屈玉玲；易永芬；邓玮；文雪；闫田静
目的 测定我国人用狂犬病疫苗株4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒糖蛋白G基因序列,并对其进行生物信息学分析.方法 RT-PCR扩增3株病毒糖蛋白G基因,分别克隆至pGEM-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,进行测序.应用DNAstar MegAlign软件分析3株病毒糖蛋白的同源性,AntheProt 5.0及DNAstar Protean软件分析3株病毒糖蛋白的结构及潜在B细胞抗原表位的差异.结果 4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒均属基因Ⅰ型狂犬病病毒；其糖蛋白G区基因同源性为76.0％～88.4％,G区ORF基因同源性为84.4％～91.5％,氨基酸序列同源性为90.5％～92.2％；3株病毒糖蛋白前19位氨基酸中均存在潜在信号肽结构,其中第19位氨基酸为三者潜在信号肽断裂位点,第17位氨基酸为4aGV株病毒糖蛋白潜在信号肽断裂位点；3株病毒糖蛋白分别在第463～476、464～475及463～475位氨基酸存在潜在可折叠螺旋的疏水性区域,为明显跨膜区域；4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒糖蛋白氨基酸残基均富含潜在α螺旋、β折叠及卷曲结构,其比例分别为30％、31％、39％,28％、30％、41％和29％、30％、41％,易发生扭曲、折叠,形成丰富的二级结构；3株病毒糖蛋白潜在B细胞抗原表位位置与数量相似.结论 已对3株人用狂犬病疫苗株G基因进行了全面生物信息学分析,为完善我国人用狂犬病疫苗生产用毒种的质控标准提供了支持.
作者：李加；曹守春；石磊泰；唐建蓉；田宏；高向东；董关木 刊期： 2012年第03期
目的 原核表达并纯化人细小病毒B19(Human parvovirus B19,HPVB19)结构蛋白VP1,并初步建立IgM ELISA检测方法,用于B19病毒感染的检测.方法 采用PCR法从B19 IgM阳性血清中扩增VP1基因片段,亚克隆至表达载体pGEX-2T中,构建重组表达质粒pGEX-2T-VP1,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达.表达产物经疏水纯化后进行Western blot分析.以纯化的重组蛋白包被酶标板,建立IgM间接ELISA检测方法,确定Cut-off值,并进行初步应用.结果 重组原核表达质粒经双酶切鉴定构建正确；表达的重组融合蛋白相对分子质量为61000,主要以包涵体形式存在,纯度为96％,可与B19 IgG阳性血清发生特异性反应；建立的间接ELISA方法Cut-off值为0.102,灵敏度为91.7％,特异性为98.6％,与对照试剂检测结果的符合率为97.1％；用建立的方法检测4 500份健康献血者及39份类风湿性关节炎患者血清的B19 IgM抗体,阳性率分别为1.04％和10.3％.结论 原核表达并纯化了HPVB19 VP1蛋白,并初步建立了IgM间接ELISA检测方法,为B19病毒感染的早期诊断提供了参考.
作者：梁莉莉；叶祥忠；周厚清；张娜；李良红；李益民；刘岩峰 刊期： 2012年第03期
目的 探讨代谢性胰岛素抵抗( Insulin resistance,IR)对肥胖大鼠心肌缺血/再灌注(Myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)耐受性的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为对照组(Cont组)、罗格列酮组(Rosi组)和肥胖组(Obes组),Rosi组给予高脂饲料喂养的同时灌胃罗格列酮,Obes组给予高脂饲料喂养,并灌胃相同剂量的生理盐水.检测各组大鼠血浆中各项生化指标、心肌组织总甘油三酯( Triglyceride,TG)的含量及胰岛素敏感性.制备大鼠MI/R模型,并取Obes组和Rosi组大鼠,输注磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素,分别记为Obwt组和Wort组,检测各组大鼠心脏血流动力学指标的变化；伊文蓝染色测定大鼠心肌缺血面积,2,3,5一氯化三苯四氮唑( TTC)染色测定心肌梗死面积；原位末端标记凋亡细胞(TUNEL)法分析心肌细胞凋亡；Western blot法检测心肌中PKB/Akt和GluT-4蛋白的表达水平.结果 MI/R前,与Cont组相比,Obes组大鼠心肌TG及血浆中游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA) TG和空腹胰岛素(Fasting insulin,FINS)水平均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),葡萄糖输注率(Glucose infusion rate,GIR)显著降低(P＜0.01)；而Rosi组大鼠血浆中TG、FFA和FINS水平较Obes组显著降低(P＜0.01),GIR显著升高(P＜0.01).与Cont组相比,Obes组大鼠MI/R后,心功能恢复差,梗死面积扩大,心肌细胞凋亡增多,并伴PKB/Akt和GluT-4表达水平下降；Rosi组与Obes组比,MI/R恢复能力增强,梗死面积缩小,细胞凋亡减少,PKB/Akt和GluT-4表达水平增加.Wort组大鼠可逆转Rosi组的抗凋亡作用,下调PKB/Akt和GluT-4的表达水平；而Obwt组大鼠MI/R后,心功能、心肌细胞凋亡数及PKB/Akt和GluT-4表达水平与Obes组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 肥胖大鼠心肌IR增加了 MI/R时的易损性,与PI3K-PKB-GluT-4信号通路下调、心肌细胞凋亡增加及心功能恶化密切相关.
