邵会媛；栾材富；刘杰；张守信；马新衡；张贵丽；孙成铭
目的 筛选Veto细胞生长的适低血清培养基,用于流感病毒的细胞培养.方法 分别以MEM、M199、DMEM/F12、DMEM/F12与MEM混合物(1∶1)为基础培养基,添加5％、2％、1％的小牛血清传代培养Veto细胞,通过细胞形态观察、细胞计数及MTT法检测细胞的增殖活力筛选适基础培养基;将流感病毒接种低血清适应的Veto细胞,检测病毒收获液的血凝效价及残留BSA含量,电子显微镜观察病毒形态.结果 以DMEM/F12与MEM混合物(1∶1)为基础培养基,添加2％小牛血清培养的Vero细胞长势良好,细胞数量较多,增殖活力强.低血清适应的Vero细胞培养的流感病毒血凝效价高可达1∶512,平均值为1∶384;病毒液中的残留BSA含量约为正常血清培养条件下的1/18;病毒形态完整.结论 成功筛选出Veto细胞培养流感病毒的低血清培养基,为更具生物安全性的流感疫苗的研发奠定了基础.
作者：耿兴良；戴宗祥；段盼盼；郭琦；宋绍辉；寸怡娜；姜述德；廖国阳 刊期： 2014年第05期
目的 构建成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)基因野生型和E731K突变型的真核表达载体,并进行鉴定.方法 利用基因定点突变试剂盒,定点突变FGFR2基因,获得其E731K突变的突变型基因,通过设计含有Xba Ⅰ、Xho Ⅰ限制性内切酶识别序列的引物分别扩增FGFR2基因野生型和E731K突变型的cDNA,克隆至质粒pcDNA3.1-EGFP上,构建重组表达质粒pcDNA3.1-FGFR2-EGFP和pcDNA3.1-FGFR2E731K-EGFP,利用X-tremeGENE HP DNA将质粒转染至HEK293细胞,采用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测FGFR2表达水平.结果 经定点突变已获得野生型的突变型FGFR2基因,碱基序列与设计序列完全一致,cDNA第2191位碱基G突变为A.重组表达质粒pcDNA3.1-FGFR2-EGFP和pcDNA3.1-FGFR2E731K-EGFP经双酶切及测序鉴定证明构建正确.质粒转染HEK293细胞后,荧光显微镜下均可见绿色荧光蛋白表达;质粒pcDNA3.1-FGFR2-EGFP和pcDNA3.1-FGFR2E731K-EGFP转染组中FGFR2 mNRA和蛋白表达水平均明显高于质粒pcDNA3.1-EGFP转染组和空白对照组(P＜0.05).结论 成功构建了FGFR2基因野生型和E731K突变型的真核表达质粒,并在HEK293细胞中成功表达,为进一步研究FGFR2基因奠定了基础.
作者：刘振兴；崔亚洲；刘超；栾静；周小艳；韩金祥 刊期： 2014年第05期
目的 制备壳聚糖-海藻酸钠包被的副溶血弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,omp)K微球疫苗,并检测其对大黄鱼的口服免疫效果.方法 采用乳化-离子交联法制备副溶血弧菌ompK微球疫苗,筛选表面活性剂司盘-80添加量及壳聚糖包被浓度,经正交试验优化微球疫苗的制备工艺,筛选微球疫苗的冻干保护剂.检测采用优化条件制备的微球疫苗的理化特性及其在不同条件下的释放特性,并将微球添加到饵料中,连续5d投喂大黄鱼,第28天以副溶血弧菌zj2003攻击,检测口服微球疫苗的免疫保护率.结果 适司盘-80添加量为2％～4％,壳聚糖包被浓度为0.6％～0.7％;优化的微球疫苗制备条件为:抗原蛋白浓度10 mg/ml,海藻酸钠浓度1.0％,水油比1∶2,搅拌速度2 000 r/min;微球疫苗的佳冻干保护剂为2％甘露醇;以优化的条件制备的微球圆整性、分散性好,平均直径为(1.91±1.02)μm,表现出酸性条件稳定、中性和弱碱性条件溶胀的特性;微球疫苗口服免疫的大黄鱼对副溶血弧菌zj2003攻击表现出中等程度的保护力.结论 制备了壳聚糖-海藻酸钠包被的副溶血弧菌ompK微球疫苗,并验证了其口服免疫的有效性,为鱼类口服弧菌疫苗的研制及应用奠定了基础.
