佟加贝；鲁艳芹；韩金祥
目的 探讨乌司他丁(Ulinastatin,ULI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 将体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231(雌激素受体阴性)随机分为4组:对照组、ULI组(800 U/ml),TXT组(3.7 Rg/ml)和ULI+TXT组,采用荧光定量RT-PCR法检测细胞IL-6、IL-8和TNF-α基因mRNA的转录水平;MTT法检测细胞的增殖能力;TransweⅡ小室侵袭试验检测细胞的浸润能力.结果 TXT和ULI均能抑制MDA-MB-231细胞IL-6、IL-8和TNF-α基因的表达及细胞的增殖和侵袭能力,ULI的抑制作用低于TXT,但TXT与ULI联合应用,抑制作用强.结论 ULI能抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、侵袭,其作用机制可能与ULI降低IL-6、IL-8及TNF-α基因的表达有关.
作者：赵晓亮；孙治君；罗杰；高峰 刊期： 2011年第03期
目的 原核表达并纯化单核李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)溶血素(Listeriolysin O,LLO)蛋白.方法 用1对LM LLO基因特异性引物从LM基因组DNA中扩增LLO基因,并构建重组原核表达质粒pET-30a(+)/rLLO,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的rLLO蛋白经镍离子金属鳌合柱纯化后,进行SDS-PAGE及质谱分析.结果 重组表达质粒pET-30a(+)/rLLO经PCR、双酶切及测序,证明构建正确.表达的rLLO融合蛋白相对分子质量约为78 000,主要以包涵体形式表达.质谱分析显示,两个相对分子质量分别为35 000和45 000的小分子也均为LLO蛋白.结论 已成功地在大肠杆菌中表达了rLL0蛋白,并进行了纯化,为进一步研究LLO蛋白的生物学功能及研制基于LLO蛋白的特异性诊断制剂奠定了基础.
作者：郭建巍；马骢；王珍光；钱扬会；张云；郝秀红 刊期： 2011年第03期
目的 探讨罗格列酮对人结肠癌Lovo细胞增殖的抑制作用及其可能的作用机制.方法 人结肠癌Lovo细胞分别经不同浓度(10-6、10-5、10-4和10-3 mol/L)的罗格列酮和美洛昔康作用6、12和24 h后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,RT-KR法检测罗格列酮处理24 h的细胞COX-2基因mRNA的转录水平,Western blot法检测细胞COX-2蛋白的表达水平.结果 罗格列酮浓度大于10-5 mol/L,美洛昔康浓度大于10-4 mol/L均可明显抑制Lovo细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性;罗格列酮可明显降低Lovo细胞COX-2基因mRNA和蛋白的表达水平,且均呈浓度依赖性.结论 罗格列酮能抑制人结肠癌Lovo细胞增殖,其作用机制与抑制细胞COX-2的表达有关.
作者：吴柯；何百成；周岐新 刊期： 2011年第03期
目的 探讨血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)对人结肠癌细胞SW1116增殖的影响及其机制.方法 用不同浓度的Ang-2处理SW1116细胞,MTT法检测其对SW1116细胞增殖的影响;将SW1116细胞分为正常对照、无血清DMEM、Ang-2(1.2mg/L)及PI3K/Akt阻断剂LY29400200(10 μmol/L)+Ang-2组,作用24 h后,MTT法检测LY294002对SW1116细胞增殖的影响,Western blot分析Tie-2、PI3K和Akt蛋白的表达.结果 Ang-2在1.2 mg/L时,对SW1116细胞增殖的影响显著;LY294002能有效抑制由Ang-2引起的SW1116细胞的增殖;Ang-2组与无血清DMEM组比较,Tie-2的表达略有上升,但差异无统计学意义(P>0.05),Akt蛋白的表达显著增强(P<0.01),而PI3K蛋白的表达显著降低(P<0.01),LY294002+Ang-2组中3种蛋白的表达与Ang-2组相比,均明显降低(P均＜0.01).结论 Ang-2能促进SW1116细胞增殖,LY294002可抑制由Ang-2引起的SW1116细胞的增殖,其机制可能与Tie-2/PI3'-kinase/Akt调节的信号通路有关.
