王柏涛；张启芳；邱小芬；杨红杰；孟云超；郑奕
目的 构建甲羟戊酸激酶( MVK)基因真核及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞中,观察其对细胞周期蛋白的影响.方法 从BxPC-3细胞中提取总RNA, 逆转录PCR ( RT-PCR)法获得目的基因 MVK 以及通过化学合成 MVK (751~779)和 MVK(1 089~1 117)位点寡核苷酸片段,构建真核表达及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞,筛选稳定表达细胞系.Western blot法分析转染后对BxPC-3细胞周期蛋白的影响.结果 成功获得MVK基因真核表达( pcD-NA3. 1-mvk)及两个针对 MVK shRNA 表达载体( piLenti-RNAi-shRNA1/2). 通过抗生素筛选及Western blot分析获得了稳定的MVK过表达及低表达细胞株. Western blot分析显示:过表达MVK的细胞株及MVK knockdown的细胞株中细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达量与正常及对照细胞相比均显著降低. 结论 MVK过表达及低表达均抑制Bx-PC-3细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E的表达.
作者：金锐；王芳；栾康；罗欣；张胜权 刊期： 2016年第01期
目的 观察缬沙坦对糖尿病大鼠足细胞相关蛋白表达的影响,探讨肾素-血管紧张素系统( RAS)抑制剂保护糖尿病大鼠足细胞的机制. 方法 将36只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组和实验组. 实验组使用链脲佐菌素( STZ)诱导建立糖尿病大鼠模型,随机将其分为糖尿病模型组、缬沙坦干预组. 8周后分别检测各组大鼠糖化血红蛋白(HbA1C)、尿白蛋白(UALB)、尿肌酐(UCR)、尿视黄醇结合蛋白(URBP)及肾脏肥大指数(KI)的变化,并计算尿白蛋白/肌酐(UACR)和尿视黄醇结合蛋白/肌酐(UBCR),每周监测各组血糖( BG);8 周后利用光镜及电镜观察大鼠肾脏病理及足细胞形态变化;采用免疫组化、RT-PCR法分别检测肾组织Podocin蛋白和 mRNA的表达. 结果 与正常对照组比较,糖尿病模型组和缬沙坦干预组糖尿病大鼠 BG、HbA1C、UACR、UBCR、KI均明显增高(P<0. 01),肾脏皮质Podocin mRNA及肾组织Podocin蛋白表达水平均显著降低(P<0. 01),肾脏肾小球体积增大,基底膜增厚,足细胞病变较重;与糖尿病模型组比较,缬沙坦干预组除BG及HbA1C外,UACR、UBCR、KI均明显降低(P<0. 01),肾脏皮质Podo-cin mRNA及肾组织Podocin蛋白表达水平增高( P<0. 01 ) ,肾小球、小管间质、基底膜及足细胞的病理损伤减轻. 结论缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏足细胞有明显的保护作用,其部分机制可能是通过上调肾组织Podocin mRNA和蛋白表达.
作者：黄珍珍；任伟；王艳；陈玉米；叶山东；邢燕；胡闻 刊期： 2016年第01期
目的 探讨小肠CT( CTE)对克罗恩病( CD)和肠结核( ITB)鉴别诊断的价值. 方法 回顾性分析72 例患者(52例CD及20例ITB)的临床、内镜及CT特征,分别对各种征象进行统计学检验. 结果 ① 内镜检查指标中,节段性病变、纵行溃疡对诊断CD具有统计学意义;环形溃疡、回盲瓣口固定开放、受累肠段<4节对诊断ITB具有统计学意义;② CTE指标中,空肠、多节段病变、系膜侧增厚、肠壁分层强化、假憩室征、梳状征、回盲瓣口闭塞、肠粘连指标两组间比较差异有统计学意义,有利于CD的诊断;肠系膜对侧肠壁增厚、回盲瓣挛缩或回盲瓣口固定开放、淋巴结中心坏死、淋巴结沿右结肠动脉分布为主等指标两组间比较差异有统计学意义,有利于诊断ITB. 结论 CTE对于CD的诊断有较高的价值,多征象联合应用有利于CD与ITB的鉴别诊断.
