学术投稿

猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定

夏俊保;赵俊;汤仁树;崔寰;陈伟;王明丽

关键词:干拢索α/遗传学, 重组, 遗传, 猪, 大肠杆菌/遗传学
摘要:目的 构建稳定、高效表达的重组猪α干扰紊(rpoIFN-α)大肠杆菌表达菌株,并纯化鉴定该菌株表达的目的 蛋白,进行生物学活性检测.方法 提取猪肝脏细胞基因组DNA,PCR扩增猪α干扰素(poIFN-α)基因,克隆到pMD18-T载体上,测序鉴定后再亚克隆到pGEX-5X-1载体上,转化入E.coli BL21中后得到表达菌株,用IPTG诱导表达,收集的菌体超声破碎后取上清得粗制蛋白,用GST亲和层析法进行纯化,产物用Western blot进行鉴定,并在Hep-2/VSV系统上滴定效价.结果 重组质粒pGEX-5X-1/polFN-α经过EcoR 1和Xho Ⅰ限制性酶切后可见501 bp的目的 片段,提取质粒测序鉴定,结果与GeneBank中的序列一致.转化入E. coli BL21中32℃条件下经IPTG诱导5 h,提取总蛋白,SDS-PAGE检测显示带有GST标记的rpoIFN-α能高效表达,分子量约45 ku,可溶性rpoIFN-α约占菌体蛋白的0.35,Western-blot鉴定显示有特异性条带.效价滴定结果表明该rpoIFN-α具有抗病毒活性,纯化后效价为7.5×106 IU/ml,比活性达到1.1×107IU/mg.结论 成功克隆了polFN-α基因,并可在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的rpoIFN-α.
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • TGF-β1对胃癌细胞BGC-823侵袭性的影响

    目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)对人胃癌细胞BGC-823侵袭性的影响.方法 将体外培养的人胃癌细胞BGC-823用外源性人重组TGF-β1干预后,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MT法)检测TGF-β1对细胞增殖的影响;免疫细胞化学法、免疫荧光法、流式细胞术分别检测Snail、E-cadher-in及N-cadherin蛋白的表达;Transwell侵袭实验检测TGF-β1对细胞侵袭性的影响.结果 ①经过18 h的作用,低浓度(1、5和10ng/ml)的TGF-β1促进胃癌细胞的增殖,高浓度(20和50 ng/ml)的TGF-β1则抑制胃癌细胞的增殖,且呈剂量依赖性;选取不同时间段(18、42、66 h)检测细胞生长曲线,发现不呈时间依赖性;②在外源性TGF-β1作用下,胃癌细胞均不同程度地表达Snail、E-cadherin及N-cadherin,其中TGF-β1对Snail、N-cadherin表达有促进作用,而对E-cadher-in的表达有抑制作用,E-cadherin和N-cadherin的表达呈相反的趋势;③选取不同浓度的TGF-β1(1、10和20 ng/ml),发现10 ng/ml的TGF-β1明显促进胃癌细胞的侵袭性(P<0.05).结论 不同浓度的TGF-β1对胃癌细胞增殖的影响不同;TGF-β1有增加胃癌细胞侵袭性的作用,该作用可能是通过上皮间质转化而产生,钙黏蛋白表达的变化可能是重要的分子学机制之一.

    作者:刘栗丽;吴继锋;祝迎锋;张红;秦蓉;赵文娣 刊期: 2009年第01期

  • MEK抑制剂PD98059对大鼠非酒精性脂肪性肝病的影响

    目的 观察MEK抑制剂PD98059对大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响及可能机制.方法 应用高脂饮食复制非酒精性脂肪性肝病模型.32只雄性Wister大鼠随机分成正常对照组(N组)、PD98059+普通饲料组(P组)、高脂模型组(M组)和PD98059+高脂组(PM组)共4组,每组8只.于分组喂养的第4、6、8周末分别给予P组和PM组大鼠鼠尾静脉注射MEK抑制剂PD98059干预.10周末结束实验.检测血清丙氨酸转移酶(ALT)、门冬氨酸转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、极低密度脂蛋白(VLDL),肝组织TG、TC、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);光镜观察大鼠肝脏的病理改变,免疫组化法检测肝脏磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)表达.结果 与N组比较,P组血清转氨酶、血脂、肝组织TG、TC、MDA、SOD以及肝脏病理学和p-ERK1/2表达无明显差异(P>0.05),M组所有大鼠肝细胞脂肪变性范围均超过50%并伴有不同程度的炎性细胞浸润和坏死,p-ERK1/2表达增强,ALT、AST、TC、肝组织TG、TC、MDA显著升高,SOD明显降低(P<0.05,P<0.01).与M组比较,PM组p-ERK1/2表达减少(P<0.01),ALT、肝组织TG、TC、MDA降低,SOD升高(P<0.05,P<0.01),同时大鼠的肝脏病理学得到了改善.结论 PD98059通过抑制MEK/ERK信号通路对非酒精性脂肪性肝病大鼠发挥保护作用.

