王海漩；乌美妮；汤洋；李建芳；李彦涵；胡云章；赵蕊蕊；沈霏；段志青；胡凝珠
目的 探讨胃癌组织中分化抑制因子1( Inhibitor of DNA binding / differentiation 1,IDI)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达与微血管密度(Microvessel density,MVD)的相关性.方法 采用免疫组化定性分析IDI、VEGF和CD34在胃癌及癌旁非癌组织中的表达及MVD,Western blot半定量分析ID I和VEGF蛋白在胃癌及癌旁非癌组织中的表达.结果 胃癌组织中IDI和VEGF的表达及MVD明显高于癌旁非癌组织,且差异均有统计学意义(P均＜0.05);ID1表达阳性的胃癌组织的MVD明显高于IDI表达阴性的胃癌组织,且差异有统计学意义(P<0.001).结论 胃癌组织中IDI的表达与VEGF和MVD具有相关性,IDI可能具有促进胃癌血管生成的作用.
作者：王玉彬；巴彩凤；哈敏文；刘寅 刊期： 2011年第08期
目的 构建分泌表达鼠IFNγ(Mouse interferon-gamma,mIFN-γ)的重组卡介苗(Bacillus Calmette-Gu6rin,BCG),并进行鉴定.方法 PCR扩增BCG抗原85B的信号肤序列,插入E.coli-BCG穿梭载体pBCG3000的启动子下游,构建分泌性重组穿梭质粒S-pBCG3000;以PHA刺激小鼠脾细胞产生的RNA为模板,RT-PCR扩增mIFNγ成熟肽的编码cDNA,插入S-pBCG3000质粒的信号肽序列下游,构建mIFNγ的表达质粒S-pBCG3000-γ;通过电穿孔技术将表达质粒转入BCG,以卡那霉素和PCR筛选重组BCG,ELISA法检测重组BCG培养滤液中的mIFNγ含量,细胞病变抑制法鉴定mIFNγ的生物活性.结果 经测序、PCR扩增和酶切鉴定分析,Ag85B信号肽和mIFNγ成熟肽的编码序列均成功克隆并插入到pBCG3000的相应位点,表达质粒转化BCG后获得的重组BCG分泌 mIFNγ的含量高达1234.1pg/ml,在L929细胞中的抗VSV活性为64 U/ml.结论 所构建的重组BCG可分泌具有功能活性的mIFNγ,为进一步研究其免疫效应奠定了基础.
作者：刘洪波；吴灿权；谢颖；梁洪；蔡昌学 刊期： 2011年第08期
目的 观察胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和巢蛋白(Nestin)在血管性痴呆成年大鼠海马中的表达情况,探讨二者在血管性痴呆疾病中的作用.方法 将SD大鼠随机分为假手术组和模型组,模型组经麻醉、永久性双侧颈总动脉结扎(2V0)建立血管性痴呆大鼠模型,再随机分为术后1、7、14、21和28 d组;假手术组麻醉后只分离双侧颈总动脉而不结扎.不同时间点断颈处死大鼠,取大脑,切片.经苏木素一伊红染色、尼氏染色观察海马神经元的动态变化;免疫组化染色观察GFAP和Nestin在海马区的表达.结果 与假手术组相比,模型组术后7d,海马CAI区和CA3区椎体神经元显著减少,大量胶质细胞增生;术后14,21和28 d,随着脑血流的恢复,椎体神经元的数量逐渐增加,胶质细胞逐渐减少.模型组从术后1d起,GFAP和Nestin表达即显著增加(P<0.05),GFAP的表达在术后7d达高峰,Nestin的表达强度比GFAP稍弱一些,在术后14d达高峰;随着脑血流供应的恢复,在术后21 d和28 d时,Nestin轻微减少,但未完全消失.结论 GFAP和Nestin在血管性痴呆模型大鼠海马中呈动态表达,表明两者在血管性痴呆疾病中可能扮演了保护角色.
