赵荣丽；刘少祥；李书津；潘海龙；赵青
目的 原核表达含阿德福韦酯(Adefovir,ADV)耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)区域.方法 以野生型HBV DNA为模板,PCR扩增HBV聚合酶RT区域,克隆至质粒pHis-SUMO上,构建重组表达质粒SUMO-RTWT,并通过定点突变构建含ADV耐药突变位点(181T/ V十236T)的突变质粒SUMO-MT1和SUMO-MT2,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析,并进行表达条件的优化及HBV聚合酶RT区域的结构建模.结果 重组表达质粒SUMO-RTWT、SUMO-MT1和SUMO-Mn经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为56000,可与鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合;经表达条件优化后,3种重组质粒在大肠杆菌Roset-ta(DE3)中均获得有效稳定的表达;同源结构建模结果表明,HBV聚合酶RT区域具有典型的DNA聚合酶的结构.结论 已成功构建了含ADV耐药突变位点HBV聚合酶RT区域的重组原核表达质粒,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得稳定表达的可溶性目的 蛋白,为研究ADV的耐药机制奠定了基础.
作者：谢素兰；黄爱龙；蔡雪飞；胡源 刊期： 2011年第08期
鸡球虫病是一种主要由艾美耳属球虫引起的细胞内寄生原虫病,给养禽业带来巨大的经济损失.鸡球虫病一直以药物防治为主,但耐药虫株以及药物残留等问题使药物防治受到很大限制,因此,研制安全有效的疫苗成为防治鸡球虫病的主要策略之一.鸡球虫病疫苗包括活疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、重组卡介苗和佐剂疫苗,本文就鸡球虫病疫苗的研究现状作一综述.
作者：黄金贵；李运娜；张西臣 刊期： 2011年第08期
目的 探讨sh-hnRNP-E2逆转录病毒对32D-P210细胞诱导的白血病模型小鼠的保护作用.方法 建立32D-P210转化细胞株在C3H等基因小鼠体内定殖的慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)模型,并进行鉴定;sh-hn-RNP-E2逆转录病毒感染32D-P210细胞24 h后,经尾静脉移植人C3H等基因雌性小鼠中,观察sh-hnRNP-E2对CML模型小鼠的保护作用.结果 经鉴定已成功建立32D-P210转化细胞株在C3H等基因小鼠体内定殖的CML模型;sh-hnRNP-E2逆转录病毒预感染32D-P210靶细胞,可促进靶细胞向粒系分化,并显著延长模型小鼠的生存期.结论 sh-hnRNP-E2逆转录病毒感染对CML模型小鼠具有显著的保护效应,是一种有效的CML体内治疗策略.
作者：韩红星；张文萍；张秋萍；杨燕；单万水 刊期： 2011年第08期
目的 探讨氢氧化铝吸附炭疽杆菌重组保护性抗原(Recombinant protective antigen,rPA)的影响因素.方法 取含不同P043浓度的PBS和添加EDTA的PBS,分别稀释rPA后,加人氢氧化铝,放置2～8℃及(23±2)℃作用不同时间,检测A280和A260值,计算未吸附的rPA蛋白量,并比较不同溶液中氢氧化铝对rPA的吸附效果.结果 氢氧化铝对rPA的吸附率随p043浓度的增加而降低;PBS中添加EDTA后,氢氧化铝对rPA的吸附效果明显下降;2～8℃较(23±2)℃的吸附率略有增加,但不同时间的吸附量无明显差异;在H2O中氢氧化铝对rPA的吸附效率比在PBS中高.结论 稀释缓冲液和离子强度、EDTA均可影响氢氧化铝与rPA的吸附效果,但吸附温度和时间对吸附的影响不大.