作者：潘景润；吴兴旺；刘斌；刘文冬；胡伟杰 刊期： 2016年第01期
目的 研究异烟肼( INH )、吡嗪酰胺乳酸( PZA )-羟基乙酸共聚物( PLGA)微球的制备及体外释药特性. 方法以PLGA为载体,采用复乳-溶剂挥发法制备INH-PZA-PL-GA微球;扫描电子显微镜( SEM )观察INH-PZA-PLGA微球形态特征;计算INH-PZA-PLGA微球中INH、PZA的载药量、包封率;高效液相色谱法( HPLC)检测INH-PZA-PLGA微球在不同时段模拟体液中INH、PZA的药物浓度,观察其是否均大于10倍小抑菌浓度( MIC) ,计算其各阶段释药量、累计释药度并拟合药物体外释放数学方程并观察其体外释药特性. 结果 INH-PZA-PLGA微球成球规整、分布均匀、表面光滑、分散性好,平均粒径为( 11. 04 ± 0. 4 ) μm, INH 和PZA的载药量分别为( 21. 78 ± 0. 27 )%、( 24. 91 ± 0. 16 )%,包封率分别为( 58. 52 ± 1. 65 )%、( 72. 26 ± 1. 28 )%. INH-PZA-PLGA微球中INH突释现象较PZA突释现象明显,46 d INH累计释放量93. 01%,PZA累计释放量77. 40%. 前9 d两种药物释放规律拟合Higuchi曲线的R2 值大,可认为两种药物按从高浓度向低浓度的规律释放;12 d后两种药物拟合零级曲线的R2 值大,可认为两种药物按等量的规律释放. 结论 INH-PZA-PLGA微球具有良好的体外药物缓释性能,阶段释放量均大于10倍的MIC,理论上可达到体内杀死结核杆菌的浓度,为脊柱结核术后局部给药研究奠定基础.
作者：杨宗强；何胤；施建党；赵晨；岳学峰；刘海涛；张小敏；王洁 刊期： 2016年第01期
目的 研究栀子柏皮汤不同配伍组合的抗肝纤维化药理作用. 方法 采用四氯化碳( CCl4 )引起的肝纤维化小鼠模型观察栀子柏皮汤各配伍组的抗肝纤维化作用,同时给予不同配伍的栀子柏皮汤进行灌胃治疗. 生化检测相关肝纤维化及炎症指标,运用Masson染色和HE染色检测肝纤维化的变化,Western blot 法检测Ⅰ型胶原及α-横纹肌肌节肌动蛋白(α-SMA)的表达水平. 结果 栀子柏皮汤及各配伍组均可不同程度的降低小鼠血清谷丙转氨酶( ALT)、谷草转氨酶 ( AST)、羟脯氨酸( Hyp)及透明质酸( HA)水平,改善肝脏的病理变化,其中栀子黄柏甘草配伍组抑制 CCl4 诱导的小鼠肝纤维化效果佳(P<0. 01),并能显著抑制肝组织中Ⅰ型胶原和α-SMA的蛋白表达( P<0. 01 ). 实验结果表明栀子柏皮汤亦可明显降低血清中转化生长因子 β( TGF-β)的表达水平. 结论 栀子柏皮汤不同配伍组能不同程度改善小鼠肝纤维化,但栀子黄柏甘草配伍,即全汤组抗肝纤维化作用明显,并且栀子柏皮汤的抗肝纤维化作用可能与降低TGF-β水平有关.
作者：钱正月；李俊；黄成；孟晓明；马陶陶；陈昭琳 刊期： 2016年第01期
目的 探讨组织声学结构定量( ASQ)技术在肝纤维化( HF)分期诊断中的应用价值. 方法 收集肝脏穿刺活检明确的HF患者87例和健康志愿者50例,分别对其进行腹部常规超声及ASQ技术检查;收集相应二维及ASQ图像,导出图像后脱机分析,图像选定感兴趣区( ROI) ,得出χ2 直方图;软件计算红色曲线众数( Redmode)、红色曲线均值( Re-dave)、红色曲线标准差( Redsd)、蓝色曲线众数( Bluemode)、蓝色曲线均值( Blueave)、蓝色曲线标准差( Bluesd)及红蓝曲线下面积比( FD ratio). 各参数与病理HF分期进行相关性分析,进而绘制 ROC 曲线并获得各期界值. 结果 除Bluesd外其余参数值均与 HF 分期呈正相关性,其中 Red-mode(rs =0. 853,P<0. 05)及Redave(rs =0. 686,P<0. 05)与肝纤维化分期呈正相关性. ROC曲线提示:S0 vs S1 期,仅Redmode、Redave参数曲线偏左上角,曲线下面积( AUC)分别为0. 763、0. 624,与AUC=0. 5比较,差异有统计学意义(P<0. 05),灵敏度及特异度较高,可得出临界值,差异有统计学意义(P<0. 05);S1 vs S2期,除Bluesd外所有参数均位于左上角,余参数AUC均大于0. 5,与AUC=0. 5比较,差异有统计学意义(P<0. 05),灵敏度、特异度较高,可得出临界值,差异有统计学意义( P<0. 05 );S2 vs S3期,所有参数均偏左上角,与 AUC =0. 5 比较,差异有统计学意义( P <0. 05),灵敏度、特异度较高,可得出临界值,差异有统计学意义( P<0. 05 ). 结论 ASQ技术是一项无创性 HF检查技术,在HF的准确分期标准制定方面有较高的临床应用价值及前景.