作者：余天平；张鹏；张雄；王林辉；田茗源；李昱 刊期： 2011年第08期
目的 制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,并进行验证.方法 采用免疫胶体金技术标记猪旋毛虫排泄-分泌(Excretory-secretory,ES)抗原,在AE98NC膜上点上兔抗猪IgG作为检测带,抗ES抗原抗体作为对照带,将NC印膜、胶体金抗原玻璃棉、吸水纸和支持板用胶膜组成试纸条,进行敏感性、特异性和重复性验证,并与ELISA检测方法进行对比.结果 试纸条检测38头份猪旋毛虫阳性血清的敏感性为97.37%;检测33头份猪蛔虫阳性血清、26头份猪囊虫阳性血清、21头份猪细颈囊尾蚴阳性血清和98头份猪旋毛虫阴性血清的特异性为98.88%;重复性好;与EIASA检测方法的敏感性和特异性差异无统计学意义(P>0.05).结论 已制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,该试纸条敏感、特异、简便、快速,可用于猪旋毛虫病的检疫及流行病学调查.
作者：苑淑贤；姚新华；任科研；李萌；杨金生；苑冬梅；李煜洁；常军亮；杨淑苹 刊期： 2011年第08期
HIV-1耐药株的出现是人类艾滋病(AIDS)治疗失败的重要原因之一,HIV-1耐药性的研究对于控制耐药株的流行及临床治疗真有重要意义.本文就HIV-1耐药株的产生、进化和传播,HIV-1的耐药机制及耐药性突变,HIV-1耐药性检测以及新型HIV-1耐药性检测方法等作一综述.
作者：贾峥 刊期： 2011年第08期
目的 建立高效液相色谱测定抗人T淋巴细胞猪免疫球蛋白中戊二醛残留量的方法.方法 取供试品,与2,4-二硝基苯肼柱前衍生化,过滤,进样.色谱条件:色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶填充柱;以50%乙腈(乙腈:水＝1:1)溶液为流动相,流速为0.9 m1/min,检测波长为360 nn,柱温30℃.用该方法检测2批供试品中戊二醛的含量,并确定该方法的检测限、定限量、准确度和精密度.结果 该方法检测的2批供试品中戊二醛的含量分别为9.8和7.5 μg/ml;该方法的检测限为0.611μg/ml,定量限为2.04μg/ml,在2～20μg/ml范围内,其线性相关系数为0.9982,检测5、10、15μg/ml戊二醛的回收率分别为102.3%、101.6%和99.2%,相对标准偏差均小于4.0%.结论 高效液相色谱法可以简便、准确地检测抗人T淋巴细胞猪免疫球蛋白中戊二醛的残留量,为其生产工艺参数的确定提供了实验依据.
作者：夏南；王青青；赖俊；康光明 刊期： 2011年第08期
目的 探讨三七皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对慢性血栓栓塞性肺动脉高压(Chronic thromembolismpulmonary hypertension,CTPH)大鼠心肌胶原重构的调控作用及可能的机制.方法 利用二次血栓栓塞法建立大鼠CTPH模型,4周后,将正常大鼠分为A、B组,模型大鼠分为C、D组,A、C组经腹腔注射0.9%生理盐水,2ml/d;B、D组经腹腔注射PNS,100 mg/(kg·d).每天注射1次,4周后,测定各组大鼠的血流动力学指标、心室游离壁厚度,HE和VG染色观察心肌组织的形态学改变,Western blot检测心肌组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达.结果 C组与A组、B组比较,右心室收缩压、右室(RV)/左室(LV)游离壁厚度比、心肌间质胶原增生、MMP-2的表达均明显升高(P<0.05);经PNS干预后,D组右心室收缩压、RV/LV游离壁厚度比、心肌间质胶原增生、MMP-2的表达均明显降低(P<0.05).结论 在CTPH心肌重构过程中,PNS可以逆转右心室重构,其机制可能与上调MMP-2的表达、促进心室间质胶原的降解有关.
作者：李长毅；王导新；张玉坤 刊期： 2011年第08期
目的 克隆A型人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州分离株F1基因,并进行原核表达和纯化.方法 采用RT-PCR方法克隆RSV F1 ORF序列,克隆至pET-42b(+)表达载体,构建重组原核表达质粒pET-42b-Fl,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经 SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用GST亲和层析树脂进行纯化.结果 重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约77000,表达量约占菌体总蛋白的20%,以包涵体和可溶性两种形式存在;该蛋自可与鼠抗人RSV单抗发生特异性反应,纯化后纯度约为50%.结论 已原核表达并纯化了HRSV Fl蛋白,为其血清抗体的制备及免疫原性研究奠定了基础.