作者：张继红；温春阳；尹俐；李相军；李希宁；任立群 刊期： 2011年第03期
目的 探讨RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU序列对人胚肾293(HEK293)细胞凋亡的影响以及干扰素(IFN)在此机制中的作用.方法 取对数生长期的HEK293细胞,分为6组,ALU-293组(瞬时转染重组质粒pcDNA3.1-ALU)、peDNA3.1-293组[瞬时转染空质粒peDNA3.1(-),作为阴性对照],Poly Ⅰ:C-293组[瞬时转染dsRNA的多聚肌苷胞苷酸(Poly Ⅰ:C),作为阳性对照]、IFNβ-293组(加入1.65×104U IFNβ,作为阳性对照)、空白对照组(未经处理的HEK293细胞)和HBs-293组(瞬时转染重组质粒pcDNA3.1-HBs),转染后48 h,采用MTT法检测细胞的增殖活性;Cellular DNA Fragmentation ELISA和DNA Ladder 法检测细胞的凋亡情况;Real-time PCR检测细胞中IFNβ基因mRNA的水平.结果 瞬时转染重组质粒pcDNA3.1-ALU能够抑制HEK293细胞增殖,并促使其凋亡,且细胞中IFNβ mRNA的水平显著上调.结论 RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU序列能够通过激活干扰素系统来诱导细胞凋亡.
作者：李璇；高建；杨梅；胡文艳；田绿；彭湃澜；王峰；高昌益；任红；唐开福 刊期： 2011年第03期
目的 改进嗜水气单胞菌J-1株灭活疫苗的生产工艺,提高培养效率.方法 采用改良培养基和产毒素培养基,利用机械式通风搅拌培养J-1菌株.确定发酵培养时间,并比较两种培养基的培养效果;用摇瓶灭活和罐灭活J-1菌株培养液,比较不同浓度甲醛的灭活效果.结果 用机械搅拌发酵罐培养J-1菌株,菌体生长12～14 h达峰值,产毒素培养基菌液活菌数平均为102×108 CFU/ml,改良培养基活菌数平均为216×108 CFU/ml,较产毒素培养基提高了111.7%,活菌数大可达300×108 CFU/ml;改良培养基培养J-1菌株,培养液毒力略高于产毒素培养基;0.3%的福尔马林于37℃灭活24 h,可完全灭活J-1菌株培养液,且制备的灭活疫苗福尔马林残留量符合质量标准.结论 改良培养基培养J-1菌株的效果明显优于产毒素培养基,机械式搅拌发酵罐培养嗜水气单胞菌,可比原工艺缩短培养时间一半.
作者：陶家发；赖迎迢；任燕；江小燕；康光辉；张悠；石存斌；吴淑勤 刊期： 2011年第03期
目的 探讨白黎芦醇(Resveratrol,Res)对大鼠脑缺血再灌注氧化应激损伤的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组,线栓法复制大鼠右侧大脑中动脉栓塞模型),Res低剂量组(15 mg/kg,I/R+R1组)和Res高剂量组(30 mg/kg,I/R + R2组),于缺血2h再灌注24 h进行神经功能缺损评分;化学比色法测定大鼠血清和脑组织中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性;TTC法测定脑梗死体积;干湿重法测定脑含水量,HE染色观察脑组织的病理改变.结果 与I/R组相比,Res能改善大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经功能缺失(P<0.01),降低血清及脑组织中MDA的含量(P<0.01),提高SOD活性(P<0.01),缩小脑梗死体积(P<0.01),降低损伤侧脑含水量(P<0.01),改善脑组织的病理变化,且呈剂量依赖性.结论 Res对大鼠局灶性脑缺血再灌注氧化应激损伤具有良好的保护作用,其机制可能与清除自由基,减轻氧化性损伤有关.
作者：任俊伟；杨琴 刊期： 2011年第03期
目的 初步建立流感病毒感染豚鼠模型.方法 通过滴鼻方式分别将A/威斯康星/67/2005(H3N2)、A/广岛/52/2005(H1N1)和B/马来西亚/2506/20043个型别的流感病毒感染豚鼠,观察感染动物的临床症状,并于感染后第1、3、5、7、9、11和13天,取鼻腔洗液和肺组织,采用细胞培养法检测病毒效价.结果 3个型别的流感病毒均能感染豚鼠,感染后3 d,鼻腔和肺组织中病毒效价达峰值,随后逐步下降,直至被清除.结论 豚鼠对H3N2、H1N1和B型流感病毒较为易感.
