赵俊；王明丽；陈敬贤
目的 构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选及结构和功能的研究打下基础.方法 应用overlapping PCR制备Protein A的Z结构域.用含随机核苷酸序列的引物,制备对Z结构域的第10、13、27、28、31和32位氨基酸进行随机突变的定点随机突变体库.并在突变体片段两端引入Kpn Ⅰ位点,3'端引入3个氨基酸大小随机连接肽的序列.经Kpn Ⅰ酶切后随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S.克隆产物转化大肠杆菌TG1,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示定点随机突变组合文库.结果 该定点随机突变组合文库的转化子数目为6.4×106个,滴度为1.4×1015 TU/L;文库中含0.72以上的阳性克隆,其中有2个单结构域的阳性克隆占0.15;15个样品的序列分析显示各突变位点和随机连接肽的氨基酸序列呈随机性分布.结论 成功构建了噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,该库库容量在一级结构上具有良好的随机性和多样性,可满足体外分子进化研究的要求.
作者：何俊；周霞；陈璐；陈秋莉；王锦红；蒋少华；陈铭；卢海妹；潘卫；邓松华 刊期： 2007年第02期
目的 探讨褪黑素(MT)对肝星状细胞(HSC)凋亡和功能的影响.方法 予SD大鼠背部皮下注射CCl4造肝纤维化模型.体内实验:MT组大鼠灌胃给予MT[0.125、0.5、2.0 mg/(kg·d)]8周,HE染色观察病理改变,放免法检测血清透明质酸(HA)与Ⅲ型前胶原(PCⅢ).体外实验:从模型组来源的HSC给予MT(10、0.1 μmol/L和1 nmol/L),从正常组来源的HSC给予生理盐水;48 h后,流式细胞术检测HSC细胞凋亡,放免法检测培养上清中HA、PCⅢ.结果 体内实验中,MT各剂量组均明显改善CCl4引起的肝脏病理改变,降低血清HA、PCⅢ.体外实验中,MT 10 μmol/L显著诱导HSC凋亡,各浓度MT均明显降低HA、PCⅢ的水平.结论 MT可能通过诱导HSC凋亡和抑制其合成或分泌HA与PCⅢ而改善CCl4致大鼠肝纤维化.
作者：叶根深；马勇；魏伟；李瑞麟；陈文笔；严家春；丁体龙 刊期： 2007年第02期
目的 探讨卵巢无性细胞瘤的临床特点、预后影响因素及相关肿瘤学标记物的意义.方法 对40例单纯无性细胞瘤进行手术治疗及术后辅助放/化疗,并长期随访,观察治疗效果.分析临床分期、治疗方法与预后的相关性.结果 无性细胞瘤主要临床症状为腹部包块22例、腹痛19例、腹胀8例和生殖系统发育异常3例.其中39例患者经过综合治疗,Ⅰ～Ⅳ期总生存率为77.5%.其中Ⅰ期治疗效果佳,5年生存率为100%.Ⅱ～Ⅲ期患者,手术后化疗疗程少于4疗程与多于4疗程者相比,5年存活率差异有显著性(P＜0.05).1例Ⅱ期患者术后拒绝辅助治疗,11个月后死亡.无性细胞瘤患者乳酸脱氢酶(LDH)值常见增高,但在不同期别间分析统计无显著性差异.结论 卵巢无性细胞瘤的预后与临床分期、治疗方法密切相关.采用手术为主,化疗为辅的综合治疗,效果满意,且对保留生育能力者的生殖内分泌功能影响不大.血清LDH值可以做为一种肿瘤学标记物,辅助诊断有意义.但尚不能作为一种早期预测指标,也不能代表疾病的严重程度.
作者：范懿隽；周家德 刊期： 2007年第02期
目的 探讨缺氧诱导因子-1α在支气管哮喘大鼠模型支气管肺组织中的表达及意义.方法 采用卵蛋白致敏诱导建立支气管哮喘大鼠模型,采用逆转录半定量PCR及免疫印迹技术检测正常对照组、阴性对照组、哮喘组和地塞米松组支气管肺组织中缺氧诱导因子-1α基因和蛋白表达的水平.结果 与正常对照组比较,哮喘组缺氧诱导因子-1α基因和蛋白表达水平均显著增加,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.05);与正常对照组比较,阴性对照组缺氧诱导因子-1α基因和蛋白表达水平没有明显改变,差异均无显著性(P＞0.05,P＞0.05);与哮喘组比较,地塞米松组中的缺氧诱导因子-1α基因和蛋白表达水平均显著性降低,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.05),但与正常对照组比较,差异均无显著性(P＞0.05,P＞0.05).结论 缺氧诱导因子-1α可能参与支气管哮喘的发病机制且其表达的水平受地塞米松调节.
