学术投稿

Ⅰ型新德里金属β内酰胺酶的生物信息学分析

曾建涛;李泉

关键词:Ⅰ型新德里金属β内酰胺酶, 同源建模, 分子对接
摘要:目的 应用生物信息学方法分析Ⅰ型新德里金属β内酰胺酶(New Delhi metallo-β-1actamase 1,NDM1)的基本性质,并与常见的β内酰胺类抗生素进行分子对接,在理论上研究NDM1对β内酰胺类抗生素和抑制剂的水解活性.方法 应用EMBOSS 6.3.1.1软件包的程序分析NDM1的基本性质,并分别利用SWISS-MODEL同源建模和PHYRE 2.0折叠识别法构建NDM1的空间结构,再运用Arguslab 4.0软件的dock模块进行β内酰胺类抗生素与NDM1分子对接.结果 NDM1共270个氨基酸残基,理论等电点为6.3,包含1个跨膜区,α螺旋占27%,β折叠占34.5%;与抗生素对接能量由低到高依次为氨苄西林、头孢拉啶、阿莫西林、头孢唑林、甲氧西林、美罗培南、亚胺培南、氨曲南、克拉维酸.结论 NDM1对氨苄西林催化效率高,对氨曲南催化效率低,克拉维酸对NDM1无抑制作用.
中国生物制品学杂志相关文献
  • 马蹄香对小鼠的急性毒性及对大鼠的亚急性毒性观察

    目的 观察马蹄香(Valeviana jatamansi Jones)对小鼠的急性毒性及对大鼠的亚急性毒性,以评价其安全性.方法 给小鼠灌服5 000、7 500、10 000 mg/kg的马蹄香,对照组灌胃1%羧甲基纤维素钠(CMC),观察小鼠的中毒症状,记录小鼠的死亡数,采用Red-Munchen法计算半数致死量(LD50),并检查小鼠组织和脏器的病理变化;对大鼠分别灌服4 000、1 000和200 mg/kg的马蹄香,连续给药14 d,对照组灌胃CMC水溶液,给药后观察14 d,检测大鼠体重、脏器系数、血常规指标、血生化指标及组织病理变化情况.结果 急性毒性试验结果显示,灌胃马蹄香后,小鼠短时间内出现活动减少,而后趋于正常,病理学检测未发现小鼠组织或脏器有明显异常改变,LD50> 10 000 mg/kg;亚急性毒性试验结果显示,马蹄香各剂量组大鼠的增重、脏器系数、血常规指标、血生化指标及组织病理变化与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 马蹄香具有较好的安全性.

    作者:孙远;付玉;刘冰;李鹏;田秀丽;王珊;宋宇;夏咸柱;王承宇 刊期: 2011年第11期

  • 肺炎球菌表面黏附素A和表面膜蛋白A的研究进展

    肺炎球菌表面黏附素A(Pneumococcal surface adhesin A,PsaA)为脂蛋白,属于ABC型转运蛋白复合物(ATPbinding cassette transporter),存在于各型肺炎球菌中,是其重要的毒力因子和黏附因子,编码基因高度保守,具有转运Mn2+及黏附功能.肺炎球菌表面膜蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA)是与其毒力相关的一种重要的表面抗原,在目前发现的所有临床分离的肺炎球菌中几乎均存在,其编码基因变异性较大.PsaA和PspA均为肺炎球菌的保护性抗原和新型肺炎球菌疫苗的研发热点之一.本文就这两种蛋白的结构、功能、免疫学特性及应用的研究进展作一综述.

    作者:唐玉龙 刊期: 2011年第11期

  • 乌司他丁和泰索帝对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中uPA、uPAR、ERK表达的影响

    目的 探讨乌司他丁(Ulinastatin,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231中u-PA、uPAR、ERK表达的影响.方法 将MDA-MB-231 (ER-)细胞分为4组:UTI组(UTI 800 U/ml)、TXT组(TXT 3.7 μg/ml)、UTI+TXT组(UTI 800 U/ml+ TXT3.7μg/ml)、对照组(等量生理盐水).给药后24h,分别采用荧光定量RT-PCR检测各组细胞中uPA、uPAR、ERK基因mRNA的水平,Western blot法检测各组细胞中uPA、uPAR、p-ERK1/2蛋白的表达水平.结果 UTI组和UTI+ TXT组MDA-MB-231 (ER-)细胞中uPA和uPAR基因mRNA的水平均明显低于对照组(P<0.05),而TXT组中二者的表达水平均明显高于对照组(P<0.01),各组间ERK基因mRNA的水平差异无统计学意义(P>0.05);UTI组和UTI+ TXT组中uPA、uPAR和p-ERK1/2蛋白的表达水平均明显低于对照组(P<0.01),而TXT组中3种蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05).结论 UTI可抑制MDA-MB-231细胞中uPA、uPAR、p-ERK的表达,而TXT可上调三者的表达.

