刘宝富；王淑芹
目的:在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)E2包膜蛋白,并对其进行初步纯化.用纯化的包膜蛋白检测HCV RNA阳性血清中E2抗体,研究其检测E2抗体的敏感性和特异性.方法:将HCV E2蛋白基因克隆到原核表达载体中,并转化大肠杆菌.用IPTG诱导细菌表达E2蛋白,经离子交换层析纯化蛋白.用纯化的包膜蛋白包被微孔板,经ELISA方法检测HCV RNA阳性血清中的E2抗体.结果:在大肠杆菌表达了相对分子质量为45 000的可溶性E2蛋白,占细菌总蛋白量的21%,纯化后,蛋白纯度为85%.用其检测HCV患者血清171例,E2抗体的检出率为63%.在E2抗体阳性的血清中,部分为抗HCV阴性.结论:E2蛋白的表达及初步纯化的成功,可能用于临床检测.各基因型HCV E2包膜蛋白的抗体之间有交叉反应,在目前的抗HCV诊断试剂中加入可溶性、非融合E2包膜蛋白,可以改善抗HCV诊断试剂的特异性和敏感性.
作者：谢尧；陶其敏 刊期： 1999年第05期
高渗高糖非酮昏迷(hyperosmolar hyperglycemic nonketolic coma, HHNC )是死亡率极高的一种综合征,多见于脱水或接受脱水治疗的病例中.多数病人仅有轻度的非胰岛素依赖性糖尿病,40%的患者无糖尿病史[1].50岁以上患者多见[2],通常死亡率为36%～45%,而由颅脑损伤引起者,死亡率高达75%～100%[3].如认识不足延误治疗,患者可在48 h内死亡[4].我院危重医学科和神经外科1992年1月～1998年5月,共收治接受治疗1周以上的重型颅脑损伤患者317例(GCS 8～3),其中17例合并了高渗高糖非酮昏迷(17/317),死亡8例,报告如下.
作者：朱曦；陈浩辉；傅军；王宇欣 刊期： 1999年第05期
材料与方法:人精液标本6份,总活率大于50%,a级+b级精子≥38%.过氧化物酶甲苯胺蓝法证实白细胞总数小于106 ml-1.1∶2(体积比)加入孵育液,300×g离心15 min,弃上清,重复操作操作3次.调节细胞浓度至20×106个/ml.取24孔板每孔加入0.5 ml,实验组加入L-NAME,终浓度为1 mmol.L-1,37 ℃孵育.不同时间观察精子活动率的变化.孵育结束后Gresis试剂测定上清液中NO的生成.
作者：田溪泉；潘天明；郭应禄 刊期： 1999年第05期
1 临床资料患者,33岁,农民,孕1产0,因停经31+周伴轻微活动后乏力,紫绀加重,血压升高半个月入院.既往月经不规律,7～8 d/2～4个月,末次月经1997年10月初.停经后无早孕反应,一直未觉胎动.6岁时可疑先天性心脏病未诊治.平时不能担任重体力活动.妊娠后在当地诊为法洛四联症,轻微活动后乏力故来我院治疗.患者25岁结婚,未避孕.入院后查体:体温36.8 ℃,脉搏86次/分,呼吸19次/分,血压21.3/13.3 kPa(1 kPa=7.5 mmHg);紫绀;双肺呼吸音粗,未闻及口罗音;心界向左扩大,心率86次/分,心律齐,心音弱,各瓣膜区闻及Ⅲ级收缩期杂音,胸骨左缘第2～4肋间明显;杵状指(趾),下肢浮肿.产科检查:宫高24 cm,腹围94.5 cm,子宫软,无压痛,胎心142次/分.辅助检查:血红蛋白149 g.L-1;尿蛋白(+++);B超提示胎儿相当于21+周.入院诊断:宫内妊娠21+周,妊1产0;妊娠合并法洛四联症;重度妊娠高血压综合征(以下简称妊高征).入院后经心内科会诊,并行超声心动检查,确诊为法洛五联症.
作者：郭英花；魏丽惠 刊期： 1999年第05期
多柔比星(doxorubicin,adriamycin)为蒽环类抗生素,结构类似柔红霉素,属抗肿瘤药.文献[1～4]报道了许多高效液相色谱法,这些方法主要用于测定盐酸多柔比星的含量和主要代谢物.在试图重现这些方法时,我们遇到了一些困难,主要表现在(1)难以重现或重现不稳定;(2)方法复杂、繁琐;(3)组织提取物中有大量不溶物;(4)回收率差;(5)盐酸多柔比星保留时间太短,与内源性物质分不开.为此,本文旨在建立简便可行的方法,用于定量动物体内组织中多柔比星的质量分数.