作者：许锐；费广鹤 刊期： 2007年第02期
目的 探讨豹皮樟总黄酮(TFLC)对大鼠酒精性脂肪性肝炎的防治作用及部分机制.方法 以酒精联合脂肪乳剂灌胃,每天2次,连续6周,制备大鼠酒精性脂肪性肝炎模型.给药组同时灌服相应药物.于实验的第6周末采血,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及肝脏TG、TC、SOD、MDA、GSH-PX,并行肝脏病理学检查.结果 TFLC(200、400 mg/kg)组能明显降低酒精性脂肪性肝炎大鼠血清AST、ALT、ALP、γ-GT水平;降低血清和肝匀浆中TC、TG、MDA含量,增强SOD和GSH-PX活性;同时病理组织学显示TFLC能明显改善酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝细胞脂肪变性.结论 TFLC对大鼠酒精性脂肪性肝炎具有较好的防治作用.其作用机制与抗氧化和调节脂质代谢有关.
作者：王媛媛；李俊；曹琦；黄艳；邹宇宏；程文明；李浩；贺晓昕；胡向阳 刊期： 2007年第02期
目的 研究人外周血干细胞(PBSC)向血管内皮细胞分化.方法 以血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对经重组人粒细胞集落刺激因子刺激后采集的PBSC进行诱导培养,观察细胞形态的变化,运用流式细胞术检测诱导后的细胞表达CD31和vWF情况,并用透射电镜观察细胞的超微结构.结果 经VEGF和bFGF诱导后的细胞形态上表现内皮细胞特征,经流式细胞仪测定表达血管内皮细胞特有表面标志CD31和vWF,透射电镜细胞胞浆内可见特征性Weible-Palade小体.结论 外周血干细胞在VEGF和bFGF诱导下,可分化为内皮细胞.
作者：吴维；胡何节；余继海 刊期： 2007年第02期
目的 筛选细胞极化蛋白PALS1的结合蛋白,进一步探讨PALS1的功能及其分子机制.方法 将PALS1的全长cDNA序列克隆到载体pGBKT7中,重组的pGBKT7-PALS1质粒转入酵母AH 109细胞,细胞置于SD/-Trp培养基上生长,阳性细胞再用Hela细胞的cDNA文库质粒转化,生长于SD/-Trp/-Leu/-His/X-α-gal,显蓝色的克隆为阳性.阳性克隆细胞中的DNA被抽提后转化细菌细胞,然后抽提DNA进行酶切分型.合适的类型测序后进行BLAST检索分析.结果 筛选到了13个阳性克隆,其中有2个是已知蛋白的基因即ATRAP和GLT28D1.结论 利用酵母双杂交系统成功克隆了PALS1的结合蛋白的基因,为进一步研究PALS1蛋白的功能提供了有益的启示.
作者：高雪敏；刘晓颖；张庆慧；戴寒晶；范礼斌 刊期： 2007年第02期
目的 研究全反式维甲酸(ATRA)体外对人肝癌细胞株(HepG2)分化、软琼脂克隆形成的影响及其机制.方法 ATRA处理HepG2,光镜下观察细胞形态,并检测γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、甲胎蛋白(AFP)等分化指标的变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析ATRA对HepG2增殖的影响;软琼脂培养法观察HepG2的克隆形成能力;Western blot检测骨桥蛋白(OPN)表达变化.结果 ATRA显著抑制肝癌细胞增殖并诱导细胞分化,使代表肝细胞恶变的γ-GT比活力、AFP分泌量明显下降.ATRA可降低HepG2软琼脂克隆形成能力并使OPN表达减少.结论 ATRA是HepG2有效的分化诱导剂,并可抑制HepG2增殖,其分子机制可能与OPN表达减少有关,为ATRA诱导分化治疗肝癌提供了实验依据.
