杜琳；谭小梅；宣俊文；蒋奕；刘月萍；谢贵林
目的克隆格氏菌素T基因,在原核细胞中表达,并检测其抑菌活性.方法通过PCR技术,从3株L.gasseri北京分离株中特异性扩增格氏菌素T的成熟肽DNA编码片段(V1-1/gatA和V44-1/gatA),经TA克隆和序列测定后,进行同源比较分析.双酶切后的目的片段与表达载体pGEX-6P-1连接,得到高效融合表达质粒pGEX-gatA/V1-1和pGEX-gatA/V44-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,IPTG诱导表达,并检测表达产物的抑菌活性.结果目的蛋白以包涵体形式表达,表达量约29%.重组格氏菌素对于金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、痢疾志贺氏菌和伤寒沙门氏菌具有明显的抑制生长作用.结论 所获得的重组格氏乳杆菌素具有明显的抑菌活性,有望成为新型抗菌素.
作者：李向红；赵建增；崔云龙；闫述翠；万阜昌 刊期： 2006年第03期
目的分离纯化Pichia酵母表达的重组人可溶性TRAIL,并检测其生物活性.方法以Pichia酵母分泌型表达TRAIL,采用硫酸铵沉淀和柱层析纯化可溶性TRAIL蛋白.以SDS-PAGE、ESI-MS和Western blot法鉴定其纯度及特异性.以细胞透射电镜、DNA Ladder和MTT法检测其诱导肿瘤细胞凋亡活性.结果目的蛋白以可溶形式存在,蛋白相对分子质量22 000,纯化后纯度95%.Western blot证实为TRAIL蛋白.电镜、DNA Ladder和MTT均证实其具有诱导肿瘤细胞凋亡活性.结论 Pichia酵母表达rhsTRAIL可用柱层析法纯化,并具有诱导肿瘤细胞凋亡的生物活性.
作者：李茹冰；傅泳航；李继东；佟明华；杨联萍；孔祥平 刊期： 2006年第03期
单克隆抗体的制备多采用动物体内诱生法.由于绝大多数杂交瘤细胞是由BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞与同一品系的免疫小鼠脾细胞融合产生的,选取适周龄的BALB/c小鼠对于大量制备单抗至关重要.因此,作者对不同周龄BALB/c小鼠制备单抗的产量进行了比较.
作者：焦艳；高克谨；朱庆宣；陈洁；郭晓云；廖燕端；林朝琨 刊期： 2006年第03期
目的研究麻疹乙脑二联减毒活疫苗的安全性及免疫原性.方法采用麻疹沪191毒株和乙型脑炎SA14-14-2毒株分别制备的病毒原液,进行配比和干扰试验,制备成二联疫苗,冻干后免疫小白鼠和猴子,观察安全性和免疫原性,然后进行人体观察.结果麻疹病毒原液与乙脑病毒原液的佳混合比例(体积比)为1:2.注射小白鼠后安全性良好,且产生较好的乙脑免疫应答.注射猴子后无异常反应,神经组织病理学变化轻微,麻疹和乙脑中和抗体效价与各自的单价苗差异无显著意义.人体临床观察一般情况良好,无局部及全身反应.结论所研制的麻疹乙脑二联减毒活疫苗安全性及免疫原性良好,可推广使用.
作者：姚亚夫；张卓光；周本立；曾立学；刘瑛；王洪彬；廖轶；卢德芬 刊期： 2006年第03期
目的构建原核表达载体pET15b-PEP-1-SOD1,并进行PEP-1-SOD1融合蛋白表达和纯化.方法以pBluescript Ⅱ SK-SOD1质粒为模板,PCR扩增SOD1 cDNA.经酶切后,分别构建原核表达载体pET15b-SOD1和pET15b-PEP-1-SOD1,经测序证实构建成功后,分别转化E.coli BL21(DE3),表达SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白,并进行鉴定.结果 SDS-PAGE和Western blot分析表明,分别在相对分子质量22 000和26 000处出现SOD1和PEP-1-SOD1目标表达条带,目的蛋白占菌体总蛋白的30%,两种表达蛋白以天然的、可溶性的形式存在.结论已成功地制备出SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白.