作者：汤洋；王海漩；乌美妮；胡凝珠；胡云章 刊期： 2011年第03期
目的 建立聚乙二醇重组人血管内皮抑制素的质控方法.方法 采用内皮细胞迁移荧光分析法测定样品的生物学活性;反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定样品的纯度和含量;胰酶消化法测定肽图;其余项目按<中国药典>三部(2005版)和二部进行检测.结果 用建立的生物学活性测定方法测定的3批原液的比活性分别为88.4、56.5和89.6 U/mg,3批成品的活性分别为标示量的81%、92%和151%; RP-HPLC法测定的3批成品蛋白含量分别为标示量的101.0%、97.0%和98.1%;RP-HPLC法和SDS-PAGE法测定的3批原液的纯度均大于99.9%;肤图分析结果均与对照品一致;其余各项指标均符合规定.结论 所建立的质控方法为有效地控制聚乙二醇重组人血管内皮抑制素的质量奠定了基础.
作者：李永红；饶春明；王兰；韩春梅；陶磊；王军志 刊期： 2011年第03期
病毒小体(Virosome)是含有病毒包膜蛋白的单层脂质囊泡,可作为基因转运、抗原呈递的载体.由于不含病毒基因组及膜蛋白组分可变,病毒小体作为基因载体无潜在致病性,并可人工改变靶向性.目前研究多的病毒小体为流感病毒小体和仙台病毒小体.本文就国内外可用于基因转移的病毒小体构建策略的研究进展作一综述,为进一步开发和完善用于基因转移的病毒小体提供依据.
作者：佟加贝；鲁艳芹；韩金祥 刊期： 2011年第03期
目的 原核表达、纯化乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)(1～155)与前S1抗原(PreS1)(3～55)融合蛋白,并分析其免疫原性.方法 从HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,以其为模板,PCR分别扩增HBeAg和preS1部分基因片段及融合基因CS1,将CS1基因亚克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建重组原核表达质粒pET-CS1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经纯化后进行SDS-PAGE,HPLC和Western blot等分析.将纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用竞争抑制法检测血清Anti-1-PreS1水平,间接ELISA法检测Anti-PreS1水平,并检测抗体亚类;ELISPOT法评价其细胞免疫效果.结果 重组原核表达质粒pET-CSI经双酶切证明构建正确;电镜分析表明粗纯的CS1可自行组装成病毒样颗粒(VLP),直径约为30 nm;SDS-PAGE和HPLC分析显示,CS1蛋白纯度分别为98.2%和93%;纯化的CS1蛋白可与兔抗人HBeAg多抗和鼠抗人Presl单抗特异结合,并能诱导小鼠产生Anti-HBc和Anti-PreS1抗体,抗体亚类以IgG2为主,并能够诱生小鼠脾细胞产生HBeAg特异性的IFNγ.结论 已成功原核表达并纯化了融合蛋白CS1,纯化的CS1纯度较高,能诱导机体产生较高水平的特异性体液免疫和细胞免疫反应.
作者：吴刚；李计来；王娟；赵莉；徐静 刊期： 2011年第03期
目的 在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)-木聚糖酶(Xylanases,Xyn Ⅱ)融合基因.方法 通过PCR技术将hLY基因与Xyn Ⅱ基因连接,中间插人肠激酶识别位点序列;将其克隆至载体pPIC9K上,构建重组表达质粒pPIC9K-Xyn Ⅱ-EKsite-hLY,经Sac Ⅰ线性化后,电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选得到高拷贝转化子,PCH鉴定为阳性的克隆用甲醉进行诱导;表达的融合蛋白经Sephadex G-75凝胶柱层析纯化后,用肠激酶酶切,分别采用改良舒加法和DNS法测定hLY和Xyn Ⅱ的活性.结果 获得的融合基因序列与理论序列完全一致;重组表达质粒构建正确;融合蛋白的hLY和Xyn Ⅱ活性分别为170和158 U/ml,经肠激酶酶切后,hLY的活性为520 U/ml,Xyn Ⅱ的活性达244 U/ml.结论 已在毕赤酵母中成功表达了Xyn Ⅱ-EKsite-hLY融合基因,经肠激酶酶切后的目的蛋白活性均有较大提高.