作者：李梅芳；毛芝娟；韩雨杉；童阳阳；许健 刊期： 2014年第05期
目的 研究低温乙醇法工艺生产的抗人T细胞猪免疫球蛋白的有效期.方法 将3批经全面检定合格的抗人T细胞猪免疫球蛋白置(6±2)℃贮存36个月,分别于0、3、6、9、12、18、24、30、36个月取样,参考《中国药典》三部(2005版)中抗人T细胞猪免疫球蛋白检测方法和标准,对制品外观、pH值、纯度、蛋白含量、分子大小分布以及效价进行检定.将E玫瑰花环形成抑制试验及淋巴细胞毒试验的标示量与贮存时间结果导入Excel,使用6SQ统计加载项,进行一元线性回归,选择时间和预测区间的上或下限作散点图,在散点图中选择添加趋势线,如可观察到预测区间的上限值呈线性,可在趋势预测/回归分析类型中选择线性,获得拟合方程,将标示量带入方程中,计算获得有效期.结果 根据E玫瑰花环形成抑制试验效价测定结果,理论推算在(6±2)℃条件下保存时,有效期可达41 ～ 100个月;根据淋巴细胞毒试验效价测定结果,理论推算在(6±2)℃条件下保存时,有效期可达47.9 ～64.3个月.结论 初步确定抗人T细胞猪免疫球蛋白制品有效期为30个月.
作者：张颂；徐江峰；翁雅倩 刊期： 2014年第05期
目的 建立Sf9昆虫细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)含量双抗体夹心ELISA检测方法.方法 从Sf9昆虫细胞中提取总蛋白,免疫家兔,制备兔抗Sf9细胞总蛋白多克隆抗体,经辛酸-硫酸铵沉淀和CL-4B层析柱纯化后,采用SDS-PAGE分析抗体纯度,间接ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性;用纯化的多克隆抗体作为包被抗体,采用改良过碘酸钠法将HRP酶标记至纯化的抗体上作为酶标抗体,采用方阵滴定法确定双抗体夹心ELISA方法的适工作条件.确定该方法的佳线性范围及低检测限,验证该方法的准确度及精密度.将表达戊型肝炎ORF2基因的重组杆状病毒感染Sf9细胞,收获病毒培养上清,制备3批纯化的重组蛋白,用建立的方法检测纯化过程中HCP含量的变化,验证其在纯化工艺中的适用性.与商品化试剂盒进行比较,检测两种方法的灵敏度及在制品中的适用性.结果 纯化后的兔抗Sf9细胞总蛋白多克隆抗体纯度达90％以上,抗体效价为1∶10000,可与Sf9细胞蛋白特异性结合.建立的双抗体夹心法ELSA方法佳抗体包被浓度为20 g/ml,37℃孵育1 h;酶标抗体的工作浓度为1∶200,37℃孵育1 h;TMB室温显色30 min;测定各孔A450值.该方法的佳线性范围为50～1 600 ng/ml,低检测为50 ng/ml;不同浓度的Sf9细胞蛋白抗原回收率在87.8％ ～ 117％之间,变异系数均小于10％;制备的3批重组蛋白经超滤及层析纯化后,HCP含量均逐渐降低至小于50 ng/ ml,纯化工艺可有效去除HCP;与商品化试剂盒比较,该方法更适用于检测戊肝类病毒颗粒样品.结论 已成功建立Sf9昆虫细胞残余蛋白含量检测的双抗体夹心法ELSA方法,可用于检测Sf9昆虫细胞/杆状病毒表达系统纯化的重组蛋白中HCP含量.