    作者:罗杰;高峰;赵晓亮;孙治君 刊期: 2011年第11期

  • 梯形微板法在ABO反定型中的应用

    目的 评价梯形微板法在ABO反定型中的应用.方法 采用梯形微板进行血型抗原抗体免疫学反应,利用高科技摄像数码分析技术进行凝集判别,确定血型,分析该方法的准确性、可靠性、重复性和脂血抗干扰性,同时以U型微板法作平行对照.结果 梯形微板法的准确性为99.97%,可靠性较高,重复性为100%,且能有效避免脂血的干扰,各项指标均优于U型微板法.结论 梯形微板法在ABO反定型鉴定中是一项准确性高、稳定性好的检测手段,更适合于血站系统的大批量标本的结果处理.

    作者:杜雪宁;刘芳兰;王振卿;张来玉 刊期: 2011年第11期

  • 一种新的造血干细胞获取方法的建立

    目的 建立一种新的造血干细胞获取方法,为临床应用提供实验依据.方法 将明胶海绵移植到小鼠后肢的大腿内侧肌间隙,12d后分离明胶海绵中的迁移细胞.采用流式细胞术和免疫荧光法检测迁移细胞和骨髓细胞中CD34+、Sca-1+和CD34+Sca-1+细胞的表达,利用体外造血克隆分析迁移细胞和骨髓细胞中造血克隆的密度.结果 迁移细胞的数量在移植12d时达大;迁移细胞中CD34+、Sca-1+和CD34Sca-1+细胞的比例明显高于骨髓细胞(P<0.05),造血克隆比例也明显高于骨髓(P<0.01).结论 利用生物材料明胶海绵成功建立了一种高效的造血干细胞获取方法,可实现自体细胞治疗.

    作者:武晓云;王世立 刊期: 2011年第11期

  • 重组复杂蛋白快速表达体系的建立

    目的 建立重组复杂蛋白快速表达体系.方法 利用定点整合技术建立定点整合宿主细胞库,分别以X-Fc融合蛋白和人凝血因子Ⅷ(FⅧ)为研究对象进行定点整合转染和表达分析.结果 通过定点整合转染建立了高表达的宿主细胞库;X-Fc融合蛋白和人FⅧ均在宿主细胞中获得了高表达,X-Fc融合蛋白的表达量为220 mg/L,人FⅧ在有血清培养条件下的酶活性为2 IU/ml,且细胞株表达稳定,易于扩大培养.结论 已成功建立了基于CHO细胞定点整合的重组复杂蛋白快速表达体系,该体系在克隆效率和时间上具有很大优势,可实现蛋白的有效快速表达.

    作者:何太平;杨波;谭晓晶;唐菁燕;雷韬;宋春雷;聂艳桃;徐珑 刊期: 2011年第11期

  • 静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白的研制

    目的 研制高效价静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白.方法 用甲型H1N1流感疫苗(简称甲流)对固定供血浆者按疫苗说明书免疫后2周开始采集原料血浆,采用血凝抑制法检测原料血浆和制品的甲流抗体效价;采用柱层析法从高效价甲流免疫血浆中提取富含IgM免疫球蛋白的样品,模拟低温乙醇蛋白分离法工艺从小量混合血浆分离IgG样品,测定血浆和提取样品的甲流抗体效价,分析甲流中和抗体效价与IgG、IgM含量的对应关系,判断甲流中和抗体的免疫球蛋白类型;按本公司静脉注射人免疫球蛋白( Intravenous immunoglobulin,IVIG)生产工艺制备静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,并与普通IVIG及相应合并血浆的甲流抗体效价进行比较.结果 筛选到甲流抗体效价≥320 HU/ml的合格血浆9 866袋,合格率达33.5%,其中抗体效价≥640 HU/ml的血浆占合格血浆的49%,血浆质量符合《中国药典》三部(2010版)“血液制品生产用人血浆规程”要求;甲流抗体效价与IgG含量呈相应比例关系,而与IgM含量无关,甲流中和抗体的免疫球蛋白类型以IgG为主;制备的甲流人免疫球蛋白制品的甲流中和抗体效价达2 560 HU/ml,为普通IVIG的197倍,其他质量指标符合《中国药典》三部(2010版)“静注人免疫球蛋白制检规程”要求.结论 成功研制了静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,在甲流疫情得到有效控制的情况下,仍具有战略储备意义.

