0±8.2)%、(56.0±16.6)%和(102.0±38.4)%( n=6,均 P＜0.01 ),更高浓度时(3.0 μmol/L)则诱发节律异常.3.0 μmol/L河豚毒素可对抗这些作用.②在钳制电压为+50 mV 时,1.0 μmol/L闹羊花毒素Ⅲ使钠-钙交换电流由(123±30)pA 增至(232±49)pA( n=5,P＜0.01 ).③ 1.0 μmol/L闹羊花毒素Ⅲ抑制钠电流,使钠电流峰值由(3.58±0.86)nA降至(1.30±0.38)nA( n=5,P＜0.01 ),而对钙电流无影响[给药前为(852±260)pA,给药后为(818±226)pA,n=5,P＞0.05].结论 闹羊花毒素Ⅲ的正性肌力作用机制主要是促进钠-钙交换电流,而不是增加钙电流.
作者：刘慧；胡壮丽；张德勇；胡燕；秦国伟；金满文 刊期： 2007年第02期
目的 将促黏附分子RGD肽(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)固定于胶原材料,检测其对细胞黏附性的影响.方法 实验分4组(n=12):耦联组采用化学交联剂Sulfo-LC-SPDP,使含RGD肽的GRGDSPC肽与胶原支架结合;混合组将GRGDSPC肽与胶原直接混合后涂层;以及单纯胶原涂层组和未涂层孔板组.采用X射线光电子能谱法(XPS)对材料作表面分析.MTT试验检测种植于材料表面的大鼠肌成纤维细胞的细胞黏附效率.结果 耦联组的XPS谱图检测到硫元素,证明已将RGD肽化学结合于胶原材料表面.MTT法检测显示,耦联组RGD肽固定胶原后细胞黏附效率明显高于其它各组,且呈时间和肽浓度依赖性.结论 RGD肽对胶原的表面修饰,可提高生物源性支架的细胞黏附性,促进组织工程心脏瓣膜构建.
作者：史嘉玮；董念国；孙宗全 刊期： 2007年第02期
目的 研究5-氟尿嘧啶(5-FU)纳米磁性颗粒在荷瘤裸鼠体内的靶向性分布.方法 制备荷瘤小鼠异位肝癌模型(荷瘤鼠),随机分3组,每组8只.A组:5-FU原液治疗组;B组:单纯5-FU纳米磁性颗粒治疗组,无磁场应用;C组:实验组,在肿瘤内部建立300高斯(GS)的磁场,药物应用同B组.采用高效液相色谱(HPLC)分析法检测离体组织中5-FU药物浓度,原子吸收光谱法(AAS)测定荷瘤鼠组织中的铁浓度,磁共振成像(MRI)检测5-FU纳米磁性颗粒在荷瘤鼠体内组织分布.结果 在肿瘤组织内建立内磁场后,尾静脉注射5-FU纳米磁性颗粒(250 mg/kg),与无磁场的相同药物治疗组及单纯5-FU对照组比较,HPLC检测荷瘤鼠的肿瘤组织中5-FU浓度显著增加(P＜0.01),AAS检测肿瘤组织中铁浓度也显著增加,肿瘤组织MRI的T2加权像发生变化,呈现低信号.结论 在磁场引导下,5-FU纳米磁性颗粒中磁性载体和所载药物在荷瘤鼠体内具有肿瘤靶向性分布.
作者：郑建伟；徐戎；唐滔；王剑明；曾繁典；邹声泉 刊期： 2007年第02期
目的 深入研究淫羊藿苷(icariin,ICA)的壮阳作用机制.方法 采用125I 放射免疫测定法,以西地那非(sildenafil,Sild)为阳性对照,观察ICA对家兔阴茎海绵体平滑肌组织中cGMP和cAMP水平的影响.结果 ICA 能直接升高cGMP 的含量,但对cAMP含量无显著影响.在cGMP激动剂硝普钠(SNP)存在下,ICA和Sild均能浓度依赖性地提高海绵体组织中cGMP浓度(P＜0.01),促进cGMP生成的EC50分别为4.62和0.42 μmol/L.同样的条件下,ICA和Sild 对cAMP 的浓度均无显著影响(P＞0.05).在cAMP激动剂前列腺素E1(PGE1)刺激下,ICA 和Sild 也能够提高海绵体组织中cAMP的浓度(P＜0.01),表现出浓度依赖性,促进cAMP生成的EC50分别为2.16、0.98 μmol/L.结论 ICA的壮阳作用机制与影响NO-cGMP信号通路有关,主要通过提高阴茎海绵体平滑肌中cGMP的浓度,从而舒张海绵体,增强阴茎勃起功能.