    作者:方芳;宋育林;许建明;查正伟 刊期: 2009年第01期

  • 上颌骨翻转入路切除颅底沟通肿瘤的显微解剖学研究

    目的 探讨经上颌骨翻转入路切除颅底沟通肿瘤可行性及其显微解剖学关系.方法 应用显微外科解剖学技术.对经甲醛固定、动静脉血管内分别灌注红、蓝乳胶的10具(20侧)成人尸头标本,模拟手术入路逐层解剖.观察手术径路中颞下窝、翼腭窝、蝶筛区、前颅底、中颅底等区域的显露情况及重要解剖结构之间的关系.结果 翼突、中鼻甲、上颌神经是经上颌骨翻转手术入路切除颅底沟通肿瘤的三个重要解剖标志,此入路对颞下窝、翼腭窝、前、中颅底、斜坡区显露满意,有充足的手术操作空间切除颅底沟通肿瘤.结论 上颌骨翻转入路切除颅底沟通肿瘤手术可行,从颅外暴露颅底,对脑组织的牵拉损伤小.熟悉此入路的显微解剖学关系,对开展此手术入路切除颅底沟通肿瘤具有指导意义.

    作者:张圣邦;万经海;冯春国;徐培坤;程宏伟;李长元;吴德俊;汪宇扬;郭致飞 刊期: 2009年第01期

  • 氯化钆对大鼠腹腔巨噬细胞表达CD68的影响

    目的 观察氯化钆(GdCl3)对大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)表达CD68是否有抑制作用.方法 取正常大鼠PMφ体外培养,用不同浓度的GdCl3处理PMφ;采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠佐剂性关节炎(AA)模型并尾静脉注射GdCl3.采用免疫荧光双标、Western blot法检测PMφ活化标记物CD68的表达情况.结果 在一定的浓度范围内,GdCl3可抑制体外培养的正常大鼠PMφ中CD68的表达,以5 × 10-6 mol/L浓度抑制效果明显.大剂量的GdCl3对细胞有明显的毒性作用,表现为细胞的形态和核发生改变,并可诱导内质网(ER)应激相关蛋白ARMET的表达.对于AA大鼠活化的PMφ,体内注射GdCl3(10 mg/kg)可使部分CD68阳性的PMφ转阴,同时促进这些阴性细胞的分化;CdCl3并可诱导部分活化的PMφ凋亡.结论 GdCl3可以抑制大鼠PMφ中CD68的表达及诱导活化的PMφ凋亡,这可能是GdCl3抑制PMφ活化的机制之一.

    作者:黄学桂;王法财;王海萍;路锦涛;沈玉君;沈玉先 刊期: 2009年第01期

  • Rα97-116(V108A)鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力T-bet及GATA-3的影响

    目的 探讨Ro97-116(V108A)鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)鼠模型的治疗作用及对转录因子T-box家族成员之一(T-bet)和可与DNA序列[A/T(GATA)A/G]结合的Ⅳ型锌指蛋白之一(GATA-3)的影响机制.方法 将成模Lewis大鼠随机分为:EAMG模型组(A组)和鼻黏膜耐受组(B组),并设正常对照组(C组).B组给予Rα97-116(V108A)30μg共10 d,记录A、B两组大鼠临床评分.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测三组动物外周血单个核细胞(PBMCs)中T-bet及GATA-3 mRNA表达,酶联免疫吸附法(EUSA)测定血浆中白介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)表达水平及乙酰胆碱受体抗体IgG(AchR-AbIgG)含量.结果 B组临床评分及AchR-Ab IgG含量较A组显著降低(P<0.05);A组T-bet和GATA-3 mRNA、IL-4、IFN-γ表达水平明显高于C组,与A组相比,B组的表达水平明显降低(P<0.05),B组、C组之间表达水平无统计学差异(P>0.05);EAMG大鼠IL-4水平和IFN-γ水平分别与GATA-3和T-bet mRNA表达呈正相关(r=0.90,P<0.05;r=0.753,P<0.05).结论 Rc07-116(V108A)鼻黏膜耐受减轻EAMG的肌无力症状,其作用机制可能与其下调T-bet和GATA-3的表达,抑制异常Th1和Th2反应从而下调AChR特异性T和B细胞异常的免疫应答反应有关.

