学术投稿

PI三步法DNA定量检测技术

徐晓雪;王兴翠;孙丽娜

关键词:三步法, 定量, 细胞周期, 临床肿瘤诊断, 医学科研, 染色方法, 简便实用, 检测技术, 技术细节, 碘化丙啶, 不同时相, 规范性, 作用, 建议, 含量, 变化, 比例
摘要:DNA定量检测技术是根据细胞周期中不同时相DNA含量的变化来检测细胞周期中G0/G1、S及G2/M各时相的细胞比例,在临床肿瘤诊断和医学科研中都有重要作用.本文介绍了一种简便实用的碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色方法,同时对染色中容易忽视的技术细节提出了一些规范性的建议.
首都医科大学学报杂志相关文献
  • 应用表达载体介导siRNA抑制胰腺癌skp2基因表达的研究

    目的 探讨表达载体介导小干扰RNA(siRNA)对人胰腺癌细胞系Capan-2 skp2基因表达的抑制作用.方法 构建靶向SKP2的siRNA质粒表达载体,采用LipofectamineTM2000转染Capan-2细胞,实时定量PCR和Western blot观察Capan-2细胞转染后SKP2mRNA和蛋白表达的改变.结果 PCR和DNA测序证实SKP2siRNA表达载体构建成功,分别转染Capan-2细胞后,8kp2基因的mRNA和蛋白表达量与对照组相比均明显下降(P<0.05).结论 所构建的靶向SKP2的siRNA质粒表达载体可以有效地阻断Capan-2细胞SKP2的mRNA和蛋白表达,为下一步以SKP2为靶点的胰腺癌的基因治疗实验研究奠定基础.

    作者:任金帅;李双;宋茂民 刊期: 2008年第05期

  • PI三步法DNA定量检测技术

    DNA定量检测技术是根据细胞周期中不同时相DNA含量的变化来检测细胞周期中G0/G1、S及G2/M各时相的细胞比例,在临床肿瘤诊断和医学科研中都有重要作用.本文介绍了一种简便实用的碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色方法,同时对染色中容易忽视的技术细节提出了一些规范性的建议.

    作者:徐晓雪;王兴翠;孙丽娜 刊期: 2008年第05期

  • 无肢体增长的先天性静脉畸形肢体肥大综合征1例

    先天性静脉畸形肢体肥大综合征(Klippel-Trénaunay syndrome,KTS),又称静脉曲张性骨肥大血管痣(noerus variguex ostehypertraphigue),是一种罕见的复杂的先天性血管发育异常疾病.

    作者:李红星;张云良 刊期: 2008年第05期

  • BALB/c裸小鼠人宫颈癌模型的建立

    目的 采用在裸鼠腹部皮下移植人原代宫颈癌组织的方法,研究其在裸鼠体内的成瘤性,并初步探讨此动物模型腹部肿瘤的生物学特性.方法 将人宫颈癌组织接种于裸鼠腹部皮下建立人宫颈癌裸鼠模型,观察荷瘤鼠成瘤、一般特性和移植瘤生长情况.80 d后处死裸鼠,取肿瘤块做病理切片;用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测肿瘤组织、外周血和肝、脾等脏器HPV DNA表达情况.结果 接种后第42天在接种部位可见结节,第80天后肿瘤块平均表面积为(50.0±5.1)mm2,肿瘤移植平均成功率为90.5%.移植瘤生长以局部浸润为主,未见转移瘤.组织学检查结果示所有移植瘤与种植前肿瘤组织病理检查结果一致,HPV DNA呈阳性,且为高危型人乳头瘤病毒HPV16型阳性.而外周血与肝、脾等脏器HPV DNA呈阴性.结论 本研究所建立裸鼠人宫颈癌组织模型成瘤率较高,操作简便,可保持人宫颈癌生物学特性,为进一步研究宫颈癌的发病机制提供了重要的科研工具.