作者：王革；李睿；王秉翔 刊期： 2011年第08期
目的 克隆A型人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州分离株F1基因,并进行原核表达和纯化.方法 采用RT-PCR方法克隆RSV F1 ORF序列,克隆至pET-42b(+)表达载体,构建重组原核表达质粒pET-42b-Fl,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经 SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用GST亲和层析树脂进行纯化.结果 重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约77000,表达量约占菌体总蛋白的20%,以包涵体和可溶性两种形式存在;该蛋自可与鼠抗人RSV单抗发生特异性反应,纯化后纯度约为50%.结论 已原核表达并纯化了HRSV Fl蛋白,为其血清抗体的制备及免疫原性研究奠定了基础.
作者：傅生芳；寇桂英；包红；姜英；陈汉泉；余黎；周旭 刊期： 2011年第08期
HIV-1耐药株的出现是人类艾滋病(AIDS)治疗失败的重要原因之一,HIV-1耐药性的研究对于控制耐药株的流行及临床治疗真有重要意义.本文就HIV-1耐药株的产生、进化和传播,HIV-1的耐药机制及耐药性突变,HIV-1耐药性检测以及新型HIV-1耐药性检测方法等作一综述.
作者：贾峥 刊期： 2011年第08期
专利是世界上大的技术信息源,目前,各国每年出版的专利文献占科技出版物的1/4,内容包含了世界科技信息的91%～95%.专利是一项发明的首次公开,其披露的技术信息有80%～94%是从其他途径无法得到的,专利文献中公布的重要发明比其他形式的报道要早5～10年.专利文献反映了技术研发领域中应用性、创新性较强的一线成果与思路,通过对专利的检索、统计和分析,可以发现重要的战略和创新性信息,如国家、地区或企业的科技发展趋势,专利申请人或专利权人的经济利益趋向及市场扩展情况等.
作者：苏锦锋；李彩梅；许宁 刊期： 2011年第08期
目的 观察小檗碱(Berberine,Ber)对实验性大鼠结肠癌的防治作用及其与过氧化物增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARy)表达的相关性.方法 以二甲肼(1-2 dimethylhydrazine,DMH) 40 mg/kg皮下注射加1%葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate,DSS)水溶液饮用诱导形成大鼠结肠癌模型,以罗格列酮(Rosiglitazone,Ros)为阳性对照,观察Ber灌服对大鼠体重、异常隐窝灶(Abrrant crypt foci,ACF)和结肠癌发生率的影响.采用MTT法检测不同浓度Ber对人结肠癌lovo细胞增殖活性的影响;RT-PCR法检测Ber对lovo.细胞PPARγ基因mRNA表达的情况.结果 Ber能明显改善结肠癌大鼠的恶液质状态,并阻遏体重减轻,显著减少大鼠结肠ACF数和降低结肠癌的发生率,其作用与Ros相似.Ber可呈浓度和时间依赖性抑制lovo细胞增殖,并降低lovo细胞中PPARγ基因mRNA的表达水平.结论 Ber能抑制大鼠早期ACF的形成和结肠癌发生,其作用机制可能与抑制PPARγ表达有关.
作者：吴柯；何百成；周岐新 刊期： 2011年第08期
目的 研究let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制.方法 将A549细胞、稳定转染let-7a重组质粒的A549-let-7a细胞及稳定转染对照质粒的A549-control细胞分别接种至BALB / c裸鼠背部皮下,观察各组细胞在裸鼠体内的生长情况,测量肿瘤体积并绘制生长曲线;30 d后处死裸鼠,取出瘤体,称重并计算抑瘤率;HE染色观察瘤组织的形态学改变;Western blot及免疫组化法检测各组瘤组织中k-Ras蛋白的表达情况.结果 与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组裸鼠的瘤体生长速度明显减慢,瘤体重量显著降低(P<0.01),抑瘤率为27.51 %,A549-control细胞组差异无统计学意义(P>0.05);HE染色显示,A549-let-7a细胞组癌细胞体积较其他两组减小,核浆比例明显缩小,核分裂相显著减少;Westernblot及免疫组化结果表明,与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组瘤组织中k-Ra.蛋白的表达明显降低(P<0.01),而A549-control细胞组中.k-Ras蛋白的表达差异无统计学意义(P > 0.05).结论 let-7a能显著抑制A549细胞在裸鼠体内的生长能力,其机制可能与下调k-Ras蛋白的表达有关.
