于慧玲；麻春杰；韩雪梅；赵鹏伟；赵灵燕
高等药学教育的目标是培养药学专业高层次人才，从事药物研究及开发等相关领域的工作。免疫学是药学专业学生的必修课程之一，不仅理论体系完整，而且技术应用广、实用性强，与药学学科有着广泛交叉和渗透。近年来学校不断探索和优化针对药学专业《免疫学概论》课程的教学改革和课程设计，我们通过对教材选用、课程设置、教学方法以及考核方法等方面进行优化和调整，不仅显著地提高了药学专业学生对免疫学课程的学习兴趣，而且一定程度上拓展了学生的知识，明显提升了学生的思考能力。以下结合具体教学实践，浅谈对药学专业免疫学教学内容改革的一些体会和思考。
作者：马樱；金伯泉 刊期： 2016年第07期
作者： 刊期： 2016年第07期
补体系统是机体固有免疫的重要组成部分,可通过经典途径、凝集素途径和替代途径而被激活,发挥其生物学效应[1,2]。启动凝集素途径活化的第一个补体组分是甘露糖结合凝集素( Mannan-binding lection,MBL)/纤维胶原素( Ficolin,FCN)与MBL-相关丝氨酸蛋白酶( Mannose-binding lectin associated serine protease, MASP)结合形成的复合物。 MASP家族由MASP-1、MASP-2、MASP-3丝氨酸蛋白酶及MAp19和MAp44非酶蛋白组成,其中MASP-2是参与凝集素途径活化的重要组分。 MAp19是MASP-2的剪切体,其氨基酸序列分析显示仅比MASP-2羧基端前两个功能区多四个氨基酸残基。 MAp19能与MBL结合,但无催化功能,它是否与MASP-2存在竞争抑制作用尚待进一步研究证实。此外发现MAp19与肾病、骨髓瘤以及SARS等疾病存在一定相关性。
作者：李婷；李萍 刊期： 2016年第07期
免疫性血小板减少症( Immune thrombocyt-openia,ITP)是一种自身免疫性出血性疾病,T细胞免疫调控在ITP的发生发展中起重要作用。我们前期研究发现了ITP中存在异常的TCR亚家族克隆增殖和 TCR 信号通路[1,2]。近几年系列研究发现ITP的T细胞免疫异常与一些介导免疫耐受的分子表达异常相关[3-5]。 T细胞免疫抑制受体在T细胞活化与增殖的负调控中扮演着重要的角色,这些受体主要包含了 PD-1(程序性死亡分子-1)、CTLA-4(细胞毒性淋巴细胞相关抗原4)、Tim-3( T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3),LAG-3(淋巴细胞活化基因-3)和BTLA(B 和T淋巴细胞弱化子)等[6]。近期已有研究报道显示ITP病人血清可溶性PD-1和PD-L1表达水平明显降低,提示该信号通路与疾病的相关性,同样,CTLA-4突变,多态性和表达水平的改变也提示与 ITP 相关[5,7-9]。而未有研究显示Tim-3、LAG和BTLA等新近报道的免疫抑制分子在ITP中的变化特点。本研究首先分析这些基因在ITP病人外周血中的表达特点。
作者：钟隽；陈少华；张涛；郁志；卢育洪；杨力建；赖菁；李扬秋 刊期： 2016年第07期
目的：：探讨不同剂量小柴胡汤对体外培养的C6胶质瘤细胞的抑瘤作用及其作用机理。方法：将C6胶质瘤细胞分别接种于96孔、24孔及6孔培养板中，每种培养板均分为4组：对照组、小柴胡汤低剂量组、中剂量组和高剂量组，待细胞铺满培养板底80%~90%，开始加药，培养24小时后终止培养。采用CCK-8、活体染色、ELISA、免疫细胞化学及流式细胞仪检测细胞增殖活性、细胞存活率、ESM-1和VEGF的蛋白含量及蛋白阳性表达强度和细胞的早期、晚期凋亡状况。结果：CCK-8法检测显示小柴胡汤低、中、高剂量组对C6胶质瘤细胞的生长均有抑制作用； ELISA和免疫细胞化学法显示，小柴胡汤低、中、高剂量组均能降低ESM-1和VEGF的蛋白阳性表达强度及蛋白含量水平；流式细胞仪检测显示小柴胡汤低、中、高剂量组均能促进细胞凋亡；倒置显微镜观察可见随剂量增加细胞排列逐渐松散、萎缩，细胞漂浮死亡数量增多；各种检测法均显示随剂量增加抑制作用增强且具有剂量依赖性，组间差异均有统计学意义( P<0.01)。结论：小柴胡汤对C6胶质瘤细胞的生长具有明显的抑制作用，它可能通过下调ESM-1和VEGF蛋白水平、促进细胞凋亡，从而发挥抑瘤作用。