    作者:张凯举;赵艳忠;尚宏伟;孔璐;张玉祥 刊期: 2008年第05期

  • 精神分裂症患者家属生活质量及影响因素的研究

    目的 探讨精神分裂症患者家属生活质量及影响因素,为改善其生活质量提供指导.方法 以精神分裂症患者家属55人及正常对照组55人为研究对象,分析其生活质量综合评定问卷、社会支持评定量表及简易应对方式问卷.结果 1)精神分裂症患者家属生活质量总分及躯体功能、心理功能、社会功能3个维度评分均显著低于对照组,物质生活维度评分与对照组比较差异无统计学意义;2)精神分裂症患者家属生活质量总分及物质生活、躯体功能、心理功能3个维度评分与社会支持总分及客观支持、主观支持、支持利用度3个维度评分均呈显著性正相关,社会功能维度与社会支持总分、客观支持呈显著性正相关;3)精神分裂症患者家属的生活质量总分及物质生活、躯体功能、心理功能、社会功能4个维度评分与积极应对维度呈显著性正相关,与消极应对维度呈显著性负相关.结论 精神分裂症患者家属的生活质量明显低于对照组,并与社会支持、应对方式密切相关.

    作者:李延红;姜长青;辛刚;陈智敏 刊期: 2008年第05期

  • HPLC法测定白芍和赤芍中1,2,3,4,6-五-O-倍酰-D-葡萄糖含量

    目的 用高效液相色谱(HPLC)法测定白芍和赤芍中1,2,3,4,6-五-O-借酰-D-葡萄糖(PGG)的含量.方法 用50%乙醇水溶液,通过超声提取法从白芍和赤芍中提取PGG.采用Diamonsil C18色谱柱,流动相为乙腈-2.5%醋酸水溶液(18:82,V/V),pH为2.85,紫外检测波长为280 nm,流速为1 mL/min.结果 PGG在5ug/mL-150 ug/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9,n=5),平均回收率为100.9%,RSD为3.57%(n=9).在白芍和赤芍中PGG的含量分别为2.48 mg/g和2.24 mg/g.结论 本实验所建立的测定PGG含量的HPLC法能够有效消除白芍和赤芍中其他组分的干扰,操作简单快速,精密度高、重现性好、回收率高,适用于中药提取物中PGG含量的测定.

    作者:殷志爽;赵文华;宋学英;孔令江;王桥 刊期: 2008年第05期

  • 4地儿科临床分离革兰阳性球菌2000-2006年耐药性监测

    目的 探讨我国不同地区医院儿科主要革兰阳性球菌耐药的情况.方法 对2000年1月1日至2006年12月31日5所儿童专科医院检验科报送检标本分离出的4种革兰阳性球菌用Kirby-Bauer琼脂扩散法进行抗生素敏感实验.结果 5所医院临床分离出金黄色葡萄球菌共7 825株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methieillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)的检出率为6.87%,红霉素总耐药率为66.39%,并且有逐年上升趋势,未发现对万古霉素耐药或中度敏感菌株.分离出肺炎链球菌4 781株,其中青霉素不敏感肺炎链球菌(PNSP)的平均检出率为68.64%,红霉素耐药率为90.80%,两者耐药率均逐年上升.分离出1 301株β溶血性链球菌,对青霉素全部敏感,对红霉素的耐药率为80.94%,且耐药率在逐年增加.分离出肠球菌共2216株,对万古霉素的中度敏感率为3.11%,氨苄西林的耐药率为48.03%,红霉素的耐药率高达86.47%.结论 除β溶血性链球菌外,多数革兰阳性菌对广谱青霉素的耐药率都偏高;对红霉素的耐药率居高不下并有逐年上升的趋势,革兰阳性菌对万古霉素和环丙沙星的敏感率较高.MRSA仍在较低水平,本研究未发现耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA),但出现对万古霉素中度敏感耐药的肠球菌.因此要加强对革兰阳性球菌耐药性和抗生素使用情况的监测,合理使用抗生素.