    作者:谢娟;罗六一;许文华;赵江明;杨毅;任明山 刊期: 2009年第01期

  • 白藜芦醇抗癫痫作用机制的初步研究

    目的 评价白藜芦醇(Res)的抗癫痫效果并初步分析其作用机制,为开发新型抗癫痫药物提供理论依据.方法 建立颞叶癫痫大鼠模型后,以Res干预10 d,丙戊酸钠(VPA)作为阳性对照,观察Res对颞叶癫痫大鼠的行为学、电生理学和病理学指标的影响.结果 模型组自发性发作率增加,海马内神经元大量死亡,苔藓纤维出芽(MFS)至颗粒细胞层和内分子层;Res能抑制癫痫大鼠自发性发作,对并海马CA1和CA3a区神经元有保护作用和抑制MFS(P<0.05).结论 Res具有较强的抗癫痫作用.

    作者:许奇;吴政;张磊;孔德虎;王烈成;马嵘 刊期: 2009年第01期

  • 辣椒素通过钙信号抑制感觉神经元的电压门控性钙离子通道

    目的 研究辣椒素对大鼠背根神经节神经元的电压门控性钙离子通道的抑制效应及其信号机制.方法 在急性分离的大鼠背根神经节(DRG)神经元上,应用全细胞膜片钳技术记录电压激活性钙离子通道电流以及辣椒素诱导的电流,应用钙离子成像技术检测Ca2+浓度的变化.结果 辣椒素能够抑制大鼠DRG神经元的电压激活性钙离子通道电流.细胞外钾离子浓度显著升高引起细胞去极化并打开膜上电压门控性钙离子通道引起胞外Ca2+内流,辣椒素只在引起胞内Ca2+浓度显著升高的情况下才能抑制高钾诱导的电压门控性Ca2+内流.用咖啡因耗竭细胞内Ryanodine敏感性钙库以后,辣椒素引发的胞内钙浓度升高的效应被显著抑制,说明辣椒素可诱导胞内Ryanodine敏感性钙库释放Ca2+.结论 在辣椒素敏感性的大鼠DRG神经元中,辣椒索通过胞内钙信号抑制电压门控性钙离子通道.Ca2+信号部分来源于Ryanodine敏感性钙库.

    作者:刘悦雁;解敏;黄擎;王元银;王烈成;孔德虎 刊期: 2009年第01期

  • 乳磨牙根尖周病变对其继承恒牙萌出的影响

    目的 探讨乳磨牙根尖周病变对其继承恒前磨牙在颌骨内萌出状态的影响.方法 以Cliniview数字式X线摄影系统拍摄41名6~10岁儿童乳磨牙的根尖片,以下颌第一乳磨牙健康侧为对照侧,对侧患根尖周病侧为患侧.利用系统的图像测量功能,分别测量两侧下颌第一乳磨牙下继承第一恒前磨牙胚的高尖至预先制定基准线的垂直距离,比较其差异;以同样的方法测量两侧健康下颌第二乳磨牙下其继承前磨牙高尖至基准线的垂直距离,比较其差异.用配对£检验做统计学处理.结果 患根尖周病的下颌第一乳磨牙其继承前磨牙萌出与对照侧相比差异有显著性(P<0.05).而两侧下颌第二前磨牙的萌出差异无显著性(P>0.05).结论 与乳磨牙正常的对照侧相比,患根尖周病的乳磨牙其继承前磨牙有萌出加快的趋势.

