王家强；王焱民；李义；孙文涛；谢英林
目的构建表达P30蛋白抗原表位的重组质粒及工程菌,获得纯化的P30蛋白抗原表位,用于检测弓形虫特异性抗体.方法采用PCR技术,设计一对引物(P30P3、P30P4),从弓形虫基因组DNA中扩增出编码P30蛋白抗原表位的基因片段,与载体pET28a(+)连接,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析.用离子交换纯化表达的P30抗原表位,用ELISA鉴定其抗原性.结果表达的P30蛋白抗原表位以包涵体形式存在,纯化的P30蛋白抗原表位片段有较好的抗原性,可用于检测弓形虫抗体.结论已成功构建了高表达P30蛋白的工程菌,为研制弓形虫抗体检测试剂或疫苗奠定了基础.
作者：李越希；陶开华；张锦海；潘明洁 刊期： 2006年第03期
目的应用生物反应器培养细胞和病毒,大规模生产人用狂犬病疫苗.方法以巴斯德PV2061为毒种,以143代以内Vero细胞为培养基质,应用生物反应器,每升投放25g微载体,灌流式细胞培养,连续收获病毒液,经浓缩、灭活、纯化,制成Vero细胞狂犬病疫苗.结果细胞培养密度达1.2×107～1.5×107个/ml,病毒感染后可连续收获18～22 d,病毒高滴度8.5 LogLD50/ml,平均滴度7.6 LogLD50/ml.经柱层析纯化,杂蛋白去除率达99.95%以上,总蛋白含量≤80μg/g,DNA含量≤10 pg/0.5ml,GP含量3.5～4.5 IU/0.5ml,效力≥4.5 IU/0.5ml.结论应用生物反应器细胞培养,可以大规模生产优质Vero细胞人用狂犬病疫苗.
作者：查力；高军；侯剑英；白珠穆；袁德明；杨俊伟；李旭；李庆岸；陈焕玉；孙非非；赵红梅；周德水 刊期： 2006年第03期
目的观察连续静脉注射重组毒素LHRH-PE40所引起的家兔抗LHRH-PE40抗体产生的规律以及该抗体对细胞毒作用的影响.方法将家兔分为3组,第1组隔日连续静脉注射LHRH-PE40,第2组用弗氏佐剂乳化的LHRH-PE40皮下注射为阳性对照组,第3组静脉注射人血白蛋白为阴性对照组.用ELISA检测血清中的抗体水平,XTT检测LHRH-PE40与血清中和后对Hela细胞的细胞毒作用.结果抗LHRH-PE40抗体水平随静脉注射时间的延长而升高,8 d可以检测到抗LHRH-PE40抗体,在24 d基本达到高水平.血清中和后LHRH-PE40对Hela细胞的半数抑制量较阴性血清提高1～2倍,而阳性血清较阴性血清提高14倍.结论连续静脉注射LHRH-PE40产生较低水平的抗体,这种抗体未造成LHRH-PE40对Hela细胞半数抑制量产生严重影响,这为临床连续使用LHRH-PE40提供了依据.
作者：吴广谋；张国利；岳玉环；何畅；孟锐奇；李俊植；朱平 刊期： 2006年第03期
目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达HBV PreS2-MBP融合蛋白,并对其进行鉴定和纯化.方法利用DNA重组技术,将全长的HBV PreS2蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-P2x中,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测,并经阴离子交换层析、Amylose Resin亲和层析纯化.结果成功构建了重组载体pMAL-P2x/S2,诱导蛋白为MBP标记的可溶性的PreS2-MBP融合蛋白,具有良好的抗原性,可经Amylose Resin亲和层析纯化.结论 pMAL-P2x系统可成功表达PreS2-MBP融合蛋白.
作者：邵丽军；刘照惠；金立杰；李利；李猛；谷丽娟；赵晓林；杨屹 刊期： 2006年第03期
1.天花的危害及威胁天花是由天花病毒引起的急性病毒性传染病,是对人类具危害的疾病之一,在过去的几个世纪使千百万人丧生.在疫苗前时代,天花已成为婴幼儿的主要杀手.天花的感染者30%死亡,65%～80%的生存者留有深深的疤痕,且大部分集中在脸部.失明是天花的另一个后遗症.在18世纪的欧洲,三分之一的失明病例是由天花引起的.
作者：安焕宇；过琴媛 刊期： 2006年第03期
目的探讨Apoptin、HN和IL-18融合基因的重组鸡痘病毒(vFV3)对骨肉瘤细胞S180的抑制效应.方法 以vFV3感染人骨肉瘤细胞S180,应用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪分析vFV3感染致S180细胞周期变化,并用Rhodamine123染色结合FCM检测线粒体跨膜电位,从细胞生物学角度探讨vFV3致S180肿瘤细胞凋亡的途径.结果 vFV3感染可有效抑制S180肿瘤细胞,杀伤率达46.8%.感染使S180肿瘤细胞线粒体膜电位下降,导致S180肿瘤细胞凋亡.结论 vFV3可诱导S180肿瘤细胞凋亡,并主要通过线粒体途径诱导凋亡.
