SOCS-3基因真核载体的构建及瞬时表达鉴定

周瑛；徐宁；卢震亚

关键词：细胞因子信号抑制蛋白-3, 真核表达质粒, 基因重组

摘要：目的构建含小鼠细胞因子信号抑制蛋白-3(SOCS-3)基因的重组pcDNA3.1质粒,同时瞬时转染后,鉴定其在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达.方法自小鼠肝脏标本中提取RNA进行RT-PCR,经克隆后获得pUC19-SOCS-3质粒,从中切出目的基因片段克隆至质粒pcDNA3.1中,以构建重组质粒pcDNA3.1-SOCS-3.后将构建完成的质粒瞬时转染COS-7细胞株,并随机分为未转染质粒组(对照组)、转染空质粒组和转染重组SOCS-3基因质粒组,同时采用免疫印迹法测定SOCS-3的表达.结果经测序鉴定证实,SOCS-3与美国国立生物技术信息中心核苷酸序列数据库提供的原始序列完全一致;同时经瞬时转染COS-7细胞后,转染重组质粒组的SOCS-3蛋白表达水平(光密度比值)显著高于对照组和转空质粒组(P＜0.01).结论成功构建含小鼠SOCS-3基因的真核表达质粒,为进一步研究该基因在脂肪代谢中的抑制调节作用提供了技术平台.

浙江医学杂志相关文献

联合检测ADA、IL-18、CEA、VEGF在胸腔积液鉴别诊断中的价值

目前临床上对胸腔积液病因的诊断主要根据胸水常规、涂片和脱落细胞学等检查,而近年来研究发现,胸水中的多种细胞因子水平在鉴别胸腔积液的性质方面具有重要价值,主要包括腺苷脱氨酶(ADA)、IL-18、癌胚抗原(CEA)和血管内皮生长因子(VEGF)等,但单个因子的检测对胸水性质诊断的灵敏度和特异度均较低.

作者：管彩虹；楼雅芳；任自力；黄奕娟刊期： 2009年第04期
糜酶基因多态性与浙江地区汉族人群2型糖尿病肾病的相关性

目的探讨糜酶(CMA)基因多态性与浙江地区汉族2型糖尿病肾病(DN)患者的相关性.方法应用PCR-RFLP技术和遗传学方法,对145例汉族正常人群和130例汉族2型糖尿病患者进行CMA基因CMA/B多态性频率检测;同时根据尿白蛋白排泄率将糖尿病患者分为3组:正常蛋白尿组66例、微量白蛋白尿组40例和临床蛋白尿组24例,并分别检测各组CMA基因CMA/B多态性频率.结果 CMAB基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡;在汉族正常人群中,CMA基因AA、AG、GG型频率分别为0.159、0.497和0.345.糖尿病组及其3个分组患者CMA/B基因型、等位基因频率与正常对照组的差异均无统计学意义(X2分别为1.219、0.560和3.359、1.940,均P＞0.05),而DN组患者与非DN组上述指标的差异均无统计学意义(X2分别为1.403和1.062,均P＞0.05).结论浙江地区汉族人群存在CMA基因CMA/B多态性,而CMA/B多态性可能与汉族人群糖尿病和DN的发病无相关性.

作者：马江波；李红；孟伟华；施育平刊期： 2009年第04期
甲状腺结节的术前检查与良恶性判断

甲状腺结节在临床上十分常见,成年人群中约有4%可触及结节,高分辨率超声检出率更高[1].甲状腺结节大致可分为良性结节和甲状腺痛两类,良性结节占绝大部分,而甲状腺癌不到5%.

作者：楼建林；赏金标；王可敬；郭良；葛明华；王升晔刊期： 2009年第04期
罗哌卡因和布比卡因分娩镇痛对产程的影响

罗哌卡因属新型酰胺类局麻药,与布比卡因有相似的结构,其麻醉性能与布比卡因相似,但麻醉效能稍弱川.在相同药物浓度下,罗哌卡冈对运动神经的阻滞弱于布比卡因,也不影响子宫动脉血流[2],因此罗哌卡因是一种较为理想的用于硬膜外腔分娩镇痛的局麻药.

