扈会平；赵淑媛；唐正均；李云富；曾娟梅；孙玉龙；刘兵；黄剑波
目的 两种常用抗人T细胞猪免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin)制备工艺的对比.方法 以人T淋巴细胞免疫的健康猪血浆为原料,采用硫酸铵-Sephadex A-50和Cohn低温乙醇法,经醛化人健康红细胞、醛化人胎盘渣及混合人血浆吸收后,制备抗人T细胞猪免疫球蛋白,参考《中国药典》三部(2010版)相关附录,进行中间品及成品检定.结果 用硫酸铵盐析法与低温乙醇法连续分别制备了3批产品,每批投浆量约5 000ml;3批中间品鉴别试验及3批成品检定结果均符合《中国药典》三部(2010版)相关要求,两种工艺方法均适用于制备抗人T细胞猪免疫球蛋白,但在质量和收获率上,低温乙醇法更具优势.结论 低温乙醇法制备抗人T细胞猪免疫球蛋白更适用于生产.
作者：徐江峰；张颂 刊期： 2014年第05期
目的 构建成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)基因野生型和E731K突变型的真核表达载体,并进行鉴定.方法 利用基因定点突变试剂盒,定点突变FGFR2基因,获得其E731K突变的突变型基因,通过设计含有Xba Ⅰ、Xho Ⅰ限制性内切酶识别序列的引物分别扩增FGFR2基因野生型和E731K突变型的cDNA,克隆至质粒pcDNA3.1-EGFP上,构建重组表达质粒pcDNA3.1-FGFR2-EGFP和pcDNA3.1-FGFR2E731K-EGFP,利用X-tremeGENE HP DNA将质粒转染至HEK293细胞,采用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测FGFR2表达水平.结果 经定点突变已获得野生型的突变型FGFR2基因,碱基序列与设计序列完全一致,cDNA第2191位碱基G突变为A.重组表达质粒pcDNA3.1-FGFR2-EGFP和pcDNA3.1-FGFR2E731K-EGFP经双酶切及测序鉴定证明构建正确.质粒转染HEK293细胞后,荧光显微镜下均可见绿色荧光蛋白表达;质粒pcDNA3.1-FGFR2-EGFP和pcDNA3.1-FGFR2E731K-EGFP转染组中FGFR2 mNRA和蛋白表达水平均明显高于质粒pcDNA3.1-EGFP转染组和空白对照组(P＜0.05).结论 成功构建了FGFR2基因野生型和E731K突变型的真核表达质粒,并在HEK293细胞中成功表达,为进一步研究FGFR2基因奠定了基础.
作者：刘振兴；崔亚洲；刘超；栾静；周小艳；韩金祥 刊期： 2014年第05期
目的 构建稳定表达转录因子增强子结合蛋白α(CCAAT-enhancer-binding protein α,C/EBPα)基因的白血病髓性细胞系.方法 利用DNA重组技术将C/EBPα基因插入到慢病毒表达载体PLVX-EGFP-3FLAG-Puro中,构建重组慢病毒质粒PLVX-C/EBPα-3FLAG-Puro,与慢病毒包装辅助质粒plp1、plp2、plp/VSVG(1∶1∶1)共转染293细胞,包装出慢病毒,实时荧光定量PCR法检测病毒滴度;收集病毒,分别以10、20 MOI感染K562细胞,G418筛选阳性克隆,利用有限稀释法筛选稳定转染的单克隆细胞株,并采用Western blot法检测C/EBPα蛋白的表达.结果 重组慢病毒质粒PLVX-C/EBPα-3FLAG-Puro经菌落PCR及测序鉴定证明构建正确;包装后的慢病毒pSB957的病毒滴度为5×106 TU/ml;pSB957-K562细胞中C/EBPα蛋白的表达水平较高,且20和10MOI pSB957感染的K562细胞中,C/EBPα蛋白的表达水平无明显差异.结论 成功构建了pSB957-K562白血病细胞株,为进一步研究C/EBPα在白血病发生发展中的作用提供了良好的细胞模型.
