钱晓军；杨仁杰；汪幼梅
1 半定量和定量PCR及定量核酸的方法1.1 内对照法将已知的目的DNA及内对照DNA混合,加入两对引物同时进行PCR扩增,后将PCR产物转膜,用特异性探针杂交,目的DNA扩增后的量通过系列稀释后与内对照的相对量进行比较即可确定[1].
作者：张捷 刊期： 1999年第05期
目的:验证重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)双体融合分子(G2)较GM-CSF单体分子具有高活性的结构机制.方法:利用Insight II软件,采用同源性模建结合手工拼接的方法模建出G2融合分子的空间三级结构,并将其与GM-CSF单体的结构相比较.结果:模建出的G2融合分子前后两个结构单元在空间位置上相对独立,二者各自的三级构象及二级结构组成均与GM-CSF非常相似.另外,从受体结合位点的分析结果来看,G2分子在结构上有能力同时结合两分子的GM-CSF受体.结论:G2融合分子中的两个GM-CSF结构单元在结构上基本保持了GM-CSF单体分子的三级结构,其空间结构允许两分子的GM-CSF受体同时结合,引发受体间的交联,从而产生高活性.
作者：饶严；顾维丰；马大龙 刊期： 1999年第05期
目的:在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)E2包膜蛋白,并对其进行初步纯化.用纯化的包膜蛋白检测HCV RNA阳性血清中E2抗体,研究其检测E2抗体的敏感性和特异性.方法:将HCV E2蛋白基因克隆到原核表达载体中,并转化大肠杆菌.用IPTG诱导细菌表达E2蛋白,经离子交换层析纯化蛋白.用纯化的包膜蛋白包被微孔板,经ELISA方法检测HCV RNA阳性血清中的E2抗体.结果:在大肠杆菌表达了相对分子质量为45 000的可溶性E2蛋白,占细菌总蛋白量的21%,纯化后,蛋白纯度为85%.用其检测HCV患者血清171例,E2抗体的检出率为63%.在E2抗体阳性的血清中,部分为抗HCV阴性.结论:E2蛋白的表达及初步纯化的成功,可能用于临床检测.各基因型HCV E2包膜蛋白的抗体之间有交叉反应,在目前的抗HCV诊断试剂中加入可溶性、非融合E2包膜蛋白,可以改善抗HCV诊断试剂的特异性和敏感性.
作者：谢尧；陶其敏 刊期： 1999年第05期
动脉粥样硬化是危害人类健康严重的疾病之一.近年研究发现,高同型半胱氨酸(homocysteine, HCY)血症是动脉粥样硬化的一个独立的、重要的危险因素.现已证明,它可引起内皮损伤、刺激血管平滑肌细胞增殖、促进胶原形成、诱导血小板聚集,促进动脉粥样硬化形成[1～5].本工作在培育的大鼠VSMC上,观察牛磺酸及L-精氨酸HCY诱导的VSMC增殖的影响.
作者：薛林；张钧华；李载权；庞永正；唐朝枢；刘乃奎 刊期： 1999年第05期
目的:研究诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)在正常足月妊娠和妊娠高血压综合征孕妇胎盘、脐带中的表达.方法:形态学观察、免疫组织化学、原位杂交、图像分析定量研究,检测iNOS mRNA和蛋白质表达水平.结果:妊娠高血压综合征患者胎盘合体滋养层细胞及脐带内皮细胞的iNOS表达增加;绒毛血管平滑肌细胞免疫组化染色显示iNOS表达减弱,原位杂交则显示有较强的iNOS mRNA表达;绒毛间质中表达iNOS的Hofbauer细胞增多.结论:妊娠高血压综合征患者胎盘及脐带中 iNOS表达异常,可能在妊高征发病过程中起生理或病理作用.
作者：宋明清；刘斌 刊期： 1999年第05期
材料与方法:人精液标本6份,总活率大于50%,a级+b级精子≥38%.过氧化物酶甲苯胺蓝法证实白细胞总数小于106 ml-1.1∶2(体积比)加入孵育液,300×g离心15 min,弃上清,重复操作操作3次.调节细胞浓度至20×106个/ml.取24孔板每孔加入0.5 ml,实验组加入L-NAME,终浓度为1 mmol.L-1,37 ℃孵育.不同时间观察精子活动率的变化.孵育结束后Gresis试剂测定上清液中NO的生成.