作者：王宁；佟雪莲；边雅静；周思杭；李静；王奔；唐玉龙 刊期： 2014年第05期
目的 比较3株来自我国不同地区的狂犬病病毒街毒株在细胞和乳鼠脑内的生长特性,为建立狂犬病病毒感染模型奠定基础.方法 分别通过乳鼠脑内接种和细胞培养法进行连续传代,测定不同代次SXYQ、YN01和GDMMD57株狂犬病病毒街毒株的病毒滴度,计算半数细胞感染量(TCID50).结果 SXYQ、YN01和GDMMD57株病毒乳鼠脑内接种传代至10代,病毒滴度随传代次数的增加,呈上升趋势,至第8代后,病毒滴度趋于稳定,分别为105 85、1 05 63和105.97TCID50/g,不同毒株间病毒滴度存在差异.SXYQ、YN01和GDMMD57株病毒接种N2a细胞后,随着传代次数的增加,病毒对细胞的适应性不断增强,病毒滴度呈上升趋势,至第15代后,病毒滴度趋于稳定,不同毒株间病毒滴度存在差异;第20代SXYQ株病毒的滴度在感染后2.5d达到峰值(106.80TCID50/ml),YN01和GDMMD57株病毒滴度在感染后3d达到峰值(均为107.30TCID50/ml).结论 3株病毒在细胞和乳鼠脑内经连续传代后均能达到较高滴度,可用于狂犬病病毒感染模型的建立及新型疫苗的研究.
作者：李露；王化磊；赵国星；齐瑛琳；郑学星；冯娜；赵永坤；王铁成；李忠义 刊期： 2014年第05期
目的 优化复合型阴离子交换层析填料Capto adhere的纯化工艺,并进行验证.方法 利用中心复合设计(central composite design,CCD)法对影响复合阴离子交换层析的3个因素(上样液pH值、上样液电导率值、上样量)进行优化,拟合出响应曲面,找出优参数范围.将优化的Capto adhere层析工艺与亲和层析相结合,纯化CHO细胞表达的IgG1单抗培养液,验证工艺参数的稳定性.结果 优化的Capto adhere层析工艺为:上样液pH值6.9,上样液电导值率6.3 mS/cm,上样量300 mg/ml gel;CHO细胞表达的IgG1单抗培养液先经蛋白A亲和层析柱初步纯化,再经优化的Capto adhere层析工艺进一步纯化后,样品纯度达98.9％,蛋白A残留量为0.000 52％,宿主细胞蛋白残留量为0.015％,与预测值比较,结果偏差小于10％,且均符合质控标准,两步层析总收率达86.7％.结论 优化了复合型阴离子交换层析填料Capto adhere的纯化工艺,利用亲和层析与Capto adhere复合阴离子交换层析两步法纯化单抗是有效、简便、可行的.
作者：张波；靳征；徐秀玲；鲍禹凡；李景华 刊期： 2014年第05期
目的 制备口服CD226 DNA疫苗,观察该疫苗对小鼠免疫功能的影响.方法 以质粒CD226-PCR2.1-ToPo为模板,PCR扩增CD226基因,克隆至pcDNA3.1载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-CD226,利用脂质体LipofectamineTM 2000瞬时转染CT-26细胞株,采用RT-PCR法、Western blot法、流式细胞术检测CD226基因在CT-26细胞中的表达.将质粒pcDNA3.1-CD226用脂质体LipofectamineTM2000包裹制成CD226 DNA疫苗(100 μg质粒/100μl脂质体),经灌胃免疫C57BL/6小鼠,实验分CD226疫苗组、pcDNA3.1组和生理盐水组,流式细胞术检测CD226在小鼠脾细胞中的表达;还原酶法检测NO分泌水平;乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性;ELISA法检测脾细胞培养上清中细胞因子(IL-2、IL-4、IFNγ和TNF-α)分泌水平;Real-time PCR法检测肠黏膜组织内细胞因子表达水平.结果 质粒pcDNA3.1-CD226经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;质粒pcDNA3.1-CD226转染CT-26细胞的转染率为32.14％,转染的CT-26细胞检测到CD226蛋白表达.CD226疫苗组CD226 CD4+T细胞的绝对数、NK细胞杀伤活性、NO分泌水平、脾细胞培养上清中TNF-α、IFNγ和IL-2分泌水平、肠黏膜组织内TNF-α和IFNγ基因mRNA水平均明显高于pcDNA3.1组和生理盐水组(P＜0.05);而CD226疫苗组脾细胞培养上清中IL-4分泌水平及肠黏膜组织内IL-2和IL-4基因mRNA水平,与pcDNA3.1组和生理盐水组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CD226DNA疫苗经灌胃免疫,可诱导小鼠全身Th1型免疫应答增强和肠道局部部分Th1型免疫应答增强.