    作者:王楠;侯爱兵 刊期: 2009年第01期

  • 猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定

    目的 构建稳定、高效表达的重组猪α干扰紊(rpoIFN-α)大肠杆菌表达菌株,并纯化鉴定该菌株表达的目的 蛋白,进行生物学活性检测.方法 提取猪肝脏细胞基因组DNA,PCR扩增猪α干扰素(poIFN-α)基因,克隆到pMD18-T载体上,测序鉴定后再亚克隆到pGEX-5X-1载体上,转化入E.coli BL21中后得到表达菌株,用IPTG诱导表达,收集的菌体超声破碎后取上清得粗制蛋白,用GST亲和层析法进行纯化,产物用Western blot进行鉴定,并在Hep-2/VSV系统上滴定效价.结果 重组质粒pGEX-5X-1/polFN-α经过EcoR 1和Xho Ⅰ限制性酶切后可见501 bp的目的 片段,提取质粒测序鉴定,结果与GeneBank中的序列一致.转化入E. coli BL21中32℃条件下经IPTG诱导5 h,提取总蛋白,SDS-PAGE检测显示带有GST标记的rpoIFN-α能高效表达,分子量约45 ku,可溶性rpoIFN-α约占菌体蛋白的0.35,Western-blot鉴定显示有特异性条带.效价滴定结果表明该rpoIFN-α具有抗病毒活性,纯化后效价为7.5×106 IU/ml,比活性达到1.1×107IU/mg.结论 成功克隆了polFN-α基因,并可在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的rpoIFN-α.

    作者:夏俊保;赵俊;汤仁树;崔寰;陈伟;王明丽 刊期: 2009年第01期

  • 乙状结肠自发性穿孔的诊治探讨

    目的 分析乙状结肠自发性穿孔的病因、临床表现及处理原则.方法 回顾性分析32例乙状结肠自发性穿孔患者的临床资料.结果 本病以老年患者多见,常伴有便秘、糖尿病、高血压等疾病.本组均根据手术及病理报告而明确诊断,术前误诊率达96.9%.本组死亡15例,死亡率为46.9%.结论 乙状结肠自发性穿孔的误诊率高,及时而合理的手术治疗是降低乙状结肠自发性穿孔死亡率的关键.

    作者:曹荣格;汪迎;曹斌 刊期: 2009年第01期

  • 白细胞介素-6和罗格列酮对3T3-L1脂肪细胞Vaspin mRNA表达的影响

    目的 观察罗格列酮和白细胞介素-6(IL-6)对3T3L-1脂肪细胞Vaspin mRNA表达的影响.方法 体外培养3T3L-1前体脂肪细胞并诱导其分化成熟,分别以不同浓度的罗格列酮和(或)IL-6干预,在不同时间段提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术检测细胞中Vaspin mRNA的表达水平.结果 IL-6和罗格列酮分别作用于分化成熟的3T3L-1脂肪细胞,IL-6对Vaspin mRNA的表达无影响,而罗格列酮能上调Vaspin mRNA的表达,用IL-6和罗格列酮共同作用于细胞,则罗格列酮对Vaspin mRNA表达的上调作用未受到显著影响.结论 IL-6对Vaspin mRNA表达无明显的调控作用,表明Vaspin基因可能不是IL-6致胰岛素抵抗的位点.罗格列酮能上调Vaspin mRNA的表达,说明Vaspin可能是噻唑烷二酮(TZD)类药物改善胰岛素敏感性的靶基因.

    作者:孙莉;王长江;代芳;张德园 刊期: 2009年第01期

  • 鬼针草总黄酮对小鼠日本血吸虫病肝纤维化α-SMA、TGFβ1及胶原代谢的影响

    目的 研究鬼针草总黄酮(TFB)对日本血吸虫病小鼠肝组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGFβ1)、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白表达的影响,探索鬼针草总黄酮抗血吸虫病肝纤维化的作用机制.方法 以日本血吸虫尾蚴感染BalB/C小鼠制作肝纤维化动物模型,6周末随机分为TFB高剂量组(230 mg/kg·d-1)、中剂量组(115 mg/kg·d-1)、低剂量组(57.5 mg/kg·d-1)和阳性对照组(秋水仙碱0.15 mg/kg·d-1)和模型组,各组均于感染42 d后用吡喹酮(400 mg/kg·d-1)治疗1 d,同时设置正常对照组10只.感染14周后处死,放射免疫法测定血清透明质酸(HA)的含量,碱水解法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,用免疫组织化学方法评价α-SMA、TGFβ1、Ⅰ型胶原、TIMP-1的表达情况.结果 TFB高、中剂量组与模型组相比较,肝组织α-SMA、TGFβ1、TIMP-1表达及Hyp含量均显著降低(P<0.01),TFB低剂量组与模型组比较差异无显著性(P>0.05);TFB高剂量组与模型组相比较,Ⅰ型胶原蛋白表达量显著降低(P<0.01),TFB中、低剂量组与模型组比较差异无显著性(P>0.05);TFB高、中、低剂量组与模型组相比较,血清HA含量均显著降低(P<0.01).结论 高剂量TFB显著降低血吸虫病小鼠肝组织α-SMA、TGFβ1、Ⅰ型胶原、TIMP1表达,其抗血吸虫病肝纤维化作用机制与抑制肝星状细胞活化及胶原合成有关.