作者：傅生芳；寇桂英；包红；姜英；陈汉泉；余黎；周旭 刊期： 2011年第08期
目的 探讨Quil A对口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)疫苗的免疫增强作用.方法 将O型FMDV抗体阴性的仔猪随机分为4组:1组首次免疫.型口蹄疫核酸苗pVIRIL18Pl,第2次免疫重组鸡痘苗,VTAL3CP1;2组首次免疫Quil A+0型口蹄疫核酸苗pVIRIL18P1,第2次免疫重组鸡痘苗vUTAL3CP1;3组两次均免疫猪O型口蹄疫合成肽疫苗;;4组两次均免疫PBS.首次免疫后0、14、42d,检测猪血清中FMDV VP1结构蛋白抗体及细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFNy的水平;首次免疫后42d,检测T淋巴细胞增殖水平.结果 2次免疫后,2组猪血清中FMDV VPl结构蛋白抗体水平、细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFNγ水平及T淋巴细胞增殖率均显著升高.首次免疫后42 d,2组上述指标中除IL-2水平外,与3组和4组比较差异均有统计学意义(P<0.05或＜0.01);除IL-2、IL-10和IFNγ水平外,与1组比较差异均有统计学意义(P<0.05或＜0.01).结论 Quil A对O型口蹄疫疫苗具有较好的免疫增强作用.
作者：刘燕瑜；任静强；张丹；谭磊；刘存霞；靖杰；刘昊；鲁会军；金扩世；金宁一 刊期： 2011年第08期
目的 构建羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒,并检测其免疫效果.方法 将前期克隆的P39基因片段连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,提取重组质粒,进行双酶切鉴定.以鉴定正确的重组质粒免疫BALB/c小鼠,凝集试验检测小鼠血清特异性抗体水平,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子含量,MIT掺人法检测小鼠脾脏淋巴细胞的增殖效应.结果 重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39经双酶切鉴定构建正确;该重组质粒能够刺激小鼠产生特异性抗体(抗体峰值滴度为1:320),显著增加Thl型细胞因子的产生,并能够增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应.结论 成功构建了羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,该重组质粒能够诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答.
作者：石艳春；韩堃；郑源强；毕力夫 刊期： 2011年第08期
目的 评价海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响.方法 将Wistar妊娠大鼠随机分为5组:基质对照组、阳性对照(环磷酰胺7 mg/kg)组、海妇洁栓低(16 mg/kg)、中(32 mg/kg)和高(80 mg / kg)剂量组.基质对照组和海妇洁栓各剂量组孕鼠于妊娠第6天开始经阴道给药,每天1次,连续10d;阳性对照组孕鼠于妊娠第11天开始经大腿外侧肌肉注射给药,每天1次,连续3d.于妊娠第20天剖腹取出活胎,观察海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响.结果 除阳性对照组外,海妇洁栓各剂量组及基质对照组所有受检胎鼠均未见明显外观畸形;平均体重、身长及尾长虽组间比较差异有统计学意义(P<0.05),但均属于正常生理变化,无生物学及毒理学意义,与海妇洁栓无关;除阳性对照组外,海妇洁栓各剂量组及基质对照组所有受检胎鼠骨骼、主要内脏器官均未见明显异常.结论 海妇洁栓剂量在16 - 80 mg/kg之间对Wistar大鼠胚胎无明显的毒性和致畸作用.