作者：蒋兆健；胡本容；付琴；汤强；向继洲；刘菊妍 刊期： 2007年第02期
目的 探讨肺耐药蛋白(lung resistance protein, LRP)与人卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP顺铂耐药表型的关系及其分子机制.方法 应用LipofectamineTM介导反义寡核苷酸(AsODN)体外转染人卵巢癌细胞;采用RT-PCR和Western blot法检测转染前后细胞中LRP基因的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测顺铂对转染前后细胞的杀伤效应;通过高效液相色谱仪(HPLC)检测经LRP AsODN或抗LRP单克隆抗体作用后,顺铂在A2780/DDP细胞质、核中的吸收和排泄情况.结果 与非耐药亲本细胞A2780相比,A2780/DDP细胞内LRP表达明显增高.LRP AsODN能明显降低A2780/DDP细胞中LRP表达水平,逆转其顺铂耐药表型.经LRP AsODN或抗-LRP单克隆抗体作用后,A2780/DDP细胞中顺铂含量明显增高,尤以胞核中的含量上升为甚,而其从核中的排泄受到显著性抑制.结论 LRP可能参与介导人卵巢癌细胞顺铂耐药表型的产生,并可能与顺铂在卵巢癌细胞胞质囊泡以及细胞核质交换中的代谢过程密切相关.
作者：王薇；鲍丽萍；邢辉；杨晓葵；翁丹惠；田训；司马妮；王世宣；卢运萍；马丁 刊期： 2007年第02期
目的 研究表面活性蛋白B(SP-B)、甲状腺转录因子1(TTF-1)在新生儿肺透明膜病中的表达与分布,并分析SP-B基因结构变化,探讨SP-B在肺透明膜病中的作用.方法 回顾性研究28例新生儿肺透明膜病尸检病例,应用免疫组织化学方法检测SP-B、TTF-1在肺泡Ⅱ型上皮细胞中的表达;通过PCR-SSCP方法检测SP-B基因第4外显子是否有突变.结果 免疫组织化学染色显示SP-B、TTF-1表达显著减少,PCR-SSCP结果未见SP-B第4外显子突变.结论 新生儿肺透明膜病与肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-B表达减少有关,SP-B下调可能与TTF-1低表达相关.
作者：李敏才；时燕；李娜萍；吴人亮；王曦 刊期： 2007年第02期
目的 为终揭示大鼠背根神经节神经元上天然瞬时外向钾通道的结构与功能调节提供依据.方法 采用双极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2电流,用全细胞膜片钳技术记录大鼠背根神经节神经元上瞬间外向钾电流(IA),并对二者进行动力学特征的比较.结果 背根神经节神经元上IA和Kv4.2通道电流①均具有明显的A型电流特征;②半数大激活电位分别为(-29.5±3.1) mV和(-3.9±1.0) mV;③半数大失活电位分别为(-78.5±3.4) mV和(-48.5±0.6) mV;④失活后再激活恢复时间常数(τ)分别为(32.0±4.8) ms和(71.4±13.2) ms.结论 Kv4.2通道电流可能是背根神经节神经元上IA电流的主要成分, 但不是唯一成分.
作者：聂辉；张玉芹；李享元；余文静；罗加烈；胡霞敏；李之望 刊期： 2007年第02期
目的 探讨血管内皮细胞衰老与细胞生物学特征变化的关系.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,通过传代形成细胞的衰老模型.光镜下观察各代细胞的形态结构;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞内自发荧光产物的变化;线粒体膜电位特异染色法检测线粒体膜电位的演变.结果 随着细胞传代次数的增加,血管内皮细胞结构逐步退化,细胞分裂减缓,细胞周期趋向停滞于G0/G1期.处于G0/G1期的细胞由第2次传代细胞的74.17%增加至第8次传代细胞的88.80%.细胞自发荧光有显著性增加,线粒体膜电位则有显著性降低.结论 在血管内皮细胞复制性衰老过程中,伴随着细胞形态退化,细胞周期分布异常,细胞内线粒体功能降低,脂质过氧化反应增强.
