李晓艳；王景龙；张瑞；孙春辉；郎需龙；杨艳玲；屈海龙；赵勇坤；王兴龙
目的 探讨胃癌组织中分化抑制因子1( Inhibitor of DNA binding / differentiation 1,IDI)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达与微血管密度(Microvessel density,MVD)的相关性.方法 采用免疫组化定性分析IDI、VEGF和CD34在胃癌及癌旁非癌组织中的表达及MVD,Western blot半定量分析ID I和VEGF蛋白在胃癌及癌旁非癌组织中的表达.结果 胃癌组织中IDI和VEGF的表达及MVD明显高于癌旁非癌组织,且差异均有统计学意义(P均＜0.05);ID1表达阳性的胃癌组织的MVD明显高于IDI表达阴性的胃癌组织,且差异有统计学意义(P<0.001).结论 胃癌组织中IDI的表达与VEGF和MVD具有相关性,IDI可能具有促进胃癌血管生成的作用.
作者：王玉彬；巴彩凤；哈敏文；刘寅 刊期： 2011年第08期
目的 采用顶空气相色谱法测定23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚的残留量.方法 采用顶空气相色谱法,以水为溶剂,甲醇为内标,测定23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚的残留量,并对该方法进行系统适用性、线性关系、检测限与定量限、精密性、准确性验证及初步应用.结果 该方法可使待测组分得到良好分离;测定乙醇、丙酮和乙醚的线性范围分别为:2.660～532.000 μg/ml(r=1.0000)、0.530～105.400 μg/ml(r =0.9998)和0.049～9.760μg/ml(r＝0.9989),检测限分别为0.80、0.16和0.01μg/ml,定量限分别为2.66、0.53和0.05μg/ml,精密性RSD值小于5.0%,平均回收率在95.0%～105.6%之间.该法检测3个批号23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇残留量,均未超过<中国药典>三部(2010版)规定的限度.3批疫苗中均未检出丙酮和乙醚.结论 顶空气相色谱法操作简便,准确可靠,可用于23价肺炎球菌多糖疫苗中乙醇、丙酮及乙醚残留量的检测.
作者：赵荣丽；刘少祥；李书津；潘海龙；赵青 刊期： 2011年第08期
目的 构建羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒,并检测其免疫效果.方法 将前期克隆的P39基因片段连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,提取重组质粒,进行双酶切鉴定.以鉴定正确的重组质粒免疫BALB/c小鼠,凝集试验检测小鼠血清特异性抗体水平,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子含量,MIT掺人法检测小鼠脾脏淋巴细胞的增殖效应.结果 重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39经双酶切鉴定构建正确;该重组质粒能够刺激小鼠产生特异性抗体(抗体峰值滴度为1:320),显著增加Thl型细胞因子的产生,并能够增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应.结论 成功构建了羊布氏菌P39基因重组真核表达质粒pcDNA3.1-P39,该重组质粒能够诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答.
作者：石艳春；韩堃；郑源强；毕力夫 刊期： 2011年第08期
目的 评价海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响.方法 将Wistar妊娠大鼠随机分为5组:基质对照组、阳性对照(环磷酰胺7 mg/kg)组、海妇洁栓低(16 mg/kg)、中(32 mg/kg)和高(80 mg / kg)剂量组.基质对照组和海妇洁栓各剂量组孕鼠于妊娠第6天开始经阴道给药,每天1次,连续10d;阳性对照组孕鼠于妊娠第11天开始经大腿外侧肌肉注射给药,每天1次,连续3d.于妊娠第20天剖腹取出活胎,观察海妇洁栓对大鼠胚胎发育的影响.结果 除阳性对照组外,海妇洁栓各剂量组及基质对照组所有受检胎鼠均未见明显外观畸形;平均体重、身长及尾长虽组间比较差异有统计学意义(P<0.05),但均属于正常生理变化,无生物学及毒理学意义,与海妇洁栓无关;除阳性对照组外,海妇洁栓各剂量组及基质对照组所有受检胎鼠骨骼、主要内脏器官均未见明显异常.结论 海妇洁栓剂量在16 - 80 mg/kg之间对Wistar大鼠胚胎无明显的毒性和致畸作用.