作者：邵会媛；栾材富；刘杰；张守信；马新衡；张贵丽；孙成铭 刊期： 2014年第05期
目的 建立测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20(Tween 20)含量的荧光偏振检测方法,并进行验证.方法 利用疏水性荧光染料DAF(5-dodecanoylaminofluorescein)与Tween 20胶束内的非极性核心结合,在485 nm激发波长下产生的荧光偏振强度与溶液中胶束浓度呈正相关,来确定样品中的Tween 20浓度.对建立的方法进行专属性、准确性、精密性、拟合度验证.结果 该方法的专属性较好,可排除检测体系中蛋白的干扰;该方法重复检测3次高(250 μg/ml)、中(150 μg/ml)、低(50 μg/ml)、定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ,25μg/ml)浓度样品的平均回收率均在(100±20)％的可接受范围内,批内和批间变异系数均小于15％;标准曲线拟合度良好.结论 立的荧光偏振法专属性、准确性、精密性良好,可用于蛋白制剂中Tween 20含量的测定,并适用于稳定性考察过程中Tween20有效浓度的监测.
作者：牛冬云；连炜；邬智刚；郝晓峰；柯潇 刊期： 2014年第05期
目的 比较3株来自我国不同地区的狂犬病病毒街毒株在细胞和乳鼠脑内的生长特性,为建立狂犬病病毒感染模型奠定基础.方法 分别通过乳鼠脑内接种和细胞培养法进行连续传代,测定不同代次SXYQ、YN01和GDMMD57株狂犬病病毒街毒株的病毒滴度,计算半数细胞感染量(TCID50).结果 SXYQ、YN01和GDMMD57株病毒乳鼠脑内接种传代至10代,病毒滴度随传代次数的增加,呈上升趋势,至第8代后,病毒滴度趋于稳定,分别为105 85、1 05 63和105.97TCID50/g,不同毒株间病毒滴度存在差异.SXYQ、YN01和GDMMD57株病毒接种N2a细胞后,随着传代次数的增加,病毒对细胞的适应性不断增强,病毒滴度呈上升趋势,至第15代后,病毒滴度趋于稳定,不同毒株间病毒滴度存在差异;第20代SXYQ株病毒的滴度在感染后2.5d达到峰值(106.80TCID50/ml),YN01和GDMMD57株病毒滴度在感染后3d达到峰值(均为107.30TCID50/ml).结论 3株病毒在细胞和乳鼠脑内经连续传代后均能达到较高滴度,可用于狂犬病病毒感染模型的建立及新型疫苗的研究.
作者：李露；王化磊；赵国星；齐瑛琳；郑学星；冯娜；赵永坤；王铁成；李忠义 刊期： 2014年第05期
目的 分析2010年1月1日～ 2012年12月31日天津市宁河县百日咳流行病学特征及病例直接花费情况,为下一步预防和控制百日咳提供参考依据.方法 利用描述流行病学方法,采用Excel 2003对2010年1月1日～2012年12月31日天津市法定传染病报告系统百日咳个案调查资料进行统计学分析,利用天津市疾病预防控制中心设计的“百日咳病例疾病负担调查表”中数据分析病例花费情况.结果 2010～ 2012年天津市宁河县共报告16例百日咳,平均发病率为1.28/10万;夏秋季高发,6～ 10月的病例占81.2％;87.5％的病例发生在农村地区;发病年龄小的为1月龄,大的为28岁,＜1岁的病例占62.5％,发病率明显高于大龄儿童及成人;16例百日咳中,5例有免疫史,7例未到接种月龄,4例无免疫史;发病至初次就诊时间间隔中位数为13 d;11例为实验室诊断病例,5例为临床诊断病例,临床表现以痉挛性咳嗽、呕吐、口唇青紫等为主,有5例合并支气管肺炎;共有12例住院病例,二、三级医疗机构各6例,住院病例平均花费8 846元.结论 农村地区百日咳发病率较高,应提高免疫服务质量并加强百日咳预防知识的宣传.婴幼儿监护人如有咳嗽等相关症状应积极就诊,降低病原传播风险.应加强百日咳的预防和控制,以减轻家庭的经济负担.