作者：段雅倩；周波；孙芳；毛锦宁；吴豪杰；陈运贞；张素华 刊期： 2012年第03期
目的 初步建立嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和温和气单胞菌(Aeromonas sobria)二联灭活疫苗的生产工艺.方法 用50 L发酵罐培养嗜水气单胞菌和温和气单胞菌,确定发酵培养时间、甲醛灭活浓度及与佐剂乳化比例,对制备的疫苗进行质量检测,并分析佐剂与无佐剂二联灭活疫苗的免疫效果.结果 50 L发酵罐培养嗜水气单胞菌和温和气单胞菌菌株10～ 12h时,A650值达峰值；0.3％的甲醛于37℃灭活24 h,可完全灭活菌液；以灭活菌液与佐剂1∶1.5比例混合较合适；制备的佐剂二联灭活疫苗各项质量指标均合格,免疫保护效果优于无佐剂二联灭活疫苗.结论 已初步建立嗜水气单胞菌和温和气单胞菌二联灭活疫苗的生产工艺.
作者：陶家发；任燕；罗霞；赖迎迢；康光辉；张悠；石存斌；吴淑勤 刊期： 2012年第03期
目的 构建旋毛虫(Trichinella spirais)新生幼虫期特异性T314基因真核表达质粒,并在BHK细胞中进行表达.方法 从旋毛虫新生幼虫RNA中通过RT-PCR技术扩增无信号肽T314全长基因,定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组真核表达质粒T314-pEGFP-N1,脂质体法转染BHK细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,Western blot检测T314融合蛋白的表达.结果 重组真核表达质粒T314-pEGFP-N1经双酶切及测序证实构建正确；转染的BHK细胞48 h转染效率高；表达的T314融合蛋白可与旋毛虫感染的猪血清发生特异性反应.结论 已成功构建了T314基因重组真核表达质粒T314-pEGFP-N1,并在BHK细胞中融合表达,为进一步研究旋毛虫包囊形成机制奠定了基础.
作者：于建立；白雪；吴秀萍；刘明远 刊期： 2012年第03期
目的 克隆与乳腺癌MCF-7细胞相关的旋毛虫TS498基因,并进行原核表达.方法 从含TS498基因的噬菌体文库中PCR扩增TS498基因,亚克隆人原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-TS498,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物.结果 扩增的旋毛虫TS498基因与GenBank中登录的基因序列同源性为100％,重组表达质粒pET-28a-TS498经双酶切和测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约23 000,表达量约占菌体总蛋白的20％,能够被兔抗旋毛虫肌幼虫阳性血清识别.结论 成功克隆并在大肠杆菌中表达了与MCF-7细胞相关的旋毛虫TS498基因,为进一步研究其特性和功能奠定了基础.
作者：任保彦；左绍志；高江明；付成福；张旭；宫鹏涛；李建华；张西臣 刊期： 2012年第03期
目的 人工合成恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Macaca mulatta granulocyte-macrophage colony stimulating factor,mGM-CSF)基因,在大肠杆菌中高效表达并纯化.方法 根据大肠杆菌遗传密码子偏爱性优化设计并合成mGM-CSF基因,克隆至原核表达载体pET-43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus( DE3)-RIPL,IPTG诱导表达.表达的重组mGM-CSF蛋白经Sephacryl S-200分子筛层析纯化,复性后,Western blot检测其反应原性,MTT法检测其生物学活性.结果 重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为15000,表达量约占菌体总蛋白的30％,主要以包涵体形式存在；纯化复性后的重组蛋白纯度可达95％以上,并可与大鼠抗人GM-CSF单克隆抗体特异性结合,比活性为1.2×107 IU/mg.结论 在大肠杆菌中高效表达了重组mGM-CSF蛋白,纯化复性后的蛋白具有良好的生物学活性.