    作者:汪玲;沈叙庄;陆权;王艺;曾其毅;陈沅;王传清;邓秋莲;刘岚;甄景慧;张泓;杨永弘 刊期: 2008年第05期

  • 人胰腺癌细胞株HPAC和BxPC-3中Src/MAPK信号转导途径中pp60c-Src和pERK1/2表达的差异

    目的 研究人胰腺癌细胞株HPAC和BxPC-3中Src/MAPK信号转导系统,探寻不同类型胰腺癌信号转导通路的差异,为研究靶点药物提供基础.方法 将1640培养的HPAC和BxPC-3经细胞计数相同后各分为4组,分别为对照组、TGF-α组、TGF-α+PP2组和TGF-α+PD组.细胞贴壁并达70%融合后,换无血清培养48 h.无血清处理作对照,用无血清培养基溶解终浓度为7 nmol/L的TGF-α刺激TGF-α组2 h,TGF-α+PP2组先加入终浓度为10umol/L的PP2刺激细胞20 min后加入7 nmol/L的TGF-α刺激2 h,TGF-α+PD组先加入30umol/L的PD98059刺激细胞20 min后加入终浓度为7 nmol/L的TGF-α刺激2 h.用蛋白印迹方法分析HPAC和BxPC-3的4组细胞pp60c-Src和pERK1/2的表达.结果 HPAC细胞pp60c-Src的表达:对照组显著高于TGF-α组、TGF-α+PD组(P<0.05)和TGF-α+PP2组(P<0.01);HPAC细胞pERK1/2的表达:TGF-α组显著高于对照组和TGF-α+PD组(P<0.01),与TGF-α+PP2组相比较差异无统计学意义(P>0.05).BxPC-3细胞pp60c-Src的表达:TGF-α组显著高于对照组(P<0.05)和TGF-α+PP2组(P<0.01),与TGF-α+PD组相比较差异无统计学意义(P>0.05);BxPC-3细胞pERK1/2的表达:TGF-α组显著高于对照组、TGF-α+PD组和TGF-α+PP2组(P<0.01).结论 HPAC和BxPC-3细胞中Src/MAPK信号途径存在差异.推测在BxPC-3细胞株中c-Src是活化Ras/Raf/MAPK途径的关键信号分子,应进一步研究在HPAC细胞株中c-Sic的作用.

    作者:孔璐;张玉祥;孙林;马慧苹;贺旭;谢千池;李宝红 刊期: 2008年第05期

  • 雌激素受体亚型α和β及胰岛素样生长因子-I在子宫肌瘤中的表达变化

    目的 检测子宫肌瘤组织雌激素受体(ER)亚型α、β及胰岛素样生长因子-1(IGF-I)的表达,探讨其与子宫肌瘤发生发展的关系.方法 采用荧光定量PCR方法,检测21例患者的增生期子宫肌瘤组织及6例配对增生期肌层组织中ERamRNA,ERβmRNA和IGF-I mRNA的表达水平.结果 所有标本均以ERαmRNA表达为主,ERβmRNA表达微弱.ERαmRNA在肌瘤中表达高于肌层,ERβmRNA在肌瘤中表达低于肌层,但差异无统计学意义.IGF-I mRNA的表达在肌瘤中高于肌层(P<0.05).ERαmRNA与IGF-I mRNA表达水平呈正相关(r=0.572,P=0.014);ERβmRNA与IGF-I mRNA表达水平亦呈正相关,但无统计学意义.结论 子宫肌瘤中IGF-I mRNA表达增高,ERαmRNA与IGF-I mRNA表达呈正相关,提示雌激素可能通过ERα上调IGF-I mRNA的表达促进肌瘤生长.

    作者:赵滢;张为远;贾红梅;陈卫 刊期: 2008年第05期

  • 牙髓干细胞研究现状

    牙髓干细胞是一种具有高度增生、自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞,在牙髓修复和牙齿再生中发挥重要作用.近年来对牙髓十细胞的培养、细胞表型和功能等方面已进行了大量研究,本文就牙髓千细胞的研究现状作一综述.

    作者:丁刚;刘怡;王松灵 刊期: 2008年第05期

  • 地震截肢患者的心理康复

    地震往往会导致大量的截肢伤残患者,及时有效地对他们进行心理康复,利于减缓地震和截肢对他们造成的心理创伤,促进患者心理健康的重建.本文着重分析了地震截肢后患者的主要心理表现和影响因素,并对震后截肢患者出现的早期应激反应,焦虑、抑郁、自卑等负性情绪,以及患者对社交和幻肢疼痛的恐惧心理提出心理康复的原则和具体对策.

    作者:祁长凤;刘松怀;梁志锋;洪晔 刊期: 2008年第05期

  • 大鼠心肌细胞容积敏感性与钾离子通道的关系

    目的 观察大鼠心肌细胞调节性容积减小(regulatory volume decrease,RVD)过程,研究参与RVD过程的钾离子通道及其亚型.方法 采用膜片钳全细胞记录法,记录急性分离的大鼠心肌细胞在低渗刺激下钾离子电流的变化及特征,分析其所属亚型;用细胞容积测定法观察大鼠心肌细胞RVD的过程.结果 膜片钳全细胞记录法证实,低渗刺激激活了心肌细胞的K+通道电流,该K+通道电流可被CsCl和格列苯脲所阻断.同时钾离子通道阻断剂可明显阻断大鼠心肌细胞的RVD过程.结论 大鼠心肌细胞在低渗溶液作用下具有RVD过程,钾离子通道,尤其ATP敏感性钾离子通道在大鼠心肌细胞RVD过程中可能具有十分重要的作用.

