学术投稿

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达及生物活性分析

祁雅慧;王雅梅;孙丽翠;司杨;闫豫东;张静宜;邴国英

关键词:人胰岛素样生长因子, 基因克隆, 基 因表达
摘要:采用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增得到人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)cDNA,利用基因重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1(+)真核表达载体上,成功构建了pcDNA/I重组表达载体.应用脂质体介导的基因转移技术将重组质粒体外转染至人脐静脉内皮细胞(HUVEC).MTT法检测结果表明:重组质粒转染能明显促进内皮细胞的分裂增生.将重组质粒通过脂质体介导,体外转染至人肾细胞293细胞系进行表达,经G418筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆,表达产物经鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生成活性.此结果为研究IGF-1对血管内皮细胞作用的分子机制,以及利用IGF-1基因治疗肢体及冠状动脉缺血性疾病等的研究奠定了实验基础.
首都医科大学学报杂志相关文献
  • 银杏叶提取物对缺氧复氧致神经细胞凋亡中Bax基因表达的影响

    为探讨缺氧复氧致原代培养的大鼠大脑皮质神经细胞凋亡中,Bax基因的表达及银杏叶提取物(EGB)对其的调节作用,用胎龄16~17 d Wistar大鼠的大脑皮质神经细胞进行原代分离培养.采用原位末端标记法(TUNEL)透射电镜技术确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型,并应用免疫组织化学方法显示缺氧复氧不同时间Bax基因的表达.结果:缺氧复氧可以使大鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡,随缺氧时间的延长,凋亡细胞数逐渐增多,至缺氧8 h,复氧18 h达高峰,银杏叶提取物预保护可使凋亡细胞数减少;同时随着缺氧时间的延长,Bax基因表达逐渐增高,EGB可逆转缺氧复氧时Bax的表达.提示:EGB对缺氧复氧时Bax的表达具有明显的抑制作用,这可能是EGB对抗缺氧复氧时胎鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡的机制之一.

    作者:季凤清;孙海梅;郭燕茹;郭崇洁;赵天德 刊期: 2004年第02期

  • 脾切除肝硬化门脉高压大鼠血浆TNF-α质量浓度的变化

    为研究脾切除术、脾动脉结扎术对肝硬化门脉高压症(PHT)大鼠血浆肿瘤坏死因子(TNF-α ) 的影响,研究PHT时TNF-α与一氧化氮合酶(NOS)间的关系,建成PHT大鼠模型,用放射免疫分析法动态检测TNF-α,根据吸光度的大小测定血浆NOS活性,并观察术后4周内各组的病死率.发现:PHT大鼠血浆TNF-α质量浓度较正常对照组明显增高(P<0.01);PHT脾切除组术后3 d、7 d、14 d血浆TNF-α质量浓度与实验对照组比较有显著性差异(P <0.01);脾动脉结扎组TNF-α的质量浓度虽比实验对照组升高,但无显著性差异. 实验对照组血浆NOS活性明显高于正常对照组(P<0.01),且与TNF-α显著正相关( P<0.01,r=0.946);脾动脉结扎组NOS活性显著低于实验对照组及脾切除组(P <0.01).PHT时血浆TNF-α的质量浓度显著增高,提示:TNF-α可能在PHT形成中起重要作用. 与脾动脉结扎组相比较,脾切除组血浆TNF-α的质量浓度显著增高,血浆NOS活性以及病死率亦显著增高,提示:脾动脉结扎术后脾脏仍可发挥一定作用,PHT时应保留脾脏.

    作者:张淑文;刘东斌 刊期: 2004年第02期

  • 无血清饥饿法去除神经组织培养中的成纤维细胞

    介绍去血清饥饿培养方法去除神经组织培养中的成纤维细胞.取2日龄大鼠双侧坐骨神经和双侧嗅球,酶消化、离心,10%胎牛血清(FCS)DMEM体外培养,如果成纤维细胞生长迅速,换无血清DMEM培养液培养.根据细胞生长状况可反复上述过程.S-100免疫荧光染色鉴定雪旺细胞和嗅鞘细胞纯度.结果:换无血清培养液后,成纤维细胞迅速死亡,S-100免疫荧光染色雪旺细胞和嗅鞘细胞的纯度可达98%~99%.此方法简捷、易操作,为神经组织培养中去成纤维细胞的一种好方法.