作者：万颖；郑慧；李晓金；王迪；姚翀；李朝密 刊期： 2016年第01期
目的 通过对视神经管及其相关结构的研究,为经颅视神经管减压术提供解剖学依据. 方法 随机选取10个外观无异常的经甲醛固定的成人尸头及5个成人干颅骨标本,在显微镜下进行视神经管及其相关结构的观察和测量. 结果 ① 视神经管颅口、中部及眶口的横截面积分别为(19. 22 ± 4. 58)、(18. 26 ± 4. 33)、(21. 08 ± 3. 96) mm2;视神经管颅口与眉间及翼点的距离分别是( 63. 88 ± 4. 63 )、(51. 97 ± 2. 98)mm;② 前床突全长为(9. 52 ± 0. 38) mm,根宽为(11. 45 ± 0. 67)mm. 前床突气化率为20%. 前床突与颅神经及颈内动脉关系密切. ③ 本组20侧中12侧可见镰状韧带锐利的后缘压迫视神经;镰状韧带、视神经鞘膜、总腱环均比较坚韧结实;这些膜性结构与视神经之间无明显间隙. ④ 本组有3侧( 15%)滑车神经由于筛后动脉的牵拉,致使其紧贴上直肌腱. ⑤ 眼动脉均在视神经下方的硬膜鞘内走行. 结论 ① 视神经管减压应全程切开;② 正确磨除前床突可减少脑神经及颈内动脉损伤概率;③ 在视神经上方纵行切开镰状韧带、鞘膜,在近眶口处贴近内侧切开总腱环,可使管内视神经有效减压,并可减少滑车神经的损伤概率,避免眼动脉损伤.
作者：梅照军；李志范；单明；程志勇；周律；程宏伟 刊期： 2016年第01期
目的 探讨在对顺铂不同敏感性的卵巢癌细胞中生长抑制蛋白5 ( ING5 )的表达情况及其影响. 方法 应用MTT法分析卵巢癌细胞系A2780、SKOV-3、HO8910、ES-2对顺铂的敏感性差异并测定半数抑制浓度( IC50 )值;Western blot法检测 ING5 蛋白在卵巢癌细胞系 A2780、SKOV-3、HO8910、ES-2中的表达水平;并在A2780 细胞中应用ING5 siRNA沉默 ING5 基因, Western blot法检测沉默效率, MTT法检测转染后 A2780 细胞对顺铂敏感性的改变. 结果A2780细胞对顺铂的敏感性高,IC50值为(0. 423 ± 0. 020)μg/ml;而ES-2细胞对顺铂的敏感性低,IC50值为(5. 280 ± 0. 309)μg/ml(P<0. 01). 然而,ING5蛋白在A2780细胞中表达高,在 ES-2 细胞中表达低( P <0. 01 ). ING5 siRNA显著降低 A2780 细胞对顺铂的敏感性( P <0. 01 ).结论 ING5的高表达可能有利于提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性.
作者：孙正伟；马蓉；万安；徐汉杰；王慧妍；周颖；赵卫东 刊期： 2016年第01期
建立包括下颌颌骨、牙列、牙周组织和曲度10°、弧形深度2 mm、直径分别为0. 014、0. 016、0. 018和0. 020 in的圆丝摇椅弓有限元模型. 当弓丝直径一定时,切牙应力值大,尖牙次之,第一前磨牙小. 随着弓丝直径变大,牙根牙周应力增加. 切牙有压低和牙冠唇倾移动,尖牙、前磨牙和第一磨牙有伸长和冠远中竖直趋势. 临床中使用不锈钢圆丝摇椅弓在曲度10°,弧形深度2 mm时,弓丝直径不宜超过0. 018 in.