作者：赵海梅；杨彬；成蓓 刊期： 2007年第02期
目的 检测人卵和胚胎中线粒体基因组的表达,探讨线粒体基因表达水平与卵母细胞发育潜能的关系.方法 收集临床常规体外授精(IVF)和单精子卵胞浆内注射(ICSI)不受精的成熟卵母细胞以及不适合移植和冷冻保存的胚胎,单个细胞裂解液制备单个卵母细胞或胚胎总RNA,半定量逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)检测线粒体DNA(mtDNA)编码的5个呼吸链蛋白基因的mRNA含量.结果 在所有未受精人卵和胚胎中都检测到了线粒体5种基因的mRNA;未受精人卵ND2、ND5、COⅡ、Cytb、ATP酶6的mRNA含量分别为:(0.38±0.16)、(0.75±0.31)、(0.49±0.22)、(0.74±0.30)、(0.53±0.24),明显低于胚胎中相应5种基因mRNA的含量,其分别为(2.16±0.41)、(3.40±0.53)、(2.40±0.40)、(3.26±0.46)、(2.32±0.42),与胚胎的mRNA含量相比,均P＜0.01;三原核胚胎和发育阻滞胚胎的5种基因mRNA水平差异没有显著性意义.结论 线粒体基因表达下降可能参与卵母细胞不受精的机制,并与卵母细胞的发育潜能有关.
作者：黄睿；李涛；黄敏珍；张敏芳；庄广伦 刊期： 2007年第02期
目的 研究Bmi-1和Mel-18基因在人急性髓系白血病细胞株HL-60凋亡过程中的表达.方法 将HL-60细胞用Proteasome抑制剂MG-132进行处理后,采用Real-Time RT-PCR法检测不同时间点的Bmi-1和Mel-18的表达水平,用流式细胞仪检测细胞凋亡状况,同时共聚焦显微镜观察细胞内NF-κB活性.结果 MG-132处理前HL-60细胞Mel-18表达水平很低,而Bmi-1表达水平较高;处理后Mel-18表达水平未见明显变化,而Bmi-1表达水平明显下降,细胞凋亡比例增加,同时观察到HL-60细胞内NF-κB活性明显抑制.结论 MG-132抑制NF-κB活性的过程中很可能通过下调Bmi-1的表达,诱导了HL-60细胞凋亡.
作者：崔睿；王萍；黄士昂 刊期： 2007年第02期
目的 探讨非血缘关系异基因造血干细胞移植(URD-SCT)的疗效和相关并发症.方法 22例白血病患者接受URD-SCT治疗.预处理方案:所有患者均采用马利兰联合环磷酰胺(BUCY2)或改良BUCY2预处理方案.移植物抗宿主病(GVHD)预防:22例均采用酶酚酸酯(MMF)+环孢素A(CsA)+短程甲氨蝶呤(MTX)方案,其中,4例用猪抗淋巴细胞球蛋白(ALG),16例于移植0 d和移植后4 d使用赛尼哌(CD25单抗),2例同时用ALG和CD25单抗.供者细胞回输:输注有核细胞中位数为4.5×108/kg,CD34+细胞中位数为4.3×106/kg.结果 1例早期死亡不能评估,1例未植活,20例经血型、染色体及DNA多态性检测证实植活.急性Ⅱ～Ⅳ度GVHD 8例;慢性GVHD 8例:局限性3例,广泛性5例.感染:移植后100 d内感染者17例,病原学确诊为细菌感染3例,真菌感染2例,巨细胞病毒(CMV)感染6例.存活情况:100 d内死亡5例,100 d后死亡5例,其余患者无病存活.结论 进一步降低移植相关并发症已成为URD-SCT需解决的首要问题.对无血缘供者的高危白血病患者,在严格控制移植适应证情况下,URD-SCT仍是治疗的重要手段之一.
作者：夏凌辉；邹萍；游泳；黎纬明；张纯；方峻；刘芳；宋善俊 刊期： 2007年第02期
目的 对河南省汉族群体的6个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因座等位基因频率进行研究,获得河南汉族群体D19S253、D14S306、D18S535、D11S2368、D12S391、D4S2639基因座的群体遗传学数据.方法 对133名无血缘关系河南汉族个体的EDTA抗凝血样用酚-氯仿法提取DNA,应用多重PCR扩增技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳对D19S253、D14S306、D18S535、D11S2368、D12S391、D4S2639 6个基因座在河南地区汉族人群中的基因型分布进行分析.结果 6个基因座的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡,各基因座的观察杂合度分别为0.764、0.854、0.844、0.921、0.813、0.807,6个位点的累积个体识别率为0.999 999 88,累计非父排除率为0.999 31,累计个体匹配率为1.16×10-7.结论 6个基因座在河南汉族群体中具有较高的非父排除率和个体识别率,在法医学和群体遗传学研究中有一定的应用价值.
