李俊毅；彭林；唐存多；邬敏辰；金坚
目的 制备甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs),为研制HAV VLPs疫苗奠定基础.方法 利用RT-PCR法从HAV HM175-clone4株中扩增P1-2A、P2和P3基因片段.将P1-2A和P3基因亚克隆至pFastBacDual载体,构建重组表达质粒pFastBacDual-P1-P3,转化大肠杆菌DH10BacTM,构建重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-P1-P3,转染昆虫细胞sf-9进行重组杆状病毒的包装.重组杆状病毒vAcP1P3扩增后,感染昆虫细胞Tn-5,培养72 h后,收获表达产物,经原位免疫荧光、EIA、Western blot法及透射电镜检测HAV VLPs的表达.表达产物经超滤及蔗糖密度梯度离心纯化.结果 重组表达质粒和重组穿梭质粒分别经双酶切和PCR鉴定证明构建正确.第2、3、4代重组杆状病毒的滴度分别为1.58×105、2.13×107、3.98×107 TCID50/ml.vAcP1P3转染sf-9细胞72 h后,可见HAV蛋白的表达；vAcP1P3转染Tn-5细胞后,表达的HAV抗原主要存在于沉淀中,且含量明显高于野生型杆状病毒沉淀样品(P＜0.001)；Wentern blot结果表明,与野生型杆状病毒组相比,HAV VLPs样品中VP3的含量相对较少,HAV VLPs样品可见相对分子质量约30 700的VP1片段及相对分子质量约27 700的VP3片段；透射电镜观察可见大小约50 nm的VLPs颗粒,略大于天然HAV颗粒.纯化的HAV蛋白主要存在于40％ ～ 50％的蔗糖梯度中,提示有VLPs形成.结论 成功制备了HAV VLPs,为甲肝新型疫苗的研制奠定了基础.
作者：沈智俊；吴杰；解庭波；吕宏亮；王云；陈新文；严家新 刊期： 2013年第04期
目的 原核表达重组EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)Zta蛋白,并进行纯化.方法 PCR扩增EBV B95-8株BZLF1n氨基端基因,分别插入pThioHisA和pcDNA3.1载体中,构建重组表达质粒pThioHisA-BZLF1n和pcDNA3.1-BZLF1n.用pcDNA3.1-BZLF1n质粒免疫ICR小鼠,制备抗血清.将质粒pThioHisA-BZLF1n转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化诱导表达条件.表达产物经亲和层析后,用肠激酶切割,再经离子交换层析,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 重组表达质粒经双酶切和测序证明构建正确.表达的重组蛋白相对分子质量约为32 000; IPTG终浓度为0.1 mmol/L,37℃诱导6h,目的蛋白的表达量高,占菌体总蛋白的30％以上；重组蛋白以包涵体和可溶性两种形式表达.纯化的重组蛋白相对分子质量约为18 000,纯度大于95％,可与制备的小鼠抗血清发生特异性反应.结论 在大肠杆菌中高效表达了重组EBV Zta蛋白,纯化的重组蛋白纯度较高,特异性良好,为EBV相关疾病的早期诊断筛查奠定了基础.
