高玲；陈肖华；毛秉智
目的:构建用于筛选奇异变形菌的特异序列的基因组文库,并从中筛选变形杆菌特异的标识序列.方法:提取奇异变形菌的基因组DNA,用Sau3AI部分酶切,回收酶切产物,然后与BamHⅠ酶切的pUC19质粒连接,转化JM109,构建奇异变形菌的基因组文库.随机挑取抗性克隆,用位于质粒上的引物进行扩增,确定插入片段的大小及分布情况.DNA测序确定部分克隆中插入的序列,根据序列设计引物,分析这些序列在奇异变形菌临床分离株中的分布,验证序列的特异性.结果:成功构建了奇异变形菌的基因组文库,库容量达到1.1×105 CFU.阳性克隆的比例为95%,插入片段大小主要分布在200~500 bp的范围.对其中14个克隆进行了序列测定,其中5个片段与已知序列有一定的同源性,另外9个与已知序列没有同源性,特异性分析发现了几个较好的标识序列.结论:成功构建了奇异变形菌的基因组文库,利用该文库发现了奇异变形菌特异的序列.
作者：赵瑾；陈泽良；王玉飞；乔凤；杜昕颖；张伶；黄留玉 刊期： 2008年第02期
电磁辐射具有潜在的健康危害.高通量基因和蛋白表达分析技术的应用,将为电磁辐射生物学效应及其机制研究提供分子水平的依据和线索.本文就基因芯片技术和比较蛋白质组学在微波、电磁场等电磁辐射领域中的应用及其研究进展进行综述.
作者：陈浩宇；王水明；彭瑞云 刊期： 2008年第02期
血管生成素(angiogenin,ANG)是一种重要的血管生成因子,属于RNase超家族的一员.它的立体结构包含3个功能元件:RNase活性中心、细胞表面受体结合位点和核定位序列.ANG能有效地促进血管新生,并参与调控其他血管生成因子.它还具有RNase活性,故有抑制蛋白合成等作用.ANG促血管生成途径包括:经典的细胞信号转导途径和核转位途径.ANG参与多种生物学过程,特别是肿瘤的增殖与血管新生.
作者：黄欣；王金凤；徐东刚 刊期： 2008年第02期
目的:构建pET-32a(+)-PA重组质粒,实现融合蛋白Trx-PA在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中的表达,并获得有生物学活性的PA.方法:采用PCR的方法扩增PA的编码序列,并且与pET-32a(+)载体的Trx编码区融合产生pET-32a(+)-PA重组质粒,将重组质粒转化至感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达pET-32a(+)-PA,通过SDS-PAGE和Western印迹进行分析.利用Ni2+金属亲和层析纯化表达产物,通过梯度透析进行复性.通过蛋白酶降解和细胞毒性实验分析Trx-PA的生物学活性.结果:成功构建pET-32a(+)-PA重组质粒,并纯化了Trx-PA融合蛋白.SDS-PAGE分析表明融合蛋白相对分子质量大小正确,经纯化复性后,蛋白纯度达到76%.Trx-PA在体内和体外均能被弗林蛋白酶(furin酶)降解.Trx-PA的正确降解是致死因子(lethal factor,LF)进入小鼠巨噬细胞Raw264.7内并产生细胞毒性的基础.结论:重组Trx-PA融合蛋白能在E.coli BL21(DE3)中有效表达,并表现出生物学活性.
作者：李玉霞；李伟东；凌焱；胡伟；毛赟赟；周围；张京生；梁龙；陈惠鹏 刊期： 2008年第02期
目的:构建含有海肾萤光素酶(Renilla luciferase, R.luc)报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子,为探讨病毒基因组中保守序列和元件在复制和翻译调控机制中的作用提供新的手段.方法:利用定点诱变PCR技术构建prM-E基因缺失的登革4型病毒亚基因组复制子(DENRP),用顺式水解酶元件(cis-acting hydrolase element,CHYSEL)技术将R.luc报告基因插入到DENRP缺失的结构基因区,构建含有R.luc报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP).将构建的复制子线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光、RT-PCR和R.luc检测技术对复制子进行鉴定.结果:所构建的prM-E基因缺失的复制子和含有海肾萤光素酶报告基因的复制子,均可在BHK-21细胞中自主复制并稳定表达病毒特异蛋白.DEN-R.luc2A-RP可持续表达外源R.luc报告基因21 d,在转染后24~96 h R.luc荧光信号呈线性增强.在该区间进行实时检测可显示复制子复制和翻译水平的变化.结论:获得了两株可在BHK-21细胞中稳定表达的复制子,为进一步研究登革4型病毒复制和翻译机制奠定了基础.