作者：晁秀玲；宋宇宁；李玉如；白颖；杨雅娴 刊期： 2016年第01期
目的 采用脂多糖( LPS)诱导大鼠枯否细胞( KCs)发生极化改变,之后用人脐带血间充质干细胞( huMSCs )与LPS诱导的 KCs 在 Transwell 内共培养,以观察 huMSCs 对KCs极化偏移的调节作用. 方法 实验分为KCs组、KCs+LPS组、KCs+LPS+MSCs组. 对各组的白介素-4 ( IL-4 )、肿瘤坏死因子( TNF-α)、白介素-10 ( IL-10 )、白介素-6 ( IL-6 )等上清因子采用ELISA法进行检测;诱导型一氧化氮合酶( iN-OS)、精氨酸酶-1 ( Arg-1 )、信号传导与转录激活因子 3、6 ( STAT-3、STAT-6 )、核因子 kappaB ( NF-κB )用 Western bolt进行检测,同时用荧光实时定量PCR( qRT-PCR)对以上结果进行验证. 结果 KCs+LPS组促炎因子TNF-α、IL-6 分泌增加,KCs+LPS+MSCs组抑炎因子IL-10、IL-4分泌增加;而Western blot检测表明, KCs + LPS 组中 iNOS 升高, NF-κB p65入核增高;而 KCs +LPS +MSCs 组高表达 Arg-1,同时pSTAT-3、pSTAT-6表达增加. 结论 huMSCs能诱导已经发生M1极化的KCs向M2 表型偏移,考虑可能与huMSCs分泌细胞因子有关,起到一种免疫调节作用,huMSCs 调节巨噬细胞极化的分子机制可能与通过JAK-STAT信号转导通路有关.
作者：李亮；彭琼；蔡亦红；戴夫 刊期： 2016年第01期
目的 探讨精准肝脏外科理念在肝细胞肝癌( HCC)治疗中的应用价值,总结影响HCC切除术后复发的危险因素. 方法 回顾性分析行肝切除术的207例HCC患者的临床资料. 结果 精准手术组在血流阻断比例、平均血流阻断时间、平均手术时间、平均术中失血量、围手术期输血量、围手术期输血率、术后并发症发生率、术后住院时间等方面较传统手术组显著下降. 传统手术组术后1、3、5 年总体生存率分别为69%、37%、19%,中位生存时间34 个月;精准手术组术后1、3年总体生存率分别为83%、54%,中位生存时间41 个月. 单因素分析显示:肿瘤直径>5 cm、血管侵犯、非R0切除、术中输血和肿瘤多发是肿瘤复发的危险因素.多因素分析显示:血管侵犯、非R0 切除和术中输血是肿瘤复发的独立危险因素. 结论 精准肝脏切除术治疗原发性HCC是安全有效的,可改善患者生存预后. 血管侵犯、切缘阳性和术中输血是影响HCC患者术后复发独立危险因素.
作者：张松；潘树波；谢坤；黄帆；赵义军；刘付宝；赵红川；王国斌；耿小平 刊期： 2016年第01期
收集10例抗N-甲基-D-天冬氨酸受体( NMDAR)脑炎及38例病毒性脑炎患者临床资料,分析其临床表现、实验室检查、影像学、脑电图及脑脊液细胞学异同. 抗NMDAR脑炎患者的性别比、年龄、病程以及发热、头痛、病理征、意识障碍的发生率与病毒性脑炎组无明显差异;不自主运动、癫痫发作、精神行为异常的发生率及脑电图异常率高于病毒性脑炎组,脑膜刺激征阳性率低于病毒性脑炎组;抗NMDAR脑炎脑脊液白细胞数及多个核细胞比值低于病毒性脑炎组,而脑脊液细胞学浆细胞出现率高于病毒性脑炎组.