作者：施秀亚刊期： 2009年第04期
丙泊酚复合七氟醚全麻用于癫痫患儿手术的有效性及安全性分析

癫痫是危害人类健康较大的常见病.全球患病率约0.4%～0.6%,尤以20岁以前多发,儿童癫痫患者尤其多见[1].手术及麻醉方法不当造成继发性癫痫发作也较多见.

作者：董梅珍；邵君刊期： 2009年第04期
DIVERTMCE血栓抽吸导管在急性心肌梗死急诊介入治疗中的应用

目的探讨DJVERTMCE血栓抽吸导管在急诊PCI中应用的有效性和安全性.方法将78例行急诊介入治疗(PCI)的急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者分为血栓抽吸组(30例)及常规PCI组(48例).比较两组患者术后即刻梗塞相关区域的心肌组织灌注分级(TMP)、术后12h ST段回落情况以及术后3个月的主要心血管事件的发生情况.结果 78例研究对象中,冠状动脉造影提示36例(46.15%)存在血栓,术前46例(58.62%)TMPO～1级.血栓抽吸组术后TMPO～1级明显少于常规PCI组(P＜0.05),术后TMP 3级明显多于常规PCI组(P＜0.05),但两组间术后TMP 2级发生率并无明显差异(P＞0.05);血栓抽吸组术后梗死相关导联ST段回落多于常规PCI组(P=0.05);两组术后3个月主要心血管事件发生率无明显差异(P＞0.05).血栓抽吸组无一例抽吸相关并发症发生.结论在STEMI患者的急诊PCI中应用DIVERTMCE血栓抽吸导管安全可行,而且可以显著改善心肌组织灌注,提高梗死相关导联ST段回落率.

作者：叶红华；潘伟民；杜为平；储慧民；张福兴；王勇；张国阳；陈晓敏刊期： 2009年第04期
阿维A联合窄谱中波紫外线照射治疗银屑病的疗效观察

银屑病既往俗称牛皮癣,是一种常见的慢性、复发性、炎症性的皮肤病,其特征性表现为大小不等的丘疹及红斑,表面覆盖银白色鳞屑.

作者：李美芳；王金校；蒋正强刊期： 2009年第04期
儿童肺炎支原体IgM型抗体的检测及其分析

肺炎支原体(MP)主要通过呼吸道传播,其临床表现多样化,可引起全身各脏器损害,但以呼吸道感染为多见,且仅依据临床表现常难与病毒、细菌和结核感染鉴别.

作者：林爱琳刊期： 2009年第04期
慢性完全闭塞病变PCI治疗前后血浆N末端脑钠素原的变化

血浆N末端脑钠素原(NT-pmBNP)是一种由心室合成和分泌的多肽,是B型钠尿肽(BNP)的无活性激素片段,它的升高可准确反映左心室充盈压,并可判断患者预后.

作者：马荣国；邱春光；韩战营刊期： 2009年第04期
精神分裂症并发糖尿病患者经颅多普勒检测对照分析

糖尿病是一种代谢性疾病,易导致血管、微血管病变,引发心、脑、肾、视网膜等脏器广泛病损.由于脑血管早期病变无特异性临床表现,因此,早发现及尽早进行医学干预是目前急待解决的问题.