作者：刘娟；陈丹；李璐；刘新颖；王冉；史洪娜；王维龙；沈林；刘勇；李鼎锋 刊期： 2012年第03期
目的 探讨全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对大鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)的治疗作用及肺组织中基质金属蛋白酶-9( Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为生理盐水对照组、ALI组和ATRA干预组,后两组经尾静脉注射5ml/kg的脂多糖(LPS)复制ALI模型,ALI组在注射LPS前5d,每天以植物油灌胃1次,0.5ml/(kg·次),注射LPS后,经腹腔注射植物油,1ml/kg;ATRA干预组在注射LPS前5d,每天以含30 mg/kg ATRA的植物油灌胃1次,0.5 ml/(kg·次),注射LPS后,经腹腔注射含5 mg/kg ATRA的植物油,1ml/kg.对照组在整个实验过程中均注射生理盐水(0.5ml/kg).腹腔注射ATRA 8 h后,处死各组大鼠,测定大鼠动脉血氧分压(PaO2)、支气管肺泡灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中蛋白含量、肺组织湿/干比重(W/D),并观察肺组织形态,采用RT-PCR和免疫组化法分别检测肺组织中MMP-9基因mRNA和蛋白的表达.结果 与生理盐水对照组相比,ALI组大鼠肺组织炎性细胞明显增多,动脉PaO2明显降低(P＜0.05),W/D、BALF中蛋白含量、肺组织中MMP-9基因mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05或P＜0.01)；与ALI组相比,ATRA干预组大鼠肺组织炎症反应减轻,W/D、BALF中蛋白含量、肺组织中MMP-9基因mRNA及蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05或P＜0.01),其动脉PaO2也明显改善(P＜0.05).结论 ATRA对大鼠ALI具有治疗作用,其机制可能是通过降低MMP-9的表达实现的.
作者：张媛梅；张婷；周向东 刊期： 2012年第03期
目的 探讨胃癌组织中食管癌相关基因4(Esophageal cancer-related gene 4,ECRG4)启动子区的甲基化情况及其临床意义.方法 应用甲基化特异性PCR (Methylation specific-PCR,MSP-PCR)法,检测49份胃癌组织、30份癌旁组织和15份正常组织标本中ECRG4基因启动子区的甲基化情况,并分析其与临床病理特征之间的相关性.结果 胃癌组织[69.4％(34/49)]和癌旁组织[53.3％(16/30) ]ECRG4基因甲基化检出率均明显高于正常组织[6.7％(1/15)](P＜0.01)；Ⅲ+Ⅳ期ECRG4基因甲基化检出率[80％(24/30)]明显高于Ⅰ+Ⅱ期[52.6％(10/19)]( P＜0.05),表明ECRG4基因甲基化检出率与病理分期相关,而与患者年龄、性别及淋巴结转移无相关性(P＞0.05).结论 ECRG4基因启动子区异常甲基化与胃癌的发生发展密切相关,可作为胃癌早期辅助诊断的分子标志物之一.
作者：王玉彬；巴彩凤 刊期： 2012年第03期
目的 研究自噬在熊果酸( Ursolic acid,UA)抑制人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖中的作用,探讨UA抑制血管生长的机制.方法 体外培养HUVECs,分别采用不同浓度的UA和自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)+UA联合处理,采用MTT法检测UA对HUVECs增殖的抑制作用及其联合3-MA对HUVECs存活率的影响；透射电镜观察细胞的超微结构；微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1-LC3)免疫荧光和流式细胞术检测UA对HUVECs自噬表达水平的影响；RT-PCR检测自噬相关基因Beclin1和MAP1-LC3B转录水平的变化.结果 UA可抑制HUVECs增殖,且呈剂量依赖性；HUVECs经UA处理后,自噬泡数量明显增加:经UA处理后,可上调HUVECs中MAP1-LC3蛋白的表达水平,MAP1-LC3阳性细胞的荧光强度较对照组明显增强；UA处理HUVECs不同时间可上调MAP1-LC3B及Beclin1 mRNA的转录水平；而UA联合3-MA处理后,HUVECs的增殖抑制作片用明显增强.结论 UA抑制HUVECs增殖,并诱导其发生自噬,自噬在此过程中起保护性作用,抑制自噬可明显增强UA诱导的HU VECs死亡.