    作者:史路平;徐萌;刘杰;王军 刊期: 2008年第05期

  • 不懈追求创造一流业绩

    【编者按】赵继宗教授1969年毕业于第四军医大学,1990年赴美国休斯顿医疗中心神经外科进修,次年转到美国.Henry Ford医院神经外科进修脑血管疾病的手术治疗以及显微神经外科技术.现任首都医科大学附属北京天坛医院神经外科学系主任、神经外科教授、博士生导师.对医疗工作和医学教育的敬业与执著、对科研工作的睿智与严谨、对行政管理的真挚与坦诚使赵继宗教授硕果累累、成就辉煌.

    作者: 刊期: 2008年第05期

  • 小肠黏膜下层作为组织工程支架材料的免疫原性研究

    目的 检测小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,sis)的免疫原性,探讨其作为组织工程支架材料的可行性.方法 取SIS材料制备成体积为10 mm×4mm×3 mm的组织块,埋植于新西兰大白兔背部一侧骶脊肌内,以术前情况作自身对照,以新鲜SIS组作为阳性对照.分别于SIS材料植入前及植入后1、4、8周从兔耳缘静脉取血,用流式细胞仪检测家兔外周血中CD4+T和CD8+T细胞亚群的动态变化.结果 流式细胞仪检测结果显示,脱抗原处理后的SIS植入兔体内后,其外周血CD4+T和CD8+T细胞较术前均有不同程度升高,术后一周达高峰,与术前相比差异有统计学意义(P<0.05).术后逐渐回落,至第4周时基本恢复正常.而植入新鲜SIS组的兔外周血CD4+T和CD8+T细胞较术前升高明显,与术前及实验组相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论 SIS植入后T细胞亚群反应初始结果显示SIS有较低的免疫原性,提示其具有作为组织工程支架材料的可行性和可能性.

    作者:李华;张凤兰;冯永堂 刊期: 2008年第05期

  • 85例肢体枪弹伤的早期外科处理

    目的 总结85例枪弹伤早期外科处理的经验和教训.方法 对肢体枪弹伤患者进行早期清创、引流并应用抗生素治疗,合并骨折者进行适当固定.20例切线伤中有15例行一期伤口闭合.结果 85例枪弹伤的总感染率为23.5%,伤情较轻的切线伤感染者有8例.结论 早期肢体枪弹伤处理应当重视创口的减压和充分引流,重视环境因素的影响.

    作者:付立新;刘利民;Oumar Cherif 刊期: 2008年第05期

  • 链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人正常肝细胞生长的影响

    目的 观察链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞生长增生的影响.方法 常规培养链球菌,提取细菌全蛋白并通过阴离子交换层析获得蛋白分离组分Sp Ⅰ和SpⅡ.不同浓度链球菌蛋白(10、50、100 mg/L)作用于人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞24-72 h后,采用MTT法检测两种细胞的增生活性.倒置显微镜下观察50 mg/L链球菌全蛋白和Sp Ⅱ对两种细胞的形态学变化.结果 MTT结果显示,链球菌全蛋白及SpⅡ能显著抑制Bel-7402细胞的生长,与蛋白剂量和作用时间呈负相关关系;Sp Ⅰ对Bel-7402细胞未显示出明显增生抑制作用.链球菌全蛋白及SpⅡ对人Chang氏正常肝细胞显示出不同程度的刺激生长作用.倒置显微镜下观察,链球菌全蛋白及SpⅡ作用后的Bel-7402细胞,细胞稀疏、脱落、排列紊乱,失去正常形态,而人Chang氏细胞未发现明显的形态学变化.结论 链球菌全蛋白及SpⅡ能抑制人肝癌Bel-7402细胞的增生,并且能在一定程度上促进人Chang氏正常肝细胞增生.