    作者:历俊华;万虹;翟晶;王忠诚 刊期: 2004年第02期

  • 人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达及生物活性分析

    采用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增得到人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)cDNA,利用基因重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1(+)真核表达载体上,成功构建了pcDNA/I重组表达载体.应用脂质体介导的基因转移技术将重组质粒体外转染至人脐静脉内皮细胞(HUVEC).MTT法检测结果表明:重组质粒转染能明显促进内皮细胞的分裂增生.将重组质粒通过脂质体介导,体外转染至人肾细胞293细胞系进行表达,经G418筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆,表达产物经鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生成活性.此结果为研究IGF-1对血管内皮细胞作用的分子机制,以及利用IGF-1基因治疗肢体及冠状动脉缺血性疾病等的研究奠定了实验基础.

    作者:祁雅慧;王雅梅;孙丽翠;司杨;闫豫东;张静宜;邴国英 刊期: 2004年第02期

  • 颈部椎管内外肿瘤的外科治疗

    根据肿瘤与椎间孔的关系将27例颈部椎管内外肿瘤分为3种类型,并采取不同的手术方法:Ⅰ型(13例):瘤体主要在椎管内,向椎间孔内生长不超过1 cm,椎间孔轻微扩大,采用后正中切口手术.Ⅱ型(4例):瘤主体在椎管外,少部分长入椎间孔;采用颈部入路手术.Ⅲ型(10例):肿瘤在椎管内外都较大,椎间孔明显扩大;采用颈部和后正中入路,分2期切除肿瘤.结果:全切肿瘤25例,近全切除2例.其中23例随访6~79月,22例恢复工作.提示:对颈部椎管内外肿瘤,应分型选择术式,以利于全切肿瘤,并利于维持脊柱稳定性和椎动脉保护.

    作者:杨俊;刘伟明;王江飞 刊期: 2004年第02期

  • 米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌LNCaPC4-2和PC3细胞的作用机制

    为探讨抗孕激素药米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株LNCaPC4-2、PC3的促凋亡及生长抑制作用,将不同浓度的米非司酮加入到体外培养的2株前列腺癌细胞中,分别在培养后3 d、5 d、7 d用SRB染色法检测细胞生长抑制率;用流式细胞仪检测加药后24 h、 48 h LNCaPC4-2和PC3细胞凋亡情况.发现:高浓度米非司酮(20 μmol/L)对雄激素非依赖性细胞株LNCaPC4-2、PC3于3 d、5 d、7 d的细胞生长抑制率分别为55.79% 、66.37%、71.54%和87.42%、98.15%、100%.不同浓度米非司酮即2.5、5、10、15、20 μm ol/L对LNCaPC4-2、PC3细胞株7 d时的细胞生长抑制率分别为17.07%、35.77%、53.6 6% 、63.41%、71.54%和48.25%、63.42%、82.37%、95.31%、100%.前列腺癌细胞株LNCaPC 4-2受15 μmol/L米非司酮作用24 h和48 h细胞凋亡率分别为19.30%、30.04%;PC3受米非司酮15 μmol/L作用24 h细胞凋亡率为44.52%.提示:米非司酮对LNCaPC4-2、P C3细胞株有时间和剂量依赖的生长抑制作用,其生长抑制作用是通过促进细胞凋亡实现的.