作者：吕万良；齐宪荣；孙华东；张强；魏树礼 刊期： 1999年第05期
目的:进一步明确维生素D和维生素K与肾结石的关系.方法:健康成年雄性SD大鼠36只随机分成6组,即对照组、单纯成石组、维生素D组、诱石剂+维生素D组、维生素K组和诱石剂+维生素K组,测定肾脏骨桥蛋白(osteopontin, OPN) mRNA的表达量和尿晶体成分的浓度.结果:维生素D和维生素K均可促进肾脏表达OPN mRNA;维生素D可升高尿钙,维生素K则抑制尿草酸的分泌,诱石剂有降低尿镁和柠檬酸的作用.结论:维生素D过多可促进肾结石形成,而维生素K有抑制结石形成的作用.
作者：常连胜；冯陶；姜长林；姜学军；窦长琪；黄有媛；郭应禄 刊期： 1999年第05期
目的:探讨Ca15-3在Paget病鉴别诊断中的价值.方法:对11例阴囊Paget病回顾性地做Ca15-3、EMA、CEA和HMB45免疫组化染色,并以4例Bowen病和1例恶性黑色素瘤做对照.结果:Ca15-3、EMA在Paget病和大、小汗腺及皮脂腺均有较强的表达,4例Bowen病均无Ca15-3表达,但其中2例有EMA表达.CEA在6例(54.5%)Paget病中有表达.HMB45只在恶性黑色素瘤中表达.结论:Ca15-3在Paget细胞的相对特异性表达提示它可作为Paget病与Bowen病鉴别诊断的标志物,其对诊断的敏感性与EMA相同,但特异性高于EMA.同时还说明Paget病的发生可能与汗腺有关.
作者：孔祥田；涂平；李竞贤；曾荔；夏同礼；郭应禄 刊期： 1999年第05期
子宫肉瘤是少见的子宫恶性肿瘤,其组织来源丰富,恶性程度很高,临床表现无明显特异性,早期诊断困难.现对我院9年间收治的20例子宫肉瘤患者进行回顾性分析,探讨早期诊断方法和预后相关因素.
作者：王建六；武晓莹；魏丽惠 刊期： 1999年第05期
目的:通过表面活性物质缺乏的兔肺模型,评估传统通气模式(conventional mechanical ventilation, CMV)与允许性高碳酸血症加佳PEEP(permissive hypercapnia associated with ideal PEEP ventilation, PHY+PEEPi)的通气模式对肺损伤的影响,了解肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNFα)与机械通气引起肺损伤(ventilator-induced lung injury, VILI)的关系.方法:12只成年兔,以反复肺灌洗法制备表面活性物质缺乏兔肺模型.以CMV (C组) 或PHY+PEEPi (P组)通气4 h后,测定通气前、后的支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中TNFα含量和白细胞分类计数,测定肺水量,进行动脉血气分析和病理检查.结果:CMV组表现为明显的低氧血症,BALF中较多的中性粒细胞数,总肺水量及血管外肺水量明显增多,肺内病理改变为较明显透明膜形成及炎性细胞聚集;而PHY+PEEPi组引起较少的上述病理、生理变化.且CMV组BALF中的TNFα含量明显高于PHY+PEEPi组.结论:CMV通气方式较PHY+PEEPi通气方式引起较多炎性细胞因子TNFα释放和较重程度肺损伤,TNFα在机械通气引起的肺损伤中可能起十分重要的作用.
作者：邹军；杨拔贤；张京范；张熙哲 刊期： 1999年第05期
目的:研究免疫治疗用于治疗及预防骨髓移植(bone marrow transplantation, BMT)后的白血病复发.方法:A组为异基因骨髓移植(Allo-BMT)后白血病复发患者10例,接受供者白细胞治疗.B组为自身外周血干细胞移植(autogenous peripheral blood stem cells transplantation, APBSCT)或BMT后共10例患者输注免疫杀伤细胞(cytokine-induced killer, CIK)细胞治疗.结果:A组患者中血液学复发的6例,1例Ph1染色体100%转阴,无病存活至今已超过18个月,4例达暂时缓解;1例未缓解;微小残留及中枢神经系统复发共4例,均完全缓解,其中Ph1染色体全部转阴.B组10例中1例患者带有的白血病融合基因转阴.结论:(1)供者白细胞的输注能使某些BMT后慢性粒细胞性白血病遗传学及血液学复发患者完全缓解.(2)CIK细胞输注是安全的,对某些白血病复发患者的治疗是有效的.