    作者:吕元庆;陈飞虎;沈际佳;吴繁荣;袁丽萍;钟明媚 刊期: 2009年第01期

  • 经腹经心包全肝血流阻断对肝切除术中血流动力学的影响

    目的 探讨经腹经心包全肝血流阻断(TPTHVE)对肝切除术中血流动力学的影响.方法 对行肝脏巨大肿瘤切除和或肝段切除累计≥3个肝段的43例临床病例,TPTH-VE组18例,传统全肝血流阻断(THVE)组25例,对照分析应用TPTHVE对术中血流动力学、出血量及术后并发症发生的影响.结果 所有肿瘤均完全切除,术后并发症发生率为51.2%(22/43);病死率为4.7%(2/43);两组肝切除术中出血量差异有显著性(P<0.05),手术总时间、术中血流动力学变化及术后并发症发生率无明显差异.结论 采用TPTHVE能显著减少肝切除术中出血量,对术中血流动力学变化无显著影响,且不会增加术后并发症发生率.

    作者:姜海涛;熊奇如;夏俊;耿小平;许业传;余宏铸 刊期: 2009年第01期

  • 改进Madigan术治疗前列腺增生38例

    目的 通过对改进Madigan术式(结扎前列腺动脉Madigan前列腺切除术)与传统经膀胱开放术式治疗前列腺增生进行临床比较分析,提高良性前列腺增生(BPH)开放手术的治疗效果.方法 回顾性分析结扎前列腺动脉Madigan前列腺切除术治疗BPH 38例,传统经膀胱开放术式前列腺切除术治疗BPH 40例;比较两种术式中手术时间、出血量和术后各种并发症的发生率.结果 改进的Madigan术式切除前列腺增生手术时间、术中出血量、术后膀胱冲洗时间、留置导尿管时间和住院时间及术后的并发症均少于经膀胱开放术式(P<0.05);而大尿流率和残余尿量差异无显著性(P>0.05).结论 改进Madigan术为BPH患者提供了一种较理想的安全、有效、经济的手术方法.

    作者:方志启;吴刚;王贺彬;陈晓宇 刊期: 2009年第01期

  • 原发性肾病综合征并发急性肾衰竭19例临床观察

    急性肾衰竭(acute renal failure,ARF)为原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)严重的并发症.一些有大量蛋白尿的PNS患者并无低血容量、药物或感染因素存在,而出现ARF.

    作者:任伟;兰雷;汪鹏;江洁龙;王科;黄珍珍;倪力军 刊期: 2009年第01期

  • 准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术对兔角膜基质细胞凋亡的影响

    目的 观察兔行不同切削深度的准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术(LASEK)后角膜基质细胞凋亡的变化.方法 健康新西兰白兔随机分为3组,随机选择一只眼行LSEK术,分别按近视-3.00、-9.00和-15.00D设计切削,另一只眼为对照眼.24 h和7 d后常规取角膜制成石蜡切片,采用核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口标记(TUNEL)法检测基质细胞凋亡,计数凋亡细胞,计算凋亡指数进行分析.结果 凋亡细胞呈棕黄色,体积缩小,核固缩成团.术后24h-3.00、-9.00和-15.00D三组激光切削眼凋亡指数分别为0.39±0.10、0.55±0.08和0.54±0.12,均分别高于对照眼;-9.00D的切削较-3.00D组凋亡细胞增多,-15.00D组凋亡指数与-9.00D无显著性差异;术后7 d激光切削组的凋亡指数与对照眼无显著性差异,且较24 h减轻.结论 LASEK术可导致兔角膜基质细胞凋亡,且随切削深度的增加,细胞凋亡呈增加趋势.