    作者:毕泗成;徐秀红;邵强;杜林栋 刊期: 2004年第02期

  • 杜克雷嗜血杆菌与人类树突状细胞和巨噬细胞体外的相互作用

    为探讨抗原呈递细胞(APCs)在软下疳发病机制中的作用,将树突状细胞(DCs)和巨噬细胞(MQs)与流感嗜血杆菌、杜克雷嗜血杆菌及其纯化抗原脂寡糖(LOS)、细胞致死性肿胀毒素(HdCDT)共育,测定它们的吞噬活性及6、24 h时前炎症细胞因子TNF-α、IL -1β、IL-6、IL-8的分泌情况;将抗原作用后的细胞与自体CD4+T淋巴细胞共育,测定T淋巴细胞增生及48 h细胞上清液中的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-13的水平.结果: 约6%~27%的DCs和14%~26%的MQs吞噬杜克雷嗜血杆菌的不同菌株及无荚膜流感嗜血杆菌、大肠杆菌.杜克雷菌的不同菌株诱导DCs、MQs分泌大量的TNF-α、IL-6、IL-8(P<0.05);LOS诱导的前炎症细胞因子水平比细菌低50%~67%;HdCDT不诱导任何前炎症细胞因子的产生.2种细菌作用后的DC s、MQs能激活T淋巴细胞产生高水平IFN-γ,并诱导产生相似的T淋巴细胞增生,HdCDT无此作用.提示:杜克雷菌能影响APCs活化T细胞的能力,并有助于Th1型反应.

    作者:徐婷婷;Hinda J.Ahmed;Kristina Eriksson;Karin Ahlman;杨永弘;Teresa Lagergard 刊期: 2004年第02期

  • 2种骨切片硫堇-苦味酸染色法的比较

    骨切片的染色法有多种,其中硫堇-苦味酸染色法是比较常用的染色方法,但书中及各实验室的染液配制及染色方法不尽相同[1~4],因此我们对2种硫堇染液和2种脱水、透明方法做了一些比较和探讨,以便选择一种效果较好的染色方法.

    作者:曾晓蓓;孙海梅;李宝红 刊期: 2004年第02期

  • 汽南社区中老年妇女骨密度的相关性分析

    为探讨北京汽南社区中老年妇女骨密度的相关因素,选择142名44~76岁、身体健康的志愿汉族妇女,使用跟骨骨密度仪测量跟骨骨密度(BMD);由医生认真填写调查病史表,包括年龄、绝经年龄、月经史、生育史、既往史、妇科手术史、家族史、嗜好等,与BMD进行相关性分析;并对月经周期、生殖年和妇科手术史对BMD 的影响进行分析.发现:年龄、绝经年与BMD呈负相关(P<0.05),生育史、哺乳史与BMD关系不明显;月经不规律组的BMD为(363.6±66.7)mg/cm 2,低于规律组的(38 8.7±84.9)mg /cm 2;生殖年长组的BMD为(415.7±67.3)mg/cm 2,高于生殖年短组的(368.7±68.7)m g/cm 2;无妇科手术组的BMD为(382.6±84.2)mg/cm 2,高于手术组的(372.4±48.9)mg/cm 2,但经统计学处理均无显著性差异.提示:年龄、绝经年龄是影响老年妇女骨密度的主要因素,有月经不规律病史、生殖年短及有妇科手术史的妇女的BMD较低.

    作者:张李松;赖爱鸾;姜桂英;张洪涛;丁磊;林守清;余卫 刊期: 2004年第02期

  • 胰腺炎相关蛋白与结直肠癌DNA倍体性的关系

    为探讨结直肠癌组织中胰腺炎相关蛋白(PAP)mRNA表达与肿瘤DNA倍体性的关系,收集结直肠癌外科手术标本27例(病理均证实为腺癌),同时取距肿瘤边缘3 cm和8 cm的黏膜组织作为对照.采用逆转录聚合酶链技术,测定样本中有无胰腺炎相关蛋白的表达,并用流式细胞仪对各样本行细胞DNA倍体性分析.发现:PAP mRNA在结直肠癌中的表达阳性率为29.6% (8/27).在8例PAP mRNA阳性表达的肿瘤组织样本中,S期细胞比率(SPF)为18.91±8 .43,并有7例为非整倍体肿瘤;而另外19例PAP mRNA阴性肿瘤组织的SPF为12.11±7.02,有4例为非整倍体肿瘤.在B、C 2个对照组的黏膜组织中未能检测出PAP mRNA阳性表达及非整倍体组织.经统计学处理PAP mRNA阳性样本的非整倍体例数和SPF,与阴性样本相比差异有显著性(P<0.05);而肿瘤细胞的分化程度和扩散范围与PAP mRNA的阳性表达无明显相关.提示:PAP mRNA阳性肿瘤样本有较高增生活性,PAP mRNA的表达与肿瘤分化、浸润深度及淋巴结转移情况无关.