作者：于慧玲；麻春杰；韩雪梅；赵鹏伟；赵灵燕 刊期： 2016年第07期
目的：：研究IL-17对病毒性心肌炎小鼠的作用。方法：随机挑选20只野生型BALB/c小鼠为对照组,20只IL-17A-/-小鼠为IL-17A-/-组,20只L-17A-/-小鼠为IL-17组。每只小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(Coxsackie virus B3,CVB3)建立VMC模型。收集小鼠外周血利用ELISA法检测血清中IL-17水平,利用流式细胞术检测血清中Th17细胞水平。 CVB3处理3 d后,对照组和L-17A-/-组腹腔注射100μg IgG抗体,IL-17组注射100μg IL-17mAb。分别于CVB3处理第3、7、14天收集小鼠心肌组织。将小鼠心肌切片并H&E染色进行病理学检查。检测小鼠心肌组织中病毒滴度。利用酶联免疫吸附法检测心肌组织IL-17、IL-23、IL-6和TNF-α的含量。结果：成功构建病毒性心肌炎小鼠。对第14天收集的组织进行分析发现, IL-17组小鼠血清中IL-17和Th17水平均显著低于对照组和IL-17-/-组。对照组小鼠心肌组织损伤程度明显高于IL-17A-/-组和IL-17组,IL-17小鼠心肌组织损伤程度高于IL-17A-/-组。对照组病毒滴度高于IL-17A-/-组和IL-17组,且随着CVB3处理时间增加而增加。在补充IL-17抗体后IL-17组病毒滴度高于IL-17A-/-组。在IL-17-/-组和IL-17组的IL-17、IL-23、IL-6和TNF-α水平均显著低于对照组。在补充IL-17抗体后IL-17组IL-17、IL-23、IL-6和TNF-α水平均显著高于IL-17-/-组(P<0.05)。结论：IL-17是参与病毒性心肌炎的重要炎症因子,而IL-17缺失可保护小鼠心肌免受病毒性心肌炎损伤。
作者：张晓玲；余宗林；任劲松；刘福川 刊期： 2016年第07期
目的：：观察干燥综合征( SS)患者凝血参数及外周血细胞因子、NF-κB信号通路蛋白、实验室指标的变化,探讨SS患者高凝状态的机制。方法：随机选取60例SS患者及20例健康人分别作为研究组和对照组；采用全自动凝血仪测定两组凝血参数指标[活化部分凝血酶时间( APTT)、血浆凝血酶时间( PT)、血浆纤维蛋白原( FIB)、凝血酶原时间( TT)、D-二聚体(D-D)]；酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血血清中细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-10)及NF-κB信号通路蛋白(p65、p50、IκBα)的表达量；魏氏法测定血沉( ESR)；采用全自动生化分析仪测定免疫蛋白( IgG、IgA、IgM、GLO)、超敏C反应蛋白( hs-CRP)。结果：60例SS患者中凝血参数指标至少有一项异常者为46例,占全部患者的76.7%。其中参数异常率高的为D-D,其次依次为FIB、APTT、PT、TT。与正常组比较,SS组凝血指标FIB、D-D,血清IL-1β、TNF-α、P50、P65表达量和实验室指标hs-CRP、ESR、IGg、GLO、ESSDAI、角膜荧光染色积分显著升高,唾液流率、泪膜破裂时间、血清IL-10表达量明显降低( P<0.05或P<0.01)。相关性分析显示,凝血指标FIB与唾液流率、TNF-α、P50、P65、ESR、hs-CRP呈正相关,与IL-10呈负相关；TT与TNF-α呈负相关；D-D与TNF-α、IL-1β、P65、ESR、hs-CRP、ESSDAI、角膜染色评分呈正相关,与IL-10呈负相关。结论：SS患者普遍存在高凝状态,可能与细胞因子失衡,NF-κB信号通路异常活化,从而介导血管内皮细胞损伤,引起凝血/纤溶系统紊乱有关。