作者：丁鹏；王家宁；杨波；黄永章；骆丽娜 刊期： 2006年第03期
目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达HBV PreS2-MBP融合蛋白,并对其进行鉴定和纯化.方法利用DNA重组技术,将全长的HBV PreS2蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-P2x中,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测,并经阴离子交换层析、Amylose Resin亲和层析纯化.结果成功构建了重组载体pMAL-P2x/S2,诱导蛋白为MBP标记的可溶性的PreS2-MBP融合蛋白,具有良好的抗原性,可经Amylose Resin亲和层析纯化.结论 pMAL-P2x系统可成功表达PreS2-MBP融合蛋白.
作者：邵丽军；刘照惠；金立杰；李利；李猛；谷丽娟；赵晓林；杨屹 刊期： 2006年第03期
目的克隆宫颈癌病理组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)晚期蛋白(L1)的基因,并构建真核表达质粒,为制备预防性疫苗奠定基础.方法采用PCR法从宫颈癌病理标本中扩增出HPV16 L1基因,与pMD18-T载体连接,测序并构建真核表达质粒(pVAX1-L1),瞬时转染Cos-7细胞,利用免疫组化技术检测表达产物.通过小鼠淋巴细胞转化试验检测免疫原性.结果所得L1基因的序列与GenBank中序列比较存在若干变异,并由此引起相应的氨基酸发生变化.pVAX1-L1瞬时转染Cos-7细胞,经免疫组化技术检测到棕黄色免疫复合物的形成,说明有表达产物L1蛋白产生.淋巴细胞转化试验结果显示,试验组与对照组差异有显著意义.结论宫颈癌病理组织中HPV16 L1基因序列存在一定程度的变异,所得L1基因表达产物具有生物学活性.
作者：刘大维；刘景晔；王鹏富；姜春来；于湘晖；孔维 刊期： 2006年第03期
目的分析CD109基因在正常组织及脑癌组织中的分布.方法采用实时荧光定量PCR方法,分析CD109在人、鼠正常组织及脑癌中的表达,以18S rRNA作为内标.结果 CD109蛋白的mRNA丰度在睾丸组织中高,在其它组织中较低,在12份脑癌标本中,检测到9份CD109表达上调.结论 CD109基因在多数正常组织中表达很少,有可能是治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点.
作者：张静敏；金宁一；连海；李宵；孙迎春；安汝国；高桥雅英 刊期： 2006年第03期
目的探讨Apoptin、HN和IL-18融合基因的重组鸡痘病毒(vFV3)对骨肉瘤细胞S180的抑制效应.方法 以vFV3感染人骨肉瘤细胞S180,应用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪分析vFV3感染致S180细胞周期变化,并用Rhodamine123染色结合FCM检测线粒体跨膜电位,从细胞生物学角度探讨vFV3致S180肿瘤细胞凋亡的途径.结果 vFV3感染可有效抑制S180肿瘤细胞,杀伤率达46.8%.感染使S180肿瘤细胞线粒体膜电位下降,导致S180肿瘤细胞凋亡.结论 vFV3可诱导S180肿瘤细胞凋亡,并主要通过线粒体途径诱导凋亡.
作者：张治宇；金宁一；李霄；张新；金毅；杨英欣；李力卓 刊期： 2006年第03期
目的重组表达Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白(Surface immunogenic protein,SIP)基因,为进一步免疫学研究提供目标蛋白.方法用PCR的方法从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出SIP基因,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体,构建原核表达载体pET32a-SIP,用BI21(DE3)/pET系统表达Trix-SIP融合蛋白,SDS-PAGE和质谱分析鉴定表达产物,并对表达蛋白进行初步纯化.结果 PCR扩增产物经测序,证实与GenBank中I a/c型GBS的SIP的基因序列同源性为99%.SDS-PAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET32a-SIP总蛋白中出现一条相对分子质量为66 000的新蛋白带.质谱分析和蛋白质库的比较证实其为B族链球菌表面免疫相关蛋白(SIP)的可能性分数为74.结论已成功表达并初步纯化SIP,为SIP在细菌致病中的作用研究以及相关疫苗的制备奠定了基础.