作者：常利民；郑治敬；翟春艳 刊期： 2014年第05期
目的 优化复合型阴离子交换层析填料Capto adhere的纯化工艺,并进行验证.方法 利用中心复合设计(central composite design,CCD)法对影响复合阴离子交换层析的3个因素(上样液pH值、上样液电导率值、上样量)进行优化,拟合出响应曲面,找出优参数范围.将优化的Capto adhere层析工艺与亲和层析相结合,纯化CHO细胞表达的IgG1单抗培养液,验证工艺参数的稳定性.结果 优化的Capto adhere层析工艺为:上样液pH值6.9,上样液电导值率6.3 mS/cm,上样量300 mg/ml gel;CHO细胞表达的IgG1单抗培养液先经蛋白A亲和层析柱初步纯化,再经优化的Capto adhere层析工艺进一步纯化后,样品纯度达98.9％,蛋白A残留量为0.000 52％,宿主细胞蛋白残留量为0.015％,与预测值比较,结果偏差小于10％,且均符合质控标准,两步层析总收率达86.7％.结论 优化了复合型阴离子交换层析填料Capto adhere的纯化工艺,利用亲和层析与Capto adhere复合阴离子交换层析两步法纯化单抗是有效、简便、可行的.
作者：张波；靳征；徐秀玲；鲍禹凡；李景华 刊期： 2014年第05期
目的 研究低温乙醇法工艺生产的抗人T细胞猪免疫球蛋白的有效期.方法 将3批经全面检定合格的抗人T细胞猪免疫球蛋白置(6±2)℃贮存36个月,分别于0、3、6、9、12、18、24、30、36个月取样,参考《中国药典》三部(2005版)中抗人T细胞猪免疫球蛋白检测方法和标准,对制品外观、pH值、纯度、蛋白含量、分子大小分布以及效价进行检定.将E玫瑰花环形成抑制试验及淋巴细胞毒试验的标示量与贮存时间结果导入Excel,使用6SQ统计加载项,进行一元线性回归,选择时间和预测区间的上或下限作散点图,在散点图中选择添加趋势线,如可观察到预测区间的上限值呈线性,可在趋势预测/回归分析类型中选择线性,获得拟合方程,将标示量带入方程中,计算获得有效期.结果 根据E玫瑰花环形成抑制试验效价测定结果,理论推算在(6±2)℃条件下保存时,有效期可达41 ～ 100个月;根据淋巴细胞毒试验效价测定结果,理论推算在(6±2)℃条件下保存时,有效期可达47.9 ～64.3个月.结论 初步确定抗人T细胞猪免疫球蛋白制品有效期为30个月.
作者：张颂；徐江峰；翁雅倩 刊期： 2014年第05期
目的 制备高效价的抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)兔血清.方法 分别用RD细胞和Vero细胞培养EV71,纯化后,将经甲醛灭活和未灭活的EV71抗原分别加入佐剂或不加佐剂,经不同途径(肌肉、皮下、腹腔)免疫家兔,每周采血,分离血清,分别采用ELISA、免疫双扩散、免疫荧光和中和抗体试验检测兔血清抗体效价,并分析不同方法检测兔血清抗体结果的相关性.结果 未灭活和灭活的纯化EV71抗原加弗氏佐剂后,经皮下或肌肉途径免疫家兔均可获得高效价的抗EV71兔血清,其中加弗氏佐剂的灭活疫苗经皮下途径免疫获得了高滴度的中和抗体;当抗血清ELISA效价达到或接近1∶108,免疫双扩散效价达到或接近1∶512,抗血清1:2000稀释后荧光强度＞++时,可进行免疫家兔的全血采集;不同方法免疫家兔全血采集的血清中和抗体效价为29 406～ 1280652 U/ 0.2ml;免疫双扩散检测与中和抗体和免疫荧光检测结果的相关性较高.结论 获得了高效价的抗EV71兔血清,为EV71疫苗抗原的相关检定创造了条件.
作者：王继麟；陈晓琦；吴杰；明平刚；宰家敏；郭长福；杨京生；段凯 刊期： 2014年第05期
目的 探讨水飞蓟宾(silibinin)与阿霉素(doxorubicin)联合作用对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制.方法 用不同浓度的水飞蓟宾、阿霉素单独或联合作用SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化;Westem blot法检测细胞周期调控蛋白Cdk1 、Cyclin B1和细胞凋亡调控蛋白pro-caspase 3、pro-caspase 8、pro-caspase 9、PARP、Fas、Fas L表达量的变化及Bcl-2/Bax的比例.结果 0.01 μmol/L阿霉素联合水飞蓟宾(25、50、100、200 μmol/L)作用SGC-7901细胞后,产生了明显的协同作用,联合作用指数(combined index,CI)分别为0.634、0.418、0.224、0.472,有效提高了细胞的抑制率,同时降低了Cdk1和Cyclin B1蛋白的表达量,引起细胞G2/M期阻滞;Fas和Fas L的表达量升高,pro-caspase 3/8/9的表达量降低,PARP被剪切,Bcl-2/Bax的比例降低,促使SGC-7901细胞凋亡.结论 水飞蓟宾与阿霉素联合作用SGC-7901细胞后,水飞蓟宾能有效降低阿霉素的使用浓度,并提升其诱导凋亡的效果.