作者：孙静；傅晶晶；蔡泓志；施建东；石怀生；胡云章；胡凝珠 刊期： 2013年第04期
目的 探讨穿心莲内酯(Andrographolide,AP)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)中NF-κB信号通路的影响.方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为3组:空白对照组、LPS组和AP+ LPS组.AP+ LPS组腹腔内注射10 mg/kg的AP,空白对照组腹腔内注射等体积的NS,2次/d,连续3d,第3天注射后2h,LPS组和AP+ LPS组气管内雾化吸入LPS(1 mg/kg),空白对照组气管内雾化吸入等剂量的NS,12 h后处死小鼠,开胸取肺,10％甲醛溶液固定,随后进行石蜡切片及常规HE染色,光镜下观察各组小鼠肺组织的病理学变化；免疫组化法观察肺组织中血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白的表达；Western blot法检测肺组织中磷酸化抑制蛋白IκB (Phospho-inhibitor of κB,p-IκBα)和p-NF-κB (P65)蛋白的表达.结果 LPS组小鼠肺损伤明显,有明显的炎症反应；AP+ LPS组小鼠肺损伤明显减轻,炎症细胞浸润明显减少.与LPS组相比,AP+ LPS组小鼠肺组织中VCAM-1蛋白的表达明显抑制；p-IκBα和p-NF-κB(P65)蛋白的表达明显降低(P＜0.05).结论 AP可通过抑制磷酸化的IκBα的降解及P65单体的磷酸化来调节NF-κB通路,从而减轻小鼠肺损伤的炎症变化.
作者：管弦；朱涛；王导新 刊期： 2013年第04期
目的 探讨慢病毒介导的人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)16型E6基因shRNA在体内对荷瘤裸鼠宫颈癌生长的抑制作用.方法 将BALB/c-nu裸鼠随机分为空白对照组、干扰组和无义干扰组,经皮下接种宫颈癌Caski细胞(2×106个),移植瘤直径达0.5 cm时,空白对照组于瘤体局部注射PBS,干扰组和无义干扰组分别于瘤体局部注射靶向HPV16型E6基因的shRNA-PLL3.7干扰慢病毒和无义干扰慢病毒(3×108 TU/ml),2周后检测瘤体大小和重量的变化,采用免疫组化法检测肿瘤组织中HPV16型E6、P53和P21蛋白的表达.结果 与无义干扰组和空白对照组比较,干扰组裸鼠体内肿瘤明显缩小,瘤体重量明显降低(P＜0.000 1),无义干扰组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；干扰组肿瘤组织中HPV16型E6蛋白的表达被抑制,P53和P21蛋白的表达水平明显升高.结论 慢病毒介导的HPV16型E6基因shRNA能有效抑制动物体内宫颈癌的生长,具有潜在的开发应用前景.
作者：白垚；郭建新；崔舫；郑秀惠 刊期： 2013年第04期
目的 优化CHO-DG44细胞瞬时转染的条件.方法 采用TubeSpin一次性生物反应器,以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)为报告基因,氯醚酰亚胺(Polyether imide,PEI)为转染试剂,将质粒pIRESneo3-eGFP瞬时转染CHO-DG44细胞,优化瞬时转染的基本条件[细胞密度、DNA浓度和DNA:PEI比例(w/w)]以及其他条件(换液、渗透压和温度),采用优化的条件转染质粒pIRESneo3-eGFP,流式细胞术检测细胞转染效率,生物发光仪检测相对荧光强度.结果 CHO-DG44细胞瞬时转染的佳条件为:采用XLG-P8培养基进行转染,细胞密度为2×106个/ml,DNA浓度为6.25μg/5 ml,DNA∶PEI(w/w)比例为1∶5；转染后4h更换新鲜培养基,添加30 mmol/L NaCl,并于31℃继续培养.在此条件下,CHO-DG44细胞的瞬时转染效率可达81.45％,相对荧光强度可达9×105 RFU/106 cells.结论 优化了CHO-DG44细胞瞬时转染的条件,为下一步药物蛋白的研发奠定了基础.