作者：付新华；孙谧；王跃军；梁玉记 刊期： 2011年第08期
目的 原核表达含阿德福韦酯(Adefovir,ADV)耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)区域.方法 以野生型HBV DNA为模板,PCR扩增HBV聚合酶RT区域,克隆至质粒pHis-SUMO上,构建重组表达质粒SUMO-RTWT,并通过定点突变构建含ADV耐药突变位点(181T/ V十236T)的突变质粒SUMO-MT1和SUMO-MT2,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析,并进行表达条件的优化及HBV聚合酶RT区域的结构建模.结果 重组表达质粒SUMO-RTWT、SUMO-MT1和SUMO-Mn经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为56000,可与鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合;经表达条件优化后,3种重组质粒在大肠杆菌Roset-ta(DE3)中均获得有效稳定的表达;同源结构建模结果表明,HBV聚合酶RT区域具有典型的DNA聚合酶的结构.结论 已成功构建了含ADV耐药突变位点HBV聚合酶RT区域的重组原核表达质粒,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得稳定表达的可溶性目的 蛋白,为研究ADV的耐药机制奠定了基础.
作者：谢素兰；黄爱龙；蔡雪飞；胡源 刊期： 2011年第08期
目的 探讨慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用.方法 利用rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α体外定向诱导CML患者外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)生成DC,光学显微镜和透射电镜观察所诱导的DC形态特征;流式细胞术进行表型检测;采用FISH和RT-PCR法检测所诱导的DC的白血病源性;MTT法检测其对自体CML细胞的杀伤作用.结果 CML患者PBMC在体外可诱导生成6cr/abl融合基因阳性的DC,其激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用明显强于单独应用T淋巴细胞对CML细胞的杀伤作用.结论 CML患者PBMC能够诱导生成白血病源的DC,该DC能够激活T淋巴细胞对CML细胞的特异性杀伤作用.
作者：崔久嵬；牛超；李薇；金浩范；Boyapati Maheoh；王冠军 刊期： 2011年第08期
目的 建立白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用.方法 以马抗白喉类毒素血清作为包被抗体,HRP标记的白喉絮状反应抗毒素作为酶标抗体,建立白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,并对该方法进行重复性、特异性验证、佳线性范围和检测限确定及初步应用.结果 经验证,该方法重复性好,特异性强,白喉类毒素含量在0.9765～125.0000ng/ml之间时线性关系良好,检测限为7.812 ng/ml,该方法检测了3批白喉类毒素原液,与动物实验结果基本相符.结论 已建立了白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,可用于检测白喉类毒素的含量和抗原性.
作者：刘朝阳；景辉；陈艳红；张斌；马相虎；朱金华 刊期： 2011年第08期
目的 比较两种亲和层析法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的效果.方法 制备可溶性CHO细胞蛋白,免疫家兔,获得兔免疫血清,采用蛋白A亲和层析和抗原偶联亲和层析两种方法分别纯化兔抗CHO细胞蛋白抗体,ELISA测定抗体效价;SDS-PAGE分析抗体纯度;Western blot分析抗体的特异性.结果 兔IgG经蛋白A亲和层析纯化后,ELISA效价约为1:106,抗体纯度达81.3%;经抗原偶联亲和层析纯化后,ELISA效价可达1:107,抗体纯度达80.6%.两种方法纯化的抗体特异性均较好.结论 抗原偶联亲和层析法更适合纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体.
作者：杜洪桥；朱蓉；徐葛林；严家新 刊期： 2011年第08期
目的 建立羊布氏菌强毒株16M感染小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic cell,DC)的模型.方法 体外分离C57小鼠骨髓原代细胞,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)和重组人白细胞介素-4(Recombinant human interleukin-4,rhIL-4)诱导分化后,倒置显微镜观察DC形态,流式细胞术鉴定其分化程度.在体外建立羊布氏菌16M感染小鼠骨髓DC模型,间接免疫荧光试验和透射电镜进行鉴定,并进行感染后羊布氏菌16M的重培养及染色观察.结果 培养第5天,细胞形态符合髓源DC,伸出长的树突样和伪足样突起;第7天,细胞呈半悬浮,周围有大量突起;体外培养DC的纯度约达70%,符合试验要求.DC在感染后12h具有强的吞噬能力,胞内细菌量少.重培养后经染色,可观察到羊布氏菌16M典型的细菌形态.结论 成功构建了羊布氏菌感染小鼠骨髓 DC模型,为进一步研究布氏菌与DC的相互作用及胞内寄生机制奠定了基础.