作者：张元新；葛雅琨；施维 刊期： 2014年第05期
目的 比较不同浓度配比的CpG ODN和Al(OH)3佐剂乙型肝炎疫苗的免疫原性.方法 按乙肝表面抗原浓度为20 μg/ml,分别加入3个浓度的Al(OH)3(300、400、500 μg/ml)和CpG ODN(125、250、500 μg/ml)佐剂,按不同配比制备9组不同佐剂浓度的疫苗样品,以不加CpG ODN佐剂的疫苗作为对照.将各组疫苗样品分别按1:16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256共5个稀释度稀释后,经腹腔免疫BALB/c小鼠,第5周检测血清中抗-HBs水平,计算抗体阳转率及半数有效量(ED50);将各组疫苗样品分别于第0和28天经左前胫肌肉免疫BALB/c小鼠,分别于第1次免疫后第2、4、6、8、10周检测体液免疫应答水平,第5周检测细胞免疫应答水平.结果 不同浓度CpG ODN和Al(OH)3的9组疫苗样品免疫小鼠后,ED50均小于0.2,对照组疫苗的ED50为0.235.不同浓度CpG ODN和Al(OH)3的9组疫苗样品小鼠血清抗体滴度均高于对照组,且抗体产生时间略提前;Al(OH)3浓度为400和500 μg/ml时,疫苗诱导小鼠产生的抗体滴度与CpG ODN佐剂浓度呈正相关.对照组诱导产生的IFNγ水平均较其他疫苗组低;随着Al(OH)3浓度的升高,同一CpG ODN浓度的疫苗样品诱导IFNγ的水平逐渐下降;相同Al(OH)3浓度下,低浓度CpG ODN组斑点形成细胞数(spot-forming cell,SFC)均值较高,而高浓度组SFC均值较低.结论 Al(OH)3和CpGODN作为双佐剂系统协同乙型肝炎疫苗,不仅能增强体液免疫应答,还能诱导IFNγ的表达,激活Th1细胞免疫应答,比传统Al(OH)3单佐剂乙型肝炎疫苗更具优势,其中CpG ODN和Al(OH)3浓度均为500 μg/ml的疫苗制剂免疫原性佳.
作者：杨喆；丁敏；王丽丽；李伟；周长征；徐娅妮；李镭；马波 刊期： 2014年第05期
目的 比较应用于抗体药物捕获的耐碱的4种蛋白A亲和层析介质和2种小分子亲和层析介质的性能,为单抗纯化工艺的选择提供参考.方法 利用两种单抗纯品(mAb1和mAb2)测定4种蛋白A亲和层析介质MabSelectSuRe、POROS MabCaptureA、Absolute High Cap、TOYOPEARL AF-rProtein A-650F和2种小分子亲和层析介质Mabsorbent A2P HF、Fabsorbent F1P HF在停留时间分别为4、6、8 min时的动态载量;利用含mAb2的发酵液,从回收率和杂质去除方面比较6种亲和层析介质的纯化效果.结果 在5％穿透点,各介质对mAb1和mAb2的动态载量在35～73 g/L之间.小分子亲和层析介质Mabsorbent A2P HF纯化mAb2的回收率为89％,其他5种介质纯化mAb2的回收率均≥96％;6种介质纯化mAb2的宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)在2 000 ppm之内,蛋白A残留量在20 ppm之内.结论 结合流速、动态载量、回收率和杂质去除效果等指标,可从6种亲和层析介质中挑选适用于抗体类药物下游纯化工艺的耐碱型蛋白A或小分子亲和介质.