作者：谢斌；左莉；江志奎；徐大林；朱华庆；周青；胡若磊；桂淑玉；汪渊 刊期： 2007年第02期
目的 研究A771726在大鼠体内的药代动力学过程.方法 单剂量口服给药3个剂量的A771726,根据大鼠体内血药浓度经时过程,计算相应的药代动力学参数.结果 A771726(3、6、12 mg/kg)的血药经时过程均符合一级吸收的一房室模型,其主要药动学参数T1/2Ka(h):3.91±3.43、5.63±2.07、6.73±1.67;T1/2Ke(h):17.45±10.79、9.68±4.65、7.63±1.39;AUC(0～tn)(mg/L·h-1):163.83±17.88、447.88±148.60、843.72±175.41;Cmax(mg/L):7.05±1.17、24.00±1.87、39.93±3.90;Tmax(h):8.00±0.00、6.67±2.06、8.00±0.00;MRT(0～tn)(h):19.87±4.25、19.54±1.11、19.29±2.47.结论 单剂量口服A7717263个剂量组的药物代谢均成线性关系,其血药浓度-时间曲线符合一级吸收的一房室模型.
作者：刘骅；金涌；朱熙；宋珏；李俊 刊期： 2007年第02期
目的 研究舌体大小与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)之间的关系.方法 采用多排螺旋CT(MSCT)对正常人和OSAHS患者的舌体大小进行扫描,应用图像工作站测量正常人和OSAHS患者的舌体大小,包括舌体长度、舌体宽处的宽度、中纵切面面积,舌体厚度.通过OSAHS患者与正常人、轻度OSAHS患者与中重度OSAHS患者舌大小的各指标的比较,研究舌体大小与OSAHS之间的相关性.结果 正常个体的舌大小测量参数的测量均值均小于OSAHS患者个体(P＜0.05);轻度OSAHS患者舌体大小的各指标测量均值均小于中重度OSAHS患者(P＜0.05);舌体大小的临床分级与OSAHS严重程度有关.结论 舌大小和OSAHS发病密切相关,特别是中重度OSAHS发病中起着重要作用.
作者：万玉峰；高潮兵；吴兴旺；陶冶；周莉；刘业海 刊期： 2007年第02期
目的 建立稳定表达tau蛋白的稳转细胞系,并观察tau蛋白的过度磷酸化对稳转的非神经源性细胞形态和活性的影响.方法 构建pEGFP-C1-tau真核细胞表达质粒,建立稳转和表达融合蛋白GFP-tau的293T细胞系,并用不同浓度的蛋白磷酸酯酶抑制剂冈田酸(OA)处理细胞以诱导其过度磷酸化,通过荧光显微镜观察细胞形态的变化,用MTT法监测细胞的活性及免疫印迹法检测tau蛋白的表达及磷酸化水平.结果 成功地建立了稳定表达GFP-tau蛋白的非神经源性稳转细胞系,该细胞系在稳转后3～4周,细胞生长状态良好,细胞形态和突起生长基本正常.用OA处理后,细胞突起消失、变圆,贴壁性能差,死亡的细胞数量也增多,这些变化随着OA作用时间的延长或浓度的增加更加明显;MTT法显示细胞的增殖活性明显下降;免疫印迹法提示,100 nmol/L OA作用8 h后,磷酸化tau水平增加.结论 对于稳定表达tau蛋白的非神经源性细胞,OA可降低其增殖活性,该作用可能与OA抑制细胞内去磷酸化过程有关.
作者：冯利杰；李琪；方辉；王海萍；粱燕；沈玉先 刊期： 2007年第02期
目的 观察特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者治疗前后外周血淋巴细胞亚群水平变化,评价其在ITP发病机制研究和治疗中的价值.方法 利用流式细胞术检测ITP患者外周血淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD19+、CD19+CD5+)水平.结果 ITP组治疗前CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞百分率以及CD3+CD4+/CD3+CD8+比例减低,CD3+CD8+T淋巴细胞、CD19+B淋巴细胞、CD19+CD5+B淋巴细胞百分率均升高,与对照组相比较,差异有显著性(P＜0.05).ITP组治疗后,27例有效,9例无效.治疗有效组治疗后CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞百分率以及CD3+CD4+/CD3+CD8+比例升高,CD3+CD8+T淋巴细胞、CD19+B淋巴细胞、CD19+CD5+B淋巴细胞百分率均减低,与治疗前相比,差异有显著性(P＜0.05),与健康对照组相比,差异无显著性(P＞0.05);治疗无效组治疗后淋巴细胞亚群与治疗前相比,差异无显著性(P＞0.05).结论 ITP患者外周血淋巴细胞亚群水平存在异常,可能与ITP患者体内细胞免疫和体液免疫紊乱有关,并在其中发挥重要的作用,治疗前后外周血淋巴细胞亚群水平的变化对于研究ITP发病机制以及观察ITP临床病情转归均起着一定的作用.