作者：黎美香；陈先金；王晓慧；王亚玉；袁凤媚；汪才坤；谢秋玲 刊期： 2013年第04期
目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(High-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD)测定W135群和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖中半乳糖和葡萄糖的含量,并对该方法进行验证及初步应用.方法 多糖蛋白结合物原液的混合液经HC1水解处理后,进样CarboPac PA10柱,以氢氧化钠-醋酸钠梯度流洗,脉冲积分安培检测器检测.筛选样品的水解条件；对HPAEC-PAD法进行专属性、精密性及准确性验证,并进行初步应用.结果 确定的样品水解条件为以2 mol/L HCl于85℃处理1h.载体蛋白破伤风类毒素对检测结果无干扰；重复性、日内精密性和不同操作者之间精密性试验结果的RSD均小于5％；准确性试验中葡萄糖和半乳糖的回收率在90％ ～ 110％之间.HPAEC-PAD法测定多糖蛋白结合物原液的多糖含量与传统间苯二酚比色法测定结果相当；成品疫苗中的W135群和Y群多糖含量测定结果符合《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》的规定(均≥4 μg/剂).结论 HPAEC-PAD法专属性、精密性和准确性良好,可用于A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗中W135群和Y群多糖含量的测定.
作者：李冶珊；刘梅影；陈敬；林海涛；王平 刊期： 2013年第04期
目的 原核表达人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)58型截短型L1 (Truncated L1,tL1)蛋白与结核分枝杆菌早期分泌型抗原靶蛋白-6(Early secreted antigenic target-6,ESAT-6)融合蛋白,并制备其抗血清.方法 利用PCR技术分别从HPV基因组DNA和ESAT-6-18T质粒DNA中扩增tL1和ESAT-6基因,构建重组原核表达质粒ESAT-6-tL1-pET-21a,分别转化E.coli BL21(DE3)和Rosetta,IPTG诱导表达.表达的融合蛋白ESAT-6-tL1经镍离子亲和层析柱纯化后免疫昆明小鼠,ELISA检测血清抗体效价.结果 PCR扩增出750 bp的tL1基因片段和320 bp的ESAT-6基因片段,测序结果与GenBank登录的序列一致；重组表达质粒ESAT-6-tL1-pET-21a经双酶切鉴定,构建正确；表达的ESAT-6-tL1融合蛋白相对分子质量约40 000,在E.coli Rosetta中的表达形式为包涵体,纯化后纯度为85％,免疫小鼠血清抗体效价为1:4 000.结论 成功表达了ESAT-6-tL1融合蛋白,并制备了其抗血清,为进一步研制检测HPV58的抗体奠定了基础.
作者：朱攀；井申荣；曾韦锟；黄芬 刊期： 2013年第04期
目的 构建大鼠结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)基因miRNA表达质粒,并建立稳定转染大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)系.方法 根据大鼠CTGF基因mRNA序列,设计并合成3对寡聚单链DNA X191-1、X191-2和X191-3及1对阴性对照序列DNA X191-4,将4对寡聚单链DNA退火成双链后,分别与载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR连接,构建CTGF基因miRNA重组表达质粒,分别转染HSC-T6细胞,荧光显微镜观察细胞的转染效率,RT-PCR检测转染细胞中CTGF基因mRNA的转录水平；取干扰效率高的重组质粒及阴性对照质粒,分别转染HSC-T6细胞,经杀稻瘟菌素持续加压筛选.结果 经测序鉴定,重组表达质粒构建正确,插入片段的碱基序列与设计相符；细胞的瞬时转染效率约为50％；3组干扰质粒转染的HSC-T6细胞中,CTGF基因mRNA的转录水平明显低于空白对照组(P＜0.01),其中X191-2质粒对CTGF基因转录的干扰效率高；获得了稳定转染的HSC-T6细胞.结论 成功构建了CTGF基因miRNA表达质粒,并获得了稳定转染的肝星状细胞系,为进一步研究肝纤维化的形成机制及其治疗奠定了基础.