作者：李岩；王大南；杨芳莉；桑力轩；朱俊丰；李胜军；孙逊；吕昌龙 刊期： 2014年第05期
目的 从牛肺中提取基因组DNA,并分析其质量.方法 通过单因素试验考察不同NaC1浓度(0.6、0.8、1.0 mol/L)和水解温度(55、75℃)对组织蛋白水解及DNA释放的影响;采用酶解-沉淀法,按照单因素试验确定的酶解条件提取4批牛肺基因组DNA(100221、100301、100305、100322):二步钙盐沉淀法选择性沉淀DNA,获得DNA钙盐,并进行钠置换,获得DNA钠盐.对提取的牛肺基因组DNA进行质量分析,并考察牛肺新鲜程度对DNA终产品分子量的影响.结果 0.6 mol/L NaC1,55 ℃酶解4h可保证组织蛋白充分水解及基因组DNA完全释放;经二步钙盐沉淀制备的DNA纯度符合药用标准,但DNA产率不稳定,DNA分子量分布较宽,产率低的100305批DNA小分子丰度高;牛肺冻存处理导致DNA分子严重降解.结论 采用酶解-沉淀法从牛肺中提取了基因组DNA,对拓宽去纤苷及其类似物的来源具有重要意义.
作者：郭妍；惠长野；张文；王佃鹏；高朝贤；杨学琴 刊期： 2014年第05期
目的 建立测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20(Tween 20)含量的荧光偏振检测方法,并进行验证.方法 利用疏水性荧光染料DAF(5-dodecanoylaminofluorescein)与Tween 20胶束内的非极性核心结合,在485 nm激发波长下产生的荧光偏振强度与溶液中胶束浓度呈正相关,来确定样品中的Tween 20浓度.对建立的方法进行专属性、准确性、精密性、拟合度验证.结果 该方法的专属性较好,可排除检测体系中蛋白的干扰;该方法重复检测3次高(250 μg/ml)、中(150 μg/ml)、低(50 μg/ml)、定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ,25μg/ml)浓度样品的平均回收率均在(100±20)％的可接受范围内,批内和批间变异系数均小于15％;标准曲线拟合度良好.结论 立的荧光偏振法专属性、准确性、精密性良好,可用于蛋白制剂中Tween 20含量的测定,并适用于稳定性考察过程中Tween20有效浓度的监测.
作者：牛冬云；连炜；邬智刚；郝晓峰；柯潇 刊期： 2014年第05期
目的 比较应用于抗体药物捕获的耐碱的4种蛋白A亲和层析介质和2种小分子亲和层析介质的性能,为单抗纯化工艺的选择提供参考.方法 利用两种单抗纯品(mAb1和mAb2)测定4种蛋白A亲和层析介质MabSelectSuRe、POROS MabCaptureA、Absolute High Cap、TOYOPEARL AF-rProtein A-650F和2种小分子亲和层析介质Mabsorbent A2P HF、Fabsorbent F1P HF在停留时间分别为4、6、8 min时的动态载量;利用含mAb2的发酵液,从回收率和杂质去除方面比较6种亲和层析介质的纯化效果.结果 在5％穿透点,各介质对mAb1和mAb2的动态载量在35～73 g/L之间.小分子亲和层析介质Mabsorbent A2P HF纯化mAb2的回收率为89％,其他5种介质纯化mAb2的回收率均≥96％;6种介质纯化mAb2的宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)在2 000 ppm之内,蛋白A残留量在20 ppm之内.结论 结合流速、动态载量、回收率和杂质去除效果等指标,可从6种亲和层析介质中挑选适用于抗体类药物下游纯化工艺的耐碱型蛋白A或小分子亲和介质.
