付新华；孙谧；王跃军；梁玉记
目的 建立定量检测血清中b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)总抗体的ELISA方法,并进行初步验证.方法 采用棋盘滴定法确定抗原佳包被浓度及酶标抗体工作浓度,参考血清的线性范围及适合的底物,并验证方法的特异性、准确性及精密性.结果 佳抗原包被浓度为0.4 μg/ml;佳酶标抗体稀释度为1:6000;参考血清的适线性范围为5～100ng/ml,RZ=0.9976 ;选择TMB作为底物.该方法特异性较好,准确性和精密性较高.结论 已成功建立了定量测定血清中Hib总抗体的ELISA方法,可逐渐替代测定血清中抗Hib IgG的方法.
作者：李红；李茂光；唐静；梁丽；李亚南；何莉；叶强 刊期： 2011年第08期
目的 评价海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响.方法 将Wistar妊娠大鼠随机分为5组:基质对照组、阳性对照(环磷酰胺7 mg/kg)组、海妇洁栓低(16 mg/kg)、中(32 mg/kg)和高(80 mg / kg)剂量组.基质对照组和海妇洁栓各剂量组孕鼠于妊娠第6天开始经阴道给药,每天1次,连续10d;阳性对照组孕鼠于妊娠第11天开始经大腿外侧肌肉注射给药,每天1次,连续3d.于妊娠第20天剖腹取出活胎,观察海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响.结果 除阳性对照组外,海妇洁栓各剂量组及基质对照组所有受检胎鼠均未见明显外观畸形;平均体重、身长及尾长虽组间比较差异有统计学意义(P<0.05),但均属于正常生理变化,无生物学及毒理学意义,与海妇洁栓无关;除阳性对照组外,海妇洁栓各剂量组及基质对照组所有受检胎鼠骨骼、主要内脏器官均未见明显异常.结论 海妇洁栓剂量在16 - 80 mg/kg之间对Wistar大鼠胚胎无明显的毒性和致畸作用.
作者：付新华；孙谧；王跃军；梁玉记 刊期： 2011年第08期
目的 探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)和乳腺癌易感基因-1(Breast cancer susceptibility gene-1,BRCA-1)在非小细胞肺癌(Non-small cell lungcancer,NSCLC)中的表达及其意义.方法 采用SP免疫组化染色法检测44例NSCLC组织切片中VEGF、EGFR和BRCA-1的表达情况.结果 在NSCLC中,VEGF和EGFR的表达率分别为47.73%(21/44)和79.55%(35/44),BRCA-1的表达率为50%(22/44),VEGF和EGFR的表达在不同性别、年龄、组织学类型、淋巴结转移和吸烟情况中差异无统计学意义(P>0.05),但在不同临床分期差异有统计学意义(P<0.05) ;BRCA-1表达在上述各临床病理特征中差异均无统计学意义(P>0.05),但BRCA-1与VEGF的表达呈正相关(r＝0.501,P=0.001);VEGF与EGFR,EGFR与BRCA-1的表达无相关性(P值分别为0.344和0.147).结论 VEGF,EGFR,BRCA-1与NSCLC的发生发展密切相关,对判断NSCLC的预后及治疗有一定的参考意义.
作者：王林辉；田茗源；张雄；罗红池；余天平；张鹏；李昱 刊期： 2011年第08期
目的 克隆A型人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州分离株F1基因,并进行原核表达和纯化.方法 采用RT-PCR方法克隆RSV F1 ORF序列,克隆至pET-42b(+)表达载体,构建重组原核表达质粒pET-42b-Fl,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经 SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用GST亲和层析树脂进行纯化.结果 重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约77000,表达量约占菌体总蛋白的20%,以包涵体和可溶性两种形式存在;该蛋自可与鼠抗人RSV单抗发生特异性反应,纯化后纯度约为50%.结论 已原核表达并纯化了HRSV Fl蛋白,为其血清抗体的制备及免疫原性研究奠定了基础.