作者：岳丽琴；沈叙庄；张华捷；王咏红；俞桑洁；杨永弘 刊期： 2006年第03期
目的探讨免疫化疗在肾癌根治术后的远期疗效.方法将50名经手术和病理证实为肾透明细胞癌的患者随机分成2组,化疗组25名,肾癌根治术后应用白细胞介素-2、干扰素和5-氟尿嘧啶治疗;对照组25名,行单纯肾癌根治术.比较2组术后生存率.结果观察1年,2组间生存率差异无显著意义(P＞0.05),而3年及5年化疗组生存率分别为92.0%和84.0%,明显高于对照组(分别为68.0%和48.0%),差异均有显著意义(P＜0.05).化疗组患者未发生严重副反应,药物治疗耐受性良好.结论肾癌术后免疫化疗可提高生存率.
作者：王家强；王焱民；李义；孙文涛；谢英林 刊期： 2006年第03期
目的构建可以指导外源基因在动物乳腺组织特异表达的调控序列--牛α-S1酪蛋白基因调控序列.方法 提取新生小牛肝组织的DNA,应用PCR分段扩增牛α-S1酪蛋白基因调控序列,经琼脂糖凝胶电泳鉴定后测序,再将各基因片段连接成完整的序列.并将外源基因ALB亚克隆入该调控序列内,转染C127细胞,经免疫组化法检测其表达情况.结果 乳腺生物反应器特异调控序列--牛α-S1酪蛋白基因调控序列,包括其1.8kb上游序列、第一外显子、第一内含子、包含翻译起始位点的第二外显子和部分第二内含子,及其后一个内含子的大部分、后一个不翻译的外显子(含多聚A信号)及侧翼区全长5.8kb.位于该调控序列内的ALB高效表达.结论成功构建乳腺生物反应器特异调控序列--牛α-S1酪蛋白基因调控序列,此调控序列对外源基因的表达有正调控作用.
作者：蒋小玲；张红梅；徐六妹；王火生；乐晓华；李丽雄；周伯平 刊期： 2006年第03期
目的制备对人肝癌细胞具有特异性杀伤活性的抗肝癌重组免疫毒素.方法利用大肠杆菌系统表达抗肝癌hdsFv-hEDN基因重组免疫毒素.表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化后,进行特异性杀伤活性检测.结果抗肝癌hdsFvhEDN重组免疫毒素以可溶性形式表达于大肠杆菌培养上清中,并获得有效纯化.ELISA法检测证实其具有与相应抗原特异性结合的活性.细胞毒试验表明对肝癌细胞具有杀伤作用,而对正常肝细胞无损伤.结论已成功地制备了具有特异性结合和杀伤活性的抗肝癌hdsFv-hEDN基因重组免疫毒素,为其进一步应用奠定基础.
作者：付勇；苏雪梅；刘彦仿；杨守京；赵君；邹赛英 刊期： 2006年第03期
目的利用凋亡素和IL-18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL-7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法.方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,构建重组质粒pVVP3IL-18,经脂质体介导,转染人肝癌细胞BEL-7402,AO/EB染色,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,透射电镜分析凋亡细胞超微结构变化.结果随着转染时间的延长,重组质粒pVVP3IL-18所表达的目的蛋白对BEL-7402细胞的杀伤作用逐渐增强,作用48 h,形态学观察表明BEL-7402细胞发生明显的凋亡,凋亡率可达(56.5±11.9)%,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,透射电镜观察可见细胞核固缩、染色质聚集等典型的凋亡超微结构变化.结论联合应用凋亡素与hIL-18基因,在体外对人肝癌细胞BEL-7402具有明显的凋亡诱导作用.
