孙丛晓；黄长胜；韩凤岳；刘娜；陈亚亮；杨琳
随着膜片钳技术的逐渐推广和心肌电异质性等研究领域的发展,对犬等大型动物的应用越来越多,往往也需要对犬心室肌心外膜下细胞(Epi细胞) 、中间层细胞(M细胞)和心内膜下细胞(Endo细胞)进行准确的定位和分离.成功分离犬心肌细胞并使其保持良好状态是决定整个实验成败的核心环节.现将我们近3年来分离定位犬心室肌细胞的经验简介如下.
作者：周鹏；杨新春；刘秀兰 刊期： 2004年第02期
为探讨人肝癌组织热休克蛋白70(HSP70)的表达及意义,采用SABC法检测人肝癌组织HSP70的表达,图像分析HSP70在癌组织中的表达特点.结果显示:25例肝癌组织中均存在HSP70的表达,不同癌组织存在胞质、胞膜和胞核表达强度及部位的差异.证实人肝癌组织存在HSP70的表达异质性,呈现了胞质、胞膜和胞核的表达差异,HSP70在人肝癌组织的表达特点为今后肿瘤抗原肽瘤苗的提取和实验研究作了铺垫.
作者：王小平；刘国贞；宋爱利；廖静；陈瑞芬；郎振为 刊期： 2004年第02期
为观察肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)在帕金森病(P D)患者血清中的变化,采用放射免疫法测定PD组(30例),其他神经系统免疫疾病组(OND )(22例),正常对照组(HC)(24例)血清中TNF-α的浓度和IL-6的质量浓度.结果: PD患者血清中TNF-α浓度[(13.83±4.47)pmol/L]与OND组[(17.53±7.25)pmol/L]、HC组[(1 6.57± 3.05)pmol/L]比较均明显降低(P<0.05).PD患者血清中IL-6质量浓度[(112.80 ±25.13)μg/L]与OND组[(178.53±42.78)μg/L]、HC组[(136.22±17.40)μg/L] 比较均明显降低 (P<0.001).PD组间比较,其结果与年龄、病程及分型无关.本研究结果表明PD患者存在外周血细胞因子的改变,提示免疫机制可能参与了PD的发病过程.
作者：管小亭；王春雪；龙洁；资深 刊期： 2004年第02期
为探讨缺氧复氧致原代培养的大鼠大脑皮质神经细胞凋亡中,Bax基因的表达及银杏叶提取物(EGB)对其的调节作用,用胎龄16～17 d Wistar大鼠的大脑皮质神经细胞进行原代分离培养.采用原位末端标记法(TUNEL)透射电镜技术确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型,并应用免疫组织化学方法显示缺氧复氧不同时间Bax基因的表达.结果:缺氧复氧可以使大鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡,随缺氧时间的延长,凋亡细胞数逐渐增多,至缺氧8 h,复氧18 h达高峰,银杏叶提取物预保护可使凋亡细胞数减少;同时随着缺氧时间的延长,Bax基因表达逐渐增高,EGB可逆转缺氧复氧时Bax的表达.提示:EGB对缺氧复氧时Bax的表达具有明显的抑制作用,这可能是EGB对抗缺氧复氧时胎鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡的机制之一.
作者：季凤清；孙海梅；郭燕茹；郭崇洁；赵天德 刊期： 2004年第02期
采用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增得到人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)cDNA,利用基因重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1(+)真核表达载体上,成功构建了pcDNA/I重组表达载体.应用脂质体介导的基因转移技术将重组质粒体外转染至人脐静脉内皮细胞(HUVEC).MTT法检测结果表明:重组质粒转染能明显促进内皮细胞的分裂增生.将重组质粒通过脂质体介导,体外转染至人肾细胞293细胞系进行表达,经G418筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆,表达产物经鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生成活性.此结果为研究IGF-1对血管内皮细胞作用的分子机制,以及利用IGF-1基因治疗肢体及冠状动脉缺血性疾病等的研究奠定了实验基础.
作者：祁雅慧；王雅梅；孙丽翠；司杨；闫豫东；张静宜；邴国英 刊期： 2004年第02期
致命性大出血是重症胰腺炎(SAP)后期并发症之一,发病率为1.2%～14.5%.除外胃、十二指肠因素外[1],局部血管损伤引起的大出血亦不少见,且是患者死亡的主要原因. 对SAP并发大出血的认识和防治是临床工作中的薄弱环节.本文中SAP大出血特指局部血管损伤性大出血.