作者：傅生芳；寇桂英；包红；姜英；陈汉泉；余黎；周旭 刊期： 2011年第08期
目的 探讨广谱流感噬菌体微球疫苗对分别感染H3N2、HlN1和B型流感病毒豚鼠的免疫保护作用.方法 以广谱流感噬菌体微球疫苗免疫豚鼠,1个月后采血,间接ELISA法检测豚鼠血清中抗流感病毒IgG抗体的滴度;并于采血后3d,经滴鼻途径分别攻击3个型别的流感病毒,攻击后3d,检测豚鼠鼻腔洗液和肺组织中的病毒滴度.结果 免疫豚鼠血清中均能检测出抗HINI、M3N2和B型流感毒株的IgG抗体;分别以H3N2、HIN1和B型流感病毒攻击后3d,在疫苗组豚鼠鼻腔洗液中检出少量病毒,而肺组织中则未检出,空白对照组豚鼠鼻腔洗液和肺组织中均检出较大量的流感病毒.结论 广谱流感噬菌体微球疫苗对感染H3N2、HlN1和B型流感病毒的豚鼠均具有一定的免疫保护效果.
作者：王海漩；乌美妮；汤洋；李建芳；李彦涵；胡云章；赵蕊蕊；沈霏；段志青；胡凝珠 刊期： 2011年第08期
目的 制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,并进行验证.方法 采用免疫胶体金技术标记猪旋毛虫排泄-分泌(Excretory-secretory,ES)抗原,在AE98NC膜上点上兔抗猪IgG作为检测带,抗ES抗原抗体作为对照带,将NC印膜、胶体金抗原玻璃棉、吸水纸和支持板用胶膜组成试纸条,进行敏感性、特异性和重复性验证,并与ELISA检测方法进行对比.结果 试纸条检测38头份猪旋毛虫阳性血清的敏感性为97.37%;检测33头份猪蛔虫阳性血清、26头份猪囊虫阳性血清、21头份猪细颈囊尾蚴阳性血清和98头份猪旋毛虫阴性血清的特异性为98.88%;重复性好;与EIASA检测方法的敏感性和特异性差异无统计学意义(P>0.05).结论 已制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,该试纸条敏感、特异、简便、快速,可用于猪旋毛虫病的检疫及流行病学调查.
作者：苑淑贤；姚新华；任科研；李萌；杨金生；苑冬梅；李煜洁；常军亮；杨淑苹 刊期： 2011年第08期
鸡球虫病是一种主要由艾美耳属球虫引起的细胞内寄生原虫病,给养禽业带来巨大的经济损失.鸡球虫病一直以药物防治为主,但耐药虫株以及药物残留等问题使药物防治受到很大限制,因此,研制安全有效的疫苗成为防治鸡球虫病的主要策略之一.鸡球虫病疫苗包括活疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、重组卡介苗和佐剂疫苗,本文就鸡球虫病疫苗的研究现状作一综述.
作者：黄金贵；李运娜；张西臣 刊期： 2011年第08期
目的 构建羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒,并检测其免疫效果.方法 将前期克隆的P39基因片段连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,提取重组质粒,进行双酶切鉴定.以鉴定正确的重组质粒免疫BALB/c小鼠,凝集试验检测小鼠血清特异性抗体水平,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子含量,MIT掺人法检测小鼠脾脏淋巴细胞的增殖效应.结果 重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39经双酶切鉴定构建正确;该重组质粒能够刺激小鼠产生特异性抗体(抗体峰值滴度为1:320),显著增加Thl型细胞因子的产生,并能够增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应.结论 成功构建了羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,该重组质粒能够诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答.