作者：于学东；秦成峰；姜涛；陈水平；邓永强；刘然；赵慧；李晓峰；朱武洋；于曼；秦鄂德 刊期： 2008年第02期
目的:通过观察山莨菪碱(654-2)对激活的血管内皮细胞(VEC)中谷胱甘肽(GSH)含量、核因子-êB(NF-êB)活性和细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响,探讨其对VEC损伤的保护机制.方法:建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外培养体系,经TNF-á刺激和合并应用654-2干预HUVEC后,采用荧光分光光度计法测定HUVEC胞内GSH含量,凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测NF-êB活性和应用免疫组化方法检测HUVEC的ICAM-1表达.结果:HUVEC在TNF-á刺激后GSH含量显著降低(P<0.01),于3 h达低谷;NF-êB的活性显著增高(P<0.01),峰值在刺激后6 h;ICAM-1表达显著增强(P<0.01),并于12 h达峰值.TNF-á刺激并654-2干预后,相应时相点的GSH含量显著降低,但较单纯TNF-á刺激组显著增高(P<0.05),而NF-êB的活性、ICAM-1表达强度较单纯TNF-á刺激显著降低(P<0.05).结论: 654-2通过抑制TNF-á对HUVEC刺激所导致GSH水平的降低,减少了NF-êB活化核易位所启动ICAM-1基因高效表达,这可能是其防治全身炎症反应综合征/脓毒症介导MODS发生的作用环节.
作者：孙杰；郭振辉；赖添顺；唐柚青；苏磊；洪新；毛宝龄；钱桂生 刊期： 2008年第02期
目的:建立测定大鼠全血4-二甲氨基苯酚(4-dimethylaminophenol,4-DMAP)的液相色谱/质谱联用法(LC-MS).方法:全血样品经乙腈蛋白沉淀后,用丹磺酰氯衍生化,LC-MS法测定其血药浓度.以乙腈-0.1%甲酸水溶液(70/30,V/V)为流动相, 用Venusil XBP-C18柱(50 mm×2.1 mm,5 ìm)分离,通过电喷雾电离源(ESI)选择性离子检测.检测离子为m/z:370.8(4-DMAP衍生物),m/z:373(内标衍生物).对Wistar大鼠(n=5),于肌注4-DMAP(15 mg/kg)后进行了血药浓度测定.结果:4-DMAP在0.02~5 ìg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9987),批内和批间精密度RSD均小于10%.结论:本法操作简单、灵敏、准确,可用于4-DMAP的临床血药浓度测定和药代动力学研究.
作者：徐丽丽；肖琳琳；阮金秀 刊期： 2008年第02期
化疗是骨科常见肿瘤治疗中的一种主要治疗手段.由于药物对敏感肿瘤细胞的杀伤效果主要取决于药物浓度和有效接触时间,因此设法维持药物在肿瘤病灶局部尽可能高浓度、长时间的存在是提高局部治疗效果的关键[1].应用经皮穿刺股动脉插管(Seldinger式)配合皮肤小切口或外科手术直接将导管插入动脉埋置化疗泵(植入式药物输注装置),永久性局部灌注化疗通道即被建立[2],可重复进行化疗药物灌注,能对肿瘤实施较为规范的动脉灌注化疗,是一种积极有效的方法.
作者：曾丽蓉；朱家凌；姜宁；吴佳伟；石卫青；李鼎锋 刊期： 2008年第02期
小肠型脂肪酸结合蛋白(FABP2)基因定位于人染色体4q28～q31,特异地表达于小肠上皮吸收细胞,与食物中长链脂肪酸(LCFA)的吸收、靶向运输及代谢密切相关.FABP2基因第2外显子54位点存在单核苷酸多态性,即Ala54Thr.近年研究发现,突变型54TFABP2与血脂障碍以及代谢综合征的其他特征相关.本文拟从FABP2基因的结构、功能、基因表达调控及其多态性与脂代谢关系作一综述.
作者：常晓彤；侯丽娟；王振辉 刊期： 2008年第02期
目的:获得重组乳腺生长抑制因子(mammastatin)表位抗原蛋白,制备抗血清,以测定正常人及乳腺癌患者血清中mammastatin存在水平.方法:用BioSun生物软件对 mammastatin氨基酸序列进行分析,确定表位序列,PCR逐步延伸法合成表位基因,构建pBVIL1-mammastatin和pBVIL6-mammastatin表达质粒,转化于大肠杆菌HB101中进行表达,经纯化后免疫大耳白兔,制备抗血清,用双抗体夹心法检测乳腺癌及正常人的血清.结果:重组 mammastatin抗原在大肠杆菌中获得了高效表达,并获得了兔多抗血清.用双抗体夹心法检测,显示95例正常对照血清mammastatin表达水平显著高于95例乳腺癌(平均D值,正常组0.261,乳腺癌组0.135,Wilcoxon秩和检验P=0.000<0.01,差异显著).结论:正常人血清中乳腺生长抑制因子mammastatin 存在水平显著高于乳腺癌患者.