作者：江浩；陆道培；郭乃榄；卢锡京；童春荣；耿彦彪 刊期： 1999年第05期
RNA是分子生物学研究的一个重要组成部分, 不论是cDNA文库的构建、RT-PCR、RNA序列分析、差异显示(mRNA differential display)、代表性差异分析 (representational Difference Analysis, RDA)、抑制性消减杂交(suppression Subtraction Hybridization, SSH)、Northern印迹分析、蛋白质的体外翻译等均依赖于高纯度完整的RNA. 因此, 如何获得高质量的RNA是研究人员关注的问题.1987年Chomczynski等[1]建立了酸-异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法(acid-guanidine-phenol-chloroform, AGPC).该方法较以往的传统方法操作简单,无需特殊的设备,抽提时间缩短至4 h,因而得到广泛的应用.数家公司据此开发出RNA提取试剂盒[2,3].使用试剂盒简单方便,但价格相对昂贵.为探索操作简便、经济实用、快速有效的RNA提取方法,我们分析了大量相关文献资料,进行了多次实验,成功地研制出一种新型的RNA提取试剂,建立了其操作程序,我们称之为RNA快速提取一步法.其性能达到进口试剂盒的水平,但造价低廉、操作简便,特别适用于国内实验室.
作者：梁德勇；徐国恒；崔振中；王晓民；朱丽霞；韩济生 刊期： 1999年第05期
目的:对19例鼻咽部B细胞性恶性淋巴瘤与EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染的相关性进行研究.方法:利用免疫组织化学及原位杂交方法对EBV进行检测,并用免疫组化及原位杂交双染法标记肿瘤细胞,以鉴定EBV阳性的细胞为B淋巴瘤细胞.结果:EBV编码的小mRNA探针(EBER)原位杂交显示,8例原发性鼻咽部B细胞性恶性淋巴瘤中3例绝大多数肿瘤细胞呈阳性表达,1例潜在性膜蛋白1(latent membrane protein 1, LMP-1)阳性.而11例继发性鼻咽部B细胞性恶性淋巴瘤EBER全部为阴性.全部病例进行了LMP-1检测,除1例原发者,全部阴性. 利用EBER-ISH(EBER原位杂交)和免疫组化CD 标记物进行双标记染色证实,EBER和LMP-1阳性细胞为CD 20阳性,CD 45RO阴性.鼻咽部原发性B细胞性恶性淋巴瘤EBV表达4/8,而继发者为0/11.结论:EBV与鼻咽部原发性B细胞恶性淋巴瘤有较高的相关性,而与继发性者无关.
作者：高子芬；Faith C.S.HO；Alex C.L.CHAN；Qian TAO；Ramond LIANG；Gopesh SRIVASTAVA 刊期： 1999年第05期
目的:研究诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)在正常足月妊娠和妊娠高血压综合征孕妇胎盘、脐带中的表达.方法:形态学观察、免疫组织化学、原位杂交、图像分析定量研究,检测iNOS mRNA和蛋白质表达水平.结果:妊娠高血压综合征患者胎盘合体滋养层细胞及脐带内皮细胞的iNOS表达增加;绒毛血管平滑肌细胞免疫组化染色显示iNOS表达减弱,原位杂交则显示有较强的iNOS mRNA表达;绒毛间质中表达iNOS的Hofbauer细胞增多.结论:妊娠高血压综合征患者胎盘及脐带中 iNOS表达异常,可能在妊高征发病过程中起生理或病理作用.
作者：宋明清；刘斌 刊期： 1999年第05期
目的:研究排卵期阴道脱落细胞的雌、孕激素受体.方法:自然排卵妇女、注射人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin, hCG)促排卵妇女排卵期阴道脱落细胞,应用免疫组织化学ABC法和图像分析技术进行雌激素受体(estrogen receptor, ER)和孕激素受体(progesterone receptor, PR)的定位和定量研究.结果:两组组内排卵前、后阴道脱落细胞ER比较均无差异;注射hCG后阴道脱落细胞的ER在排卵前和排卵后均较自然排卵组有明显增高;自然排卵组PR在排卵后较之排卵前明显升高.结论:排卵前后阴道上皮细胞ER无明显变化; hCG可提高阴道上皮细胞ER水平;排卵后阴道上皮细胞PR增加.
作者：焦丽雅；杨京京；刘斌 刊期： 1999年第05期
1 临床资料患儿,男,2岁5个月.因发现左阴囊空虚2年5个月入院.患儿出生后至入院左阴囊内从未触及睾丸.其母孕期体健,无服药史.入院查体:发育正常,一般情况良好.心、肺无阳性体征,腹软,肝、脾未触及.左阴囊扁平,其内无睾丸,左腹股沟区亦未触及睾丸样物.右阴囊内可触及正常睾丸,约1.8 cm×1.5 cm×1.5 cm.阴茎发育正常.实验室检查:血红蛋白132 g.L-1,白细胞9.1×109 L-1,ALT 11.7 U.L-1.