作者：虞曼；沈志华刊期： 2009年第04期
中重度慢性阻塞性肺病和特发性间质性肺炎患者运动心肺储备功能的对照研究

目的探讨Ⅱ～Ⅲ期的慢性阻塞性肺病(COPD)和特发性间质性肺炎(IIP)患者在运动状态下心肺储备功能、肺通气功能和气体交换功能的异同点.方法选择16例Ⅱ～Ⅲ期的COPD稳定期和15例IIP患者分别作为COPD组、IIP组,并选取15例健康成年人作为对照组,分别对各组进行静息肺功能和运动心肺试验(CPET)检查,并观察运动中相关病理生理学参数指标的变化.结果 IIP组患者第一秒用力呼气量、一秒率、第一秒用力呼气璧占预计值、每分钟大通气量、大运动负荷、每分钟氧耗量、每分钟二氧化碳产生量、氧脉搏、大运动通气量、呼吸储备和呼吸商水平均较COPD组增高(均P＜0.05);IIP组血氧饱和度下降速度较COPD组增快,但达到极量运动的时间却较COPD组延迟(P＜0.05).结论运动状态下,中重度COPD患者较IIP者心肺储备功能、通气功能和气体交换功能下降明显.

作者：王利民；任振义；潘浩刊期： 2009年第04期
MTHFR基因变异与2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化症的关系

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性和2型糖尿病合并颈动粥样脉硬化症(DM+CAS)的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分别检测109例2型DM患者和90例DM+CAS患者及100名健康对照者的MTHFR C677T基因多态性分布特征.同时检测血糖、血脂和血浆同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸(FA)、维生素B12(VitB12)的水平.结果 DM+CAS组的TT基因频率(31.1%)、T等位基因频率(51.1%)明显高于DM组(18.4、33.1)和对照组(18%、33.5%)(均P＜0.05);CC基因型频率(28.9%)和C等位基因频率(48.9%)均明显低于DM组(52.2%、66.9%)和对照组(53.0%、67.5%)(均P＜0.01).DM+CAS组的Hcy水平明显高于DM组和对照组(均P＜0.05),而FA、VitB12明显低于DM组及对照组(均P＜0.05);Hcy与FA、VitB12呈负相关.结论 MTHFR C677T基因多态性与DM+CAS有关,并影响Hcy水平.

作者：邱毅刊期： 2009年第04期
淋巴细胞计数绝对值减少患者的感染风险调查

业已证实,血中性粒细胞减少可显著增加患者的感染风险.然而作者在临床实践观察中曾发现,外周血淋巴细胞计数绝对值(ALC)下降,患者的感染风险也可急剧增加.

作者：王宏智；刘加良；吴美娟刊期： 2009年第04期
原发性肾病综合征并发特发性急性肾衰竭24例临床病理分析

特发性急性肾衰竭(IARF)是原发性肾病综合征(PNS)的严重并发症之一,多数患者虽经治疗后肾功能可恢复,但仍有部分患者可持续存在肾功能衰竭,甚至影响预后.

作者：周莹；尤小寒；黄朝兴；胡小明；董芍芍；虞旭先刊期： 2009年第04期
HBVS-ecdCD40L融合基因构建及相应融合蛋白的二级结构预测

目的构建HBVS-ecdCD40L融合基因,并利用软件对其相应融合蛋白的二级结构进行预测.方法利用分子生物学技术将HBV S基因与人CD40L胞外段基因进行融合,构建融合基因及其真核表达载体,并利用蛋白质分析软件对相应融合蛋白二级结构水平的一些生物学特性进行预测.结果融合基因序列与设计一致,其相应氨基酸序列经软件分析,并与HBsAg和CD40L胞外段氨基酸序列分析结果比较.发现在二级结构上几乎无变化,亲水性和抗原性等生物学活性几乎未受影响.结论 HBVS-ecdCD40L融合基因构建成功,软件分析表明融合过程未影响HBsAg和人CD40L胞外段的生物学活性,为进一步研究奠定基础.