作者：高金湖；唐存多；邬敏辰 刊期： 2011年第03期
目的 探讨激活素A(Activin A)及激活素结合蛋白(Follistatin,FS)在急性酒精性肝损伤小鼠肝组织中的表达.方法 通过1次/12h给予小鼠5 g/Kg酒精连续灌胃3次,复制急性酒精性肝损伤小鼠模型,采用实时定量RT-PCR检测小鼠肝组织Activin A及FS mRNA表达水平,免疫组织化学染色观察小鼠肝组织Activin A及FS蛋白的表达水平.结果 急性酒精性肝损伤小鼠肝组织Activin A mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组(P < 0.01); FS mRNA和蛋白表达水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 急性酒精性肝损伤小鼠肝组织Activin A-FS表达失衡,以Activin A升高为主,提示Activin A-FS系统失衡可能与酒精性肝损伤有关.
作者：于昉；王轶楠；杨清；孟小丹；孙洋；台桂香；柳忠辉 刊期： 2011年第03期
目的 研究氨氯地平对小鼠黑色素细胞瘤B16细胞自发性肺转移的抑制作用及其机制.方法 将小鼠黑色素细胞瘤B16细胞接种于C57BL/6J小鼠右腹股沟皮下,2×106个/只,次日将小鼠随机分为阴性对照组(给予生理盐水0.2 ml/只,每天灌胃1次,共21 d)、氨氯地平低、中、高剂量组(分别给予氨氯地平1、3和10 mg/kg,每天灌胃1次,共21 d)和环磷酞胺组(给予环磷酚胺20 mg/kg,每2d腹腔注射1次,共7次),观察小鼠成瘤及活动情况.于末次给药后第2天断颈处死小鼠,观察小鼠的肺转移情况及抑瘤率;体外进行血小板聚集试验及黏附试验,比较药物作用前后血小板聚集及黏附能力的差异.结果 氨氯地平可抑制小鼠黑色素细胞瘤B16细胞的体内增殖、自发性肺转移、B16细胞诱导的小鼠血小板聚集以及血小板与B16细胞的黏附,且呈剂量依赖性.结论 氨氯地平对小鼠黑色素细胞瘤B16细胞具有抑制体内增殖和自发性肺转移的作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞诱导的血小板聚集及肿瘤细胞与血小板的黏附有关.
作者：张旭；廖一兰；孙洋；孙文娟 刊期： 2011年第03期
目的 探讨人偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)标准株在不同细胞中的复制动力学,确定适合分离和培养hMPV的细胞.方法 将hMPV A亚型标准株hMPV/NL/1/00和B亚型标准株hMPV/NL/1/99分别接种于Vero、Vero-E6、LLC-MK2,A549和Hep-2细胞,盲传数代,逐日观察细胞病变(CPE),并于接种后第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天提取细胞RNA,逆转录合成cDNA,采用实时荧光定量PCR检测hMPV F蛋白基因.结果 接种hMPV后3d可在Vero、Vero-E6、LLC-MK2和A549细胞中观察到CPE,不同亚型的hMPV所致的CPE无差别;hMPV可在Vero、Vero-E6和LLC-MK2细胞中稳定复制,不能在A549和HEp-2细胞中稳定传代.结论 Vero、Vero-E6和LLC-MK2细胞是适合培养hMPV的细胞,A549和Hep-2细胞不适合用于培养hMPV.
作者：佘薇薇；赵晓东；赵耀 刊期： 2011年第03期
目的 分析2001～2008年上海市虹口区产院新生儿首针乙肝疫苗的接种情况,为进一步完善新生儿乙肝免疫预防策略提供参考.方法 对2001～2008年上海市虹口区所有产院新生儿的首针乙肝疫苗接种率、及时接种率、未及时接种原因以及母亲乙肝病毒抗原阳性的新生儿接种情况进行调查分析.结果 2001～2008年上海市虹口区产院新生儿乙肝疫苗各年首针接种率和及时接种率均＞96%,其中本市新生儿与外来新生儿的乙肝疫苗首针接种率与及时接种率差异均有统计学意义(P<0.05);母亲乙肝病毒抗原阳性与阴性的新生儿乙肝疫苗接种率和及时接种率差异均无统计学意义(P>0.05);新生儿未能及时接种乙肝疫苗的原因,排在首位的是体重<2 500g,占84.49%,其中,2 300g≧体重＜2 500 g者占所有未及时接种乙肝疫苗低体重儿的46.69%.结论 建议适当放宽新生儿首针乙肝疫苗接种禁忌症的标准,将体重≧2 300 g作为首针乙肝疫苗的接种标准之一,提高新生儿首针乙肝疫苗的接种率和及时接种率.