作者：丁建坤；彭育才；邓巧春；何丽秀；闫鸿鹏；谭清清；谢亦武 刊期： 2014年第05期
目的 制备口服CD226 DNA疫苗,观察该疫苗对小鼠免疫功能的影响.方法 以质粒CD226-PCR2.1-ToPo为模板,PCR扩增CD226基因,克隆至pcDNA3.1载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-CD226,利用脂质体LipofectamineTM 2000瞬时转染CT-26细胞株,采用RT-PCR法、Western blot法、流式细胞术检测CD226基因在CT-26细胞中的表达.将质粒pcDNA3.1-CD226用脂质体LipofectamineTM2000包裹制成CD226 DNA疫苗(100 μg质粒/100μl脂质体),经灌胃免疫C57BL/6小鼠,实验分CD226疫苗组、pcDNA3.1组和生理盐水组,流式细胞术检测CD226在小鼠脾细胞中的表达;还原酶法检测NO分泌水平;乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性;ELISA法检测脾细胞培养上清中细胞因子(IL-2、IL-4、IFNγ和TNF-α)分泌水平;Real-time PCR法检测肠黏膜组织内细胞因子表达水平.结果 质粒pcDNA3.1-CD226经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;质粒pcDNA3.1-CD226转染CT-26细胞的转染率为32.14％,转染的CT-26细胞检测到CD226蛋白表达.CD226疫苗组CD226 CD4+T细胞的绝对数、NK细胞杀伤活性、NO分泌水平、脾细胞培养上清中TNF-α、IFNγ和IL-2分泌水平、肠黏膜组织内TNF-α和IFNγ基因mRNA水平均明显高于pcDNA3.1组和生理盐水组(P＜0.05);而CD226疫苗组脾细胞培养上清中IL-4分泌水平及肠黏膜组织内IL-2和IL-4基因mRNA水平,与pcDNA3.1组和生理盐水组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CD226DNA疫苗经灌胃免疫,可诱导小鼠全身Th1型免疫应答增强和肠道局部部分Th1型免疫应答增强.
作者：李岩；王大南；杨芳莉；桑力轩；朱俊丰；李胜军；孙逊；吕昌龙 刊期： 2014年第05期
柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)是引起手足口病(hand,foot and mouth desease,HFMD)的主要病原体之一.研发CA16疫苗对控制HFMD流行具有重要意义.本文探讨了CA16疫苗研发的必要性和可行性,并对CA16疫苗中和抗体检测方法、动物模型、重组病毒样颗粒(recombinant virus-like particles,rVLPs)疫苗及灭活疫苗等相关的研发进展作一综述.
作者：卞莲莲；王一平 刊期： 2014年第05期
目的 对鼠神经生长因子(mouse nerve growth factor,mNGF)病毒灭活工艺进行验证.方法 以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)和Sindbis病毒为指示病毒,考察辛酸钠法对mNGF原液中病毒的灭活效果,并比较灭活后与未灭活原液的mNGF活性、纯度、等电点及其-20℃贮存0、3、6个月的稳定性.结果 mNGF原液经0.3％辛酸钠、pH(5.0-0.2)、(25±1)℃灭活90 min,PRV和Sindbis病毒滴度均下降6 lgCCID50/ml以上,灭活60、90 min样品盲传3代后,均未检测出病毒.灭活后与未灭活原液的mNGF活性无差异,比活性均在5.0×105 AU/mg以上,蛋白纯度均为100％,等电聚焦主区带均在8.65～9.30之间;-20℃贮存0、3、6个月,蛋白纯度均为100％,比活性均无明显差异,且6个月内比活性均未明显降低.结论 辛酸钠法可安全、快速、高效地灭活mNGF原液中的指示病毒及其所代表的相关病毒,保证了产品的质量及其工艺的稳定性,保障了临床用药的安全性.
作者：扈会平；赵淑媛；唐正均；李云富；曾娟梅；孙玉龙；刘兵；黄剑波 刊期： 2014年第05期
固定床反应器在病毒性疫苗的研究中已经得到广泛的应用.固定床反应器能在较小的体积中得到较高的细胞密度和病毒滴度.本文主要介绍固定床反应器在病毒性疫苗研究中的应用及其优势和存在的主要问题.