作者：朱福兵；刘健；方利；谈冰；章平衡 刊期： 2016年第07期
目的：：分析补肺活血汤联合西医治疗慢性阻塞性肺疾病( Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期的疗效及降低气道炎症并改善肺功能的作用。方法：选取我科2013年2月至2015年3月COPD稳定期患者共100例,随机分为联合组和对照组。对照组予以常规吸氧、沙美特罗替卡松粉吸入剂(1吸/次,2次/d)及祛痰治疗。联合组在对照组基础上,加用补肺活血汤,疗程均为12周。对比两组患者的临床疗效及α1-AT和IL-8水平变化。结果：联合组治疗后的咳嗽、咳痰、呼吸困难、喘息、哮鸣症状积分显著低于对照组(P<0.05)。联合组治疗后的用力肺活量(Forced vital capacity,FVC)、一秒用力呼气容积(Forced expiratory volume in one second,FEV1)和FEV1/FVC显著低于对照组(P<0.05)。联合组治疗后的α1-AT和NO显著高于对照组,IL-8和TNF-α显著低于对照组(P<0.05)。联合组治疗后的BODE各项评分显著低于对照组(P<0.05)。结论：补肺活血汤联合西医治疗COPD可通过抑制炎症反应,改善临床症状、肺功能和生活质量。
作者：刘洋；汤万权 刊期： 2016年第07期
作者：《中国免疫学杂志》编辑部 刊期： 2016年第07期
目的：：探讨纳曲酮( Naltrexone,NTX)对小鼠腹膜巨噬细胞表型,分泌细胞因子及吞噬功能的影响。方法：本实验利用新型四唑化合物比色法测得 NTX 对 RAW264.7细胞作用的佳剂量；再将培养的腹膜巨噬细胞分为3组, RPMI1640空白对照组、脂多糖( LPS)阳性对照组和NTX处理组,采用流式细胞术检测CD206、CD64的阳性表达率及对葡聚糖的吞噬能力；ELISA法检测白介素10(IL-10)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌表达。结果：10-11 mol/L剂量可显著促进RAW264.7细胞的增殖；NTX(10-11 mol/L)处理可明显提高腹膜巨噬细胞表面CD64的阳性表达,减少CD206的表达；提高对葡聚糖的吞噬能力；TNF-α、IL-6、IL-1β的表达显著增加,IL-10的表达无明显差异。结论：低剂量纳曲酮可改变巨噬细胞表型及功能,起免疫调节作用。
作者：郭胜男；李岩；王晓楠；单风平 刊期： 2016年第07期
目的：：分析术前PRA水平与肾移植长期存活之间的关系。方法：收集我中心2001年1月至2014年6月间,接受首次肾移植术的1162例受者临床资料,根据受者术前PRA水平分组,将PRA≤10%分为阴性组,PRA>10%为阳性组,并对其进行回顾性分析。结果：术前 PRA 阴性者1、5、10年人存活率为96.8%、89.4%、78.6%,阳性者为93.5%、81.6%、65.4%,而术前PRA阴性者1、5、10年肾存活率为95.9%、84.8%、63.1%,阳性者为92.3%、74.1%、51.9%,两组移植人/肾间生存曲线均有统计学差异(人/肾log-rank检验χ2=9.623/11.019,P=0.002/0.001)。 Cox多因素回归分析显示PRA水平是影响人/肾存活的重要因素(P<0.001),PRA与术后急性排斥反应发生相关(OR=8.25,95% CI=2.86-5.72,P<0.001)。术前PRA阴性受者术后5年、10年血肌酐均较术前PRA阳性者低,具有统计学差异(P<0.05),而两者术后1年血肌酐无统计学差异。此外,PRA与术后抗供体特异性抗体(DSA)出现相关(OR=6.89,95% CI=4.52-9.17,P<0.05)。结论：PRA是肾脏移植术前筛选致敏受者的重要指标,术后更应注重PRA阳性受者急性排斥反应及DSA的监测和诊断。