作者：付新华；孙谧；王跃军；梁玉记 刊期： 2011年第08期
目的 建立羊布氏菌强毒株16M感染小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic cell,DC)的模型.方法 体外分离C57小鼠骨髓原代细胞,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)和重组人白细胞介素-4(Recombinant human interleukin-4,rhIL-4)诱导分化后,倒置显微镜观察DC形态,流式细胞术鉴定其分化程度.在体外建立羊布氏菌16M感染小鼠骨髓DC模型,间接免疫荧光试验和透射电镜进行鉴定,并进行感染后羊布氏菌16M的重培养及染色观察.结果 培养第5天,细胞形态符合髓源DC,伸出长的树突样和伪足样突起;第7天,细胞呈半悬浮,周围有大量突起;体外培养DC的纯度约达70%,符合试验要求.DC在感染后12h具有强的吞噬能力,胞内细菌量少.重培养后经染色,可观察到羊布氏菌16M典型的细菌形态.结论 成功构建了羊布氏菌感染小鼠骨髓 DC模型,为进一步研究布氏菌与DC的相互作用及胞内寄生机制奠定了基础.
作者：李晓艳；王景龙；张瑞；孙春辉；郎需龙；杨艳玲；屈海龙；赵勇坤；王兴龙 刊期： 2011年第08期
目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路阻断对人胃癌细胞SGC-7901侵袭的影响及其可能的机制.方法 免疫荧光检测Hh信号通路分子Shh和Gli 1蛋白在SGC-7901细胞中的表达;用不同浓度((2.5、5、10μmol/L)的Hh信号通路特异性阻断剂环靶明作用SGC-7901细胞48 h后,Transwell小室试验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,半定量RT-PCR检测SGC-7901细胞中Shh、Gli 1和血管内皮生长因子(VEGF)基因mRNA的表达.结果 Shh和Gli 1蛋白在SGC-7901细胞中高表达;环靶明能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭,且呈剂量依赖性;Hh信号通路阻断后,SGC-7901细胞中Shh基因mRNA的表达水平无明显改变,Gli 1和VEGF基因mRNA的表达水平显著下降.结论 Hh信号通路分子在SGC-7901细胞中高表达,阻断Hh信号通路可以抑制SGC-7901细胞的侵袭,可能是通过抑制Glil下调VEGF起作用.
作者：欧阳小波；郝亚琴；王立 刊期： 2011年第08期
目的 探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)和乳腺癌易感基因-1(Breast cancer susceptibility gene-1,BRCA-1)在非小细胞肺癌(Non-small cell lungcancer,NSCLC)中的表达及其意义.方法 采用SP免疫组化染色法检测44例NSCLC组织切片中VEGF、EGFR和BRCA-1的表达情况.结果 在NSCLC中,VEGF和EGFR的表达率分别为47.73%(21/44)和79.55%(35/44),BRCA-1的表达率为50%(22/44),VEGF和EGFR的表达在不同性别、年龄、组织学类型、淋巴结转移和吸烟情况中差异无统计学意义(P>0.05),但在不同临床分期差异有统计学意义(P<0.05) ;BRCA-1表达在上述各临床病理特征中差异均无统计学意义(P>0.05),但BRCA-1与VEGF的表达呈正相关(r＝0.501,P=0.001);VEGF与EGFR,EGFR与BRCA-1的表达无相关性(P值分别为0.344和0.147).结论 VEGF,EGFR,BRCA-1与NSCLC的发生发展密切相关,对判断NSCLC的预后及治疗有一定的参考意义.