作者：陈金华 刊期： 2014年第05期
目的 探讨蕃茄红素(lycopene)对人中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophil elastae,HNE)诱导的气道上皮细胞黏液高分泌的影响.方法 分别用0、25、50、75、100、200、400μmol/L的番茄红素处理人支气管上皮细胞株HBE16,采用MTY法检测细胞活性,确定番茄红素试验浓度;用HNE刺激HBE16细胞构建气道黏液高分泌模型,用番茄红素及AG1478进行干预,实验共分5组:对照组(无血清培养基培养)、HNE组(加入终浓度为50 nm/L的HNE)、HNE+蕃茄红素组(加入终浓度为100 μmol/L的蕃茄红素,作用24 h后,给予终浓度为50 nm/L的HNE刺激)、HNE+ AG1478组(加入5μmol/L AG1478预处理30 min后,给予终浓度为50 nmol/L的HNE刺激)、HNE+蕃茄红素+ AG1478组(先加入100 μmol/L的蕃茄红素作用24 h,再给予5μmol/L的AGl478处理30 min后,给予终浓度为50 nmoL/L的HNE刺激).各组均于处理后24 h取样,采用RT-PCR法检测各组黏蛋白5ac(mucin,MUC5ac)基因、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因mRNA的转录水平;Western blot法检测各组EGFR和磷酸化表皮生长因子受体(phosphorylated EGFR,P-EGFR)蛋白的表达;ELISA法检测各组MUC5ac蛋白的表达.结果 番茄红素浓度低于l 00 μmol/L时对细胞无明显损伤,以100 μmol/L番茄红素作为实验浓度.与对照组比较,HNE组MUC5ac和EGFR基因mRNA转录水平均明显升高,HNE、HNE+番茄红素、HNE+ AG1478组EGFR和P-EGFR蛋白的表达均明显升高(P均＜0.01);与HNE组比较,HNE+番茄红素、HNE+ AG1478和HNE+番茄红素+ AG1478组MUC5ac和EGFR基因mRNA转录水平均明显降低,EGFR和P-EGFR蛋白的表达水平均明显降低(P均＜0.01).与对照组比较,HNE组MUC5ac蛋白含量明显升高(P＜0.01);与HNE组比较,HNE+番茄红素、HNE+ AG1478和HNE+番茄红素+AG1478组MUC5ac蛋白含量均明显降低(P均＜0.01).与HNE+ AG1478组比较,HNE+番茄红素+AG1478组中MUC5ac 、EGFR mRNA及蛋白表达水平、P-EGFR蛋白表达水平均明显降低(P均＜0.01).结论 蕃茄红素通过下调EGFR水平对炎性气道上皮细胞黏液高分泌有抑制作用.
作者：邓玥；张婷 刊期： 2014年第05期
目的 应用Logistic回归与多因子降维法(multifactor dimensionality reduction,MDR)分析胃癌易感基因多态性,为胃癌的早期诊断和预警奠定基础.方法 采用病例-对照研究,以中国西北476例汉族胃癌患者为病例组,361名非肿瘤、非消化系统疾病个体为对照组;通过候选基因策略,应用MassARRAY质谱平台分析与代谢、炎症相关的18个基因的37个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点;利用Logistic回归与MDR对基因分型结果进行分析.结果 Logistic回归分析显示,磷脂酶Cε1 (phospholipase C epsilon 1,PLCE1)_rs3765524[OR=1.341,95％ CI(1.003,1.792)]、还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]_rs1800566[OR=0.615,95％ CI (0.418,0.903)]、X线修复交叉互补基因1(X ray repair cross complementing gene 1,XRCC1)_rs25487 [OR=0.688,95％ CI (0.490,0.967)]3个SNP位点的基因型分布与胃癌易感性显著相关(P＜0.05);MDR分析显示,PSCA _rs 10216533-XRCC1_rs25487[模型Ⅰ:OR=3.566,95％CI(2.614,4.863)]、MTHF_rs1801131-PSCA _rs2976392-CYP17A1rs6163-CYP19A1_rs4646-CYP19A1 _rs1902586-MMP2_rs243865[模型Ⅱ:OR=7.257,95％ CI(5.337,9.870)]、IL1B_rs16944-PSCA_rs10216533-CYP17A1_rs6163-NQO1_rs1800566-ENOSF1_rs2298581-XRCC1_rs25487[模型Ⅲ:OR=15.837,95％CI(11.252,22.289)]3个模型内部各位点之间具有显著交互作用(P＜0.0001).结论 PLCE1、NQO1、XRCC1、PSCA、MTHFR、CYP17A1、CYP19A1、MMP2、IL1B、ENOSF1等基因多态性与我国西北地区汉族人群胃癌发病风险相关;在胃癌的早期诊断与预警中应联合Logistic回归和MDR等方法,兼顾单因素与多因素交互的影响进行综合分析.