作者：郭予和；陈伟翔；尹威；潘光辉；马俊杰；陈正 刊期： 2016年第07期
目的：：了解胰岛素自身免疫综合征的临床特点,提高诊治水平。方法：以“胰岛素自身免疫综合征”为关键词,通过中国知网对近15年文献报告的IAS病例71例,进行回顾性分析,统计其病史、临床表现、胰岛素水平、治疗及预后等。结果：71例IAS中有甲状腺功能亢进症病史40例,发病前服用甲巯咪唑有31例；低血糖发作有明显规律的43例,其中有30例在夜间或凌晨发作；有35例出现意识障碍,该类患者的发作时血糖水平较低,胰岛素水平较高；36例予激素治疗,26例仅停服诱发药物,激素治疗的IAA转阴时间较短；缓解的有69例,1例因自动出院预后不详,1例因合并胸膜间皮瘤死亡。结论：IAS是引起严重自发性低血糖的重要病因之一,临床较为少见,常合并自身免疫性疾病及服用羟基药物诱发,出现意识障碍的患者应及时激素治疗,正确治疗一般预后良好。
作者：徐太军 刊期： 2016年第07期
目的：：制备孕激素受体A型单克隆抗体,为后期应用到免疫组化实验提供支持。方法：选择无缝克隆的方法将目的基因与载体连接到一起,通过诱导表达收集蛋白,经过免疫后细胞融合获得单克隆抗体。将该单克隆抗体经免疫组化验证。结果：将融合后筛选的阳性细胞制备获得的单克隆抗体7 C7经免疫组化验证,发现其在乳腺癌、子宫肌瘤组织中呈现阳性,在直肠癌组织、平滑肌组织中呈现阴性,符合目的抗体的要求。结论：该方法获得的孕激素受体A型单克隆抗体较常规方法周期短,获得的抗体在不同组织间结果符合预判,对后期研究区别PR-A、PR-B,临床推广具有重要意义。
作者：赵小磊；翟晋豫；刘玲玲；梁永波；牛银银；李三华；齐华 刊期： 2016年第07期
目的：：观察哮喘-COPD 重叠综合征( Asthma- COPD overlap syndrome, ACOS )机械通气患者肺泡灌洗液(BALF)中肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)及白介素-8(IL-8)的水平,探讨其对ACOS机械通气患者病情发展影响。方法：38例 ACOS机械通气患者根据入院第1天和第5天的APACHEⅡ评分变化,分为病情加重组(18例),及病情缓解组(20例),收集机械通气1、5 d的肺泡灌洗液,测定BALF中SP-D、IL-8浓度,观察不同预后患者BALF中SP-D、IL-8水平的差异。结果：病情缓解组BALF中SP-D含量逐渐上升,机械通气5 d较1 d明显升高(P<0.05)；与病情缓解组比较,病情加重组机械通气1 d、5 d BALF中SP-D含量均明显降低(P<0.05)。病情缓解组BALF中IL-8含量逐渐下降,病情加重组BALF中IL-8含量逐渐上升(P<0.05)。统计分析结果提示BALF 中IL-8含量与APACHE II评分呈负相关(r为-0.44,P<0.05)；统计分析结果提示BALF中SP-D浓度与APACHE II评分也呈负相关(r为-0.32,P<0.05)。结论：SP-D、IL-8在ACOS患者的发生发展中起重要的作用,BALF中SP-D、IL-8可作为ACOS 机械通气患者病情监测和预后的参考指标。
作者：袁彬凡；吴东；何若云；袁亚莲；吴斌 刊期： 2016年第07期