作者：丁建坤；彭育才；邓巧春；何丽秀；闫鸿鹏；谭清清；谢亦武 刊期： 2014年第05期
黑曲霉是发酵工业广泛应用的重要菌种,可产生葡萄糖氧化酶、纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、葡萄糖酸、柠檬酸等重要物质,且产量较高.通过基因工程方法进行表达已成为提高产物产量主要的方法之一,而从黑曲霉中提取高纯度的DNA是基因克隆的前提条件.黑曲霉属于丝状真菌,因其细胞壁多糖与几丁质含量较高,细胞壁结构坚固,提取DNA的过程中破壁困难,对提取DNA的纯度与质量会造成一定的影响.目前,提取黑曲霉基因组DNA的方法较多,本实验旨在对实验室常用的5种快速提取黑曲霉基因组DNA的方法进行比较,为今后合理选择DNA提取方法及方法的改进提供实验依据.
作者：李长青；薛永常 刊期： 2014年第05期
目的 探讨水飞蓟宾(silibinin)与阿霉素(doxorubicin)联合作用对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制.方法 用不同浓度的水飞蓟宾、阿霉素单独或联合作用SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化;Westem blot法检测细胞周期调控蛋白Cdk1 、Cyclin B1和细胞凋亡调控蛋白pro-caspase 3、pro-caspase 8、pro-caspase 9、PARP、Fas、Fas L表达量的变化及Bcl-2/Bax的比例.结果 0.01 μmol/L阿霉素联合水飞蓟宾(25、50、100、200 μmol/L)作用SGC-7901细胞后,产生了明显的协同作用,联合作用指数(combined index,CI)分别为0.634、0.418、0.224、0.472,有效提高了细胞的抑制率,同时降低了Cdk1和Cyclin B1蛋白的表达量,引起细胞G2/M期阻滞;Fas和Fas L的表达量升高,pro-caspase 3/8/9的表达量降低,PARP被剪切,Bcl-2/Bax的比例降低,促使SGC-7901细胞凋亡.结论 水飞蓟宾与阿霉素联合作用SGC-7901细胞后,水飞蓟宾能有效降低阿霉素的使用浓度,并提升其诱导凋亡的效果.
作者：张元新；葛雅琨；施维 刊期： 2014年第05期
目的 制备高效价的抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)兔血清.方法 分别用RD细胞和Vero细胞培养EV71,纯化后,将经甲醛灭活和未灭活的EV71抗原分别加入佐剂或不加佐剂,经不同途径(肌肉、皮下、腹腔)免疫家兔,每周采血,分离血清,分别采用ELISA、免疫双扩散、免疫荧光和中和抗体试验检测兔血清抗体效价,并分析不同方法检测兔血清抗体结果的相关性.结果 未灭活和灭活的纯化EV71抗原加弗氏佐剂后,经皮下或肌肉途径免疫家兔均可获得高效价的抗EV71兔血清,其中加弗氏佐剂的灭活疫苗经皮下途径免疫获得了高滴度的中和抗体;当抗血清ELISA效价达到或接近1∶108,免疫双扩散效价达到或接近1∶512,抗血清1:2000稀释后荧光强度＞++时,可进行免疫家兔的全血采集;不同方法免疫家兔全血采集的血清中和抗体效价为29 406～ 1280652 U/ 0.2ml;免疫双扩散检测与中和抗体和免疫荧光检测结果的相关性较高.结论 获得了高效价的抗EV71兔血清,为EV71疫苗抗原的相关检定创造了条件.