作者：鲍静；夏瑞祥；曾庆曙；李嘉嘉 刊期： 2007年第02期
目的 构建人血管内皮生长因子(hVEGF121)和人骨形态发生蛋白-4(hBMP-4)的真核双表达质粒,转染COS-7细胞并表达.方法 将hVEGF121cDNA和hBMP-4通过非定向和定向克隆至真核双表达质粒pIRES中,重组质粒pIRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4,经酶切鉴定后,转染COS-7细胞,提取总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和Western blot检测.结果 真核双表达载体pIRES-hVEGF121 cDNA/hBMP-4构建成功且hVEGF121 cDNA和hBMP-4在COS-7细胞中得到了有效表达.结论 hVEGF121和hBMP-4在COS-7细胞中成功表达,为进一步研究打下良好基础.
作者：韩雷；汪春兰；赵宇；何金生；王帮河；王兴宇；杨兵；周志林 刊期： 2007年第02期
目的 观察盐酸戊乙奎醚对体外循环(CPB)瓣膜置换术患者血浆炎性因子的影响.方法 选择择期体外循环下瓣膜置换术患者20例,随机分为盐酸戊乙奎醚组(A组,n=10)和对照组(B组,n=10).A组于CPB前10 min静注盐酸戊乙奎醚3 mg,对照组给予等量生理盐水.分别于麻醉诱导前(T0)、CPB 30 min(T1)、主动脉开放后10 min(T2)、CPB后3 h(T3)、24h(T4)抽取桡动脉血,测定血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、和白细胞介素-10(IL-10)浓度.结果 组内比较,B组TNF-α浓度于T3时点高于T0(P＜0.01),而A组T1、T2时点TNF-α浓度较T0显著降低,其余时点与术前比较无明显变化.B组IL-6于T4时点高于A组(P＜0.05),IL-10浓度明显低于A组.组间比较,B组TNF-α浓度于T1～T4各时点均高于A组(P＜0.05).结论 盐酸戊乙奎醚可部分抑制CPB导致的炎性反应,对CPB术后全身炎性反应综合征有一定的预防作用.
作者：魏昕；高亚利；秦红；方才 刊期： 2007年第02期
目的 研究血管紧张素转换酶2(ACE2)在大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)上的表达.方法 体外培养大鼠PMVEC,分别采用RT-PCR、Western blot及免疫组化的方法检测ACE2的表达.结果 RT-PCR法从细胞总RNA中检测出ACE2的扩增条带;用Western blot法检测大鼠PMVEC蛋白提取液,可见ACE2的蛋白印迹条带;免疫组化法显示ACE2免疫组化反应产物主要分布于细胞的胞膜和胞浆.结论 从核酸和蛋白水平证实了大鼠PMVEC可以表达ACE2,表达主要位于细胞的胞膜和胞浆部分.
作者：王楠；孙耕耘；张泓 刊期： 2007年第02期
目的 分析TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术和透射电镜3种细胞凋亡检测方法的优缺点.方法 在已建立的HCMV先天性感染小鼠中枢神经系统模型基础上,选用鼠龄为24个月模型鼠进行试验.试验分为3组(每组6只):HCMV先天性潜伏感染老年小鼠组(A组)、HCMV先天性潜伏再激活感染老年小鼠组(B组)和正常对照老年小鼠组(C组).采用TUNEL法和流式细胞仪检测各组小鼠大脑皮质细胞凋亡情况,采用透射电镜观察凋亡细胞的超微结构变化.结果 TUNEL法和流式细胞术检测发现C组凋亡细胞少,A组凋亡细胞比率较C组有所升高,而B组凋亡细胞多;检测结果经T检验分析发现A组、B组与C组各组间凋亡率差异均有显著性.透射电镜检测发现,同C组比较,A组和B组部分神经元细胞核染色体固缩,核物质碎片化,凋亡小体形成等特征性凋亡改变.结论 HCMV先天性感染可致老年小鼠大脑皮质细胞凋亡.TUNEL法和流式细胞术可用于凋亡的定量检测,但TUNEL法易受主观因素的影响,而透射电镜是凋亡定性检测的可靠方法.