作者：阳宏；李孝生；向颖；邢旎旎；沈艳 刊期： 2013年第04期
目的 了解重庆地区5岁以内儿童腹泻病毒病原及流行病学特点.方法 收集重庆医科大学附属儿童医院2010年8～11月就诊的5岁以内腹泻患儿的粪便标本共500份,采用胶体金法检测A组轮状病毒(Rotavirus,RV),RT-PCR法检测B、C组RV、诺如病毒(Norovirus,NV)G Ⅰ和GⅡ、肠道腺病毒(Adenovirus,ADV)、札如病毒(Sapovirus,SLV)和星状病毒(Astrovirus,ASV),取NV和SLV阳性PCR产物测序,并对病毒基因进行分型.采用MEGA 5.05软件构建进化树,Kimura's two-parameter法计算遗传距离,邻接法(Neighbor-joining)boot-strap重复检验1 000次.结果 500份标本中,检测到A组RV阳性标本134份,阳性率为26.8％; NV GⅡ型阳性标本132份,阳性率为26.4％; ADV阳性标本31份,阳性率为6.2％; SLV阳性标本9份,阳性率为1.8％;ASV阳性标本1份,阳性率为0.2％；未检测到B、C组RV和NV GⅠ型.随机选择22份NV阳性标本进行测序及基因分型,其中GⅡ/4占绝对优势,其次为GⅡ/6、GⅡ/2、GⅡ/3和GⅡ/7.SLV可分为4个基因亚型,其中GⅠ/1为优势株,其次为GⅠ/2、GⅡ/1和GⅠV1.结论 重庆地区5岁以下儿童腹泻以病毒感染为主,RV是主要的病原体,其次为NV、ADV、SLV和ASV.
作者：任增志；孔元梅；王倩倩；黄爱龙；钟晓妮；许红梅 刊期： 2013年第04期
目的 探讨酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对甲型肝炎(简称甲肝)和乙型肝炎(简称乙肝)抗原诱导小鼠体液免疫应答的增强作用,并对皮下和鼻腔接种的免疫效果进行比较.方法 将酵母多糖与角鲨烯按一定比例混合,制成复合佐剂,将不同剂量的复合佐剂与HBsAg混合,并设生理盐水对照组、HBsAg对照组、铝佐剂对照组和酵母多糖对照组,均经皮下免疫ICR小鼠1次,分别于免疫后2、4、8、16周,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HBsAg IgG抗体水平,筛选复合佐剂的佳免疫剂量.以复合佐剂的佳免疫剂量与甲肝抗原混合,并设生理盐水对照组、甲肝抗原对照组、铝佐剂对照组和酵母多糖对照组,均经皮下免疫ICR小鼠1次,分别于免疫后2、4、8周检测小鼠血清中抗甲肝抗原IgG抗体水平.以复合佐剂佳免疫剂量分别与HBsAg和甲肝抗原混合,并设生理盐水对照组、HBsAg对照组和甲肝抗原对照组,经鼻腔免疫ICR小鼠,共免疫3次,间隔2周,分别于末次免疫后4、8周检测小鼠血清中抗HBsAg和甲肝抗原IgG抗体水平.在试验期间,对小鼠的健康状况进行观察,并对小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织进行病理分析.结果 酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对HBsAg的佳免疫剂量为2 mg酵母多糖+8μl角鲨烯,该组抗体水平明显高于铝佐剂对照组和酵母多糖对照组(P＜0.05)；复合佐剂对甲肝抗原也有较好的体液免疫增强作用,抗体水平显著高于铝佐剂对照组和酵母多糖对照组(P＜0.05)；复合佐剂通过鼻腔免疫,对HBsAg和甲肝抗原的体液免疫应答也有增强作用,但效果不如皮下免疫,甲肝抗原鼻腔免疫效果优于HBsAg(P＜0.05).在试验期内,小鼠均未出现异常反应,各器官均未发生病变.结论 酵母多糖-角鲨烯复合佐剂能显著增强甲肝和HBsAg抗原对小鼠的体液免疫应答,免疫效果优于铝佐剂；皮下免疫效果优于鼻腔免疫；在免疫剂量范围内,复合佐剂安全性良好.
