徐乔乔;赵秀秀;谢新欣;周霞;孙中武
目的 采用德尔菲专家咨询法,构建流感与新型流感暴发早期预警指标体系.方法 通过两轮专家问卷调查法,咨询专家对各指标的评分,根据界值筛选法确定流感与新型流感暴发早期预警指标体系.结果 第一轮,流感的专家权威系数为0.79±0.09;第二轮,流感的专家权威系数为0.81±0.08,新型流感为0.80±0.08.总体指标专家协调系数,第一轮专家协调系数为0.30(P <0.001);第二轮,流感的专家协调系数为0.25 (P< 0.001),新型流感为0.35 (P<0.001).终确定流感暴发早期预警指标体系,共9个一级指标,40个二级指标;新型流感早期预警指标体系共8个一级指标,40个二级指标.结论 专家权威性和专家协调程度较好,构建的流感与新型流感暴发早期预警指标体系得到了专家普遍认可,较为科学.
作者:朱梦;龚磊;宋丹丹;马婉婉;陈芳;侯赛;吴家兵 刊期: 2018年第09期
入选100例接受支气管镜检查的患者,随机分为镇静组(术前利多卡因雾化局麻联合舒芬太尼+咪达唑仑)和对照组(仅利多卡因雾化局麻),每组各50例,对比两组患者对支气管镜检查的耐受性、舒适度及安全性.结果显示镇静组患者操作时长缩短(P<0.01),术中咳嗽、窒息感及疼痛视觉模拟(VAS)评分均明显减低(P <0.001),术后遗忘程度高,愿意接受再次检查的人数增多(P <0.001).镇静组出现心率显著升高的例数明显减少(P<0.01),但出现收缩压(SBP)明显下降的例数和血氧饱和度(SpO2)显著下降的例数多于对照组(P<0.05),但均为一过性表现,可迅速自行缓解.说明该方法可明显提高支气管镜检查的舒适度,安全性亦较高.
作者:刘红艳;高磊;刘云峰;赵卉 刊期: 2018年第09期
目的 分析吗啡与布托啡诺对肺腺癌细胞A549侵袭与迁移的影响及可能的作用机制.方法 人肺腺癌A549细胞随机分为吗啡组与布托啡诺组.每组均分别设置吗啡、布托啡诺与拮抗剂不同浓度.采用免疫组化法、Transwell法、细胞划痕法评估吗啡与布托啡诺及其对应的拮抗剂对肺腺癌细胞A549侵袭与迁移及相关蛋白表达的影响及作用机制.结果 随着布托啡诺剂量的增加,A549细胞侵袭数明显减少,而随着吗啡剂量的增加,A549细胞侵袭数明显增加(P<0.05);随着布托啡诺剂量的增加及时间延长,A549细胞迁移变化不明显,而随着吗啡剂量的增加A549细胞迁移数明显增加(P<0.05);Nor-Binaltorphimine(Nor-BNI)剂量为0.1 μmol/L时,A549细胞侵袭数明显增加.与单纯布托啡诺组比较,加入Nor-BNI后,每组对应剂量的A549细胞侵袭数明显增加.与单纯吗啡组比较,随着甲基纳曲酮剂量的增加,A549细胞侵袭数明显减少.10 μmol/L布托啡诺作用肺腺癌A549细胞24h后,相关蛋白表达下调,而吗啡作用后表达上调(P<0.05).结论 吗啡可促进肺腺癌细胞A549的迁移与侵袭,并上调MMP-2、MMP-9、Fascin蛋白表达,而布托啡诺则抑制肺腺癌细胞A549的迁移与侵袭,并下调MMP-2、MMP-9、Fascin蛋白表达.