作者：毕娟娟；何林；余音；郭倩；叶秀峰 刊期： 2012年第03期
毒理基因组学是将基因组信息和技术应用于毒理学研究的一门新兴学科,主要采用以DNA微阵列为代表的高通量技术,其快速发展为毒理学研究提供了新的思路与方法.本文对毒理基因组学在非临床毒理学研究,主要是在预测肝、肾毒性方面的应用现状及研究进展作一综述.
作者：潘东升；范玉明；李波 刊期： 2012年第03期
腺病毒载体是一种非常有效的转基因载体,具有高效率、高滴度、低致病性及不整合入宿主细胞染色体等优点,是目前非常具有应用前景的转基因载体.本文就重组腺病毒载体的研究进展、研究中的问题和解决方法及其在轮状病毒疫苗研究中的应用作一综述.
作者：郜岩；孙茂盛 刊期： 2012年第03期
目的 研究染料木黄酮对大鼠慢性栓塞性肺动脉高压(Chronic thromboembolic pulmonary hypertension,CTEPH)的减缓作用及对肺组织一氧化氮合酶(Endothelial nitric oxide synthase,eNOS)水平的影响,并探讨其可能的机制.方法 雄性SD大鼠麻醉后,经颈静脉同输体外制备的自体血栓栓子,2周后同法进行二次栓塞,将造模成功的大鼠分为染料木黄酮治疗组、栓塞4周组和8周组.全程腹腔注射抗纤维溶解剂氨甲环酸,达目标日期后,采用右心导管法检测平均肺动脉压；开胸取心肺组织,心脏左右心室、室间隔分别称重后,计算有心室肥厚指数,电镜下观察肺小动脉结构变化；Western blot法检测肺组织中eNOS水平.结果 染料木黄酮治疗组及栓塞8周组大鼠平均肺动脉压及右心室肥厚指数较栓塞4周组明显升高(P均＜0.01),染料木黄酮组较栓塞8周组显著降低(P＜0.01)；染料木黄酮治疗组及栓塞8周组大鼠肺小动脉结构重塑(平滑肌细胞明显增殖)；染料木黄酮治疗组大鼠肺组织中eNOS水平较栓塞4周和8周组明显升高(P＜0.01).结论 染料木黄酮能减缓大鼠慢性栓塞性肺动脉高压的进展,其机制可能与其上调eNOS的水平有关.
作者：张玉坤；王导新；李长毅 刊期： 2012年第03期
人肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是导致人类手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的主要致病原.HFMD已成为严重影响儿童健康的公共卫生问题之一,因此,尽快了解EV71的致病机理及研制安全有效的疫苗是当前急需解决的问题,而建立相关动物模型是研究EV71致病机理以及评价EV71疫苗安全性和有效性的重要一步.本文就目前EV71常用动物模型的研究进展作一综述.
作者：黄坚；王晶晶；刘龙丁 刊期： 2012年第03期
目的 探讨血清肿瘤标志物糖类抗原(Carbohydrate antigen,CA )242(CA242)、CA724联合检测在胰腺癌诊断中的应用价值.方法 采用放射免疫法分别检测34例胰腺癌、26例慢性胰腺炎患者及60名健康体检者的血清CA242和CA724水平.结果 进展期胰腺癌组血清中CA242和CA724的水平均明显高于早期胰腺癌组、慢性胰腺炎组和正常对照组(P均＜0.01),早期胰腺癌组、慢性胰腺炎组和正常对照组之间CA242和CA724的水平差异无统计学意义(P＞0.05)；胰腺癌患者血清中CA242、CA724单独和联合检测的敏感性分别为61.7％、57.3％和84.9％,特异性分别为91.0％、87.6％和90.3％.结论 血清肿瘤标志物CA242、CA724的定量测定是诊断胰腺癌敏感、特异的指标,但其早期敏感性较差；其测定结果与胰腺癌的分期及预后明显相关；联合检测可使其敏感性明显提高,而特异性无明显改变.