作者：陈辉；郑红；连建华；宋国英；李晓雯；张钦宪 刊期： 2007年第02期
目的 研究依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其对脑出血后脑组织损害的保护作用.方法 36只SD大鼠随机分为依达拉奉组、脑出血组和假手术组,每组12只.用尾状核注射自体血法建立脑出血模型;检测丙二醛(MDA)含量,以TUNEL法及免疫组化法检测神经细胞凋亡数及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 出血组脑组织MDA含量、细胞凋亡数和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显高于假手术组;与出血组相比,依达拉奉组MDA含量、细胞凋亡数与Bax蛋白表达水平均下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增高.结论 依达拉奉可抑制出血后神经细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关.
作者：陈吉相；季艳梅；孙圣刚；徐芳 刊期： 2007年第02期
目的 快速纯化tau蛋白,制备tau 蛋白的多克隆抗体.方法 依次使用差速离心、热失活、离子交换层析的方法纯化体外重组的人tau蛋白;用此纯化的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,用Western blot检测组织来源的样品,确定所制备抗体的特异性和效价.结果 采用上述方法成功获得人类全长tau蛋白--tau40;同时,所制备的tau蛋白多克隆抗体效价高,特异性好.结论 本方法所获得的tau抗体效价高,特异性好,可以用于进一步的科学研究.
作者：王群；胡茂琼；张蕲；张永杰；徐雅飞；王建枝 刊期： 2007年第02期
目的 建立组织中释放组胺的检测方法.方法 采用邻苯二甲醛(OPA)对组织中释放的组胺(HA)进行衍生,对衍生物进行激发与发射波长扫描.采用Na3PO4沉淀组织液中的干扰离子.结果 组胺-邻苯二甲醛衍生物的大激发波长和发射波长分别为347 nm和442 nm,Na3PO4能够有效地消除Ca2+和Mg2+对荧光的淬灭作用.该法测定组胺的工作曲线回归方程为F=1.584C+40.392,相关系数r=0.999 5,线性范围为9.01×10-9～9.01×10-7 mol/L,检出限为4.51×10-9 mol/L.高、中、低浓度组胺的回收率为91.9%～115.8%.结论 该方法可用于检测组织中释放的组胺,无须提取,操作简便、快捷,效果可靠.
作者：何功浩；周四元；胡静；孟静茹；王慧；罗晓星 刊期： 2007年第02期
目的 观察在大鼠肾病综合征模型中使用3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂洛伐他汀(Lovastatin)治疗对肝脏低密度脂蛋白(LDL)受体表达的影响,探讨他汀类药治疗肾病综合征高脂血症的机制.方法 大鼠2次尾静脉注射阿霉素建立肾病综合征大鼠模型;采用灌胃法给予大鼠洛伐他汀治疗2周.采用Western blot和RT-PCR技术分别检测LDL受体蛋白和其mRNA在肝脏的表达,同时检测大鼠相关血生化指标.结果 肾病综合征大鼠洛伐他汀治疗2周后,血清总胆固醇、LDL胆固醇和三酰甘油以及尿蛋白均显著降低(均P＜0.05),血清白蛋白显著升高(P＜0.05),血肌酐在各组间差异无显著性意义(P＞0.05);肝脏LDL受体蛋白较肾病综合征组显著增加(P＜0.01);肝脏LDL受体mRNA水平在各组间差异无显著性意义.结论 肾病综合征大鼠经洛伐他汀治疗后,其肝脏LDL受体缺乏得到明显改善,伴随的高脂血症也得到明显改善.
作者：魏立新；邹和群；詹林达 刊期： 2007年第02期
目的 研究丙酮酸乙酯(EP)对缺血/再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡的可能机制.方法 应用Langendorff主动脉逆行灌流的体外大鼠缺血/再灌注心脏模型,24只雄性大鼠随机分为3组(每组各8只):对照组,K-H液持续灌流120 min;缺血/再灌注组,平衡灌流30 min,全心停灌30 min,再灌60 min;EP组,实验程序与缺血/再灌注组相同,平衡15 min后和再灌注期间灌流使用含2 mmol/L EP的K-H液.检测心肌丙二醛(MDA)含量,分别以缺口末端标记法(TUNEL法)及免疫组化法检测心肌细胞凋亡指数(AI)及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 缺血/再灌注组MDA含量,AI和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显高于对照组(均P＜0.05);与缺血/再灌注组比较,EP组MDA含量,AI与Bax蛋白表达水平均下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增高(均P＜0.05).结论 EP可抑制缺血/再灌注后心肌细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关.
作者：郭家龙；张凯伦；蒋雄刚；夏家红；孙宗全 刊期： 2007年第02期