作者：何晓燕；彭琼乐；张政；彭惠民 刊期： 2011年第08期
目的 建立测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法 样品用磺基水杨酸沉淀、离心除去蛋白质,上清液采用氨基柱分离,示差折光检测器进行监测,依外标法建立校正曲线,并对建立的方法进行验证.采用建立的方法测定4种疫苗成品中蔗糖和乳糖的含量.结果 蔗糖和乳糖的标准曲线的相关系数r2均达0.9999以上.该方法能将两种糖完全分离;测定两种糖的特异性较好;该法检测4个浓度的蔗糖和乳糖的平均回收率分别为97.9%和100.5%,变异系数分别为1.28%和0.48%;低检测限及定量限分别为0.01mg/ml和0.1Mg/ml;采用该法测定的4种疫苗成品中蔗糖和乳糖的变异系数分别为2.59%和1.44%.结论 已建立了测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的HPLC法,该方法定量准确,重复性好,可作为生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的常规检测方法.
作者：雒丽红；高雪军；魏然；朱莉萍；程瑞霞；郑学刚 刊期： 2011年第08期
目的 采用顶空气相色谱法测定23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚的残留量.方法 采用顶空气相色谱法,以水为溶剂,甲醇为内标,测定23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚的残留量,并对该方法进行系统适用性、线性关系、检测限与定量限、精密性、准确性验证及初步应用.结果 该方法可使待测组分得到良好分离;测定乙醇、丙酮和乙醚的线性范围分别为:2.660～532.000 μg/ml(r=1.0000)、0.530～105.400 μg/ml(r =0.9998)和0.049～9.760μg/ml(r＝0.9989),检测限分别为0.80、0.16和0.01μg/ml,定量限分别为2.66、0.53和0.05μg/ml,精密性RSD值小于5.0%,平均回收率在95.0%～105.6%之间.该法检测3个批号23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇残留量,均未超过<中国药典>三部(2010版)规定的限度.3批疫苗中均未检出丙酮和乙醚.结论 顶空气相色谱法操作简便,准确可靠,可用于23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚残留量的检测.
作者：赵荣丽；刘少祥；李书津；潘海龙；赵青 刊期： 2011年第08期
目的 评价海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响.方法 将Wistar妊娠大鼠随机分为5组:基质对照组、阳性对照(环磷酰胺7 mg/kg)组、海妇洁栓低(16 mg/kg)、中(32 mg/kg)和高(80 mg / kg)剂量组.基质对照组和海妇洁栓各剂量组孕鼠于妊娠第6天开始经阴道给药,每天1次,连续10d;阳性对照组孕鼠于妊娠第11天开始经大腿外侧肌肉注射给药,每天1次,连续3d.于妊娠第20天剖腹取出活胎,观察海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响.结果 除阳性对照组外,海妇洁栓各剂量组及基质对照组所有受检胎鼠均未见明显外观畸形;平均体重、身长及尾长虽组间比较差异有统计学意义(P<0.05),但均属于正常生理变化,无生物学及毒理学意义,与海妇洁栓无关;除阳性对照组外,海妇洁栓各剂量组及基质对照组所有受检胎鼠骨骼、主要内脏器官均未见明显异常.结论 海妇洁栓剂量在16 - 80 mg/kg之间对Wistar大鼠胚胎无明显的毒性和致畸作用.