作者：连海；金宁一；李霄；陈立刚；张静敏；管国芳；孙丽丽；李雪梅；郑洪玲 刊期： 2006年第03期
目的分析三个代次CTN-1-V病毒株糖蛋白(GP)基因部分序列,并与代表性街毒株进行比较.方法利用RT-PCR反应,从感染了CTN-1-V病毒的小鼠脑内获得GP cDNA的部分片段,并进行序列测定.结果三个代次的CTN-1-V病毒株GP cDNA序列的690个核苷酸与代表性狂犬病毒GP核苷酸相应序列同源性为83.2%～96.8%,氨基酸序列同源性为90.0%～97.4%.CTN-1-V株三代之间的核苷酸序列几乎相同.结论 CTN-1-V株在传代过程中GP基因结构基本稳定,与中国流行的代表性街毒株的同源性高于aG株和PV株.
作者：明平刚；孙文；徐葛林；吴杰；杨晓明；严家新 刊期： 2006年第03期
目的建立HIV抗体国家参考品(胶体金类试剂)并对其应用效果进行分析.方法通过对阳性和阴性样品的筛选,确定候选参考品的组成,经标定,确定参考品的质量标准,并以此为标准对试剂的质量进行检测和评估.结果参考品由20份阳性、20份阴性、3份低检测限和1份精密性样品组成.质量标准为20份阳性样品,应均为阳性,20份阴性样品中应至少18份为阴性,低检测限样品应至少1份为阳性,且稀释用血浆应为阴性,精密度样品检测10次,其颜色反应一致.共检测进口注册、国内注册以及常规检定样品189批,其中进口注册样品合格率为81.8%,国内注册样品合格率为80.8%,常规检定样品合格率为96.2%.结论该参考品可反映试剂的质量水平,对保证试剂的质量具有重要作用.
作者：李秀华；宋爱京；尹红章；王佑春 刊期： 2006年第03期
目的构建表达P30蛋白抗原表位的重组质粒及工程菌,获得纯化的P30蛋白抗原表位,用于检测弓形虫特异性抗体.方法采用PCR技术,设计一对引物(P30P3、P30P4),从弓形虫基因组DNA中扩增出编码P30蛋白抗原表位的基因片段,与载体pET28a(+)连接,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析.用离子交换纯化表达的P30抗原表位,用ELISA鉴定其抗原性.结果表达的P30蛋白抗原表位以包涵体形式存在,纯化的P30蛋白抗原表位片段有较好的抗原性,可用于检测弓形虫抗体.结论已成功构建了高表达P30蛋白的工程菌,为研制弓形虫抗体检测试剂或疫苗奠定了基础.
作者：李越希；陶开华；张锦海；潘明洁 刊期： 2006年第03期
2006年3月15～17日,笔者受国家食品药品监督管理局和中国药品生物制品检定所委派,应WHO邀请,参加了在英国NIBSC举行的无细胞百日咳疫苗质量控制与规程修订研讨会.本次会议主要为修订WHO 1998年制定的<单价、联合无细胞百日咳疫苗的生产和质量控制技术指导原则>(TRSNo.878)作前期准备,并进行实验室研究方面的相关安排.
作者：张庶民 刊期： 2006年第03期
超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内的一种清除超氧离子的重要酶类.人类的多种疾病与SOD的活性变化有关.本文以中华稻蝗为原料,经丙酮沉淀和硫酸铵盐析提纯SOD,取得了较好的效果,现简述如下.
作者：周艳利；李建科 刊期： 2006年第03期
目的构建重组小鼠干扰素γ(mIFN-γ)真核表达系统,并检测其在cos-7细胞中的表达.方法用RT-PCR方法,从ConA活化的小鼠脾细胞中扩增出mIFN-γ cDNA,将其克隆至pGEM-T载体上,测序正确后,再定向连接到真核表达载体pcDNA3中,经DEAE-Dextran转染至cos-7细胞,检测其在细胞内外的表达.结果 RT-PCR扩增的mIFN-γ cDNA与GenBank中mIFN-γ序列一致.构建的真核重组表达质粒pcDNA3/mIFN-γ转染cos-7细胞后,可检测到mIFN-γ的转录和表达.结论已成功构建了mIFN-γ真核表达系统,为抗病毒基因疫苗的研究奠定了基础.
作者：揣侠；张永红；金玉怀；房文亮；谢立新；王永祥 刊期： 2006年第03期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