作者：王林辉；田茗源；张雄；罗红池；余天平；张鹏；李昱 刊期： 2011年第08期
目的 建立白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用.方法 以马抗白喉类毒素血清作为包被抗体,HRP标记的白喉絮状反应抗毒素作为酶标抗体,建立白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,并对该方法进行重复性、特异性验证、佳线性范围和检测限确定及初步应用.结果 经验证,该方法重复性好,特异性强,白喉类毒素含量在0.9765～125.0000ng/ml之间时线性关系良好,检测限为7.812 ng/ml,该方法检测了3批白喉类毒素原液,与动物实验结果基本相符.结论 已建立了白喉类毒素双抗体夹心ELISA检测方法,可用于检测白喉类毒素的含量和抗原性.
作者：刘朝阳；景辉；陈艳红；张斌；马相虎；朱金华 刊期： 2011年第08期
目的 原核表达含阿德福韦酯(Adefovir,ADV)耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)区域.方法 以野生型HBV DNA为模板,PCR扩增HBV聚合酶RT区域,克隆至质粒pHis-SUMO上,构建重组表达质粒SUMO-RTWT,并通过定点突变构建含ADV耐药突变位点(181T/ V十236T)的突变质粒SUMO-MT1和SUMO-MT2,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析,并进行表达条件的优化及HBV聚合酶RT区域的结构建模.结果 重组表达质粒SUMO-RTWT、SUMO-MT1和SUMO-Mn经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为56000,可与鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合;经表达条件优化后,3种重组质粒在大肠杆菌Roset-ta(DE3)中均获得有效稳定的表达;同源结构建模结果表明,HBV聚合酶RT区域具有典型的DNA聚合酶的结构.结论 已成功构建了含ADV耐药突变位点HBV聚合酶RT区域的重组原核表达质粒,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得稳定表达的可溶性目的 蛋白,为研究ADV的耐药机制奠定了基础.
作者：谢素兰；黄爱龙；蔡雪飞；胡源 刊期： 2011年第08期
HIV-1耐药株的出现是人类艾滋病(AIDS)治疗失败的重要原因之一,HIV-1耐药性的研究对于控制耐药株的流行及临床治疗真有重要意义.本文就HIV-1耐药株的产生、进化和传播,HIV-1的耐药机制及耐药性突变,HIV-1耐药性检测以及新型HIV-1耐药性检测方法等作一综述.
作者：贾峥 刊期： 2011年第08期
鸡球虫病是一种主要由艾美耳属球虫引起的细胞内寄生原虫病,给养禽业带来巨大的经济损失.鸡球虫病一直以药物防治为主,但耐药虫株以及药物残留等问题使药物防治受到很大限制,因此,研制安全有效的疫苗成为防治鸡球虫病的主要策略之一.鸡球虫病疫苗包括活疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、重组卡介苗和佐剂疫苗,本文就鸡球虫病疫苗的研究现状作一综述.
作者：黄金贵；李运娜；张西臣 刊期： 2011年第08期
专利是世界上大的技术信息源,目前,各国每年出版的专利文献占科技出版物的1/4,内容包含了世界科技信息的91%～95%.专利是一项发明的首次公开,其披露的技术信息有80%～94%是从其他途径无法得到的,专利文献中公布的重要发明比其他形式的报道要早5～10年.专利文献反映了技术研发领域中应用性、创新性较强的一线成果与思路,通过对专利的检索、统计和分析,可以发现重要的战略和创新性信息,如国家、地区或企业的科技发展趋势,专利申请人或专利权人的经济利益趋向及市场扩展情况等.