作者：王丽萍；王越；王海漩；胡云章；胡凝珠 刊期： 2013年第04期
目的 探讨普洱茶发酵过程中咖啡因的存在形式及游离咖啡因含量的变化,为监测茶叶发酵程度,控制茶品质量提供依据.方法 应用低pH沉淀结合高效液相色谱法(HPLC)检测普洱茶发酵全程中6个主要发酵阶段[一翻、二翻、三翻、四翻、五翻样品和出堆样品(熟茶)]样品的游离咖啡因和结合咖啡因含量.结果 普洱茶发酵过程中,游离咖啡因含量逐渐降低,从一翻样品的(2.555±0.104)％降至出堆样品的(1.878±0.049)％,超过1/4的咖啡因与茶中的其他组分相结合,形成结合咖啡因.结合咖啡因的含量不断增加,四～五翻期间增幅大,从0.084％增至0.647％;出堆样品中结合咖啡因的含量高,为0.703％.结论 发酵过程中,普洱茶中的游离咖啡因含量逐渐降低.本实验为监测茶叶发酵程度,控制茶品质量提供了依据.
作者：王腾飞；王宣军；黄业伟；方崇业；朱强强；杨军；盛军；郝淑美 刊期： 2013年第04期
目的 探讨肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染患儿外周血中自然杀伤(Natural killer,NK)细胞比例、亚群、表面受体及免疫效应分子的变化.方法 将EV71阳性的急性期患儿按疾病严重程度分为重症病例组和普通病例组,同时设健康对照组.提取各组患儿外周血,采用流式细胞术检测外周血中NK细胞比例、NK细胞亚群、自然细胞毒受体NKp30和NKp46、激活性受体NKG2D、抑制性受体CD94和NKG2A、脱颗粒标记CD107a及免疫效应分子(PF、GrB和GNLY)阳性细胞所占NK细胞的比例.结果 重症病例组患儿外周血NK细胞比例较健康对照组明显减少(P＜0.01),普通病例组CD16+NK细胞亚群比例较健康对照组升高(P＜0.05),重症病例组较普通病例组低,但差异无统计学意义(P＞0.05)；重症病例组和普通病例组NKG2D阳性细胞百分率均较健康对照组低(P＜0.01),而CD94和NKG2A阳性细胞百分率均较健康对照组明显升高(P＜0.01),NKp30和NKp46阳性细胞率3组之间差异无统计学意义(P＞ 0.05)；重症病例组和普通病例组CD107a、PF、GrB、GNLY的阳性细胞百分率均较健康对照组明显降低(P＜0.01或P＜0.05).结论 EV71感染可能抑制宿主NK细胞的增殖、激活及其杀伤功能.重症病例组与普通病例组比较,NK细胞比例和CD16+NK细胞亚群降低,抑制性受体CD94表达增高,胞浆内CD107a、GrB和PF表达显著降低,可能与重症病例的发生有关.
作者：王倩倩；许红梅 刊期： 2013年第04期
目的 构建胰岛素诱导基因-2(Insulin induced gene-2,Insig-2)启动子荧光素酶报告基因重组质粒,并检测其转录活性.方法 从人基因组DNA中扩增Insig-2基因转录起始位点上游1 389 bp的启动子片段,插入pGL3-basic质粒中,构建重组质粒pGL3-Insig-2,将其与内参质粒pRL-TK瞬时共转染HEK293、HepG2和3T3-L1细胞,采用双荧光素酶法检测Insig-2启动子活性.结果 重组质粒pGL3-Insig-2经双酶切和DNA测序,证实构建正确；pGL3-Insig-2质粒在HEK293、HepG2和3T3-L1细胞中均具有启动子活性,分别为阴性对照组(pGL3-basic空载体)的28、40和214倍、阳性对照组(pGL3-SV40)的2.6、5.5和30倍,呈现出强启动子活性.结论 成功构建了Insig-2基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒,为后续Insig-2基因的深入研究奠定了基础.