作者：刘利涛；李非 刊期： 2004年第02期
为了探讨中药复方髓伤平(SSP)对全脑缺血再灌流大鼠模型脑保护作用的机制,阻断18只SD大鼠双侧颈总动脉血流30 min后,解除阻断再灌流2 h, 造成脑缺血再灌流损伤模型.造模大鼠随机分为3组:缺血再灌流组(BG),SSP治疗组(SG ),尼莫地平对照组(NG);另设不造模的正常对照组(NCG)6只.分别检测4组大鼠脑组织内丙二醛(MDA)质量摩尔浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性.发现:BG组大鼠脑内MDA 质量摩尔浓度明显升高 (P<0.05),SOD活性则明显下调(P<0.05).SSP能使升高的MDA适度降低, 并且上调SOD活性.提示:在大鼠脑缺血再灌流条件下,SSP可以清除脑内过多的氧自由基, 对脑起保护作用.
作者：孙丛晓；黄长胜；韩凤岳；刘娜；陈亚亮；杨琳 刊期： 2004年第02期
介绍去血清饥饿培养方法去除神经组织培养中的成纤维细胞.取2日龄大鼠双侧坐骨神经和双侧嗅球,酶消化、离心,10%胎牛血清(FCS)DMEM体外培养,如果成纤维细胞生长迅速,换无血清DMEM培养液培养.根据细胞生长状况可反复上述过程.S-100免疫荧光染色鉴定雪旺细胞和嗅鞘细胞纯度.结果:换无血清培养液后,成纤维细胞迅速死亡,S-100免疫荧光染色雪旺细胞和嗅鞘细胞的纯度可达98%～99%.此方法简捷、易操作,为神经组织培养中去成纤维细胞的一种好方法.
作者：历俊华；万虹；翟晶；王忠诚 刊期： 2004年第02期
为探讨星形胶质细胞在戊四唑(pentylenetetrazol,PTZ)化学点燃癫痫形成过程中的作用,采用免疫组织化学方法和图像分析技术,对PTZ点燃各发作级别大鼠大脑皮质部位的胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的变化进行动态观察.发现:GF AP值于点燃后Ⅲ级组开始增加,Ⅴ级组达到高峰.表明:在戊四唑点燃癫痫模型中,随着点燃级别的进展,GFAP的免疫表达逐渐增加.提示:星形胶质细胞GFAP含量的增加,可能是PTZ点燃模型癫痫发病的原因之一.
作者：姚君茹；潘三强；吕来清；高秀来 刊期： 2004年第02期
1 超氧化物歧化酶的分类与功能1938年,一种蓝色含铜的蛋白质首次从牛的红细胞中被分离,1967年, Maccord和F ridovich将其命名为超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD).SOD是一类含不同金属离子的氧化还原酶,广泛存在于生物界.
作者：杜艳玲；陈瑞 刊期： 2004年第02期
回顾性分析确诊的61例严重急性呼吸综合征(SARS)患者.发现:发病2周为疾病的高峰期. 有明确SARS接触史者47人(77.1%).56例(91.8%)静点甲泼尼龙,54例(88.5%)使用利巴韦林治疗.用药后血红蛋白降低幅度达20 g/L者占44.4%(24/54),心动过速者占40.4%(23 /57).6例死亡患者中5例为老年人,均合并严重的基础病变,另1位患者在住院期间自杀.所有患者在出现症状后(8.6±5 .9)d(1～24 d)胸片显示异常,胸片浸润性病灶完全吸收的平均时间为(17.1±6.2)d(5～3 5 d).提示:对SARS患者,早期、持续一定时间的中等剂量的激素是必要的;治疗过程中应该重视大量激素和大量利巴韦林带来的不良反应.
作者：冯力民；王保国；李晶华；刘小春；焦强 刊期： 2004年第02期
为观察棕褐沙林蚁水提物对佐剂性关节炎的保护作用,用二甲苯制作小鼠耳郭肿胀模型,称量耳片,计算肿胀度;用弗氏完全佐剂制作大鼠佐剂性关节炎模型,用容积法测量大鼠足跖肿胀率;用分光光度计法测量前列腺素E2(PGE2).结果:小鼠灌胃给予棕褐沙林蚁水提物2、4 g/kg 时,对二甲苯所致小鼠耳郭肿胀有显著抑制作用,其作用类似于消炎痛.棕褐沙林蚁水提物 100、450、900 mg/kg连续用药,均可明显剂量依赖性地抑制大鼠佐剂性关节炎的原发性及继发性炎症反应,可降低炎症局部的PGE2质量浓度,其作用与吡罗昔康相似.