作者：赵俊；王明丽；陈敬贤 刊期： 2007年第02期
目的 探讨空气灌肠在诊治小儿急性肠套叠中的应用价值及如何提高整复率.方法 经空气压力灌肠证实肠套叠患儿125例(135例次),所有病例均在透视下采用空气灌肠获得肠套叠的诊断并进行整复治疗.诊断压力6～8kPa,整复压力10～16 kPa.结果 腹部平片86例次肠管生理积气减少.空气灌肠透视130例次见肠管内软组织肿块.共整复成功129例次,其中一次性整复成功109例次,多次间歇性整复成功20例次,其中8例发生复套均整复成功,总成功率为95.56%,6例次未整复成功,无一例穿孔.结论 空气灌肠是小儿急性肠套叠首选的诊治方法,疗效可靠,安全性高;早期诊断及间歇性空气灌肠并辅以局部按摩是提高整复率的关键.
作者：李修奎；余永强；朱赤；刘连城 刊期： 2007年第02期
目的 明确自噬和自噬性细胞死亡在胃癌SGC-7901及BGC-823细胞紫杉醇处理过程中的存在,探讨其对紫杉醇诱导的凋亡敏感性的作用.方法 流式细胞仪和MTT法分别检测紫杉醇诱导SGC-7901及BGC-823细胞的凋亡率和总死亡率,死细胞DAPI染色荧光显微镜检测非凋亡性细胞死亡,吖啶橙染色流式细胞仪和荧光显微镜分别定量、定性检测自噬和自噬性细胞死亡的存在,自噬特异性阻断剂3-甲基腺嘌呤和紫杉醇共同作用细胞后流式细胞术检测细胞死亡率和凋亡率的变化.结果 紫杉醇处理SGC-7901及BGC-823细胞早期(24 h内)可出现明显的细胞自噬性变化,自噬高峰期出现紫杉醇诱导3～6 h,自噬性细胞死亡存在并可能是紫杉醇诱导的非凋亡性细胞死亡的主要形式,抑制紫杉醇诱导的细胞自噬可以促进紫杉醇诱导细胞凋亡的发生.结论 紫杉醇可以诱导胃癌SGC-7901及BGC-823细胞自噬及自噬性细胞死亡,并且紫杉醇诱导的胃癌细胞自噬会拮抗胃癌细胞凋亡的发生,从而为胃癌化疗耐受提供新的解释,可能为胃癌治疗提供新的途径.
作者：占贞贞；陈思；叶艳；吴萍；张旭东；张林杰 刊期： 2007年第02期
目的 对照性分析非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)临床特点,探讨海狗油ω-3多不饱和脂肪酸胶丸(海狗油)对NAFLD的治疗效果.方法 ①收集NAFLD患者和正常健康人资料各76例,以病例对照研究方法分析NAFLD的临床生化指标.②选取18例NAFLD患者,予以海狗油连续治疗12周,动态观察海狗油对NAFLD患者临床生化和影像学检查结果的影响.结果 ①NAFLD组体重指数(BMI)、谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、空腹血糖(FPG)显著高于对照组(P＜0.01),两组间AST和TCH差异无显著性.②NAFLD组合并肥胖、高血压、血脂紊乱、高血糖中两项或两项以上者和代谢综合征者分别为72.37%(55/76)和46.05%(35/76).③与治疗前比较,海狗油治疗4周末和8周末时,NAFLD患者的血清LP-a显著降低(P＜0.01);治疗12周末时,血清Apo-A1明显降低(P＜0.05),肝/脾CT值比值的差异无显著性(P＞0.05).结论 NAFLD与肥胖、血脂紊乱和高血糖密切相关,海狗油对NAFLD患者的血脂有一定调节作用.
作者：朱振；宋育林；胡乃中；梅俏；许建明 刊期： 2007年第02期
目的 研究芍药苷(PF)对佐剂性关节炎(AA)大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)吞噬功能及其产生细胞因子的影响.方法 采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导AA大鼠模型,无菌取PMφ,吞噬功能采用中性红法测定,PMφ培养上清液中IL-1活性的测定采用小鼠胸腺细胞增殖法,TNF-α和PGE2含量的测定采用放射免疫测定法.结果 PF能抑制关节肿胀,降低AA大鼠PMφ过强的吞噬功能和产生IL-1、TNF-α和PGE2的水平.结论 PF对AA大鼠的抗炎和免疫抑制作用与其降低AA大鼠PMφ过强的吞噬功能和产生IL-1、TNF-α和PGE2的水平有关.
作者：王晓玉；魏伟；唐丽琴；吴虹；杨宇清；陈尹 刊期： 2007年第02期
安徽医科大学学报杂志
主管:安徽省教育厅
主办：安徽医科大学