    作者:杨汇川;张燕;高阳;何建琴;吕加成;刘素芳;王焰;吴强;杨春;张雪梅 刊期: 2011年第11期

  • 分枝杆菌噬茵体D29裂解酶gp10的原核表达及抗脓肿分枝杆菌活性

    目的 克隆并原核表达分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10基因,观察重组蛋白对脓肿分枝杆菌的抑菌作用.方法 以噬菌体D29基因组DNA为模板,PCR扩增gp10基因片段,克隆至pET-32a(+)载体上,构建重组原核表达质粒pET-32a-gp10,转化E.Coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,亲和层析纯化后,采用杯碟法检测其抑菌活性.结果 PCR扩增获得长1 454 bp的gp10基因片段,重组表达质粒pET-32a-gp10经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为54 800,表达量占菌体总蛋白的97.4%,破菌上清及破菌沉淀中均可见目的蛋白的表达,纯化后纯度可达90%,浓度为0.5mg/ml;重组蛋白对脓肿分枝杆菌有抑菌作用.结论 已成功表达重组分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10,其对脓肿分枝杆菌具有抑菌作用,为抗脓肿分枝杆菌及其他非结核分枝杆菌感染新药物的研制提供了依据.

    作者:熊玉霞;杨致邦;于拽拽;戴维;蒋任举;蒋英 刊期: 2011年第11期

  • Notch2胞内段基因过表达对K562细胞增殖的影响及其机制

    目的 探讨外源性Notch2胞内段基因过表达对慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)细胞株K562增殖的影响及其机制.方法 将携带Notch2胞内段(ICN2)基因的质粒转染K562细胞,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布;RT-PCR检测Notch2基因全长mRNA的转录,Western blot检测Notch2蛋白的表达;RT-PCR检测Notch通路下游靶基因Hes1、Hey1及细胞增殖、凋亡相关基因numb、Bcl-2、NF-κB和TGF-β1的mRNA转录水平.结果 与未转染组相比,转染组K562细胞数量减少,增殖显著受抑(P<0.01);转染48 h后的K562细胞G1期细胞比例显著增多(P<0.01),S期细胞比例显著减少(P<0.01);Notch2基因mRNA及下游靶基因Hes1和Hey1 mRNA转录水平均明显增强(P<0.01),Notch2蛋白表达量增加(P<0.01);numb基因mRNA转录水平无变化;Bcl-2表达下调,NF-κB和TGF-β1表达上调.结论 Notch2胞内段基因过表达可抑制K562细胞增殖,其机制可能是通过上调TGF-β1和NF-κB基因表达及下调Bcl-2基因表达,将细胞阻滞于G1期来实现的.

    作者:杨春秀;陈建斌;张树君;李芳菲;杨泽松 刊期: 2011年第11期

  • 钩体疫苗免疫小鼠佳剂量的筛选

    钩端螺旋体病(钩体病)为一种分布广泛的人兽共患病,呈世界范围流行,我国为该病的高发地区之一.接种安全、有效的疫苗是预防钩体病的有效手段.为研究人用钩体疫苗免疫小鼠的佳剂量,为进一步研究疫苗的安全性及有效性提供依据,本文采用上海生物制品研究所生产的三价钩体疫苗(包括黄疸出血型、流感伤寒型、秋季型,每型菌不少于1.5×108条/ml,剂量5ml)免疫小鼠,筛选佳免疫剂量,为下一步多种疫苗联合接种的研究奠定基础.