作者：林贤凡；吴金明；陈瑾；孙慧；金思思；申苏建刊期： 2009年第04期
SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术在前列腺癌诊断中的应用

目的通过应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术筛选前列腺癌患者不同于前列腺增生患者和正常健康男性的血清标志蛋白,探讨诊断前列腺癌的新方法.方法检测79例研究对象(包括前列腺癌22例、前列腺增生26例、正常健康男性31例)血清蛋白质图谱,并采用Proteinchip 3.0软件进行分析,选出佳前列腺癌诊断模型,应用该模型对同期另择的12例前列腺癌患者、18例前列腺增生患者以及18例体检健康者进行盲法验证.结果 (1)与正常健康男性比较,前列腺癌患者血清中5个标志蛋白呈高表达(分子量分别为 11665、2958、7978、3092及4657Da),据此建立诊断模型,灵敏度为95.45%,特异性为83.87%;阳性预测值为80.77%,阴性预测值为96.30%.(2)与前列腺增生患者比较,前列腺癌患者血清中2个标志蛋白呈高表达、1个呈低表达(分子量分别为3191、3271及1127Da),据此建立诊断模型,灵敏度为95.45%,特异性为96.15%;阳性预测值为95.45%,阴性预测值为96.15%.所有盲法验证结果均较满意.结论 SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术可以筛选出前列腺癌标志蛋白并建立前列腺癌诊断模型,可能成为前列腺癌诊断的有效方法.

作者：祁小龙；汪朔；肖家全；张大宏；邹强；楼水鑫；章越龙；任黎刚；郦卫星；陈盈刊期： 2009年第04期
恙虫病致肺损害31例诊治分析

恙虫病是由恙虫病立克次体引起的急性传染病,在我国东南沿海和西南地区发病率比较高.近年来,本病的发病率有增高趋势,临床表现也呈多样化和复杂化,并可导致全身多脏器功能损害.

作者：郑宇；金栗名；李骥；陈永平刊期： 2009年第04期
PI3K/Akt/p70S6K途径在哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的观察哮喘大鼠肺组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)活性变化,以探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号转导途径在哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用.方法采用卵蛋白致敏和激发方法将24只SPF级健康雄性SD大鼠制成慢性哮喘模型,随机分为哮喘组(A组)和渥曼青霉素(wortmannin)干预组(W组),同时设正常对照组(C组,共12只),分别观察各组大鼠气道炎症和细胞浸润情况,并测定气道壁厚度(Wat)、气道平滑肌层厚度(Wam)、支气管基底膜周径(Pbm)和肺组织中P-Akt、p-p70S6K、cyclinD1表达水平.结果 A组和W组大鼠Wat/Pbm、Wam/Pbm、肺组织P-Akt、p-p70S6K蛋白、cyclinD1 mRNA的含量均大于C组(均P＜0.01);W组大鼠上述各指标的含量均小于A组(均P＜0.01).肺组织P-Akt蛋白的含量与Wam/Pbm、p-p70S6K蛋白含量和cyclinD1 mRNA含量均呈显著正相关性(均P＜0.01).结论哮喘大鼠肺组织中P13K/AktJp709S6K途径激活,抑制该途径可减少哮喘大鼠ASMCs增殖,从而减轻哮喘气道重塑;同时CyclinD1在哮喘大鼠肺组织中表达增高,且与p-Akt及p-p70S6K表达趋势一致,提示P13K信号转导途径可能通过激活cyclinD1促进ASMCs增殖.

作者：吴立琴；戴元荣；夏晓东；金立达；林洁刊期： 2009年第04期
术中保温对胃癌患者免疫功能的影响

低体温是指患者中心体温低于36℃,是围手术期为常见的体温失衡现象,多因全麻对体温调节功能的抑制以及手术室环境温度较低共同作用的结果.

作者：林学正；彭从斌；周春莲刊期： 2009年第04期
妊娠期肝内胆汁淤积症的临床干预及其预后分析

妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)为妊娠中、晚期常见的并发症,临床上以皮肤瘙痒、黄疸、总胆汁酸和血转氨酶升高为特征,因此早产率、胎儿官内窘迫率、围生儿发病率和病死率均增高.

作者：孙晓燕刊期： 2009年第04期