作者：田溪泉；潘天明；郭应禄 刊期： 1999年第05期
1 临床资料患者,33岁,农民,孕1产0,因停经31+周伴轻微活动后乏力,紫绀加重,血压升高半个月入院.既往月经不规律,7～8 d/2～4个月,末次月经1997年10月初.停经后无早孕反应,一直未觉胎动.6岁时可疑先天性心脏病未诊治.平时不能担任重体力活动.妊娠后在当地诊为法洛四联症,轻微活动后乏力故来我院治疗.患者25岁结婚,未避孕.入院后查体:体温36.8 ℃,脉搏86次/分,呼吸19次/分,血压21.3/13.3 kPa(1 kPa=7.5 mmHg);紫绀;双肺呼吸音粗,未闻及口罗音;心界向左扩大,心率86次/分,心律齐,心音弱,各瓣膜区闻及Ⅲ级收缩期杂音,胸骨左缘第2～4肋间明显;杵状指(趾),下肢浮肿.产科检查:宫高24 cm,腹围94.5 cm,子宫软,无压痛,胎心142次/分.辅助检查:血红蛋白149 g.L-1;尿蛋白(+++);B超提示胎儿相当于21+周.入院诊断:宫内妊娠21+周,妊1产0;妊娠合并法洛四联症;重度妊娠高血压综合征(以下简称妊高征).入院后经心内科会诊,并行超声心动检查,确诊为法洛五联症.
作者：郭英花；魏丽惠 刊期： 1999年第05期
腔内放射治疗(放疗)或与外照射结合对食管癌有较强的近期控制作用,但局部复发率和组织硬化、狭窄及穿孔、瘘道形成令人担忧[1].而管腔内支架对于食管癌良、恶性狭窄,穿孔、瘘道等有独到之处,对肿瘤无杀伤作用[2～4].我们提出将放射性同位素和支架捆绑一起,制成放射性支架,以结合二者疗效.为此设计可行性研究,初步结果报告如下.
作者：钱晓军；杨仁杰；汪幼梅 刊期： 1999年第05期
目的:评价特必萘芬(疗霉舒)治疗慢性皮肤癣菌病的疗效.方法:采用特必萘芬治疗慢性皮肤癣菌病患者60例.特必萘芬0.25,每日1次,共用7 d,然后用特必萘芬0.25,隔日1次,连服11～15周.采用扫描电镜观察特必萘芬在甲内对真菌形态的影响.结果:痊愈51例(51/60);显效8例(8/60);无效1例(1/60).半年后复发2例(2/60).服特必萘芬1周后病甲中的真菌可见菌丝断裂,胞壁破坏.1个月后见凝固、坏死.结论:特必萘芬治疗慢性皮肤癣菌病疗效好.
作者：张文娟；佟春光；马映宇；刘彦梅 刊期： 1999年第05期
RNA是分子生物学研究的一个重要组成部分, 不论是cDNA文库的构建、RT-PCR、RNA序列分析、差异显示(mRNA differential display)、代表性差异分析 (representational Difference Analysis, RDA)、抑制性消减杂交(suppression Subtraction Hybridization, SSH)、Northern印迹分析、蛋白质的体外翻译等均依赖于高纯度完整的RNA. 因此, 如何获得高质量的RNA是研究人员关注的问题.1987年Chomczynski等[1]建立了酸-异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法(acid-guanidine-phenol-chloroform, AGPC).该方法较以往的传统方法操作简单,无需特殊的设备,抽提时间缩短至4 h,因而得到广泛的应用.数家公司据此开发出RNA提取试剂盒[2,3].使用试剂盒简单方便,但价格相对昂贵.为探索操作简便、经济实用、快速有效的RNA提取方法,我们分析了大量相关文献资料,进行了多次实验,成功地研制出一种新型的RNA提取试剂,建立了其操作程序,我们称之为RNA快速提取一步法.其性能达到进口试剂盒的水平,但造价低廉、操作简便,特别适用于国内实验室.
作者：梁德勇；徐国恒；崔振中；王晓民；朱丽霞；韩济生 刊期： 1999年第05期
目的:对19例鼻咽部B细胞性恶性淋巴瘤与EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染的相关性进行研究.方法:利用免疫组织化学及原位杂交方法对EBV进行检测,并用免疫组化及原位杂交双染法标记肿瘤细胞,以鉴定EBV阳性的细胞为B淋巴瘤细胞.结果:EBV编码的小mRNA探针(EBER)原位杂交显示,8例原发性鼻咽部B细胞性恶性淋巴瘤中3例绝大多数肿瘤细胞呈阳性表达,1例潜在性膜蛋白1(latent membrane protein 1, LMP-1)阳性.而11例继发性鼻咽部B细胞性恶性淋巴瘤EBER全部为阴性.全部病例进行了LMP-1检测,除1例原发者,全部阴性. 利用EBER-ISH(EBER原位杂交)和免疫组化CD 标记物进行双标记染色证实,EBER和LMP-1阳性细胞为CD 20阳性,CD 45RO阴性.鼻咽部原发性B细胞性恶性淋巴瘤EBV表达4/8,而继发者为0/11.结论:EBV与鼻咽部原发性B细胞恶性淋巴瘤有较高的相关性,而与继发性者无关.