作者：王继麟；陈晓琦；吴杰；明平刚；宰家敏；郭长福；杨京生；段凯 刊期： 2014年第05期
目的 了解北京市顺义区常住人口麻疹抗体水平.方法 选择2012年在北京市顺义区连续居住6个月以上的11个年龄组人群作为调查对象,共243名.采用调查问卷,收集调查对象的人口学特征、麻疹患病史、含麻疹成分疫苗免疫史,并采用ELISA法检测研究对象麻疹抗体水平.结果 调查对象麻疹抗体阳性率为83.13％ (202/243),抗体水平中位数为939.23 IU/L.男性与女性的麻疹抗体阳性率、抗体水平以及本市人口与流动人口麻疹抗体阳性率、抗体水平差异均无统计学意义(P均＞0.05);有免疫史者与无免疫史者和免疫史不详者间,麻疹抗体阳性率及抗体水平差异均有统计学意义(P均＜0.05),有免疫史者抗体水平高于无免疫史者和免疫史不详者.本市和流动人口麻疹抗体阳性率均以8～11月龄低,分别为37.50％、14.29％;均以0～7月龄、1～4岁、5～9岁、35～39岁组高,为100％,其中15～19、20 ～ 24、25～29和30～ 34岁组流动人口麻疹抗体阳性率均高于本市人口,差异有统计学意义(P均＜0.05).本市和流动人口麻疹抗体水平中位数均以0～7月龄低,分别为72.51、96.07 IU/L;高的年龄组本市人口为8～11月龄(3 940.12 IU/L),流动人口为30 ～ 34岁组(3 661.33 IU/L),其中25～29、30 ～ 34、35 ～ 39岁组流动人口麻疹抗体水平中位数高于本市人口,差异有统计学意义(P均＜0.05),1～4岁组本市人口麻疹抗体水平中位数高于流动人口,差异有统计学意义(P＜0.05).本市和流动人口共调查≤14岁儿童93名,81.72％的人曾接种过含麻疹成分疫苗,接种1、2、3剂次及以上疫苗的人群,麻疹抗体阳性率在92.61％～100％之间,差异无统计学意义(P＞0.05),抗体水平中位数差异无统计学意义(P＞0.05).但本市儿童不同免疫剂次间麻疹抗体阳性率、抗体水平中位数差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 北京市顺义区常住人口中,1～9岁儿童麻疹抗体水平较高,发生大范围麻疹暴发和流行的风险较小,＜1岁婴儿麻疹抗体水平有待进一步提高,应进一步探索本市15岁以上年龄组免疫策略,以降低该人群发病风险.
作者：王凤双；吴殚；肖雷；冯冉；唐莹 刊期： 2014年第05期
柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)是引起手足口病(hand,foot and mouth desease,HFMD)的主要病原体之一.研发CA16疫苗对控制HFMD流行具有重要意义.本文探讨了CA16疫苗研发的必要性和可行性,并对CA16疫苗中和抗体检测方法、动物模型、重组病毒样颗粒(recombinant virus-like particles,rVLPs)疫苗及灭活疫苗等相关的研发进展作一综述.
作者：卞莲莲；王一平 刊期： 2014年第05期
目的 分析2010年1月1日～ 2012年12月31日天津市宁河县百日咳流行病学特征及病例直接花费情况,为下一步预防和控制百日咳提供参考依据.方法 利用描述流行病学方法,采用Excel 2003对2010年1月1日～2012年12月31日天津市法定传染病报告系统百日咳个案调查资料进行统计学分析,利用天津市疾病预防控制中心设计的“百日咳病例疾病负担调查表”中数据分析病例花费情况.结果 2010～ 2012年天津市宁河县共报告16例百日咳,平均发病率为1.28/10万;夏秋季高发,6～ 10月的病例占81.2％;87.5％的病例发生在农村地区;发病年龄小的为1月龄,大的为28岁,＜1岁的病例占62.5％,发病率明显高于大龄儿童及成人;16例百日咳中,5例有免疫史,7例未到接种月龄,4例无免疫史;发病至初次就诊时间间隔中位数为13 d;11例为实验室诊断病例,5例为临床诊断病例,临床表现以痉挛性咳嗽、呕吐、口唇青紫等为主,有5例合并支气管肺炎;共有12例住院病例,二、三级医疗机构各6例,住院病例平均花费8 846元.结论 农村地区百日咳发病率较高,应提高免疫服务质量并加强百日咳预防知识的宣传.婴幼儿监护人如有咳嗽等相关症状应积极就诊,降低病原传播风险.应加强百日咳的预防和控制,以减轻家庭的经济负担.