作者:李彬;薛昀 刊期: 2018年第09期
目的 探讨载脂蛋白J(ApoJ)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑出血大鼠补体3(C3)表达的影响.方法 采用贴壁筛选法体外培养并纯化大鼠BMSCs,利用脂质体介导重组质粒pEGFP-N1-ApoJ转染BMSCs.建立大鼠尾状核脑出血模型,随机分为ApoJ/BMSCs组、BMSCs组和NS组,每组24只,三组分别于建模后24h在脑出血部位移植等体积转染ApoJ基因的BMSCs悬液、BMSCs悬液、生理盐水,各组再根据移植后喂养时间不同分为1、3、5、7d4个亚组,每亚组6只.采用RT-PCR法和免疫组织化学染色技术分别检测血肿周围脑组织C3 mRNA和蛋白质的表达情况.结果 应用全骨髓贴壁法成功分离、培养出活性及纯度较高的BMSCs,携带ApoJ基因的BMSCs能够表达外源性ApoJ.RT-PCR和免疫组化结果显示,与NS组和BMSCs组比较,ApoJ/BMSCs组各时间点C3的mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),且BMSCs组亦低于NS组(P<o.05).结论 ApoJ基因修饰的BMSCs能明显下调C3的表达,证实ApoJ对脑出血的神经保护作用是通过抑制补体激活而实现的.
作者:刘茂春;刘亮;普娟;陈慧;徐斌;刘学良;郑晓梅 刊期: 2018年第09期
目的 观察脑源性神经营养因子(BDNF)在慢性不可预见性温和刺激(CUMS)大鼠海马星形胶质细胞中的表达变化情况.方法 将60只成年大鼠随机分为应激组(n=30)和对照组(n=30),应激组大鼠给予CUMS,对照组每天随机抓取一次.分别采用糖水偏好实验、旷场实验和Morris水迷宫实验对两组大鼠进行行为学检测;免疫荧光双标法检测大鼠海马星形胶质细胞特异性标志蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和BDNF蛋白的共定位;采用Western blot法检测大鼠海马组织中BDNF蛋白表达水平.结果 ①糖水偏好实验:应激组大鼠的糖水消耗量及糖水偏好率均低于对照组(P<0.01);②旷场实验:与对照组相比,应激组大鼠的行走总路程、中央活动时间、站立次数、修饰行为次数均偏低(P<0.01);③Morris水迷宫实验:与对照组比较,应激组大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P<0.01);④GFAP和BDNF免疫荧光双标结果:部分星形胶质细胞的胞质内GFAP和BD-NF有共定位;⑤Western blot法检测结果:CUMS后1、7、14d应激组大鼠海马组织中BDNF的表达水平均低于对照组(P<0.01).结论 CUMS大鼠海马星形胶质细胞中BDNF表达水平降低,这可能与抑郁症的发病机制有关.
作者:吴红芳;金齐颖;曹金英;马原源;张园园;刘昊 刊期: 2018年第09期
目的 制备鼠抗人CD137抗体,并对该抗体进行人源化改造.方法 构建hCD137-pCDNA3.4真核表达质粒,经293F细胞表达纯化及鉴定后,获得CD137蛋白.制备pHAGE-CMV-MCS-IRES-ZsGreen-hCD137的慢病毒,感染HEK-293FT细胞,获得用来筛选杂交瘤的CD137转基因细胞株.将CD137蛋白免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价,将免疫小鼠的脾脏和骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用ELISA方法及流式细胞术对小鼠杂交瘤进行筛选.将筛选后的杂交瘤细胞接种小鼠,获得腹水.对抗体亚型和抗体效价进行测定,并通过竞争结合抑制实验等方法对所获的CD137单抗的生物学特性进行分析鉴定.提取该mAb杂交瘤细胞株的总RNA逆转录成cDNA,进行鼠抗人CD137抗体可变区序列克隆,构建人源化抗体重链和轻链表达载体,瞬时转染HEK-293FT,检测分析各重组人源化抗体与抗原的亲和力.结果 获得1株CD137单抗(6F5),该抗体与CD137L有竞争作用.蛋白结合表位在A.A 30-100.6F5能够激活NF-κB信号通路,对外周血单个核细胞增殖具有显著促进作用,且人源化后抗体的亲和力不变.结论 成功制备1株CD137人源化抗体,该人源化抗体为下一步开展体内肿瘤治疗奠定了基础.