作者：石艳春；韩堃；郑源强；毕力夫 刊期： 2011年第08期
目的 探讨三七皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对慢性血栓栓塞性肺动脉高压(Chronic thromembolismpulmonary hypertension,CTPH)大鼠心肌胶原重构的调控作用及可能的机制.方法 利用二次血栓栓塞法建立大鼠CTPH模型,4周后,将正常大鼠分为A、B组,模型大鼠分为C、D组,A、C组经腹腔注射0.9%生理盐水,2ml/d;B、D组经腹腔注射PNS,100 mg/(kg·d).每天注射1次,4周后,测定各组大鼠的血流动力学指标、心室游离壁厚度,HE和VG染色观察心肌组织的形态学改变,Western blot检测心肌组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达.结果 C组与A组、B组比较,右心室收缩压、右室(RV)/左室(LV)游离壁厚度比、心肌间质胶原增生、MMP-2的表达均明显升高(P<0.05);经PNS干预后,D组右心室收缩压、RV/LV游离壁厚度比、心肌间质胶原增生、MMP-2的表达均明显降低(P<0.05).结论 在CTPH心肌重构过程中,PNS可以逆转右心室重构,其机制可能与上调MMP-2的表达、促进心室间质胶原的降解有关.
作者：李长毅；王导新；张玉坤 刊期： 2011年第08期
目的 观察胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和巢蛋白(Nestin)在血管性痴呆成年大鼠海马中的表达情况,探讨二者在血管性痴呆疾病中的作用.方法 将SD大鼠随机分为假手术组和模型组,模型组经麻醉、永久性双侧颈总动脉结扎(2V0)建立血管性痴呆大鼠模型,再随机分为术后1、7、14、21和28 d组;假手术组麻醉后只分离双侧颈总动脉而不结扎.不同时间点断颈处死大鼠,取大脑,切片.经苏木素一伊红染色、尼氏染色观察海马神经元的动态变化;免疫组化染色观察GFAP和Nestin在海马区的表达.结果 与假手术组相比,模型组术后7d,海马CAI区和CA3区椎体神经元显著减少,大量胶质细胞增生;术后14,21和28 d,随着脑血流的恢复,椎体神经元的数量逐渐增加,胶质细胞逐渐减少.模型组从术后1d起,GFAP和Nestin表达即显著增加(P<0.05),GFAP的表达在术后7d达高峰,Nestin的表达强度比GFAP稍弱一些,在术后14d达高峰;随着脑血流供应的恢复,在术后21 d和28 d时,Nestin轻微减少,但未完全消失.结论 GFAP和Nestin在血管性痴呆模型大鼠海马中呈动态表达,表明两者在血管性痴呆疾病中可能扮演了保护角色.
作者：余天平；张鹏；张雄；王林辉；田茗源；李昱 刊期： 2011年第08期
目的 探讨氢氧化铝吸附炭疽杆菌重组保护性抗原(Recombinant protective antigen,rPA)的影响因素.方法 取含不同P043浓度的PBS和添加EDTA的PBS,分别稀释rPA后,加人氢氧化铝,放置2～8℃及(23±2)℃作用不同时间,检测A280和A260值,计算未吸附的rPA蛋白量,并比较不同溶液中氢氧化铝对rPA的吸附效果.结果 氢氧化铝对rPA的吸附率随p043浓度的增加而降低;PBS中添加EDTA后,氢氧化铝对rPA的吸附效果明显下降;2～8℃较(23±2)℃的吸附率略有增加,但不同时间的吸附量无明显差异;在H2O中氢氧化铝对rPA的吸附效率比在PBS中高.结论 稀释缓冲液和离子强度、EDTA均可影响氢氧化铝与rPA的吸附效果,但吸附温度和时间对吸附的影响不大.
作者：王革；李睿；王秉翔 刊期： 2011年第08期
目的 在毕赤酵母中分泌表达人肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF),并检测其活性.方法 从真核表达质粒pRC / CMV-HGF中扩增HGF的编码基因,将其克隆人表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-HGF,电穿孔法转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选阳性菌株,经甲醇诱导表达重组人HGF(rhHGF).表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,检测其对原代培养的大鼠肝细胞增殖的影响.结果 重组表达质粒pPIC9K-HGF经酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约80000,表达量占菌体总蛋白的18%,可与兔抗人HGF多抗特异性结合,并可刺激大鼠肝细胞增殖.结论 在毕赤酵母菌中成功分泌表达了rhHGF,表达产物具有促进肝细胞增殖的活性.