    作者:王亚玉;易彬樘;卢娟;闫永平 刊期: 2011年第11期

  • 四川地区供浆员中肠道病毒71型中和抗体效价的分布

    目的 通过检测EV71中和抗体效价(EV71-NT),对四川地区供浆员中EV71-NT的分布进行分析.方法 应用基于细胞病变抑制的EV71-NT检测方法,检测四川地区349份健康人血浆的EV71-NT,同时用肠道病毒(EV)71型抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)检测其EV71抗体,并分析二者的相关性;检测四川地区21 817份健康人血浆中EV71-NT的分布.结果 该EV71-NT检测方法具有较好的重复性,测定高效价和低效价EV71中和抗体标准品的变异系数分别为30.9%和33.6%;该方法与ELISA法的相关性较差(r=0.024);四川地区21 817份健康人血浆中含高效价EV71中和抗体的比例在7.1%~18.4%之间,EV71高效价血浆占10.3%.结论 在四川地区供浆员血浆中含有一定比例的高效价EV71中和抗体,可以直接从自然感染人群中筛选EV71抗体血浆进行EV71特异性免疫球蛋白的研制.

    作者:秦婷婷;杨春;李小姣;刘瑞熙;武志强;张航;刘波;刘兰军 刊期: 2011年第11期

  • HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽的原核表达及纯化

    目的 原核表达并纯化HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽skl、sk2、sk3及3条肽段串联序列.方法 用普通PCR及重叠延伸PCR法从HIV-1 B亚型质粒扩增得到sk1、sk2、sk3基因序列及3条肽段基因片段的6种连接序列,并分别克隆人原核表达载体pET-32a(+)及pGEX4T-2中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和层析纯化.SDS-PAGE分析融合肽的表达,Western blot分析融合肽的抗原性.结果 分别以pET-32a(+)和pGEX4T-2为载体,共构建了18个重组表达质粒;his-sk1、his-sk123、his-sk213、his-sk231及GST-sk3、GST-sk123、GST-sk213分别在pET-32a(+)及pGEX4T-2表达载体中以可溶形式表达,且均能与HIV-1阳性血清反应,而不能与HIV DNA-天坛疫苗免疫血清反应;经大量诱导表达纯化后,GST-sk3表达量高,可达40 mg/L,纯度超过90%.结论 已成功表达并纯化了具有生物学活性的HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽,为研制HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别诊断试剂盒奠定了基础.

    作者:袁作为;张君;胡接力;张秀瑜;黄爱龙;郑建 刊期: 2011年第11期

  • 表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶的重组腺病毒的构建及其免疫原性

    目的 构建表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的重组腺病毒,并检测其免疫原性.方法 从质粒pMD19T-simple-NA中扩增NA基因,克隆至穿梭质粒pShuttleCMV中,经同源重组获得重组腺病毒质粒,转染Ad-293细胞,包装出重组腺病毒Ad-NA,RT-PCR和免疫荧光法检测NA基因在Vero细胞中的转录和表达.CsCl密度梯度离心纯化重组腺病毒,免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠血清中抗NA抗体滴度.结果 重组腺病毒质粒经Pac Ⅰ酶切鉴定表明带有目的基因的穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中;NA基因在Vero细胞中成功转录和表达;重组腺病毒可刺激小鼠产生抗NA抗体,初免后4周,抗体水平达高,为1∶100000.结论 成功构建了表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白的重组腺病毒,其可刺激小鼠产生有效的免疫应答,为甲型H1N1流感病毒基因工程疫苗的研发奠定了基础.

    作者:严敏;孙茂盛;王文举;谢天宏;李太华;李鸿钧 刊期: 2011年第11期

  • 骨化三醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用及相关机制

    目的 探讨骨化三醇( Calcitriol)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗作用及相关机制.方法 用含200 μg髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55肽段(Myelin oligodendrocyte glycoprotein 33-35,MOG33-35)、250 μg结核菌素的50μl弗氏不完全佐剂(IFA)皮内免疫C57BL/6小鼠,并分别于免疫当天和第2天注射百日咳毒素,建立EAE实验性动物模型(EAE组);骨化三醇组从免疫当天起隔日腹腔注射骨化三醇100 ng进行治疗,观察两组小鼠临床评分的差异;于EAE发病高峰期处死小鼠,取脊髓及淋巴结,通过HE及LFB染色观察脊髓中炎细胞浸润及髓鞘脱失;采用流式细胞术检测两组淋巴细胞CD4+T细胞亚型的分布.结果 与EAE组比较,骨化三醇组发病延缓且发病较轻,临床评分差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01或P<0.001);骨化三醇组较EAE组小鼠脊髓白质炎性细胞浸润明显减少,脱髓鞘斑块明显减轻;骨化三醇组与EAE组相比,Th17细胞亚群明显受到抑制(P<0.05),而Th2和Treg细胞水平明显升高(P均<0.05).结论 骨化三醇可以延缓EAE发病,减轻临床症状及病理改变,并能够通过调节CD4+T细胞亚群平衡,即抑制Th17细胞,上调Th2和Treg细胞水平发挥对EAE的预防和治疗作用.