作者：付新华；孙谧；王跃军；梁玉记 刊期： 2011年第08期
目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路阻断对人胃癌细胞SGC-7901侵袭的影响及其可能的机制.方法 免疫荧光检测Hh信号通路分子Shh和Gli 1蛋白在SGC-7901细胞中的表达;用不同浓度((2.5、5、10μmol/L)的Hh信号通路特异性阻断剂环靶明作用SGC-7901细胞48 h后,Transwell小室试验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,半定量RT-PCR检测SGC-7901细胞中Shh、Gli 1和血管内皮生长因子(VEGF)基因mRNA的表达.结果 Shh和Gli 1蛋白在SGC-7901细胞中高表达;环靶明能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭,且呈剂量依赖性;Hh信号通路阻断后,SGC-7901细胞中Shh基因mRNA的表达水平无明显改变,Gli 1和VEGF基因mRNA的表达水平显著下降.结论 Hh信号通路分子在SGC-7901细胞中高表达,阻断Hh信号通路可以抑制SGC-7901细胞的侵袭,可能是通过抑制Glil下调VEGF起作用.
作者：欧阳小波；郝亚琴；王立 刊期： 2011年第08期
目的 探讨Quil A对口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)疫苗的免疫增强作用.方法 将O型FMDV抗体阴性的仔猪随机分为4组:1组首次免疫.型口蹄疫核酸苗pVIRIL18Pl,第2次免疫重组鸡痘苗,VTAL3CP1;2组首次免疫Quil A+0型口蹄疫核酸苗pVIRIL18P1,第2次免疫重组鸡痘苗vUTAL3CP1;3组两次均免疫猪O型口蹄疫合成肽疫苗;;4组两次均免疫PBS.首次免疫后0、14、42d,检测猪血清中FMDV VP1结构蛋白抗体及细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFNy的水平;首次免疫后42d,检测T淋巴细胞增殖水平.结果 2次免疫后,2组猪血清中FMDV VPl结构蛋白抗体水平、细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFNγ水平及T淋巴细胞增殖率均显著升高.首次免疫后42 d,2组上述指标中除IL-2水平外,与3组和4组比较差异均有统计学意义(P<0.05或＜0.01);除IL-2、IL-10和IFNγ水平外,与1组比较差异均有统计学意义(P<0.05或＜0.01).结论 Quil A对O型口蹄疫疫苗具有较好的免疫增强作用.
作者：刘燕瑜；任静强；张丹；谭磊；刘存霞；靖杰；刘昊；鲁会军；金扩世；金宁一 刊期： 2011年第08期
目的 建立定量检测血清中b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)总抗体的ELISA方法,并进行初步验证.方法 采用棋盘滴定法确定抗原佳包被浓度及酶标抗体工作浓度,参考血清的线性范围及适合的底物,并验证方法的特异性、准确性及精密性.结果 佳抗原包被浓度为0.4 μg/ml;佳酶标抗体稀释度为1:6000;参考血清的适线性范围为5～100ng/ml,RZ=0.9976 ;选择TMB作为底物.该方法特异性较好,准确性和精密性较高.结论 已成功建立了定量测定血清中Hib总抗体的ELISA方法,可逐渐替代测定血清中抗Hib IgG的方法.
作者：李红；李茂光；唐静；梁丽；李亚南；何莉；叶强 刊期： 2011年第08期
目的 比较两种亲和层析法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的效果.方法 制备可溶性CHO细胞蛋白,免疫家兔,获得兔免疫血清,采用蛋白A亲和层析和抗原偶联亲和层析两种方法分别纯化兔抗CHO细胞蛋白抗体,ELISA测定抗体效价;SDS-PAGE分析抗体纯度;Western blot分析抗体的特异性.结果 兔IgG经蛋白A亲和层析纯化后,ELISA效价约为1:106,抗体纯度达81.3%;经抗原偶联亲和层析纯化后,ELISA效价可达1:107,抗体纯度达80.6%.两种方法纯化的抗体特异性均较好.结论 抗原偶联亲和层析法更适合纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体.