作者：常利民；郑治敬；翟春艳 刊期： 2014年第05期
目的 探讨西洋参皂苷(Panax quinquefolius saponin,PQS)对缺血-再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)诱导乳鼠心肌细胞凋亡及钙浓度的影响.方法 将原代培养的心肌细胞分为正常对照组(不做任何处理)、I/R组(心肌细胞经缺氧、无血清孵育2h,再复氧、复血清培养24、48 h,以模拟心肌I/R损伤)和西洋参总皂苷干预组(PQS+ I/R,细胞再灌注时分别加入5、10、20、40 μg /ml PQS),采用台盼蓝染色法检测各组心肌细胞的活性;流式细胞术检测心肌细胞的凋亡率;激光扫描共聚焦显微镜检测心肌细胞内游离钙的变化.结果 与I/R组比较,10、20、40 μg/ml PQS+I/R组心肌细胞活性显著增加(P＜0.01),心肌细胞凋亡率显著降低(P＜0.05);20 μg/ml的PQS可降低心肌细胞的钙负载.结论 PQS可显著减少I/R诱导的心肌细胞凋亡,并减轻心肌细胞钙超载的发生,这可能是PQS抑制I/R心肌细胞凋亡的机制之一.
作者：刘哲；张峰；李丽阳；姚晓颖；武瑞 刊期： 2014年第05期
目的 对鼠神经生长因子(mouse nerve growth factor,mNGF)病毒灭活工艺进行验证.方法 以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)和Sindbis病毒为指示病毒,考察辛酸钠法对mNGF原液中病毒的灭活效果,并比较灭活后与未灭活原液的mNGF活性、纯度、等电点及其-20℃贮存0、3、6个月的稳定性.结果 mNGF原液经0.3％辛酸钠、pH(5.0-0.2)、(25±1)℃灭活90 min,PRV和Sindbis病毒滴度均下降6 lgCCID50/ml以上,灭活60、90 min样品盲传3代后,均未检测出病毒.灭活后与未灭活原液的mNGF活性无差异,比活性均在5.0×105 AU/mg以上,蛋白纯度均为100％,等电聚焦主区带均在8.65～9.30之间;-20℃贮存0、3、6个月,蛋白纯度均为100％,比活性均无明显差异,且6个月内比活性均未明显降低.结论 辛酸钠法可安全、快速、高效地灭活mNGF原液中的指示病毒及其所代表的相关病毒,保证了产品的质量及其工艺的稳定性,保障了临床用药的安全性.
作者：扈会平；赵淑媛；唐正均；李云富；曾娟梅；孙玉龙；刘兵；黄剑波 刊期： 2014年第05期
目的 分析吉林市HIV感染者中HIV-1型对常用治疗药物的基因型耐药情况.方法 采集吉林市接受抗病毒治疗的HIV-1感染者血样,提取RNA,采用巢式PCR法扩增HIV-1基因,利用ABI 3100测序仪进行核苷酸序列测定;用Sequencher 4.9对测定的序列拼接,用Bioedit软件进行多序列比对及序列清理后,与Stanford HIV Drug Resistance Database中的参考株序列进行比较,分析耐药基因突变及耐药结果.结果 49名HIV感染者中发现27人耐药,耐药率55.1％.检测出反转录酶(RT)区耐药突变位点8个,其中核苷类反转录酶抑制剂(nucleoside reverse transcripase inhibitors,NRTIs)类中,15例M184V和3例M41L突变,对应拉米夫定(Lamivudine,3TC)/恩曲他滨(Emdtricitabine,FTC)耐药15例和齐多夫定(Zidovudine,AZT)/司他夫定(Stavudine,D4T)耐药7例;非核苷类反转录酶抑制剂(non-nucleoside reverse transcripase inhibitors,NNRTIs)类中,13例K103N、8例V106I、6例Y181C及4例P225H突变,对应奈韦拉平(Nevirapine,NVP)耐药26例、依非韦伦(Efavirenz,EFV)耐药25例和利匹韦林(Rilpivirine RPV)耐药14例.蛋白酶(PR)区仅发现次要耐药突变(A71V/T/I和L10I/V),未造成相应药物的耐药.结论 吉林市HIV感染者中耐药率较高,应加强耐药监测,拟定患者个性化治疗方案.
作者：乔建国；周凤岩；李玉莹；修冬莹；邢辉；李峥；赵薇；刘红亮 刊期： 2014年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
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