作者：苏锦锋；李彩梅；许宁 刊期： 2011年第08期
目的 探讨三七皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对慢性血栓栓塞性肺动脉高压(Chronic thromembolismpulmonary hypertension,CTPH)大鼠心肌胶原重构的调控作用及可能的机制.方法 利用二次血栓栓塞法建立大鼠CTPH模型,4周后,将正常大鼠分为A、B组,模型大鼠分为C、D组,A、C组经腹腔注射0.9%生理盐水,2ml/d;B、D组经腹腔注射PNS,100 mg/(kg·d).每天注射1次,4周后,测定各组大鼠的血流动力学指标、心室游离壁厚度,HE和VG染色观察心肌组织的形态学改变,Western blot检测心肌组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达.结果 C组与A组、B组比较,右心室收缩压、右室(RV)/左室(LV)游离壁厚度比、心肌间质胶原增生、MMP-2的表达均明显升高(P<0.05);经PNS干预后,D组右心室收缩压、RV/LV游离壁厚度比、心肌间质胶原增生、MMP-2的表达均明显降低(P<0.05).结论 在CTPH心肌重构过程中,PNS可以逆转右心室重构,其机制可能与上调MMP-2的表达、促进心室间质胶原的降解有关.
作者：李长毅；王导新；张玉坤 刊期： 2011年第08期
目的 制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,并进行验证.方法 采用免疫胶体金技术标记猪旋毛虫排泄-分泌(Excretory-secretory,ES)抗原,在AE98NC膜上点上兔抗猪IgG作为检测带,抗ES抗原抗体作为对照带,将NC印膜、胶体金抗原玻璃棉、吸水纸和支持板用胶膜组成试纸条,进行敏感性、特异性和重复性验证,并与ELISA检测方法进行对比.结果 试纸条检测38头份猪旋毛虫阳性血清的敏感性为97.37%;检测33头份猪蛔虫阳性血清、26头份猪囊虫阳性血清、21头份猪细颈囊尾蚴阳性血清和98头份猪旋毛虫阴性血清的特异性为98.88%;重复性好;与EIASA检测方法的敏感性和特异性差异无统计学意义(P>0.05).结论 已制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,该试纸条敏感、特异、简便、快速,可用于猪旋毛虫病的检疫及流行病学调查.
作者：苑淑贤；姚新华；任科研；李萌；杨金生；苑冬梅；李煜洁；常军亮；杨淑苹 刊期： 2011年第08期
目的 研究let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制.方法 将A549细胞、稳定转染let-7a重组质粒的A549-let-7a细胞及稳定转染对照质粒的A549-control细胞分别接种至BALB / c裸鼠背部皮下,观察各组细胞在裸鼠体内的生长情况,测量肿瘤体积并绘制生长曲线;30 d后处死裸鼠,取出瘤体,称重并计算抑瘤率;HE染色观察瘤组织的形态学改变;Western blot及免疫组化法检测各组瘤组织中k-Ras蛋白的表达情况.结果 与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组裸鼠的瘤体生长速度明显减慢,瘤体重量显著降低(P<0.01),抑瘤率为27.51 %,A549-control细胞组差异无统计学意义(P>0.05);HE染色显示,A549-let-7a细胞组癌细胞体积较其他两组减小,核浆比例明显缩小,核分裂相显著减少;Westernblot及免疫组化结果表明,与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组瘤组织中k-Ra.蛋白的表达明显降低(P<0.01),而A549-control细胞组中.k-Ras蛋白的表达差异无统计学意义(P > 0.05).结论 let-7a能显著抑制A549细胞在裸鼠体内的生长能力,其机制可能与下调k-Ras蛋白的表达有关.
作者：何晓燕；彭琼乐；张政；彭惠民 刊期： 2011年第08期
目的 探讨慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用.方法 利用rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α体外定向诱导CML患者外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)生成DC,光学显微镜和透射电镜观察所诱导的DC形态特征;流式细胞术进行表型检测;采用FISH和RT-PCR法检测所诱导的DC的白血病源性;MTT法检测其对自体CML细胞的杀伤作用.结果 CML患者PBMC在体外可诱导生成6cr/abl融合基因阳性的DC,其激活的T淋巴细胞对自体CML细胞的杀伤作用明显强于单独应用T淋巴细胞对CML细胞的杀伤作用.结论 CML患者PBMC能够诱导生成白血病源的DC,该DC能够激活T淋巴细胞对CML细胞的特异性杀伤作用.