    作者:朱洁;廖荣丰;刘贺婷;王道斌;胡向阳 刊期: 2009年第01期

  • 食管鳞癌中CD44v6和E-cadherin的表达

    目的 探讨CD44v6和E-cadherin在食管鳞癌中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测15例正常食管鳞状上皮组织、20例癌旁上皮内瘤变组织、60例食管鳞癌组织中CD44v6和E-cadherin的表达.结果 在正常食管鳞状上皮组织、癌旁上皮内瘤变组织和食管癌组织中.CD44v6阳性表达率分别为13.3%(2/15)、45.0%(9/20)和83.3%(50/60),三者间差异有显著性(P<0.01);E-cadherin的阳性表达率分别为86.7%(13/15)、55.0%(11/20)和23.3%(14/60),三者间差异有显著性(P<0.01).CD44v6的高表达及E-cadherin的低表达与食管癌的浸润深度、淋巴结转移、临床病理分期、三年生存率均呈正相关(P<0.05),E-cadherin表达与肿瘤的分化程度有明显相关性(P<0.05),而CD44v6表达与肿瘤的分化程度无明显相关性(P>0.05).食管癌中CD44v6表达与E-cadherin表达呈负相关(x2=9.02,P<0.05,r=-0.362).结论 CD44v6和E-cadherin的表达可能具有负调节的协同作用.CD44v6和E-cadherin的表达与食管癌发生发展、浸润转移和预后密切相关,可作为预测食管癌侵袭转移和估计预后的重要参考指标.

    作者:徐世斌;魏大中;范军;马冬春;徐美清;陈柯;胡闻 刊期: 2009年第01期

  • 三棱祁甲合剂的体内外抗肿瘤作用

    目的 探讨三棱祁甲合剂的体内外抗肿瘤作用.方法 通过抑瘤率观察三棱祁甲合剂灌胃给药对S180和Heps移植性肿瘤的生长抑制作用;四甲基偶氮唑盐法观察三棱祁甲合剂体外对SMMC-7721细胞的生长抑制作用;扶正试验观察三棱祁甲合剂对小鼠免疫功能的影响.结果 三棱祁甲合剂30、60、120 g/kg能明显抑制S180和Heps移植性肿瘤的生长,体外试验也显示三棱祁甲合剂能剂量依赖性的抑制SMMC-7721细胞的生长,扶正试验显示三棱祁甲合剂能明显提高小鼠的免疫反应.结论 三棱祁甲合剂有明确的体内外抗肿瘤作用,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞生长、提高机体免疫功能有关.

    作者:胡宗涛;董六一;高杉;路景涛 刊期: 2009年第01期

  • HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

    目的 构建HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体,并在大肠杆菌E.coli B121(DE3)中进行高效表达和纯化.方法 应用PCR拼接的方法将首轮合成Tat基因的半胱氨酸富集区(64~111位核苷酸,22~37位氨基酸)移位至缺失半胱氨酸富集区的Tat(AC)的N末端,获得其突变体序列(Tat(CN)DNA),构建其原核表达质粒pET32a-Tat(CN),并转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,经SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物,纯化后的产物用间接ELISA进行鉴定.结果 构建了pET32a-Tat(cn)突变体,pET32a-Tat(CN)融合蛋白在大肠杆菌中表达水平为5.17 mg/nd,相对分子质量为31 ku.间接的ELISA结果表明,pET32a-Tat(CN)能与Tat兔抗血清呈特异反应.结论 成功构建了HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区移位至TatN端的突变体,并能在大肠杆菌中高效表达,其纯化的蛋白pET32a-Tat(CN)很好地保留了与HIV-1 Tat兔抗血清的免疫反应性,为HIV-1 Tat的疫苗基础研究提供了一有价值的研究结论.

    作者:李存枚;潘卫;曹洁;王锦红;黄德圣;庞强;廖文婷;邓松华 刊期: 2009年第01期

  • 5岁乳牙龋与父母口腔健康知信行的现况研究

    目的 调查5岁儿童乳牙患龋情况与其父母的口腔健康知信行,为儿童口腔预防提供资料.方法 采用多阶段、分层、等容量、随机抽样的方法抽取5岁儿童432名进行乳牙冠龋的检查,同时对被抽取儿童父母进行一对一现场问卷调查.结果 乳牙患龋率和龋均为65.66%、3.38,城乡分别为55.56%、2.35和75.81%、4.42,城乡之间差异具有显著性;其中父母对口腔健康的认识、儿童开始刷牙的年龄、父母是否帮助刷牙及父母的文化程度等相关因素都对乳牙患龋有明显影响.结论 父母的文化程度及社会经济地位决定其对儿童口腔健康的认识,并影响儿童健康口腔行为的建立,影响儿童龋病的流行.

    作者:高永梅;韩晓兰;颜雨春 刊期: 2009年第01期

安徽医科大学学报杂志

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主管:安徽省教育厅

主办:安徽医科大学