作者：杨发建；张琴；何芸；周龙洋；卜友泉；孙文娟；何百成；杨俊霞 刊期： 2013年第04期
目的 构建抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株,并对表达产物进行鉴定.方法 采用脂质体法将抗人CD4嵌合抗体质粒pHDC4稳定转染CHO-DHFR-细胞,经选择性培养、有限稀释法克隆和MTX加压筛选抗人CD4嵌合抗体稳定表达株,经细胞工厂扩大培养.收集培养上清,经Protein A亲和层析纯化目的抗体,激光共聚焦显微镜观察抗体基因在细胞内的表达,并分别进行质谱分析、蛋白质N-末端测序和平衡解离常数(KD)的测定.结果 构建的抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株的抗体表达水平为4.29 ～ 10.52 μg/ml;BCA测得纯化回收后的抗体表达水平为12.68 mg/L;激光共聚焦检测显示,抗CD4嵌合抗体稳定表达细胞株可稳定表达人的恒定区和鼠的可变区；质谱分析表明,其含有鼠源性和人源性成分；蛋白质N-末端氨基酸测序表明,其轻链与亲本抗体N-末端氨基酸序列完全一致；其KD为2.67×10-9M.结论 成功构建了抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株,其表达的抗人CD4嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合特异性和亲和力.
作者：胡迪超；张爱华；杨晓明 刊期： 2013年第04期
目的 在大肠杆菌中融合表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)TB10.4蛋白与呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)F1蛋白.方法 从MTB标准菌株H37Rv全基因组中扩增TB10.4(N/X)和TB10.4(N/B)基因,分别插入原核表达载体pET-28a和pET-30a中,构建重组表达质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4(N/B)/pET-30a;从F/18T/DH5α菌株中扩增F1(B/X)基因,与TB10.4(N/B)/pET-30a质粒连接,构建重组表达质粒TB10.4-F1/pET-30a;将质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4-F1/pET-30a分别转化感受态E.coliBL21 (DE3),IPTG诱导表达；表达的重组蛋白进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒TB10.4(N/X)/pET-28a和TB10.4-F1/pET-30a经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组TB10.4和TB10.4-F1蛋白相对分子质量约为13 000和59 000,可与鼠抗His单抗特异性结合.结论 成功在大肠杆菌中表达了重组融合蛋白TB10.4-F1,为进一步研究其免疫原性及保护性奠定了基础.
作者：王瑞博；井申荣；曾韦锟；黄芬 刊期： 2013年第04期
目的 观察链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导的雄性大鼠高血糖对子代生长发育及代谢的影响.方法 将健康雄性SD大鼠随机分为对照组(CON)和STZ组,STZ组经腹腔注射STZ(35 mg/kg)建立雄性大鼠糖尿病模型,CON组经腹腔注射pH4.2的枸橼酸钠缓冲溶液.两组雄鼠分别与健康SD雌鼠按1:2比例交配.雌鼠分娩后,称量两组子代出生体重,并连续监测体重变化和进食量；采用自动血糖仪和血糖试纸检测空腹血糖水平；18和22周时进行葡萄糖耐量试验(Glucose tolerance test,CTT)和胰岛素耐量试验(Insulin tolerance test,ITT)；计算肝重/体重指数；全自动生化分析仪检测血脂水平.结果 STZ组子代出生体重和后期体重及每日进食量均始终显著低于CON组(P＜0.05或P＜0.01)；第18周,STZ组与CON组子代葡萄糖耐量及胰岛素耐量差异均无统计学意义(P＞0.05)；第22周时,STZ组子代葡萄糖耐量在第15、30、60 min显著高于CON组(P＜0.05),胰岛素耐量在各检测时间点均显著高于CON组(P＜0.05)；STZ组与CON组子代肝重/体重指数差异无统计学意义(P＞0.05)；STZ组子代血清中甘油三酯含量明显低于CON组(P＜0.05).结论 父代高血糖对子代的出生体重和生长趋势有显著影响,且能显著改善子代的胰岛素耐量.