作者:何妍;王华菁;陆婷;徐依云;黄勇;杨焕凤 刊期: 2018年第09期
目的 探究由c-Myc调控的长链非编码RNA7(lncRNA7)对舌鳞癌细胞增殖的作用.方法 Western blot检测pLKO.1-shc-Myc和Flag-c-Myc分别转染至舌鳞癌SCC3细胞中原癌基因c-Myc的表达情况,qRT-PCR检测下调或上调c-Myc对lncRNA7表达水平的影响.将构建的pLKO.1-shlncRNA7表达载体转染入SCC3,获取低表达lncRNA7的细胞.MTT法和细胞克隆实验分别检测敲低lncRNA7后对SCC3细胞生长和增殖的影响.荧光原位杂交实验检测lncRNA7在细胞中的定位.结果 成功下调或上调SCC3细胞中c-Myc表达,lncRNA7水平也随之降低或升高.成功敲低SCC3细胞中lncRNA7表达,SCC3细胞生长减慢,克隆数量减少.荧光原位杂交实验结果证明lncRNA7定位于舌鳞癌细胞SCC3的胞质中.结论 敲低受c-Myc正调控的lncRNA7表达能抑制舌鳞癌细胞增殖,表明lncRNA7可能成为舌鳞癌潜在的治疗靶点.
作者:徐艳雪;韩瞳瞳;朱友明;陈乔尔 刊期: 2018年第09期
目的 观察间歇性Theta节律刺激(iTBS)与1 Hz重复经颅磁刺激(rTMS)对脑卒中患者上肢运动功能恢复的疗效.方法 选取37例脑卒中后偏瘫患者,采用随机数字表法分为3组(iTBS组13例,1 Hz组11例,对照组13例).3组均接受综合康复治疗,在此基础上,1Hz组给予健侧大脑M1区1 Hz的rTMS,iTBS组给予患侧大脑M1区iTBS,对照组不做磁刺激.治疗前后进行上肢Fugl-Meyer (U-FMA)、手臂动作调查测试表(ARAT)及改良Barthel指数(MBI)量表评定并采集运动诱发电位(MEP)参数.结果 ①治疗后各组FMA、MBI评分均较治疗前有明显提高,1 Hz组和iTBS组的ARAT评分和MEP峰值较治疗前明显增高,MBI评分提高优于对照组(P<0.05);iTBS组FMA、ARAT评分提高明显优于对照组(P<0.05);②各组患侧MEP潜伏期均较治疗前明显缩短,其中1Hz组较对照组缩短明显(P<0.05).结论 iTBS、1Hz重复经颅磁刺激组对患者日常生活活动能力的恢复有益,其中iTBS有助于患者手功能的恢复,iTBS、1 Hz rTMS均能够增强患侧大脑M1区的兴奋性;iTBS、1 Hz两组的治疗效果无明显差异.
作者:姜畅;吴建贤;洪永锋;卢茜 刊期: 2018年第09期
目的 探讨阿尔茨海默病患者左侧海马不同亚区结构、功能改变及其与认知功能的相关性.方法 采集16例阿尔茨海默病患者及17例健康对照的结构和静息态功能磁共振数据,利用简明精神状态测试评估认知功能;将左侧海马分割为情绪、认知和感知觉3个亚区;并将3个亚区作为感兴趣区,计算不同亚区的灰质体积、各亚区与全脑的功能连接,比较两组在海马不同亚区的结构和功能连接差异.结果 两组相比,患者组左侧海马情绪亚区、认知亚区、感知觉亚区灰质体积明显下降(P均<0.001);患者组左侧海马认知亚区与右侧背外侧前额叶间功能连接增强(GRF校正,体素水平P<0.001,团块水平P<0.05),两组海马情绪亚区、感知觉亚区与全脑功能连接均无显著差异.结论 阿尔茨海默病患者在左侧海马各亚区灰质体积下降,左侧海马认知亚区功能连接异常.
作者:田仰华;余永强;汪凯 刊期: 2018年第09期
目的 研究新生大鼠在高氧中脑组织内谷氨酸(Glu)浓度的变化及机制,探讨谷氨酸及其转运体在高氧脑损伤中的作用.方法 高氧组将新生6d大鼠置于体积分数为80%高氧下持续暴露24 h,建立新生大鼠未成熟脑高氧损伤模型,对照组将新生大鼠置于正常空气中7d.两组新生大鼠均于第7天分别断头取脑组织,应用ELISA法检测脑组织内Glu及γ-氨基丁酸(GABA)蛋白含量;应用Westernblot法检测高亲和力谷氨酸转运体EAAT1、EAAT2、EAAT3,脑型葡萄糖转运体GLUT1、GLUT3及囊泡谷氨酸转运体VGLUT1、VGLUT2的蛋白表达情况.结果 与对照组比较,高氧组谷氨酸转运体EAAT2、EAAT3、GLUT1和VGLUT2的蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),而EAAT1、GLUT3和VGLUT1的蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义;高氧组脑组织内Glu/GABA的比值较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 高氧可导致新生大鼠脑组织内Glu/GABA的比值增高,其机制与EAAT2、EAAT3、GLUT1和VGLUT2的蛋白表达下降有关.Glu增加可能是高氧造成脑损伤的原因之一.