目的：：检测基质金属蛋白酶-11和14( MMP-11和MMP-14)在乳腺癌中的表达,探讨MMP-11对乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法：检测MMP-11和MMP-14在161例浸润性乳腺癌和10例正常乳腺组织中的表达；运用小干扰RNA(siRNA)将高表达MMP-11的MB-231细胞抑制MMP-11,运用Transwell小室测定其迁移和侵袭力。结果：MMP-11和MMP-14在161例乳腺癌组织中高表达(分别为122/161及149/161),两者均与乳腺癌淋巴结转移和TNM分期相关,并且MMP-11与MMP-14呈正相关,差异均有统计学意义(P<0.05)；MMP-11被成功干扰后,MB-231细胞中MMP-11和MMP-14表达同时降低,并且细胞迁移、侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义( P<0.05)。结论：MMP-11和MMP-14均与乳腺癌侵袭转移相关,并且MMP-11被抑制后,能下调MMP-14从而抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭能力,它们可能成为判断乳腺癌预后的分子标志物及临床治疗靶点之一。
作者：黄红颜；谭金祥；任国胜 刊期： 2016年第07期
目的：：明确Allicin对DSS诱导的小鼠结肠炎的治疗作用并进一步分析可能的机制。方法：将24只8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为3组：Control组：阴性对照；DSS组：2.5%DSS诱导结肠炎；Allicin组：2.5%DSS诱导结肠炎+Allicin治疗[10 mg/(kg·d),共7 d]。结果：与DSS组比较,Allicin组疾病活动度评分及肠道炎症评分显著降低(P<0.05)。 Allicin治疗组小鼠肠上皮细胞凋亡数目显著低于DSS组。 Allicin治疗组小鼠肠黏膜炎症因子( IL-6、IL-1β及TNF-α)水平显著低于DSS组,差异均具有统计学意义( P<0.05)。与DSS组比较, Allicin治疗显著抑制了肠黏膜p-JAK2及p-STAT3的表达( P<0.05)。结论：Allicin对DSS小鼠肠炎具有治疗作用,可能的机制包括抗炎,保护肠上皮细胞及抑制JAK2/STAT3信号通路等。
作者：陈晶；李巧霞；李玮；李宏；汤菲；王缚鲲 刊期： 2016年第07期
目的：：探讨表达猪H1N1亚型流感病毒三聚体HA的重组慢病毒(rLV-HA-GCN4)对BALB/c小鼠的免疫保护效果。方法：将雌性BALB/c小鼠随机分为重组慢病毒rLV-HA-GCN4组、重组慢病毒rLV-HA组、慢病毒LV空载体对照组及PBS对照组,先后进行质粒和慢病毒2次免疫,间隔为2周,注射部位均为小鼠大腿内侧肌肉；于初次免疫后的第28天,各组小鼠鼻腔滴注50μl 100TCID50的H1N1病毒,采用淋巴细胞转化实验、流式细胞术、间接ELISA和脾肺指数检测各免疫指标。结果：加强免疫后第14天,rLV-HA-GCN4组脾淋巴细胞转化率为0.3±0.11,与 PBS组相比,差异有统计学意义(P<0.01),产生以Th1型CD4+T细胞为主的细胞免疫反应；rLV-HA-GCN4组小鼠IgG抗体效价可达1：8000,攻毒后第14天约为1：7000；攻毒后,rLV-HA-GCN4组脾肺指数小于PBS组,小鼠体重在前3 d略有下降,随后逐渐上升,两个指标与PBS组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：rLV-HA-GCN4能够诱导小鼠良好的细胞与体液免疫应答,从而有效地保护小鼠抵御猪H1 N1流感病毒的感染。
作者：邓颖琦；李俊峰；曲辉；唐雨博；孙艺学；李鑫；王伟利；丁壮；丛彦龙 刊期： 2016年第07期