作者：雷宇；王淑芹 刊期： 1999年第05期
冠状沟型尿道下裂占尿道下裂总数的65%.MAGPI术式于1986年在我国首次开展,为此型患儿的一种较好的手术方法.1989年9月至1998年6月我科采用MAGPI术式治疗此型尿道下裂38例,收到满意效果.
作者：刘宝富；王淑芹 刊期： 1999年第05期
目的:研究慢性粒细胞性白血病(chronic myeloid leukemia, CML)变异Ph染色体的形成.方法:应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术,以9号、15号、22号整条染色体DNA探针和M-bcr/abl易位探针检测7例具有变异Ph染色体的CML病人骨髓中期分裂相及间期细胞.结果:所有变异Ph染色体易位至少涉及3条染色体,并由标准Ph染色体易位t(9;22)(q34;q11)衍生而来.结论:FISH技术比传统细胞遗传学方法更敏感,能准确分析变异Ph染色体及其形成过程.
作者：洪波；邱镜滢；党辉；师岩；何琦；陆道培 刊期： 1999年第05期
啤酒酵母是人类基因组计划的重要模式生物,其全基因组序列测定通过国际合作已于1996年完成.我们继先前(1993年)克隆出RAD24基因区域DNA大片段后,对照全基因组测序结果进行比较,发现在我们曾预测的RAD24基因编码区存在一个移码突变.为此,我们对该区域进行了再测序,结果证实在我们报道的RAD24基因编码区少了一个碱基.应用plasmid premier基因分析软件对下载的该区域10 kb DNA大片段进行6相开放阅读框(ORF)分析,发现原RAD24基因区域的左侧尚存在一个ORF,命名为RAD24L,于是将原RAD24基因处的ORF改名为RAD24R,预测的编码蛋白质含2 130个氨基酸.应用一步基中断法和质粒交换技术,发现RAD24L缺失突变不影响细胞存活,但生长速度减慢,对紫外线和X线敏感;RAD24R基因缺失则细胞死亡,这与我们以前报道的原RAD24基因缺失的结果是一致的,说明所谓的RAD24基因缺失引起细胞死亡,实际上是由于RAD24R基因缺失所致.我们用功能互补法克隆了RAD24L的人类同源基因hR24L(Genbank No. AF126424),它参与细胞周期检定点调控,RAD24R的人类同源基因的克隆工作目前正在进行中.
作者：李文芹；韩云；朱应葆；傅欣；汪淑荣 刊期： 1999年第05期
腔内放射治疗(放疗)或与外照射结合对食管癌有较强的近期控制作用,但局部复发率和组织硬化、狭窄及穿孔、瘘道形成令人担忧[1].而管腔内支架对于食管癌良、恶性狭窄,穿孔、瘘道等有独到之处,对肿瘤无杀伤作用[2～4].我们提出将放射性同位素和支架捆绑一起,制成放射性支架,以结合二者疗效.为此设计可行性研究,初步结果报告如下.
作者：钱晓军；杨仁杰；汪幼梅 刊期： 1999年第05期
目的:探讨内源性血红素加氧酶(heme oxygenase, HO)/一氧化碳(carbon monoxide, CO)系统对大鼠主动脉球囊损伤后新生内膜形成及丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)激活的调节作用.方法:采用大鼠主动脉内膜球囊拉伤模型,观察HO抑制剂锌卟啉-9(zinc protoporphyrin IX, ZnPP-9)或其底物血红素-左旋-赖氨酸盐(heme-L-lysinate, HLL)对血管壁细胞3H-TdR掺入和MAPK活性的影响,同时观察血管平滑肌HO活性和CO生成的变化.结果:内膜拉伤后2周血管3H-TdR掺入和MAPK活性明显增加,同时HO活性和CO的产生增加;ZnPP-9使血管的3H-TdR掺入和MAPK活性增加更为明显(分别比单独拉伤组增加34.6%和39.2%,均为P<0.01);而HLL使血管的3H-TdR掺入和MAPK活性则明显降低(比单独拉伤组分别减少29.45%和33.6%,均为P<0.01).结论:HO活性上调或CO产生增加是血管对机械拉伤的一种保护性应激反应;内源性HO/CO系统直接参与新内膜形成中血管壁细胞的增殖调节,HO活性诱导有可能成为临床上防治血管增殖性疾病的一种新途径.
作者：欧和生；严丽梅；杨军；王培勇；庞永正；苏静怡；唐朝枢 刊期： 1999年第05期
北京大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：北京大学