作者:王丹丹;刘光辉;赵钰玮;张健 刊期: 2018年第09期
目的 以杂交一代(BDF1)小鼠为模型,探索小鼠第一极体基因组移植(PB1T)的佳时间窗,提高第一极体基因组移植重构胚存活率和体外发育能力,为临床研究和应用提供前期动物实验基础.方法 获取注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后12.5、13.5、14.5、15.5 h4个时间点的MII卵子作为实验组.分别取第一极体作为核供体,取hCG后14h的MII卵子,去除纺锤体染色体复合物后作为胞质供体,构建四组第一极体基因组移植重构胚.获取MII卵子进行体外受精并培养作为对照组(IVF组).体外培养并观察实验组4组重构胚以及对照组卵子存活情况、体外受精、卵裂和囊胚发育情况.结果 在4组实验组中,13.5 h组的PB 1T重构卵子的存活率、体外受精率、2-细胞形成率、4-细胞形成率和囊胚率均高,与IVF对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).14.5 h组的重构卵子的存活率、体外受精率和后续发育率稍低于13.5 h组,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).15.5 h组的重构胚体外受精率和囊胚形成率均低(76%、41.7%),与对照组相比差异有统计学意义(P =0.020 0,P=0.005 7).结论 BDF1小鼠hCG后13.5 h和14.5 h的卵子的第一极体基因组在新的供体胞质中能够更好地重建发育潜能,行PB1T可能的佳时间窗为hCG后13.5~14.5h.
作者:袁锦;纪冬梅;邹薇薇;武龙梅;章志国;曹云霞 刊期: 2018年第09期
总结后腹腔镜下73例活体供肾切取术的经验,分析临床效果,改进操作技术.回顾性分析后腹腔镜下活体供肾切取术共73例的临床资料、手术操作、手术时间、出血量、术后愈合时间、并发症发生情况和受者肾功能情况等.73例手术均获得成功,手术时间(98.3±22.9)min,1例因过度肥胖、腹膜破裂中转开放.术中出血量(42.1±19.7)ml,所有供者不需输血.供肾热缺血时间(5.2±0.7) min.供者术后住院(6.9±2.0)d.供者发生术后并发症3例,1例为术后肾区血肿,保守治疗后自行吸收;2例为术后乳糜漏,均保守治疗后自行停止.供者术后随访1~ 33个月,6例出现切口膨出,无需处理;8例出现腰腹部皮肤麻木,在1~6个月自行好转.所有受者肾功能恢复良好.后腹腔镜下活体供肾切取术创伤小、出血少、恢复快、安全可靠,经不断技术改进后已经成熟和标准化,值得临床推广.
作者:朱道方;唐亮;钟金彪;廖贵益;梁朝朝 刊期: 2018年第09期
探索超声波数域衰减系数评估早期肝纤维化在体实验的可行性.以肝脏近场区域为参照对象,以其远场肝脏为感兴趣区域,采集36例参与者肝脏波束形成后射频信号(PRF)数据及肝脏穿刺活检病理,采用波数域衰减系数计算方法对PRF信号进行处理,并与肝纤维化分级对照分析.36例参与者病理分期分为S0~S2期,其衰减系数分别为(0.0904±0.0187)、(0.126 7 ±0.0251)、(0.141 1 ±0.031 0),随着肝纤维程度增加,肝脏波数域衰减系数呈增高趋势,与肝纤维化分期具有较好相关性.波数域衰减系数在早期肝纤维化不同分期中有显著差异,该方法具有在体无创评估肝纤维化的潜能.