    作者:李彦芹;王艳;曹宁;平国玲;李卫汉;张力平 刊期: 2008年第05期

  • 支气管结核与肺结核患者临床特征分析

    目的 总结支气管结核的临床特征,以期提高诊断水平.方法 对36例支气管结核患者与30例肺结核患者的发病年龄、性别、临床表现、X线胸片及痰涂片抗酸杆菌结果进行卡方检验.结果 2组患者发病年龄≥60岁者差异无统计学意义.支气管结核多见于女性,其主要症状为咳嗽、发热、胸闷.X线胸片特点:片状影多于小斑片影,22.2%的患者胸片正常,病灶部位右肺多于左肺.痰涂片抗酸杆菌均呈阴性,支气管刷检全部为阳性.肺结核主要症状为咯血,胸片均有阴影,以小斑片影为主.病灶部位以左肺多见,痰涂片抗酸杆菌全部呈阳性.36例支气管结核患者镜下显示炎症浸润型占38.9%、干酪坏死型占33.3%、瘢痕狭窄型占19.4%、肉芽增殖型占8.3%.结论 支气管结核好发于女性,胸片影像无特征,22.2%的患者胸片无异常,病灶右肺多于左肺.镜下病变以炎症浸润和干酪坏死型为主.支气管镜刷检是诊断支气管结核的重要方法之一.

    作者:侯会玲;魏兵;毕俊英;袁靖;聂秀红 刊期: 2008年第05期

  • L的案例

    亲附理论重视婴儿和养育者之间的亲附关系及婴儿从养育者的反应中发展出有关自体和他人的内部工作模式,这种内部模式是个体以后的人际关系模板,对个体的情感与行为反应具有决定性的影响.L的案例示范了亲附理论的基本概念及该理论对心理治疗案例的理解和指导作用,说明和例证了亲附关系问题与临床症状的关系,展示了精神动力性心理治疗中的心理化、反射功能、镜映等功能.

    作者:张淑芳;李小龙;杨蕴萍 刊期: 2008年第05期

  • 精神分裂症复发(恶化)征兆问卷(家属版)的初步编制

    目的 初步编制精神分裂症复发(恶化)征兆问卷(early signs inventory of relapse/worsen in schizophrenia,ESIS).方法 通过访谈和文献复习方法,归纳总结精神分裂症复发(恶化)征兆的内容和维度,编制问卷初稿.分别对200例和100例精神分裂症患者家属进行探索性因素分析和信度分析.结果 探索性因素分析抽取6个因素并对其命名,形成28题的初始问卷.各条目得分与总问卷得分间的相关系数为0.150-0.603,各条目得分与其所属因子得分间的相关系数为0.483-0.811.各因子得分间的相关系数为0.024-0.469.各因子得分与总问卷得分间相关系数为0.164-0.820.比较精神分裂症患者缓解期和复发时间卷结果,除躯体不适感因子得分两者之间差异无统计学意义外(P>0.05),两者间问卷总分、各因子得分差异均具统计学意义(P<0.01).总问卷的标准Cronbach q系数为0.845,各因子的Cronbach α系数为0.590~0.779.总问卷的Spearman-Brown分半信度为0.719,各因子的Spearman-Brown分半信度为0.500~0.772.总问卷的重测相关系数为0.721,各因子的重测相关系数为0.484-0.900,相关系数有统计学意义(P<0.01).结论 精神分裂症复发(恶化)征兆问卷信效度特性基本符合心理测量学要求,可初步用于临床指导家属评估患者复发(恶化)征兆.

    作者:闫丽琼;李占江;姜长青;曹欣冬;徐子燕;李丹;Liu Haiyan;刘海燕 刊期: 2008年第05期

  • 急性应激障碍能否预测创伤后应激障碍

    灾难后心理创伤是临床心理学领域和精神医学领域的研究热点,灾难后急性应激障碍(ASD)和创伤后应激障碍(PTSD)之间的关系日益受到关注.本文对ASD预测PTSD的文献进行了分析,回顾了ASD诊断预测PTSD存在的一些问题,并综述了ASD各种症状(分离、再体验、回避、唤起水平增高症状)对PTSD的预测作用,以及认知模式和叙事特点等因素对PTSD的预测作用.总之,作者认为,以ASD诊断和ASD各种症状预测PTSD存在局限性.

    作者:王倩;郑晓星;杨蕴萍 刊期: 2008年第05期

首都医科大学学报杂志

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