作者：黄焰；宋晓国；张贺秋；王国华；王刚乐；官奇；尉承泽 刊期： 2008年第02期
目的:对比应用胰岛素泵与多次皮下注射胰岛素对糖尿病足患者的疗效及安全性.方法:糖尿病足患者126例,随机分为CSII组和MSII组,CSII组给予胰岛素泵持续皮下注射优泌林R加餐前大剂量;MSII组采用三餐前皮下注射优泌林R及睡前注射优泌林N.对比治疗1个月两组患者空腹血糖、餐后2 h血糖值、血糖达标时间、胰岛素用量、低血糖次数及糖尿病足治疗效果.结果:治疗1个月后,两种方法均可使血糖达标,CSII组血糖达标时间、胰岛素用量、低血糖发生次数与MSII组比较,差异有统计学意义;CSII组糖尿病足总有效率与MSII组比较差异有统计学意义.结论:应用胰岛素泵治疗糖尿病足患者,血糖控制更迅速、安全、稳定,且可迅速地促进创面愈合.
作者：陆斌；肖红珍；俞芳；项岫秀；李伟娟；张慧芹；刘阁玲 刊期： 2008年第02期
目的:构建白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)基因真核表达载体,瞬时转染OVCAR-3卵巢癌细胞,为进一步探讨其与肿瘤发生发展关系奠定基础.方法:采用RT-PCR法自健康志愿者外周血单个核细胞扩增IL-8基因,构建pcDNA3.1(+)/IL-8重组质粒;脂质体介导将外源基因转入OVCAR-3卵巢癌细胞,半定量RT-PCR、Western印迹及ELISA法鉴定其mRNA及蛋白瞬时表达后,MTT法检测细胞转染前后生长增殖特性的改变,FCM检测细胞周期的变化.结果:重组质粒双酶切电泳结果显示,相应位置(300 bp,5 400 bp)可见2条清晰特异的DNA条带;DNA测序结果进一步显示,重组质粒中插入的基因片段全长 300 bp,编码序列与GenBank报道的基因序列相符,阅读框保持不变;RT-PCR、Western 印迹检测及ELISA检测结果显示,转染后OVCAR-3细胞IL-8 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);MTT检测结果显示,IL-8转染细胞组转染3 d后的光密度值(D值)显著高于未转染细胞组(P<0.05);FCM分析结果显示,OVCAR-3细胞转染IL-8基因后进入S期的细胞比例显著增高,增殖指数也相应上升,与未转染及空质粒转染组细胞相比,差异显著(P<0.05).结论:IL-8基因真核表达载体成功构建并瞬时转染OVCAR-3卵巢癌细胞;IL-8可以自分泌方式促进卵巢癌OVCAR-3细胞生长增殖.
作者：李万胜；胡洁；赵娟；魏林；程建新 刊期： 2008年第02期
目的:制备盐酸表阿霉素脂质体,建立HPLC含量测定方法并优选包封率测定方法.方法:采用薄膜分散-pH梯度法制备盐酸表阿霉素脂质体;采用HPLC测定药物含量;采用葡聚糖凝胶色谱、超滤及透析3种分离方法测定脂质体的包封率.结果:制备的表阿霉素脂质体粒径较小、分布较窄;3种方法测得盐酸表阿霉素脂质体的包封率分别为96.1%,98.4%,92.9%;结论:薄膜分散-pH梯度法适于制备盐酸表阿霉素脂质体,含量测定方法可靠.超滤法可以准确、快速地测定脂质体包封率.
作者：吴燕；吴诚；康艳敏；梅兴国 刊期： 2008年第02期
氧化应激是机体受到有害因素作用后的共同反应机制,许多疾病的发生与机体的氧化应激有关.吸烟是更为复杂的氧化应激因素,烟雾中的氧自由基和其他氧化剂的浓度较高,种类繁多,因此,对生物大分子物质如核酸、脂质和蛋白质的损伤更为严重.内皮细胞是血管内皮的主要组成部分,在维持血管功能方面发挥重要作用,许多心血管常见疾病的发生,本质上是血管内皮受损所致的内皮功能异常性疾病,其中吸烟所产生的氧自由基是重要的损伤因素之一,因此,研究吸烟对内皮细胞的影响具有重要意义.本文综述吸烟介导的氧化应激及其对心血管系统和内皮细胞的影响.