作者：张文涛；梁平；代鹏；王伟华；汪钦；孙建斌；王伟；颜真 刊期： 2014年第05期
目的 制备壳聚糖-海藻酸钠包被的副溶血弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,omp)K微球疫苗,并检测其对大黄鱼的口服免疫效果.方法 采用乳化-离子交联法制备副溶血弧菌ompK微球疫苗,筛选表面活性剂司盘-80添加量及壳聚糖包被浓度,经正交试验优化微球疫苗的制备工艺,筛选微球疫苗的冻干保护剂.检测采用优化条件制备的微球疫苗的理化特性及其在不同条件下的释放特性,并将微球添加到饵料中,连续5d投喂大黄鱼,第28天以副溶血弧菌zj2003攻击,检测口服微球疫苗的免疫保护率.结果 适司盘-80添加量为2％～4％,壳聚糖包被浓度为0.6％～0.7％;优化的微球疫苗制备条件为:抗原蛋白浓度10 mg/ml,海藻酸钠浓度1.0％,水油比1∶2,搅拌速度2 000 r/min;微球疫苗的佳冻干保护剂为2％甘露醇;以优化的条件制备的微球圆整性、分散性好,平均直径为(1.91±1.02)μm,表现出酸性条件稳定、中性和弱碱性条件溶胀的特性;微球疫苗口服免疫的大黄鱼对副溶血弧菌zj2003攻击表现出中等程度的保护力.结论 制备了壳聚糖-海藻酸钠包被的副溶血弧菌ompK微球疫苗,并验证了其口服免疫的有效性,为鱼类口服弧菌疫苗的研制及应用奠定了基础.
作者：李梅芳；毛芝娟；韩雨杉；童阳阳；许健 刊期： 2014年第05期
目的 建立Sf9昆虫细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)含量双抗体夹心ELISA检测方法.方法 从Sf9昆虫细胞中提取总蛋白,免疫家兔,制备兔抗Sf9细胞总蛋白多克隆抗体,经辛酸-硫酸铵沉淀和CL-4B层析柱纯化后,采用SDS-PAGE分析抗体纯度,间接ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性;用纯化的多克隆抗体作为包被抗体,采用改良过碘酸钠法将HRP酶标记至纯化的抗体上作为酶标抗体,采用方阵滴定法确定双抗体夹心ELISA方法的适工作条件.确定该方法的佳线性范围及低检测限,验证该方法的准确度及精密度.将表达戊型肝炎ORF2基因的重组杆状病毒感染Sf9细胞,收获病毒培养上清,制备3批纯化的重组蛋白,用建立的方法检测纯化过程中HCP含量的变化,验证其在纯化工艺中的适用性.与商品化试剂盒进行比较,检测两种方法的灵敏度及在制品中的适用性.结果 纯化后的兔抗Sf9细胞总蛋白多克隆抗体纯度达90％以上,抗体效价为1∶10000,可与Sf9细胞蛋白特异性结合.建立的双抗体夹心法ELSA方法佳抗体包被浓度为20 g/ml,37℃孵育1 h;酶标抗体的工作浓度为1∶200,37℃孵育1 h;TMB室温显色30 min;测定各孔A450值.该方法的佳线性范围为50～1 600 ng/ml,低检测为50 ng/ml;不同浓度的Sf9细胞蛋白抗原回收率在87.8％ ～ 117％之间,变异系数均小于10％;制备的3批重组蛋白经超滤及层析纯化后,HCP含量均逐渐降低至小于50 ng/ ml,纯化工艺可有效去除HCP;与商品化试剂盒比较,该方法更适用于检测戊肝类病毒颗粒样品.结论 已成功建立Sf9昆虫细胞残余蛋白含量检测的双抗体夹心法ELSA方法,可用于检测Sf9昆虫细胞/杆状病毒表达系统纯化的重组蛋白中HCP含量.
作者：王宁；佟雪莲；边雅静；周思杭；李静；王奔；唐玉龙 刊期： 2014年第05期
中国生物制品学杂志
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