    作者:曹广;李非;孙家邦 刊期: 2004年第02期

  • 重症胰腺炎局部血管损伤性大出血的机制与防治

    致命性大出血是重症胰腺炎(SAP)后期并发症之一,发病率为1.2%~14.5%.除外胃、十二指肠因素外[1],局部血管损伤引起的大出血亦不少见,且是患者死亡的主要原因. 对SAP并发大出血的认识和防治是临床工作中的薄弱环节.本文中SAP大出血特指局部血管损伤性大出血.

    作者:刘利涛;李非 刊期: 2004年第02期

  • 急性早幼粒细胞白血病中白血病细胞CD117的表达

    为观察CD117分子在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的表达及探讨其意义,采用三色流式细胞术对22例APL骨髓白血病细胞表面CD117的表达进行分析.结果:CD117 在 APL中的表达率为19/22,在急性粒细胞白血病(AML-M1)和AML-M2中的表达率分别为2/ 2和18/21.19例CD 117+的APL患者中,18例CD34-、HLA-DR-,1例部分细胞HLA-DR+.提示:APL 患者有较高水平的CD117表达,CD117与CD34、HLA-DR联合进行多色流式细胞术分析,可用于APL微小残留病灶的检测.

    作者:万岁桂;徐娟;巩文玉;孙雪静;田丁 刊期: 2004年第02期

  • 免疫组织化学方法检测胰腺组织内的一氧化氮合酶

    急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)在临床上属于发病率及死亡率较高的疾病,其发病机制十分复杂.近年来,内源性一氧化氮(NO)在AHNP发病中的作用受到了广泛的关注,但研究结果很不一致:有的报告NO使AHNP大鼠的胰腺病变加重[1];有的发现NO对AHNP有保护作用 [2].鉴于此,有必要进一步测定AHNP时胰腺组织内一氧化氮合酶(NOS)的表达情况,从而探讨内源性NO在AHNP发病中的作用.

    作者:刘国贞;宋爱利 刊期: 2004年第02期

  • 人胚胎海马神经干细胞体外培养方法的建立

    为建立人胚胎海马神经干细胞的体外培养方法,防止神经干细胞在培养过程中的分化,确立佳的传代时机和方法,分离16周人胚海马组织,采用无血清培养基对所分离的神经干细胞进行体外培养,比较不同培养条件与方法所获得的神经球数量的差异.结果:建立了人胚胎海马神经干细胞体外培养的优化条件,确立了佳传代方法与时机.提示:人胚胎海马神经干细胞在体外抑制分化的条件下可以长期处于未分化状态增生,并且可多次传代.

    作者:赵春礼;孙晓红;鲁强;刘玉军;李敏;姜传涛;杨慧;徐群渊 刊期: 2004年第02期

  • 急诊自杀病人的就诊特点及抢救护理

    急诊护理是一门多层面的学科[1],工作范围广,随机性强,病人病情紧急、危重,因此对抢救工作的要求很高.本研究通过对7年间我院急诊自杀病人现状的回顾性调查,了解其就诊的基本情况,就诊特点和规律,探讨抢救自杀病人的护理重点,提高对自杀病人的护理质量和抢救成功率.

    作者:韦春莉 刊期: 2004年第02期

  • 急性缺氧对大鼠血管内皮细胞的损伤

    应用光镜及电镜,对急性缺氧状态下大鼠的肺小动脉内皮细胞(pulmonary small artery e ndothe lial cell,PSAEC)及肺毛细血管内皮细胞(pulmonary capillary endothelial cell,PCE C)进行形态学观察,并用显微分光光度仪对急性缺氧状态下PSAEC的乳酸脱氢酶(lactic de hydrogenase,LDH)活性进行定量分析.发现:急性缺氧可引起PSAEC和PCEC发生各种损伤性形态变化,损伤程度随缺氧时间延长而加重;与缺氧前相比,急性缺氧后各组PSAEC的LDH活性均下降,且随缺氧时间的延长,LDH活性下降得更明显.提示:急性缺氧可引起血管内皮细胞(VEC)损伤,损伤程度随缺氧时间的延长而加重,血管内皮细胞损伤的程度与其LDH活性密切相关.