目的：：了解登革病毒Ⅱ型(Dengue virus Type 2,DENV-2)感染原代人真皮微血管内皮细胞(Primary Human dermal micro-vascular endothelial cells,pHDMECs)引起细胞通透性改变的机制。方法：用103 TCID50的DENV-2感染pHDMECs；于4、8、12、24、48 h Real time-PCR、免疫荧光法及流式细胞术检测DENV-2 NS1部分序列及蛋白；Transwell法检测细胞通透性；Real time -PCR和双抗体夹心ELISA法检测IL-6和IL-8的变化；流式细胞术检测24、48、72 h细胞凋亡。结果：DENV-2感染的pHDMECs病毒NS1基因相对表达上调,但未检测到病毒NS1蛋白；DENV-2感染的pHDMECs通透性在24、48 h显著升高；pHDMECs被感染72 h后凋亡也无明显变化；IL-6和IL-8 mRNA分别在8、24 h相对表达上调[IL-6：(2.49±0.5)倍,P<0.05；IL-8：(6.82±1.69)倍,P<0.05]；对照组和感染组分泌的IL-6于8 h分别为(869.6±50.7)、(1248.8±86.9)pg/ml,P<0.05；IL-8于48 h分别为(967.6±156.6)、(1331.0±86.3)pg/ml,P<0.05。结论：DENV-2能感染pHDMECs；pHDMECs被DENV-2感染后,细胞的通透性增加与凋亡无关,与促炎性细胞因子IL-6和IL-8明显上调关系密切。
作者：赵军；左丽；戴雪婷；裴华；袁静；孔维莹 刊期： 2016年第07期
目的：：研究磷脂转运蛋白(PLTP)对香烟诱导人支气管上皮细胞(HBECs)合成白介素8(IL-8)的影响。方法：Wistar大鼠连续3 d被动吸烟,收集支气管肺泡灌洗液( BALF),苏木精-伊红( HE)染色,免疫组织化学法( IHC)检测蛋白表达；体外培养HBECs,不同浓度烟草提取物( CSE)刺激；PLTP siRNA干扰后,进行CSE刺激。 MTT法检测细胞增殖,同时检测IL-8含量及PLTP表达。结果：烟熏组BALF白细胞计数以及分类计数较对照组均明显升高( P<0.01), IHC显示烟熏组PLTP和IL-8蛋白表达高于对照组；高浓度CSE (2%、4%)抑制HBECs增殖( P<0.001)；不同浓度的CSE作用24 h后, IL-8 mRNA及蛋白表达量增加,而PLTP蛋白表达量下降,并且IL-8蛋白分泌呈现时间依赖性；PLTP siRNA处理后,IL-8表达量明显升高(P<0.001)。结论：PLTP基因缺失促进香烟诱导HBECs合成IL-8。
作者：余秀英；黎友伦；巫凤苹；陈亚娟 刊期： 2016年第07期
目的：：探讨miR-126与VEGF在乳腺癌中的表达情况,及miR-126发挥的抗肿瘤效果。方法：以qRT-PCR检测和Western blot分析miR-126与VEGF在乳腺癌组织和细胞中的表达情况；以miR-126 mimics转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231,检测miR-126对VEGF的表达影响,MTT法和细胞划痕实验验证miR-126对肿瘤细胞的增殖和迁移能力的影响。结果：miR-126在乳腺癌组织和细胞中呈低表达,VEGF表达与其呈负相关,上调miR-126可以降低VEGF的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。结论：miR-126可以通过下调VEGF表达来实现降低乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,从而发挥抗肿瘤效果。
作者：米旭光；李首庆；刘多；魏海峰；江显卓；方艳秋 刊期： 2016年第07期
中国免疫学杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国免疫学会,吉林省医学期刊社