作者：高子芬；Faith C.S.HO；Alex C.L.CHAN；Qian TAO；Ramond LIANG；Gopesh SRIVASTAVA 刊期： 1999年第05期
目的:比较自制的环孢素A(cyclosporin A, CyA)纳米粒胶体注射剂(不含毒性物质cremophor EL)和CyA商品注射剂Sandimmun Sandoz的药物动力学行为.方法:取9只家兔进行三交叉实验,分别静脉注射CyA纳米球胶体、纳米囊胶体和San,用HPLC法测定全血药物浓度,用3P97和EXCEL处理和分析数据.结果:3种制剂的血药浓度均以2室模型和权重1/C2拟合求药动参数.与CyA商品注射液San相比,纳米球胶体使CyA的V(c)增大33.17%(P<0.01),k21减小36.63%(P<0.1);纳米囊胶体使V(c)增大22.13%(P<0.1),k21减小30.69%(P<0.1).结论:与San相比,胶体制剂可使分布容积增大,k21减小,纳米球胶体更为明显.其它药物动力学参数无明显变化.
作者：黎洪珊；赵京玲；魏树礼 刊期： 1999年第05期
体重10 kg以下的婴幼儿心内直视手术有其特殊性如病情重,畸形复杂,手术操作难度较高,术后并发症多等.我科从1992年1月～1995年12月为36例体重10 kg以下婴幼儿行心内直视手术,术中死亡6例,死亡率17%.结合本组病例,对围术期治疗进行讨论.
作者：刘传绶；林新枝；王新生；王京生；张坚；徐莉 刊期： 1999年第05期
目的:分析中央杏仁核(nucleus amygdaloideus centralis, AC)升压反应的中枢机制.方法:大鼠脑内注射不同药物,记录血压和心率的变化.结果:谷氨酸兴奋AC引起的升压反应可被α-Helical CRF [9-41] ( α-H CRF, CRF拮抗剂) 或 [ D-Pro2, D-Phe7, D-Trp9 ]-P物质(DPDPDT,SP拮抗剂)分别注入双侧腹内侧核(nucleus ventromedialis, NVM),室旁核(nucleus paraventricularis, NPV)或延髓头端腹外侧区(rostral ventrolateral medulla, RVL)衰减.结论:结合作者其他工作已证明腹内侧核升压反应是通过背内侧核作用于NPV和RVL实现的,各环节都有CRF和SP参与,此工作结果进一步表明腹内侧核-背内侧核升压机制是AC升压反应中枢机制的一部分,CRF和SP是该神经通路中的递质.
作者：吴金胜；顾蕴辉；李利生；吕贻春 刊期： 1999年第05期
目的:探讨内源性血红素加氧酶(heme oxygenase, HO)/一氧化碳(carbon monoxide, CO)系统对大鼠主动脉球囊损伤后新生内膜形成及丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)激活的调节作用.方法:采用大鼠主动脉内膜球囊拉伤模型,观察HO抑制剂锌卟啉-9(zinc protoporphyrin IX, ZnPP-9)或其底物血红素-左旋-赖氨酸盐(heme-L-lysinate, HLL)对血管壁细胞3H-TdR掺入和MAPK活性的影响,同时观察血管平滑肌HO活性和CO生成的变化.结果:内膜拉伤后2周血管3H-TdR掺入和MAPK活性明显增加,同时HO活性和CO的产生增加;ZnPP-9使血管的3H-TdR掺入和MAPK活性增加更为明显(分别比单独拉伤组增加34.6%和39.2%,均为P<0.01);而HLL使血管的3H-TdR掺入和MAPK活性则明显降低(比单独拉伤组分别减少29.45%和33.6%,均为P<0.01).结论:HO活性上调或CO产生增加是血管对机械拉伤的一种保护性应激反应;内源性HO/CO系统直接参与新内膜形成中血管壁细胞的增殖调节,HO活性诱导有可能成为临床上防治血管增殖性疾病的一种新途径.