作者：杨锐；太京华；金珍婧；潘留兰；牟文玲 刊期： 2012年第03期
目的 检测重组人B7-H1IgV(rhB7-H1)工程菌生物学特性的稳定性.方法 将重组质粒pQE30-B7-H1IgV转化的大肠杆菌rhB7-H1/DH5α工程菌连续传代50代,每隔10代进行工程菌B7-H1IgV蛋白表达量检测、扫描电镜观察、革兰染色、各项生化反应及质粒的酶切鉴定.结果 各代工程菌中B7-H1IgV蛋白的表达量均为菌体总蛋白的10％左右；各代工程菌提取的质粒双酶切后均可见381 bp的目的基因片段；各代工程菌均呈典型的大肠杆菌形态,革兰染色显示为阴性杆菌,各项检测结果与原始菌种无显著差异.结论 该工程菌生物学特性稳定,可作为生产用菌种用于大规模生产.
作者：陈霖；李伯安；毛远丽；张伟；张英起 刊期： 2012年第03期
目的 建立重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(TACI-Fc)的质控方法和质量标准.方法 采用以B淋巴细胞刺激因子作为配体的受体结合法测定TACI-Fc的生物学活性；反向液相色谱(RP-HPLC)法测定蛋白含量及纯度；ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A；胰蛋白酶酶切后分析肽图；其余检测项目均按《中国药典》三部(2010版)规定进行.结果 用建立的方法对重组人TACI-Fc原液和成品进行检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2010版)的要求.结论 建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定.
作者：高凯；陶磊；史新昌；裴德宁；王兰；李响；饶春明；王军志 刊期： 2012年第03期
目的 采用不同方法提取并纯化阪崎肠杆菌(Enteobacter sakazaii,ES)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)抗原,并对其生物学特性进行鉴定.方法 常规培养ES,分别采用热酚水法和冷酚水法提取LPS抗原,收集水相和酚相LPS,采用蒽酮-硫酸法测定LPS多糖含量,紫外光谱法测定核酸含量,Bradford法测定蛋白含量,SDS-PAGE测定相对分子质量；以其免疫小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价,并检测其与各种肠道菌单价或多价血清的交叉反应性.结果 ES在相同条件下保存相同时间,采用冷酚水法提取LPS的产率高于热酚水法；所提取的水相和酚相LPS样品相对分子质量分布在14400 ～45 000之间,均具有良好的免疫原性,且仅与ES单价血清反应,而与其他各种肠道菌单价或多价血清均不发生反应.结论 热酚水法和冷酚水法均可制备免疫原性良好、特异性强的ES LPS抗原,但热酚水法所得样品的糖含量和蛋白含量均高于冷酚水法.
作者：马卫静；李克生；杜惠芬 刊期： 2012年第03期
目的 观察Y-盒结合蛋白-1(Y-box binding protein-1,YB-1)基因对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法 通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组质粒pGSi2和阴性对照质粒HK转染MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中YB-1、基质金属蛋白酶-2( Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达；MTT法及流式细胞术检测细胞增殖活力、细胞周期及凋亡的变化；Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化.结果 pGSi2组MDA-MB-231细胞较HK组细胞YB-1 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P＜0.01)；沉默YB-1表达可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡,且细胞侵袭能力及MMP-2和MMP-9的表达也较HK组明显下降(P均＜0.05).结论 YB-1 shRNA可以沉默MDA-MB-231细胞中YB-1的表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,并抑制细胞侵袭能力及MMP-2和MMP-9的表达.
作者：邱欣欣；涂植光；孔飞飞；陈光辉；成凤；匡文斌；钟梁 刊期： 2012年第03期
目的 微波诱变法筛选遗传稳定的木聚糖酶高产球毛壳霉菌株.方法 活化球毛壳霉菌种,制备孢子悬液,在不同功率条件下对其进行辐照处理60s,选择致死率在80％左右的辐照功率,在此功率条件下对其进行不同时间的微波诱变,经初筛和复筛后,采用DNS法测定木聚糖酶活性,筛选木聚糖酶高产菌株,并分析其传代稳定性.结果 在微波辐射时间80 s,功率240 W条件下处理的球毛壳霉孢子,致死率为89.5％；经诱变及菌种筛选,获得1株木聚糖酶高产菌株W80-8,其酶活力为7520U/ml,比出发菌株提高了124％;经6次传代培养,W80-8株木聚糖酶活力未见明显降低,未发生原位回复突变.结论 成功筛选获得1株遗传稳定的木聚糖酶高产球毛壳霉菌株.
作者：姚笛；王艳丹；杨健；于长青；钱丽丽；佟丹丹 刊期： 2012年第03期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