作者：杜洪桥；朱蓉；徐葛林；严家新 刊期： 2011年第08期
目的 构建羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒,并检测其免疫效果.方法 将前期克隆的P39基因片段连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,提取重组质粒,进行双酶切鉴定.以鉴定正确的重组质粒免疫BALB/c小鼠,凝集试验检测小鼠血清特异性抗体水平,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子含量,MIT掺人法检测小鼠脾脏淋巴细胞的增殖效应.结果 重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39经双酶切鉴定构建正确;该重组质粒能够刺激小鼠产生特异性抗体(抗体峰值滴度为1:320),显著增加Thl型细胞因子的产生,并能够增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应.结论 成功构建了羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,该重组质粒能够诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答.
作者：石艳春；韩堃；郑源强；毕力夫 刊期： 2011年第08期
目的 观察PTD-OD-HA融合蛋白对BALB /c裸鼠皮下K562细胞实体瘤的治疗作用.方法 采用皮下注射K562细胞的方法建立裸鼠皮下实体瘤模型,每两天向实体瘤中间部位多点注射200μl浓度为10 Mg/ml的PTD-OD-HA融合蛋白,观察裸鼠瘤体生长情况;HE染色观察肿瘤组织病理学变化;TUNEL法和透射电镜观察肿瘤组织细胞的凋亡.结果 经FMOD-HA治疗的肿瘤体积明显缩小;肿瘤组织切片经HE染色可见细胞核浓缩和细胞染色加深;TUNEL法和透射电镜检测可见肿瘤细胞发生了凋亡的改变.结论 在BALB/c裸鼠体内,PTD-OD-HA融合蛋白具有抑制K562细胞增殖和促进其凋亡的作用.
作者：季茂胜；黄峥兰；李亚娟；黄世峰；曾建明；刘打宾；曹唯希；冯文莉 刊期： 2011年第08期
目的 在毕赤酵母中分泌表达人肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF),并检测其活性.方法 从真核表达质粒pRC / CMV-HGF中扩增HGF的编码基因,将其克隆人表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-HGF,电穿孔法转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选阳性菌株,经甲醇诱导表达重组人HGF(rhHGF).表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,检测其对原代培养的大鼠肝细胞增殖的影响.结果 重组表达质粒pPIC9K-HGF经酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约80000,表达量占菌体总蛋白的18%,可与兔抗人HGF多抗特异性结合,并可刺激大鼠肝细胞增殖.结论 在毕赤酵母菌中成功分泌表达了rhHGF,表达产物具有促进肝细胞增殖的活性.
作者：常冰梅；刘晓军；李美宁；张栋；张悦红；程牛亮；牛勃 刊期： 2011年第08期
目的 观察胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和巢蛋白(Nestin)在血管性痴呆成年大鼠海马中的表达情况,探讨二者在血管性痴呆疾病中的作用.方法 将SD大鼠随机分为假手术组和模型组,模型组经麻醉、永久性双侧颈总动脉结扎(2V0)建立血管性痴呆大鼠模型,再随机分为术后1、7、14、21和28 d组;假手术组麻醉后只分离双侧颈总动脉而不结扎.不同时间点断颈处死大鼠,取大脑,切片.经苏木素一伊红染色、尼氏染色观察海马神经元的动态变化;免疫组化染色观察GFAP和Nestin在海马区的表达.结果 与假手术组相比,模型组术后7d,海马CAI区和CA3区椎体神经元显著减少,大量胶质细胞增生;术后14,21和28 d,随着脑血流的恢复,椎体神经元的数量逐渐增加,胶质细胞逐渐减少.模型组从术后1d起,GFAP和Nestin表达即显著增加(P<0.05),GFAP的表达在术后7d达高峰,Nestin的表达强度比GFAP稍弱一些,在术后14d达高峰;随着脑血流供应的恢复,在术后21 d和28 d时,Nestin轻微减少,但未完全消失.结论 GFAP和Nestin在血管性痴呆模型大鼠海马中呈动态表达,表明两者在血管性痴呆疾病中可能扮演了保护角色.
作者：余天平；张鹏；张雄；王林辉；田茗源；李昱 刊期： 2011年第08期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