    作者:王岸柳;温祥云;刘国贞 刊期: 2004年第02期

  • 儿茶提取物对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

    用流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染的小鼠肺炎为模型,研究儿茶提取物对流感病毒感染机体免疫功能的影响,包括对迟发型超敏反应(DTH)及中和抗体产生的影响.结果显示:儿茶提取物可显著增强2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱发的小鼠DTH反应,即儿茶素+病毒感染组和儿茶素对照组小鼠的耳肿胀度和脾指数都明显增加,与正常对照组相比有显著性差异(P<0.05);提示:儿茶提取物具有增强小鼠T细胞免疫功能的作用.儿茶提取物实验组的中和抗体平均效价为1∶203,与病毒感染对照组(平均效价为1∶104.2)相比具有非常显著性差异(P<0.01);说明儿茶提取物可增强流感病毒感染小鼠中和抗体的水平,提示其对小鼠体液免疫功能亦有增强作用.研究表明:儿茶提取物具有增强病毒感染机体的细胞免疫和体液免疫功能的作用 .

    作者:郑群;平国玲;赵文明 刊期: 2004年第02期

  • 脉压对高血压患者心脏功能的影响

    为探讨原发性高血压(以下简称高血压)患者24 h动态脉压(APP)与心脏功能的关系,对555名初诊或停药2周以上的轻中度高血压患者[男275例,女280例;年龄(47.1±12.7)岁]进行2 4 h动态血压监测和超声心动图检查.根据脉压(PP),将555名患者分为4组, A组:PP≤5.32 kPa(40 mmHg);B组:5.45 kPa(41 mmHg)≤PP≤6.65 kPa(50 mmHg );C组:6.78 kPa(51 mmHg)≤PP≤7.98 kPa(60 mmHg);D组:PP≥8.11 kPa(61 mmHg). 研究结果显示:随24 h APP增大,左室舒张功能减退,主要表现为心房收缩期与舒张早期充盈峰值流速之比值(A/E)增加,舒张早期充盈时间(EDFP)延长;左室收缩功能无明显变化.提示:脉压增高导致高血压患者左室舒张功能减退,而对左室收缩功能无明显影响.

    作者:李梅;华琦;刘力松;刘荣坤;杨峥 刊期: 2004年第02期

  • 对苯二甲酸聚乙二醇酯-对苯二甲酸丁二醇酯共聚物的制备及表征

    采用熔融缩聚法设计合成了对苯二甲酸聚乙二醇酯-对苯二甲酸丁二醇酯共聚物 (PEGT/PBT),并用GPC、FTIR、NMR对合成产物进行了表征,结果表明所得共聚物与设计相符合.

    作者:陈双玲;叶玲;刘锰;徐瑞兴 刊期: 2004年第02期

  • 脑动静脉畸形手术前后局部脑皮质血流的变化

    为观察脑动静脉畸形手术前后局部脑皮质血流量(CBF)的变化,对63例成年脑血管畸形病人 :25例巨大脑血管畸形(血管畸形直径≥6 cm),38例小血管畸形(血管畸形直径<6 cm)进行研究.用激光多普勒血流仪(LDF)分别记录血管畸形切除前后及术后24 h 脑血流数值,比较脑血流变化情况.发现:巨大血管畸形切除后脑血流比切除前明显增加,直到术后24 h仍然保持在高水平;而小血管畸形切除后脑血流无显著变化 .提示:巨大血管畸形和小血管畸形在切除前后的脑血流变化是不同的,监测脑血管畸形切除后脑血流变化有助于减少巨大血管畸形的出血等并发症.

    作者:石广志;赵继宗;王硕;王永刚;陆铮 刊期: 2004年第02期

首都医科大学学报杂志

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主管:北京市教育委员会

主办:首都医科大学