作者：崔久嵬；牛超；李薇；金浩范；Boyapati Maheoh；王冠军 刊期： 2011年第08期
目的 探讨sh-hnRNP-E2逆转录病毒对32D-P210细胞诱导的白血病模型小鼠的保护作用.方法 建立32D-P210转化细胞株在C3H等基因小鼠体内定殖的慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)模型,并进行鉴定;sh-hn-RNP-E2逆转录病毒感染32D-P210细胞24 h后,经尾静脉移植人C3H等基因雌性小鼠中,观察sh-hnRNP-E2对CML模型小鼠的保护作用.结果 经鉴定已成功建立32D-P210转化细胞株在C3H等基因小鼠体内定殖的CML模型;sh-hnRNP-E2逆转录病毒预感染32D-P210靶细胞,可促进靶细胞向粒系分化,并显著延长模型小鼠的生存期.结论 sh-hnRNP-E2逆转录病毒感染对CML模型小鼠具有显著的保护效应,是一种有效的CML体内治疗策略.
作者：韩红星；张文萍；张秋萍；杨燕；单万水 刊期： 2011年第08期
目的 探讨氢氧化铝吸附炭疽杆菌重组保护性抗原(Recombinant protective antigen,rPA)的影响因素.方法 取含不同P043浓度的PBS和添加EDTA的PBS,分别稀释rPA后,加人氢氧化铝,放置2～8℃及(23±2)℃作用不同时间,检测A280和A260值,计算未吸附的rPA蛋白量,并比较不同溶液中氢氧化铝对rPA的吸附效果.结果 氢氧化铝对rPA的吸附率随p043浓度的增加而降低;PBS中添加EDTA后,氢氧化铝对rPA的吸附效果明显下降;2～8℃较(23±2)℃的吸附率略有增加,但不同时间的吸附量无明显差异;在H2O中氢氧化铝对rPA的吸附效率比在PBS中高.结论 稀释缓冲液和离子强度、EDTA均可影响氢氧化铝与rPA的吸附效果,但吸附温度和时间对吸附的影响不大.
作者：王革；李睿；王秉翔 刊期： 2011年第08期
目的 观察PTD-OD-HA融合蛋白对BALB /c裸鼠皮下K562细胞实体瘤的治疗作用.方法 采用皮下注射K562细胞的方法建立裸鼠皮下实体瘤模型,每两天向实体瘤中间部位多点注射200μl浓度为10 Mg/ml的PTD-OD-HA融合蛋白,观察裸鼠瘤体生长情况;HE染色观察肿瘤组织病理学变化;TUNEL法和透射电镜观察肿瘤组织细胞的凋亡.结果 经FMOD-HA治疗的肿瘤体积明显缩小;肿瘤组织切片经HE染色可见细胞核浓缩和细胞染色加深;TUNEL法和透射电镜检测可见肿瘤细胞发生了凋亡的改变.结论 在BALB/c裸鼠体内,PTD-OD-HA融合蛋白具有抑制K562细胞增殖和促进其凋亡的作用.
作者：季茂胜；黄峥兰；李亚娟；黄世峰；曾建明；刘打宾；曹唯希；冯文莉 刊期： 2011年第08期
目的 克隆A型人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州分离株F1基因,并进行原核表达和纯化.方法 采用RT-PCR方法克隆RSV F1 ORF序列,克隆至pET-42b(+)表达载体,构建重组原核表达质粒pET-42b-Fl,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经 SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用GST亲和层析树脂进行纯化.结果 重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约77000,表达量约占菌体总蛋白的20%,以包涵体和可溶性两种形式存在;该蛋自可与鼠抗人RSV单抗发生特异性反应,纯化后纯度约为50%.结论 已原核表达并纯化了HRSV Fl蛋白,为其血清抗体的制备及免疫原性研究奠定了基础.
作者：傅生芳；寇桂英；包红；姜英；陈汉泉；余黎；周旭 刊期： 2011年第08期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