作者：黄磊；梁波；李雪莲；王尚培；徐仿成；陈先文 刊期： 2016年第01期
目的 探讨双胎妊娠子宫牵张力变化对子宫收缩能力的影响. 方法 采集单胎妊娠及双胎妊娠孕妇中期妊娠(孕26 ± 6周)和晚期妊娠(孕37 ± 6 周)的子宫平滑肌组织,制作成肌条各30份,给予缩宫素浓度梯度刺激,观察单胎妊娠与双胎妊娠的子宫牵张力变化及对子宫收缩力的影响. 结果 在Krebs液中,单胎妊娠晚孕阶段子宫牵张力大于中孕阶段,双胎妊娠晚孕阶段子宫牵张力大于中孕阶段,中孕阶段的双胎妊娠子宫牵张力大于单胎妊娠,晚孕阶段的双胎妊娠子宫牵张力大于单胎妊娠,差异有统计学意义(P<0. 05);妊娠子宫牵张力随着孕周增加而增大;在缩宫素浓度梯度诱导下,晚孕单胎妊娠子宫牵张力变化引起的子宫收缩较晚孕双胎妊娠明显. 结论 双胎妊娠因子宫牵张力增大导致子宫平滑肌收缩力下降.
作者：陶志云；张晓慧；张英；魏兆莲 刊期： 2016年第01期
目的 制备卡波氏肉瘤相关疱疹病毒( KSHV) K15蛋白多克隆抗体,并将其应用于细胞内K15蛋白的检测. 方法选择K15基因第8 个外显子( K15Pex8 )序列做为模板,构建 K15Pex8的表达载体 pQE-80L-K15Pex8. 诱导重组菌蛋白表达,免疫新西兰兔,制备抗K15Pex8多克隆抗体,并用间接ELISA法测定抗体效价. 将pFJ和pFJ-K15P两种重组质粒分别转入HEK 293T细胞,用Western blot法检测抗K15Pex8多克隆抗体对K15P-Flag蛋白的识别. 结果 由K15Pex8制备的抗K15Pex8多克隆抗体效价大于1 : 6 400,能特异性识别重组质粒pFJ-K15P转染293T细胞产生的K15P-Flag融合蛋白. 结论 初步证明K15Pex8蛋白有免疫反应性,该多克隆抗体可用于重组的K15P-Flag融合蛋白的检测.
作者：陈伟；方圆；汪小五；许常青；朱晨辰；杨宇；张龙龙；王林定 刊期： 2016年第01期
目的 应用聚合酶链式反应( RT-PCR )、电镜扫描( SEM)和X射线能谱分析技术( EDS)评价腺病毒-骨形态发生蛋白-2/骨髓间充质干细胞/脱钙松质骨( Ad-BMP-2/BMSCs/DBM)对兔股骨头坏死的治疗效果,为临床治疗股骨头坏死探索新途径. 方法 ① 采用髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型;② 将造模成功的兔子随机均等分为A、B、C、D组(n=12),A组不植入材料,为造模组,B、C、D 分别植入 DBM、DBM/BMSCs、BMP-2/BMSCs/DBM;③术后4、8、12 周各组分别处死4只兔子,运用RT-PCR、SEM、EDS检测股骨头BMP-2表达量、表面形貌和钙磷比( Ca/P) ,观察股骨头的修复情况. 结果 RT-PCR结果显示各时间点BMP-2表达量A组
作者：石正松；李强；宁寅宽；蔡伟良；李诗鹏 刊期： 2016年第01期
目的 通过分析2 型糖尿病患者趾臂指数( TBI )与体脂之间的关系,了解体脂对2 型糖尿病患者TBI的影响,探讨TBI及体脂在糖尿病下肢血管病风险评估中的意义.方法 选择收集踝肱指数( ABI)及TBI均在正常范围内的2型糖尿病患者123例,收集患者一般资料、临床生化指标,应用人体成分分析仪定量测量身体不同部分的主要成分. 将TBI按百分位数 P50 分为2 组, TBI 较高组:0. 82≤TBI <1. 12;TBI较低组:0. 60
作者：石静琳；史琳涛；张美；刘彦君；范明 刊期： 2016年第01期
采用内镜黏膜下剥离术( ESD)治疗食管早癌及癌前期病变的患者65例,其中64例成功切除,1例发生穿孔,60例整块切除,58 例完整切除. 术中发现卫星灶16 例,术后病理较术前病理明显进展20例,其中发现早癌8例,术后狭窄4例.ESD是治疗食管早癌及癌前期病变的微创、较安全、有效的治疗方法,而且能获得准确的病理资料,可更好地评估病情.