作者：欧和生；严丽梅；杨军；王培勇；庞永正；苏静怡；唐朝枢 刊期： 1999年第05期
目的:探索不同垂直面型与下颌骨骨密度之间的关系.方法:应用双能骨密度吸收仪测量3组不同垂直面型(高角组、正常组和低角组)样本的下颌骨骨密度.结果:面部基本对称的个体其下颌骨左右两侧的骨矿含量和骨密度分布基本对称,3个不同垂直面型组之间骨矿含量和骨密度差异有极显著性.结论:下颌骨骨密度与颅面垂直形态之间存在着密切的关系;双能骨密度吸收测量仪为下颌骨骨密度的定量测定提供了精确、简便而实用手段.
作者：邹冰爽；曾应魁；曾祥龙 刊期： 1999年第05期
啤酒酵母是人类基因组计划的重要模式生物,其全基因组序列测定通过国际合作已于1996年完成.我们继先前(1993年)克隆出RAD24基因区域DNA大片段后,对照全基因组测序结果进行比较,发现在我们曾预测的RAD24基因编码区存在一个移码突变.为此,我们对该区域进行了再测序,结果证实在我们报道的RAD24基因编码区少了一个碱基.应用plasmid premier基因分析软件对下载的该区域10 kb DNA大片段进行6相开放阅读框(ORF)分析,发现原RAD24基因区域的左侧尚存在一个ORF,命名为RAD24L,于是将原RAD24基因处的ORF改名为RAD24R,预测的编码蛋白质含2 130个氨基酸.应用一步基中断法和质粒交换技术,发现RAD24L缺失突变不影响细胞存活,但生长速度减慢,对紫外线和X线敏感;RAD24R基因缺失则细胞死亡,这与我们以前报道的原RAD24基因缺失的结果是一致的,说明所谓的RAD24基因缺失引起细胞死亡,实际上是由于RAD24R基因缺失所致.我们用功能互补法克隆了RAD24L的人类同源基因hR24L(Genbank No. AF126424),它参与细胞周期检定点调控,RAD24R的人类同源基因的克隆工作目前正在进行中.
作者：李文芹；韩云；朱应葆；傅欣；汪淑荣 刊期： 1999年第05期
目的:研究胰岛素毫微球(insulin-loaded nanoparticles, INS-NP)经大鼠肺部给药后的降血糖作用.方法:建立大鼠肺部给药的动物模型,通过葡萄糖氧化酶法测定血糖质量浓度来评价INS-NP 经肺部给药后对大鼠的降血糖作用.结果:大鼠肺部分别给与5、10、20 u.kg-1的INS-NP,以血糖下降至给药前的70%以下所持续的时间(duration below 70% level, DBL70%)为考察指标,5u.kg-1的INS-NP的DBL70%与其对照溶液相近,而10、20 u.kg-1的INS-NP 的DBL70%均明显大于各自的对照溶液.INS-NP肺部给药的相对药理生物利用度达到59.2%.结论:与胰岛素溶液相比,INS-NP经大鼠肺部给药后能显著延长其血糖下降的时间.
作者：沈赞聪；张强；魏树礼 刊期： 1999年第05期
近年来,大剂量化疗辅以外周血干细胞移植来缓解化疗后骨髓抑制已经成为上皮性卵巢癌病人很有前途的一种治疗方法.虽然这一方法使许多病人获得了较长的无瘤生存期,但仍有部分病人终复发,其中可能的原因之一即为回输的干细胞中含有肿瘤细胞.另外,外周血中含有肿瘤细胞的病人远处转移可能性大,预后可能不好.所以,建立一种高度灵敏的检测方法来检测病人外周血干细胞及外周血中肿瘤细胞具有重要的临床意义.我中心尝试了将细胞角蛋白19(CK19)反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法应用于上皮性卵巢癌病人外周血干细胞或外周血中肿瘤细胞的检测,报告如下.
作者：赖娟；李蔚范；钱和年；冯捷；李海玲 刊期： 1999年第05期
目的:探讨Ca15-3在Paget病鉴别诊断中的价值.方法:对11例阴囊Paget病回顾性地做Ca15-3、EMA、CEA和HMB45免疫组化染色,并以4例Bowen病和1例恶性黑色素瘤做对照.结果:Ca15-3、EMA在Paget病和大、小汗腺及皮脂腺均有较强的表达,4例Bowen病均无Ca15-3表达,但其中2例有EMA表达.CEA在6例(54.5%)Paget病中有表达.HMB45只在恶性黑色素瘤中表达.结论:Ca15-3在Paget细胞的相对特异性表达提示它可作为Paget病与Bowen病鉴别诊断的标志物,其对诊断的敏感性与EMA相同,但特异性高于EMA.同时还说明Paget病的发生可能与汗腺有关.
作者：孔祥田；涂平；李竞贤；曾荔；夏同礼；郭应禄 刊期： 1999年第05期
北京大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：北京大学