    作者:汪占文;杨金凤;孔庆飞;詹晓霞;穆莉莉;李乐乐;孙博;张瑶;王广友;李呼伦;张迎庆;周明言 刊期: 2011年第11期

  • 重组戊型肝炎病毒抗原ELISA检测方法的建立

    目的 建立重组戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于HE疫苗中HEV抗原含量的检测.方法 以重组HEV病毒样颗粒作为免疫原,免疫母鸡,制备抗HEV-IgY多克隆抗体,纯化后作为包被抗体,HRP标记的抗HEV单克隆抗体作为检测抗体,建立HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行验证.用建立的方法检测3批HE疫苗成品的HEV抗原含量,计算HEV抗原对氢氧化铝的吸附率.结果 建立的ELISA方法线性范围为2~128 ng/ml,低定量限为2 ng/ml;该方法检测冻干甲肝减毒活疫苗、重组人白介素-2( IL-2)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、人血白蛋白、小牛血清及健康人血清均无交叉反应;该方法检测3个浓度的HEV抗原内部参考品的回收率在95. 13%~104.50%之间,试验内及试验间变异系数均<15%;包被抗HEV-IgY的酶标板于37℃放置5d,其检测HEV抗原内部参考品的A 450值及敏感性均未发生显著变化;3批HE疫苗成品中HEV抗原对氢氧化铝的吸附率均大于95%,符合相关质控要求.结论 已成功建立了HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,可用于HEV抗原含量的检测.

    作者:陈子杨;吴业红;张健锋;常军亮;时成波;贾媛;郭立君;李春晖 刊期: 2011年第11期

  • 卡介菌多糖核酸治疗过敏性鼻炎合并哮喘的临床疗效

    目的 观察卡介菌多糖核酸对过敏性鼻炎合并哮喘的临床治疗效果.方法 将98例2001年初~2009年初在吉林市中心医院耳鼻喉科就诊的过敏性鼻炎合并哮喘患者随机分为治疗1组、治疗2组及对照组,3组均给予相同的过敏哮喘基础治疗,治疗1组再经肌肉注射卡介菌多糖核酸(BCG polysaccharide and nucleic acid,BCG-PSN)注射液,疗程3个月;治疗2组再经肌肉注射BCG-PSN,疗程6个月;对照组只进行基础治疗,不给予BCG-PSN.观察疗程结束后1年内3组患者过敏性鼻炎及哮喘的发作情况,根据哮喘的发作次数及程度判断疗效.结果 疗程结束后0~6个月内,治疗1组和治疗2组的过敏性鼻炎及哮喘的临床症状明显好转,显效率和总有效率均明显高于对照组(P<0.05或P< 0.01);疗程结束后7~ 12个月,治疗2组的显效率和总有效率均明显高于对照组(P均<0.05).BCG-PSN治疗中未见明显不良反应.结论 BCG-PSN治疗过敏性鼻炎合并哮喘疗效确切,安全可靠,远期疗效与疗程有关.

    作者:王敏;何巍;王伟善;周欣 刊期: 2011年第11期

  • 无血清摇动悬浮培养富集乳腺癌干细胞

    目的 探讨不同培养条件下乳腺癌MCF-7细胞的分裂特点,建立快速、有效的乳腺癌干细胞富集方法.方法 将MCF-7细胞分别采用完全培养基静置培养(A组)、完全培养基摇动培养(B组)、细胞因子静置培养(C组)和细胞因子摇动培养(D组)12、24、36 h,倒置相差显微镜下观察各组细胞分裂情况,计算克隆形成率,采用流式细胞术检测CD44+/CD24-/low细胞亚群的比例变化.结果 B组和C组培养12h,棒状分裂细胞约占30%;24 h后分别约占50%和60%;36 h后形成大的细胞克隆.D组培养12 h,棒状分裂细胞约占50%;24 h后约占80%,可见多个细胞克隆;36 h后克隆细胞数减少.D组培养12 h,CD44+/CD24-/low细胞亚群比例(8.05%)为B组(0.99%)的8倍,C组(3.80%)的2.1倍;培养24 h,D组(15.24%)为B组(4.83%)的3倍,C组(2.30%)的6倍;培养36 h,D组CD44+/CD24-/low细胞亚群比例降至9.68%,约为B组(0.95%)和C组(1.03%)的9倍.结论 在细胞因子摇动培养条件下,MCF-7细胞分裂加快,分裂象增多,细胞系中CD44+/CD24-/low亚群比例增加较快,干细胞池增加明显,表明无血清摇动悬浮培养为富集乳腺癌干细胞的快速、有效的方法.