作者：李慧颖；潘秀颉；朱茂祥 刊期： 2008年第02期
STAT3基因是近年来发现的凋亡抑制基因,具有抑制凋亡和参与细胞周期调控的双重功能.研究报道证明,在基础和临床实验中STAT3基因与放、化疗的敏感性有着密切的关系.因而目前研究关注于以STAT3 基因为靶点的基因治疗,尤其是RNA干扰技术抑制STAT3 基因的表达,增加肿瘤的自发性凋亡和放、化疗诱导的凋亡,抑制肿瘤生长,提高肿瘤对放、化疗的敏感性.
作者：高玲；陈肖华；毛秉智 刊期： 2008年第02期
目的:为适应恶性肿瘤免疫治疗中多基因联合应用的需要,在真核表达载体pVAX1的基础上,利用内部核糖体进入位点IRES序列,构建双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES,以增强DNA疫苗的免疫疗效.方法:通过PCR扩增获得目的基因IRES并定向克隆到pVAX1载体中,然后在IRES序列的上下游分别插入红色荧光蛋白基因DsRed1和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,瞬时转染人胚胎肾细胞293T,通过流式细胞术和免疫荧光验证基因表达.结果:pVAX1-IRES经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致,DsRed1基因和EGFP基因在pVAX1-IRES载体中,不仅可以分别表达,而且可以同时表达,显示该双顺反子真核表达载体构建成功.结论:pVAX1-IRES双顺反子表达载体的构建,为基因联合表达和恶性肿瘤的免疫治疗作了必要准备.
作者：阎瑾琦；刘国栋；刘荷中；贾锐；王浩；刘宁；张亮；于继云 刊期： 2008年第02期
目的:观察尿激酶治疗后IgA肾病毛细血管密度的变化.方法:观察不同病理程度下,IgA肾病毛细血管密度的变化,同时比较尿激酶治疗前后,10例重复肾活检IgA肾病患者的毛细血管密度变化.结果:①随着病变的加重,IgA肾病肾小球毛细血管袢密度、肾小管周围毛细血管密度均随之减小.② 10例IgA肾病应用尿激酶治疗后,重复肾活检显示,治疗前后肾小球毛细血管袢密度(/肾小球)分别为:36.5±8.7和45.4±9.9,两者相比具有统计学差异(P<0.05),肾小管周围毛细血管密度(/肾小管)明显升高(治疗前0.9±0.2 vs治疗后1.4±0.3,P<0.05).结论:尿激酶治疗可能是通过增加肾小球和肾间质毛细血管的密度而延缓IgA肾病的进展.
作者：邱强；孙雪峰；陈香美；洪权 刊期： 2008年第02期
目的:构建贝氏考克斯体毒力与毒力相关蛋白芯片.方法:根据贝氏考克斯体全基因组序列,筛选出约160个编码毒力及毒力相关蛋白的基因,采用PCR扩增基因片段,将获得的基因片段与pET32a表达载体连接,然后将该重组质粒转化大肠杆菌并使目的基因表达,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达的目的重组蛋白.将纯化的重组蛋白点在醛基化玻片上制备蛋白芯片.结果:由贝氏考克斯体104个重组蛋白构建毒力与毒力相关蛋白芯片,通过荧光扫描仪分析蛋白芯片与贝氏考克斯体感染的小鼠血清反应,发现10个重组蛋白与该血清反应为强阳性.结论:所制备的毒力与毒力相关蛋白芯片具有贝氏考克斯体特异性,可用于贝氏考克斯体感染患者血清的检测.
作者：王锡乐；温博海；陈梅玲；王君；孙长俭；杨晓 刊期： 2008年第02期
细胞免疫治疗在消除白血病微小残留病和延长治疗后缓解期方面的作用正日益受到人们的重视.过继性回输免疫效应细胞是其中的重要方法之一.从20世纪80年代开始,人们一直在探索新的免疫活性细胞,期望得到更有效的治疗方法.本文综述了过继性细胞免疫治疗白血病的研究进展.
作者：李澜；艾辉胜 刊期： 2008年第02期
目的:观察利用siRNA技术下调人脑胶质母细胞瘤细胞(U251)STAT3表达后对细胞凋亡的影响. 方法:分离培养并间接免疫荧光鉴定大鼠原代星形胶质细胞(NA),用STAT3干涉质粒载体(pSilence2.1-STAT3)及对照载体(pSilence2.1-GFP)转染U251细胞及NA细胞,用Hoechst 33258染色观察凋亡的形态学改变,用Annexin-V试剂盒定量检测凋亡.结果:分离培养了符合实验要求的NA细胞,转染pSilence2.1-STAT3后,U251细胞出现了明显的时间依赖性细胞凋亡,而NA细胞无显著凋亡发生.结论:pSilence2.1-STAT3能诱导U251细胞凋亡,而对正常细胞无显著影响.
作者：李峰生；高玲；董波；张军权；饶亚岚；丛悦；毛秉智；陈肖华 刊期： 2008年第02期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