作者:丁腾云;邱文倩;王亚丹;张嘉靖;郑驰超;张超学 刊期: 2018年第09期
目的 应用Logistic回归模型和分类树模型进行对比分析,探讨空腹血糖受损(IFG)患者的危险因素.方法 采用整体抽样的方法,对5 952例体检者进行调查,分别应用Logistic回归模型和分类树模型对IFG的影响因素进行探讨,并采用受试者工作特征曲线(ROC)对两模型分类效能进行检验.结果 ①Logistic回归模型显示:高龄、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、高血压、高三酰甘油、高体重指数是IFG患者的危险因素,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)是IFG患者的保护因素(P<0.05);②分类树模型共筛选出5个危险因素,包括NAFLD、高龄、高血压、高TG和高LDL-C;③Logistic回归模型的ROC曲线Youden指数为41.90%,敏感性为75.00%,特异性为66.90%,曲线下面积(AUC)值为0.775.分类树模型的ROC曲线的Youden指数为43.96%,敏感性为73.27%,特异性为70.69%,AUC值为0.775,两种模型AUC比较差异无统计学意义.结论 Logistic回归模型和分类树模型均具有中等准确性,两模型曲线下面积没有明显差异性,在实际应用中可结合具体情况选择.
作者:姚爽;谢梦婷;邹迪莎;黄芳;马小珺;江仁美;于健 刊期: 2018年第09期
目的 探讨布地奈德干预对哮喘小鼠核转录因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、相关炎症因子表达及早期气道重塑的影响,进一步完善布地奈德治疗哮喘的理论支持.方法 随机将30只BALB/C雌性小鼠分为对照组、布地奈德组和哮喘组,每组10只.布地奈德组、哮喘组均采用鸡卵白蛋白(OVA)诱导建立哮喘模型,对照组则采取生理盐水替代.HE染色观察小鼠肺组织炎症变化;ELISA法测定小鼠肺泡灌洗液(BALF)中白介素-13 (IL-13)、白介素4 (IL-4)、白介素-5(IL-5)的表达水平;Western blot及Real-time PCR法分别定量分析肺组织中NF-κB p65、TGF-β1的蛋白表达及mRNA的表达;用医学图像采集系统及医学图像分析软件测定支气管管腔的周长(Pbm)、支气管管壁面积(WAt)、支气管管壁平滑肌面积(WAm)及平滑肌细胞计数(N),将上述指标均用Pbm标准化.结果 HE染色表明哮喘组与对照组相比,哮喘组小鼠有显著的气道周围炎症细胞浸润、黏膜下水肿、气管腔壁狭窄增厚等情况;各组小鼠BALF中IL-13、IL-4、IL-5检测结果提示,布地奈德组分别与对照组和哮喘组相比,上述指标较对照组高,而明显低于哮喘组(P<0.05).各组小鼠肺组织Western blot结果显示,布地奈德组NF-κB p65、TGF-β1含量明显高于对照组,哮喘组则明显高于布地奈德组(P<0.05);Real-time PCR结果显示NF-κB p65及TGF-β1的mRNA在哮喘组中的表达均高于布地奈德组和对照组(P<0.05);图像软件分析显示,布地奈德组Wat/Pbm、WAm/Pbm、N/Pbm较哮喘组有明显改善,较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 NF-κB/TGF-β1信号通路可能是哮喘发病机制中的重要环节,并可能参与哮喘早期气道重塑,布地奈德治疗哮喘的机制之一可能通过抑制哮喘NF-κB、TGF-β1的表达,从而改善哮喘症状,干预哮喘气道重塑.
作者:邓鹏辉;马常亭;张健;高明霞;李鸿佳;张才擎 刊期: 2018年第09期
目的 探讨抑郁症患者自我怜悯和其共情能力之间的关系.方法 采用中文版自我怜悯量表(SCS-C)、中文版人际反应指针量表(IRI-C)和汉密尔顿抑郁量表(HAMD-17)对54例住院抑郁症患者和59例正常对照者进行评估,分析抑郁症患者自我怜悯水平与其共情缺陷之间的关系.结果 抑郁症患者组SCS-C总分及其自我友善、普遍人性和正念各因子分均低于对照组(P <0.001);患者组观点采择分低于对照组(P<0.01),个人痛苦分高于对照组(P<0.001);患者组SCS-C总分及其各因子分与抑郁程度呈负相关性(P<0.01,P<0.05),与观点采择分呈正相关性(P<0.01,P<0.05),与个人痛苦分呈负相关性(P<0.01);正念与观点采择、普遍人性与个人痛苦之间有线性回归关系(P<0.01).结论 抑郁症患者自我怜悯水平较低、与其共情缺陷存在相关和线性回归关系.