作者：陈怡；唐玉；刘进学；袁盛榕 刊期： 2004年第02期
为探讨北京汽南社区中老年妇女骨密度的相关因素,选择142名44～76岁、身体健康的志愿汉族妇女,使用跟骨骨密度仪测量跟骨骨密度(BMD);由医生认真填写调查病史表,包括年龄、绝经年龄、月经史、生育史、既往史、妇科手术史、家族史、嗜好等,与BMD进行相关性分析;并对月经周期、生殖年和妇科手术史对BMD 的影响进行分析.发现:年龄、绝经年与BMD呈负相关(P<0.05),生育史、哺乳史与BMD关系不明显;月经不规律组的BMD为(363.6±66.7)mg/cm 2,低于规律组的(38 8.7±84.9)mg /cm 2;生殖年长组的BMD为(415.7±67.3)mg/cm 2,高于生殖年短组的(368.7±68.7)m g/cm 2;无妇科手术组的BMD为(382.6±84.2)mg/cm 2,高于手术组的(372.4±48.9)mg/cm 2,但经统计学处理均无显著性差异.提示:年龄、绝经年龄是影响老年妇女骨密度的主要因素,有月经不规律病史、生殖年短及有妇科手术史的妇女的BMD较低.
作者：张李松；赖爱鸾；姜桂英；张洪涛；丁磊；林守清；余卫 刊期： 2004年第02期
为了解严重急性呼吸综合征(SARS)的家庭聚集性暴发过程,分析SARS不同阶段的传染性和不同接触方式的危险性及预后影响因素,并进行康复期评价.以首发病例为线索,对密切接触者进行个案调查,分析其传播关系和传染性,并对康复者进行肺功能及血清抗体检查.结果 :与处于症状期的首发病例密切接触的共8人,均先后发病,死亡1例.发病者潜伏期长短与接触方式及个人感染的病毒载量有密切关系.SARS患者年龄大于60岁、伴基础疾病者病死率高.康复4周时患者仍有不同程度的肺功能障碍,血清IgG达(1.11±0.48)g/L.提示 :SARS患者症状期传染性强,未观察到SARS潜伏期具有传染性;年龄大于60岁、伴基础疾病的SARS患者预后较差.
作者：阴赪宏；李晶铃；张淑文；王宝恩 刊期： 2004年第02期
为探讨结直肠癌组织中胰腺炎相关蛋白(PAP)mRNA表达与肿瘤DNA倍体性的关系,收集结直肠癌外科手术标本27例(病理均证实为腺癌),同时取距肿瘤边缘3 cm和8 cm的黏膜组织作为对照.采用逆转录聚合酶链技术,测定样本中有无胰腺炎相关蛋白的表达,并用流式细胞仪对各样本行细胞DNA倍体性分析.发现:PAP mRNA在结直肠癌中的表达阳性率为29.6% (8/27).在8例PAP mRNA阳性表达的肿瘤组织样本中,S期细胞比率(SPF)为18.91±8 .43,并有7例为非整倍体肿瘤;而另外19例PAP mRNA阴性肿瘤组织的SPF为12.11±7.02,有4例为非整倍体肿瘤.在B、C 2个对照组的黏膜组织中未能检测出PAP mRNA阳性表达及非整倍体组织.经统计学处理PAP mRNA阳性样本的非整倍体例数和SPF,与阴性样本相比差异有显著性(P<0.05);而肿瘤细胞的分化程度和扩散范围与PAP mRNA的阳性表达无明显相关.提示:PAP mRNA阳性肿瘤样本有较高增生活性,PAP mRNA的表达与肿瘤分化、浸润深度及淋巴结转移情况无关.
作者：曹广；李非；孙家邦 刊期： 2004年第02期
为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因,用Hind Ⅲ对pcDNA 3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段,与pFastBacI载体连接,得到含VEGF基因的转座载体pFast/VEGF,Nco I酶切鉴定方向;将其转化到含有穿梭载体杆粒(Bacmid) 的DH10Bac感受态细胞,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid/VEGF,采用琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增对重组转座载体、穿梭载体进行鉴定.将Bacmid/VEGF转染sf-9细胞,进行病毒重组及噬斑筛选.结果:琼脂糖电泳得到杆粒(Bacmid)DNA条带,PCR扩增得到575 bp的VEGF片段,病毒液在10-7稀释度时出现噬斑,约50个/孔.说明已成功构建了重组杆状病毒穿梭载体并重组出杆状病毒.