作者：常冰梅；刘晓军；李美宁；张栋；张悦红；程牛亮；牛勃 刊期： 2011年第08期
目的 探讨慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用.方法 利用rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α体外定向诱导CML患者外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)生成DC,光学显微镜和透射电镜观察所诱导的DC形态特征;流式细胞术进行表型检测;采用FISH和RT-PCR法检测所诱导的DC的白血病源性;MTT法检测其对自体CML细胞的杀伤作用.结果 CML患者PBMC在体外可诱导生成6cr/abl融合基因阳性的DC,其激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用明显强于单独应用T淋巴细胞对CML细胞的杀伤作用.结论 CML患者PBMC能够诱导生成白血病源的DC,该DC能够激活T淋巴细胞对CML细胞的特异性杀伤作用.
作者：崔久嵬；牛超；李薇；金浩范；Boyapati Maheoh；王冠军 刊期： 2011年第08期
目的 观察PTD-OD-HA融合蛋白对BALB /c裸鼠皮下K562细胞实体瘤的治疗作用.方法 采用皮下注射K562细胞的方法建立裸鼠皮下实体瘤模型,每两天向实体瘤中间部位多点注射200μl浓度为10 Mg/ml的PTD-OD-HA融合蛋白,观察裸鼠瘤体生长情况;HE染色观察肿瘤组织病理学变化;TUNEL法和透射电镜观察肿瘤组织细胞的凋亡.结果 经FMOD-HA治疗的肿瘤体积明显缩小;肿瘤组织切片经HE染色可见细胞核浓缩和细胞染色加深;TUNEL法和透射电镜检测可见肿瘤细胞发生了凋亡的改变.结论 在BALB/c裸鼠体内,PTD-OD-HA融合蛋白具有抑制K562细胞增殖和促进其凋亡的作用.
作者：季茂胜；黄峥兰；李亚娟；黄世峰；曾建明；刘打宾；曹唯希；冯文莉 刊期： 2011年第08期
目的 探讨sh-hnRNP-E2逆转录病毒对32D-P210细胞诱导的白血病模型小鼠的保护作用.方法 建立32D-P210转化细胞株在C3H等基因小鼠体内定殖的慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)模型,并进行鉴定;sh-hn-RNP-E2逆转录病毒感染32D-P210细胞24 h后,经尾静脉移植人C3H等基因雌性小鼠中,观察sh-hnRNP-E2对CML模型小鼠的保护作用.结果 经鉴定已成功建立32D-P210转化细胞株在C3H等基因小鼠体内定殖的CML模型;sh-hnRNP-E2逆转录病毒预感染32D-P210靶细胞,可促进靶细胞向粒系分化,并显著延长模型小鼠的生存期.结论 sh-hnRNP-E2逆转录病毒感染对CML模型小鼠具有显著的保护效应,是一种有效的CML体内治疗策略.
作者：韩红星；张文萍；张秋萍；杨燕；单万水 刊期： 2011年第08期
专利是世界上大的技术信息源,目前,各国每年出版的专利文献占科技出版物的1/4,内容包含了世界科技信息的91%～95%.专利是一项发明的首次公开,其披露的技术信息有80%～94%是从其他途径无法得到的,专利文献中公布的重要发明比其他形式的报道要早5～10年.专利文献反映了技术研发领域中应用性、创新性较强的一线成果与思路,通过对专利的检索、统计和分析,可以发现重要的战略和创新性信息,如国家、地区或企业的科技发展趋势,专利申请人或专利权人的经济利益趋向及市场扩展情况等.