作者:王本红;李晓驷;谢雯;夏海森;穆菁菁;耿峰 刊期: 2018年第09期
目的 探究长链非编码RNA结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的调节作用及作用机制.方法 RT-PCR法检测CCAT1 shRNA(sh-CCAT1)转染细胞后CCAT1的表达水平和sh-CCAT1+miR-219a inhibitor或CCAT1+miR-219a mimic转染细胞后miR-219a的表达情况.荧光素酶报告实验验证CCAT1和miR-219a的靶向关系.流式细胞术和CCK-8法检测细胞生存能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞增殖、凋亡和迁移相关蛋白的表达.结果 sh-CCAT1能显著抑制CCAT1的表达并能显著减弱miR-219a inhibitor对miR-219a表达的抑制作用;CCAT1能明显减弱miR-219a mimic诱导miR-219a表达的作用;同时,荧光素酶报告实验表明CCAT1和miR-219a存在靶向关系;sh-CCAT1能显著抑制Hela细胞增殖及侵袭、诱导细胞凋亡;miR-219a inhibitor能显著减弱sh-CCAT1对Hela细胞增殖、侵袭的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用;此外,sh-CCAT1还能明显抑制Ki67和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达、促进半胱天冬酶(Caspase-3)表达,miR-219a inhibitor能明显减弱sh-CCAT1对Ki67、MMP-9和Caspase-3表达的调控作用.结论 CCAT1能通过下调miR-219a表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移、抑制细胞凋亡.
作者:王圣坦;朱根海;洪澜;吴秀容;纪武 刊期: 2018年第09期
目的 探索内源性γ-干扰素(IFN-γ)对斑马鱼血管发育的影响.方法 利用反义吗啉环寡聚核苷酸(MO)技术下调斑马鱼IFN-γ受体crfb17的表达,并通过激光共聚焦成像分别观察胚胎受精后3d和5d的脑血管发育情况与胚胎受精后28 h和31 h的躯干血管发育情况;进一步利用软件分析胚胎受精后3d时crfb17 MO组和对照MO组中脑网络特征的差异.结果 下调斑马鱼IFN-γ受体crfb17后,斑马鱼脑血管和躯干血管的发育受到明显抑制,胚胎受精后3d时crfb17 MO组的中脑血管总长度、血管节段数、血管密度都较对照MO组显著降低(P <0.001).结论 内源性IFN-γ在斑马鱼血管发育阶段具有促血管生成的作用.
作者:蒋伟青;袁欣;刘晨;任潇;王永刚 刊期: 2018年第09期
糖尿病肾病(DN)是糖尿病较为常见的微血管并发症之一,也是导致患者出现终末期肾脏疾病的重要原因,然而DN的发病机制目前尚未明确.近年来研究显示microRNAs与DN关系密切,尤其是microRNA-21更是成为研究的热点.该文主要从microRNA-21介导DN的常见的3条信号通路途径(TGF-β/Smad信号途径、PTEN/PI3K/AKT信号途径、MMP-S/TIMPS信号途径)进行综述.
作者:廖华君;文小敏;许帅 刊期: 2018年第09期
目的 构建携带D896N突变型EGFR基因的重组质粒,转染Ba/F3细胞后对其的表达及对吉非替尼的敏感性进行研究.方法 PCR构建重组质粒MSCV-Tel-EGFR D896N,与2种辅助质粒MLV和VSVG共转染293T细胞包装产生慢病毒,对Ba/F3细胞进行转染.Puromycin筛选后,Western blot检测EGFR及p-EGFR的表达;撤除IL-3培养观察细胞是否正常增殖;Western blot检测并比较Ba/F3-Tel-EGFR L858R、Ba/F3-Tel-EGFR D896N对于吉非替尼的敏感性.结果 酶切及测序验证重组质粒构建无误,Western blot检测转染后的Ba/F3细胞中EGFR及p-EGFR有表达,撤除IL-3后细胞无法正常增殖,吉非替尼作用后p-EGFR明显下降.结论 成功构建了表达D896N突变型EGFR的Ba/F3细胞株,初步判断该位点并非驱动基因,但是对吉非替尼有一定敏感性.
作者:潘婧;彭佳;潘跃银 刊期: 2018年第09期