    作者:闫文星;陈玉丙;张红梅;国春龙;王铁君 刊期: 2011年第11期

  • DN-ALK2对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响

    目的 探讨DN-ALK2对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中ALK2基因mRNA的转录;分别以腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞,并设空白对照组,通过MTT法、平板集落形成试验、细胞划痕试验及Transwell侵袭试验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力.结果 MDA-MB-231细胞中内源性表达ALK2.腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞36 h后,荧光表达量一致,约为70%.MDA-MB-231/DN-ALK2细胞中高表达DN-ALK2.与MDA-MB-231/RFP组相比,MDA-MB-231/DN-ALK2组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低(P<0.05),穿膜细胞数也明显减少(P<0.05);而MDA-MB-231/RFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 DN-ALK2可以在体外抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移与侵袭.

    作者:孙笑笑;王科;冯红蕾;罗进勇;王虹;张彦 刊期: 2011年第11期

  • 狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立及初步应用

    目的 建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,用于不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测.方法 用市售的不同狂犬病疫苗株抗原免疫NIH小鼠,制备免疫血清,用不同的疫苗株抗原包被酶标板,分别测定小鼠血清抗体效价,并通过不同株抗原抗体的交叉中和实验,分析抗原的差异性;在此基础上,将不同毒株抗原按不同比例混合包被酶标板,分别测定阳性血清样本,并与快速免疫荧光抑制试验(RFFTT)检测结果比较,确定包被抗原模式,建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,绘制标准曲线,确定佳定量范围及灵敏度,确定Cut-off值;并对其特异性、精密性、准确性及稳定性进行验证;用建立的方法与其他市售狂犬病病毒抗体检测试剂分别检测血清样品,分析检测结果的一致性及相关性.结果 狂犬病病毒抗原AG:CTN-1 =4∶1为适包被抗原模式,试剂经优化后,检测抗体效价范围在535.00 ~ 33.44 mIU/ml之间,具有良好的线性关系(r>0.99),低检出限为8.36 mIU/ml,Cut-off值为0.735 mIU.该方法检测人血白蛋白、破伤风阳性血清、乙肝表面抗原阳性血清、白喉阳性质控血清均未发生反应;试验内变异系数在6.68%~7.84%之间;回收率在97.25% ~104.50%之间;试剂置37℃3 d,与4℃保存试剂测定结果差异无统计学意义(P>0.05).该方法检测血清样品与市售狂犬病病毒抗体检测试剂比较,均具有良好的一致性;与RFFIT测定结果比较,二者差异无统计学意义(P>0.05),回归方程为Y=-0.475+3.246 X,相关系数为0.801.结论 已建立了狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,可用于大规模狂犬病病毒抗体的筛查.

    作者:王伟伟;王远征;张国强;马昱 刊期: 2011年第11期

  • 牛心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及其单克隆抗体的制备

    目的 提取、纯化牛心肌肌钙蛋白T( Cardiac troponin T,cTnT),并制备其单克隆抗体.方法 采用组织匀浆、蛋白层析技术提取、纯化牛cTnT,紫外分光光度法检测其浓度;SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA法检测其反应特性.将纯化的牛cTnT免疫小鼠,进行细胞融合,间接ELSIA法筛选阳性杂交瘤细胞株,采用小鼠体内法制备腹水.结果 纯化的两批牛cTnT浓度分别为0.246和0.336 mg/ml;相对分子质量约为37 000,纯度分别为86.02%和93.77%;纯化的cTnT蛋白可与鼠抗牛cT-nT单克隆抗体结合.共获得5株分泌抗牛cTnT单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,阳性杂交瘤细胞株3B10腹水抗体效价达1∶10240.结论 已成功提取、纯化了牛cTnT,并建立了稳定分泌抗牛cTnT单抗的杂交瘤细胞株,为cTnT检测试剂盒的国产化奠定了基础.

    作者:付海英;崔衢;吴静;李勇;施雨露;王艳玲;李一 刊期: 2011年第11期

中国生物制品学杂志

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