作者：李靖娜；宋勇；李继斌；刘治国；陈笑宜；张琪娟；肖晓秋 刊期： 2013年第04期
《中国药典》三部是对生物制品质量标准和检定方法的技术规范,是生物制品生产、供应、使用和监管共同遵守的法定依据.《中国药典》三部的前身是《中国生物制品规程》,自第一部生物制品国家标准《生物制品法规》(1952年版)颁布以来,历经《生物制品制造及检定规程》(1959年版),《生物制品规程》(1979年版),《中国生物制品规程》(1990年版、1995年版、2000年版),2002年10月,第八届药典委员会成立后,《中国生物制品规程》并入药典,设为药典三部.
作者：王晓娟；曹琰；郭中平 刊期： 2013年第04期
目的 原核表达并纯化牛Ⅱ型链球菌(Streptococcus bovis biotypeⅡ)van B2蛋白.方法 采用PCR法从牛Ⅱ型链球菌基因组DNA中扩增van B2基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-van B2,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果 PCR扩增获得597 bp的van B2基因片段；重组表达质粒pET-28a-van B2经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组van B2蛋白相对分子质量约为29 000,主要以可溶性形式表达；纯化的重组蛋白纯度为70％,可被小鼠抗牛链球菌血清Ⅱ型多克隆抗体特异性识别.结论 原核表达并纯化了牛Ⅱ型链球菌van B2蛋白,为van B2基因的耐药性研究奠定了物质基础.
作者：刘燕；布日额；李艳军；白靓；锡林高娃；郭闯 刊期： 2013年第04期
目的 优化伤寒Vi多糖柱层析纯化工艺,以替代传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法.方法 采用DEAE离子交换层析柱,分别在缓冲液(20 mmol/L Tris-C1)pH值为6.0、7.0和8.0的条件下纯化1批伤寒Vi多糖粗糖,并与传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法进行比较.按《中国药典》三部(2010版)要求检测纯化样品的蛋白质含量、核酸含量、O-乙酰基含量、分子大小及内毒素含量,并计算样品的多糖回收率.采用优化的DEAE柱层析纯化工艺纯化3批伤寒Vi多糖粗糖,验证该工艺的稳定性.结果 DEAE离子交换柱缓冲液(20 mmol/L Tris-Cl)pH值为7.0和8.0时,可有效将伤寒Vi多糖的杂质与纯化产物分离,多糖回收率分别为36.52％和38.35％,明显高于传统工艺的多糖回收率(15.52％),且纯化产物的内毒素含量(10 EU/μg)明显低于传统工艺(200 EU/μg).以优化工艺(pH 7.0)纯化3批伤寒Vi多糖粗糖获得的6批精糖的蛋白质含量、核酸含量、O-乙酰基含量、分子大小、内毒素含量及多糖回收率差异较小,标准偏差均小于5％.结论 优化了伤寒Vi多糖柱层析的纯化工艺,该工艺稳定性良好,可替代传统苯酚抽提、乙醇分级沉淀法,应用于伤寒Vi多糖的纯化.
作者：黄镇；王铭；陆伟；黄志伟；王茜；余晓书；冯晓异；者海燕；江超 刊期： 2013年第04期
目的 观察透明质酸(Hyaluronic acid,HA)对人骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡及细胞周期的影响,以探讨HA保护软骨细胞的作用机制.方法 分离人正常软骨细胞和OA软骨细胞,传至第2代后,分别经HA处理24h,采用MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期.结果 HA能明显降低人OA软骨细胞的凋亡率(P＜0.05),提高细胞的增殖活力、S期比例和增殖指数(P＜0.05),且对正常人软骨细胞的增殖活力和凋亡无明显影响.结论 HA可促进OA软骨细胞的分裂与增殖,降低细胞凋亡率,从而对软骨细胞发挥保护作用.
作者：李化光；刘华；孙洁；刘肃；张林西；王文；郭佳；赵琛；赵增虎 刊期： 2013年第04期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
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