作者：孙丽翠；王雅梅；祁雅慧；闫豫东；张静宜 刊期： 2004年第02期
为探讨抗孕激素药米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株LNCaPC4-2、PC3的促凋亡及生长抑制作用,将不同浓度的米非司酮加入到体外培养的2株前列腺癌细胞中,分别在培养后3 d、5 d、7 d用SRB染色法检测细胞生长抑制率;用流式细胞仪检测加药后24 h、 48 h LNCaPC4-2和PC3细胞凋亡情况.发现:高浓度米非司酮(20 μmol/L)对雄激素非依赖性细胞株LNCaPC4-2、PC3于3 d、5 d、7 d的细胞生长抑制率分别为55.79% 、66.37%、71.54%和87.42%、98.15%、100%.不同浓度米非司酮即2.5、5、10、15、20 μm ol/L对LNCaPC4-2、PC3细胞株7 d时的细胞生长抑制率分别为17.07%、35.77%、53.6 6% 、63.41%、71.54%和48.25%、63.42%、82.37%、95.31%、100%.前列腺癌细胞株LNCaPC 4-2受15 μmol/L米非司酮作用24 h和48 h细胞凋亡率分别为19.30%、30.04%;PC3受米非司酮15 μmol/L作用24 h细胞凋亡率为44.52%.提示:米非司酮对LNCaPC4-2、P C3细胞株有时间和剂量依赖的生长抑制作用,其生长抑制作用是通过促进细胞凋亡实现的.
作者：毕泗成；徐秀红；邵强；杜林栋 刊期： 2004年第02期
为探讨纤溶酶原激活抑制剂-1(PAI-1)基因调节区-675 bp位点4G/5G多态性与2型糖尿病、2型糖尿病合并冠心病(CAD)的关系,采用特异性引物聚合酶链反应(PCR)方法,测定4G/5G基因型,并检测PAI-1抗原水平,共观察了121例单纯2型糖尿病(type Ⅱ diab etes)患者、87例2型糖尿病合并CAD患者和100例对照者.结果:合并CAD组的4G/4G基因型携带者明显高于对照组(49.4%比 37.0%,P<0.05),CAD组中PAI-1与三酰甘油(TG)呈正相关,并与4G/5G多态性有关, 表现为4G/4G基因型携带者的PAI-1质量浓度明显高于5G/5G基因型携带者[(39.82×10-3±3.11×10-3)ng/L比(38.04×10-3± 2.73 ×10-3)ng/L,P<0.05].提示:PAI-1基因4G/5G多态性与TG的联合作用与PA I-1抗原水平相关,并与2型糖尿病合并CAD的发病过程有关.
作者：王旭东；樊峥；傅研；殷红；翟艳玲；祁雅慧；朱宇清；王瑾；赵相印 刊期： 2004年第02期
为观察脑动静脉畸形手术前后局部脑皮质血流量(CBF)的变化,对63例成年脑血管畸形病人 :25例巨大脑血管畸形(血管畸形直径≥6 cm),38例小血管畸形(血管畸形直径<6 cm)进行研究.用激光多普勒血流仪(LDF)分别记录血管畸形切除前后及术后24 h 脑血流数值,比较脑血流变化情况.发现:巨大血管畸形切除后脑血流比切除前明显增加,直到术后24 h仍然保持在高水平;而小血管畸形切除后脑血流无显著变化 .提示:巨大血管畸形和小血管畸形在切除前后的脑血流变化是不同的,监测脑血管畸形切除后脑血流变化有助于减少巨大血管畸形的出血等并发症.
作者：石广志；赵继宗；王硕；王永刚；陆铮 刊期： 2004年第02期
为观察CD117分子在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的表达及探讨其意义,采用三色流式细胞术对22例APL骨髓白血病细胞表面CD117的表达进行分析.结果:CD117 在 APL中的表达率为19/22,在急性粒细胞白血病(AML-M1)和AML-M2中的表达率分别为2/ 2和18/21.19例CD 117+的APL患者中,18例CD34-、HLA-DR-,1例部分细胞HLA-DR+.提示:APL 患者有较高水平的CD117表达,CD117与CD34、HLA-DR联合进行多色流式细胞术分析,可用于APL微小残留病灶的检测.
作者：万岁桂；徐娟；巩文玉；孙雪静；田丁 刊期： 2004年第02期
首都医科大学学报杂志
主管:北京市教育委员会
主办：首都医科大学