作者：吴志芳；钱晓华；赵戴君；林可 刊期： 2011年第03期
目的 探讨新辅助化疗联合生物治疗对低位直肠癌患者手术治疗前细胞免疫功能的影响.方法 选取直肠癌Dukes C期患者15例,术前采用新辅助化疗XELOX方案两个疗程后进行生物治疗.利用流式细胞仪测定新辅助化疗前及生物治疗前、后T淋巴细胞亚群、NKT细胞以及NK细胞的百分比,并评价患者的近期疗效.结果 患者新辅助化疗前免疫功能低下,经新辅助化疗后,T淋巴细胞亚群、NKT细胞和NK细胞百分比均显著降低((P<0.05);经生物治疗后,T淋巴细胞亚群、NKT细胞和NK细胞百分比与生物治疗前相比,均明显升高.且差异均有统计学意义(P<0.05);患者的临床症状也有所改善,治疗有效率为20.00％,肿瘤缓解率为66.7%.结论 新辅助化疗使直肠癌患者免疫功能进一步降低,在等待手术前应用生物治疗可以提高患者的细胞免疫功能,新辅助化疗联合生物治疗的方法对于提高患者的免疫状态,缩短住院时间,降低复发率具有重要意义.
作者：王旻；杨艳明；刘林林；张宇；季福健；于杰；房学东 刊期： 2011年第03期
目的 预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP1蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位.方法 以CSBV LN-QY株RNA为模板,RT-PCR扩增结构蛋白VP1基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,对经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对,获得LN-QY株VPl的核苷酸序列和推导的氨基酸序列,建立VPl结构蛋白的3D模型,在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域,亲水性,表面可能性以及抗原指数等参数.结果 VP1结构蛋白的空间构象比较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于47-53,139-145,273-284氨基酸区段.结论 本研究为CSBV LN-QY株VP1蛋白表位疫苗的设计以及血清诊断试剂盒的研制奠定了理论基础.
作者：程健；张佩；马鸣潇；李明；杨松 刊期： 2011年第03期
空肠弯曲菌病在世界各地均有发生,主要导致人和动物的细菌性胃肠炎及急性腹泻等.通过细菌蛋白质组学技术研究该类病原菌应对环境变化,尤其是应对宿主的反应机制,以及重要功能蛋白的亚细胞定位等,能够在蛋白水平深人研究弯曲菌病的致病机理.本文就空肠弯曲菌蛋白组学的研究进展作一综述.
作者：祝令伟 刊期： 2011年第03期
目的 比较截短、全长、全长融合等3种不同形式的乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)核酸疫苗在小鼠体内的体液免疫和细胞免疫效果,获得佳的免疫原设计方案.方法 构建经密码子优化的不同形式HBcAg核酸疫苗质粒:pRec2.0-Ct(表达截短至144 aa的Core蛋白),pRec2.0-C(表达全长183 aa的Core蛋白)和pRec2.O-C-preS1(表达全长Core和PreS1融合蛋白),转染293T细胞,Western blot检测目的 抗原基因的表达.将3种核酸疫苗分别免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗-HBc抗体水平,IFNγ ELISPOT法检测小鼠休内HBcAg特异性T细胞免疫应答.结果 3种核酸疫苗质粒经酶切及测序证实构建正确;3种核酸疫苗质粒在293T细胞中均可表达相应蛋白;经3种核酸疫苗免疫后的小鼠均产生了HBcAg特异性抗体和T细胞应答,其中pRec2.0-C组抗-HBc抗体水平和T细胞免疫反应水平均显著高于 pRec2.O-C-preS1组和pRec2.0-Ct组(P<0.05).结论 将HBcAg截短至144个氨基酸或与preS1融合均可降低其体液免疫及细胞免疫应答.
作者：沈林；陈丹；张晓溪；孙志丹；袁京云；王维龙；刘新颖；李鼎锋；刘勇 刊期： 2011年第03期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