作者：李晓艳；王景龙；张瑞；孙春辉；郎需龙；杨艳玲；屈海龙；赵勇坤；王兴龙 刊期： 2011年第08期
专利是世界上大的技术信息源,目前,各国每年出版的专利文献占科技出版物的1/4,内容包含了世界科技信息的91%～95%.专利是一项发明的首次公开,其披露的技术信息有80%～94%是从其他途径无法得到的,专利文献中公布的重要发明比其他形式的报道要早5～10年.专利文献反映了技术研发领域中应用性、创新性较强的一线成果与思路,通过对专利的检索、统计和分析,可以发现重要的战略和创新性信息,如国家、地区或企业的科技发展趋势,专利申请人或专利权人的经济利益趋向及市场扩展情况等.
作者：苏锦锋；李彩梅；许宁 刊期： 2011年第08期
目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路阻断对人胃癌细胞SGC-7901侵袭的影响及其可能的机制.方法 免疫荧光检测Hh信号通路分子Shh和Gli 1蛋白在SGC-7901细胞中的表达;用不同浓度((2.5、5、10μmol/L)的Hh信号通路特异性阻断剂环靶明作用SGC-7901细胞48 h后,Transwell小室试验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,半定量RT-PCR检测SGC-7901细胞中Shh、Gli 1和血管内皮生长因子(VEGF)基因mRNA的表达.结果 Shh和Gli 1蛋白在SGC-7901细胞中高表达;环靶明能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭,且呈剂量依赖性;Hh信号通路阻断后,SGC-7901细胞中Shh基因mRNA的表达水平无明显改变,Gli 1和VEGF基因mRNA的表达水平显著下降.结论 Hh信号通路分子在SGC-7901细胞中高表达,阻断Hh信号通路可以抑制SGC-7901细胞的侵袭,可能是通过抑制Glil下调VEGF起作用.
作者：欧阳小波；郝亚琴；王立 刊期： 2011年第08期
目的 建立测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法 样品用磺基水杨酸沉淀、离心除去蛋白质,上清液采用氨基柱分离,示差折光检测器进行监测,依外标法建立校正曲线,并对建立的方法进行验证.采用建立的方法测定4种疫苗成品中蔗糖和乳糖的含量.结果 蔗糖和乳糖的标准曲线的相关系数r2均达0.9999以上.该方法能将两种糖完全分离;测定两种糖的特异性较好;该法检测4个浓度的蔗糖和乳糖的平均回收率分别为97.9%和100.5%,变异系数分别为1.28%和0.48%;低检测限及定量限分别为0.01mg/ml和0.1Mg/ml;采用该法测定的4种疫苗成品中蔗糖和乳糖的变异系数分别为2.59%和1.44%.结论 已建立了测定生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的HPLC法,该方法定量准确,重复性好,可作为生物制品保护剂中蔗糖和乳糖含量的常规检测方法.
作者：雒丽红；高雪军；魏然；朱莉萍；程瑞霞；郑学刚 刊期： 2011年第08期
目的 观察小檗碱(Berberine,Ber)对实验性大鼠结肠癌的防治作用及其与过氧化物增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARy)表达的相关性.方法 以二甲肼(1-2 dimethylhydrazine,DMH) 40 mg/kg皮下注射加1%葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate,DSS)水溶液饮用诱导形成大鼠结肠癌模型,以罗格列酮(Rosiglitazone,Ros)为阳性对照,观察Ber灌服对大鼠体重、异常隐窝灶(Abrrant crypt foci,ACF)和结肠癌发生率的影响.采用MTT法检测不同浓度Ber对人结肠癌lovo细胞增殖活性的影响;RT-PCR法检测Ber对lovo.细胞PPARγ基因mRNA表达的情况.结果 Ber能明显改善结肠癌大鼠的恶液质状态,并阻遏体重减轻,显著减少大鼠结肠ACF数和降低结肠癌的发生率,其作用与Ros相似.Ber可呈浓度和时间依赖性抑制lovo细胞增殖,并降低lovo细胞中PPARγ基因mRNA的表达水平.结论 Ber能抑制大鼠早期ACF的形成和结肠癌发生,其作用机制可能与抑制PPARγ表达有关.
作者：吴柯；何百成；周岐新 刊期： 2011年第08期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