作者：苏锦锋；李彩梅；许宁 刊期： 2011年第08期
HIV-1耐药株的出现是人类艾滋病(AIDS)治疗失败的重要原因之一,HIV-1耐药性的研究对于控制耐药株的流行及临床治疗真有重要意义.本文就HIV-1耐药株的产生、进化和传播,HIV-1的耐药机制及耐药性突变,HIV-1耐药性检测以及新型HIV-1耐药性检测方法等作一综述.
作者：贾峥 刊期： 2011年第08期
目的 研究let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制.方法 将A549细胞、稳定转染let-7a重组质粒的A549-let-7a细胞及稳定转染对照质粒的A549-control细胞分别接种至BALB / c裸鼠背部皮下,观察各组细胞在裸鼠体内的生长情况,测量肿瘤体积并绘制生长曲线;30 d后处死裸鼠,取出瘤体,称重并计算抑瘤率;HE染色观察瘤组织的形态学改变;Western blot及免疫组化法检测各组瘤组织中k-Ras蛋白的表达情况.结果 与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组裸鼠的瘤体生长速度明显减慢,瘤体重量显著降低(P<0.01),抑瘤率为27.51 %,A549-control细胞组差异无统计学意义(P>0.05);HE染色显示,A549-let-7a细胞组癌细胞体积较其他两组减小,核浆比例明显缩小,核分裂相显著减少;Westernblot及免疫组化结果表明,与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组瘤组织中k-Ra.蛋白的表达明显降低(P<0.01),而A549-control细胞组中.k-Ras蛋白的表达差异无统计学意义(P > 0.05).结论 let-7a能显著抑制A549细胞在裸鼠体内的生长能力,其机制可能与下调k-Ras蛋白的表达有关.
作者：何晓燕；彭琼乐；张政；彭惠民 刊期： 2011年第08期
目的 建立测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法 样品用磺基水杨酸沉淀、离心除去蛋白质,上清液采用氨基柱分离,示差折光检测器进行监测,依外标法建立校正曲线,并对建立的方法进行验证.采用建立的方法测定4种疫苗成品中蔗糖和乳糖的含量.结果 蔗糖和乳糖的标准曲线的相关系数r2均达0.9999以上.该方法能将两种糖完全分离;测定两种糖的特异性较好;该法检测4个浓度的蔗糖和乳糖的平均回收率分别为97.9%和100.5%,变异系数分别为1.28%和0.48%;低检测限及定量限分别为0.01mg/ml和0.1Mg/ml;采用该法测定的4种疫苗成品中蔗糖和乳糖的变异系数分别为2.59%和1.44%.结论 已建立了测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的HPLC法,该方法定量准确,重复性好,可作为生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的常规检测方法.
作者：雒丽红；高雪军；魏然；朱莉萍；程瑞霞；郑学刚 刊期： 2011年第08期
目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路阻断对人胃癌细胞SGC-7901侵袭的影响及其可能的机制.方法 免疫荧光检测Hh信号通路分子Shh和Gli 1蛋白在SGC-7901细胞中的表达;用不同浓度((2.5、5、10μmol/L)的Hh信号通路特异性阻断剂环靶明作用SGC-7901细胞48 h后,Transwell小室试验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,半定量RT-PCR检测SGC-7901细胞中Shh、Gli 1和血管内皮生长因子(VEGF)基因mRNA的表达.结果 Shh和Gli 1蛋白在SGC-7901细胞中高表达;环靶明能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭,且呈剂量依赖性;Hh信号通路阻断后,SGC-7901细胞中Shh基因mRNA的表达水平无明显改变,Gli 1和VEGF基因mRNA的表达水平显著下降.结论 Hh信号通路分子在SGC-7901细胞中高表达,阻断Hh信号通路可以抑制SGC-7901细胞的侵袭,可能是通过抑制Glil下调VEGF起作用.
作者：欧阳小波；郝亚琴；王立 刊期： 2011年第08期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