作者：王业涛；张明黎；张开光；宋继中；叶飞；王巧民 刊期： 2016年第01期
目的 探讨抗巨噬细胞移动抑制因子单抗(抗 MIF单抗)对小鼠急性溃疡性结肠炎( UC)发病的干预作用及其可能调控机制. 方法 以葡聚糖硫酸钠( DSS)诱导制备小鼠急性UC模型,小鼠分为正常组、UC模型组、抗MIF单抗干预组和生理盐水组. 造模及药物干预期间观察小鼠一般情况并行疾病活动指数( DAI)评分,7 d后断颈处死全部小鼠,行结肠大体损伤评分,HE染色后光镜下观察结肠病理改变,免疫组化染色观察巨噬细胞移动抑制因子( MIF)、肿瘤坏死因子-α( TNF-α)、白介素-6 ( IL-6 )等促炎因子在结肠组织炎症细胞的表达情况,实时荧光定量PCR( real-time PCR)检测结肠组织核因子-κβ( NF-κβ) p65 mRNA的表达水平.结果 与正常组相比,其余三组小鼠结肠炎症病变明显, MIF、TNF-α、IL-6 等促炎因子的表达水平明显升高( P <0. 05);与模型组相比,干预组结肠黏膜损伤程度减轻,抗MIF单抗显著改善MIF、TNF-α、IL-6等促炎因子的表达水平(P<0. 05),而生理盐水组与其差异无统计学意义( P >0. 05). real-time PCR结果显示应用抗MIF单抗的小鼠能显著抑制结肠组织NF-κβ p65 mRNA的表达水平. 结论 抗MIF单抗对小鼠UC的发病有明显的干预作用,可能通过抑制NF-κβ信号通路,减少促炎因子的表达发挥作用.
作者：王柏涛；张启芳；邱小芬；杨红杰；孟云超；郑奕 刊期： 2016年第01期
目的 探讨转染髓样细胞白血病( Mcl-1 ) siRNA特异性沉默Mcl-1 基因对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体( TRAIL)诱导胃癌细胞HGC-27 凋亡的影响. 方法 采用碘化丙啶( PI)染色法流式细胞术分析TRAIL单独作用的细胞凋亡率以及广谱caspase抑制剂z-VAD-fmk对细胞凋亡的抑制作用;Western blot法分析TRAIL处理前后半胱天冬酶-3(caspase-3)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)的活化以及抗凋亡的Bcl-2、Bcl-XL 及Mcl-1的蛋白表达情况;采用Lipofectamine 2000 转染 Mcl-1 siRNA 入 HGC-27 细胞, Western blot 法验证基因沉默效果,流式细胞术分析转染后细胞凋亡率的变化. 结果 HGC-27细胞对TRAIL不敏感, 48 h的凋亡率仅为( 20. 65 ± 3. 23 )%, z-VAD-fmk能几乎完全阻止TRAIL诱导的凋亡;TRAIL作用晚期caspase-3活化、PARP-1裂解,Bcl-2、Bcl-XL 及Mcl-1在TRAIL处理前后没有明显的变化;Mcl-1 siRNA转染后能显著降低细胞中 Mcl-1的蛋白表达水平,且细胞转染Mcl-1 siRNA后再加入TRAIL处理,细胞凋亡率明显增加. 结论 Mcl-1的高表达可能与HGC-27细胞对TRAIL抵抗有关,Mcl-1 siRNA沉默Mcl-1基因能增加HGC-27细胞对TRAIL的敏感性.
作者：金玮；吴萍 刊期： 2016年第01期
目的 建立起能够稳定表达 NLRC5 基因的肝癌HepG2细胞株. 方法 设计遗传霉素( G418 )的浓度梯度,通过对HepG2 细胞筛选终确定筛选药物浓度. 将构建好的人源pEGFP-C2-NLRC5重组质粒利用脂质体介导法转染至HepG2肝癌细胞株中,用G418筛选出耐药阳性克隆. 通过免疫荧光技术观察绿色荧光蛋白稳定表达情况, Western blot法验证NLRC5蛋白表达情况. 结果 G418 在14 d内使HepG2细胞全部死亡的小浓度是300 ng/ml. 用G418筛选瞬转pEGFP-C2-NLRC5 14 d在荧光显微镜下可见耐药克隆的形成. Western blot法检测显示,稳定过表达组 NL-RC5的蛋白水平比空质粒转染组高(t=15. 356,P<0. 05).结论 成功构建稳定表达NLRC5 基因的肝癌细胞株,为进一步研究NLRC5基因在肝癌的体内实验奠定了基础.
作者：何莺华；徐涛；倪明明；黄成；李娟；孟晓明；李俊 刊期： 2016年第01期
安徽医科大学学报杂志
主管:安徽省教育厅
主办：安徽医科大学