作者：张治宇；金宁一；李霄；张新；金毅；杨英欣；李力卓 刊期： 2006年第03期
目的研究A群溶血性链球菌制剂(康赛宁)对体外培养的人肝癌细胞系Hep3B和HepG22.2.15的影响及与乙肝疫苗联合免疫对小鼠的免疫增强作用.方法用不同浓度的康赛宁作用于人肝癌细胞Hep3B和HepG22.2.15,观察细胞形态学,MTT比色法检测细胞活性,EIA法检测培养上清HBsAg、HBeAg含量,吖啶橙直接染色检测细胞凋亡,Southern blot分析细胞DNA片段.给NIH小鼠腹腔注射康赛宁和乙肝疫苗,检测血清中HBs抗体、转氨酶水平.给普通小鼠腹腔注射康赛宁和乙肝疫苗,观察注射前后的体重变化.结果康赛宁可抑制HBsAg及HBeAg的分泌,使染色体DNA发生有规律的断裂,促使细胞发生凋亡.与乙肝疫苗联合免疫,可提高小鼠血清中HBs抗体水平.无论单用或合用康赛宁,对小鼠均无明显毒副作用.结论康赛宁对体外培养的人肝癌细胞系有影响,与乙肝疫苗联合免疫对小鼠有免疫增强作用.
作者：陈克金；刘建；喻刚；全家妩 刊期： 2006年第03期
目的进一步观察重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的免疫效果.方法选择江苏省响水县某中心小学学生及教师,经筛查HBsAg、anti-HBs和anti-HBc均为阴性的98名作为观察对象,使用10μg重组乙肝疫苗(CHO细胞),按0、1、6个月3针免疫程序进行免疫效果观察.结果全程免疫后1个月,85名学生中,抗-HBs阳性83名,阳转率为97.65%,GMT为172.50 mIU/ml,高可达498.12 mlU/ml.男性、女性的抗-HBs阳转率分别为97.50%和97.78%,GMT分别为170.11和148.42mIU/ml.结论 10μg重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)应用于小学生,免疫效果良好.
作者：孙俊业；徐冬冬；李德娟；王立成；陶航；陈胤忠；金立杰 刊期： 2006年第03期
目的探讨CCK-8对RSC-364细胞株TNF受体基因表达的影响.方法采用RT-PCR法检测不同浓度的八肽胆囊收缩素(CCK-8)对在TNF-α诱导下的大鼠滑膜细胞BSC-364 TNF受体(Tumor necrosisfactor receptor,TNFR)mRNA表达的影响.结果 CCK-8在10-6mol/L和10-7mol/L浓度时可抑制TNF-α诱导的TNFR2 mRNA在RSC-364细胞的表达,且表现了一定的剂量和时间依赖性,CCK受体拮抗剂丙谷胺则可抑制此作用.结论 CCK-8可抑制TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞RSC-364株TNFR2基因的表达.
作者：金玉怀；赵占胜；丛斌；徐锦荣；姚玉霞；李淑瑾；凌亦凌 刊期： 2006年第03期
目的探讨免疫化疗在肾癌根治术后的远期疗效.方法将50名经手术和病理证实为肾透明细胞癌的患者随机分成2组,化疗组25名,肾癌根治术后应用白细胞介素-2、干扰素和5-氟尿嘧啶治疗;对照组25名,行单纯肾癌根治术.比较2组术后生存率.结果观察1年,2组间生存率差异无显著意义(P＞0.05),而3年及5年化疗组生存率分别为92.0%和84.0%,明显高于对照组(分别为68.0%和48.0%),差异均有显著意义(P＜0.05).化疗组患者未发生严重副反应,药物治疗耐受性良好.结论肾癌术后免疫化疗可提高生存率.
作者：王家强；王焱民；李义；孙文涛；谢英林 刊期： 2006年第03期
目的分析Hib结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性.方法制备的Hib结合物经Sepharose CL-4B层析柱纯化,从中选5个不同位点取样,检测其生化特性及免疫原性.结果 1、2和3部分多糖蛋白质比例在0.4左右,高分子结合物含量均在80%以上,经高压液相分析,这3部分的相对分子质量均在1 400 000以上,免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答.第4部分高分子结合物含量在70%左右,相对分子质量约在670 000,免疫小鼠后也能产生较好的免疫应答.第5部分高分子结合物含量为23.7%,相对分子质量在50 000左右,基本是以游离状态存在的多糖和载体蛋白,免疫小鼠后仅能产生很低的免疫应答.结论 1、2和3部分是Hib结合物纯化中需收集的部分,第4部分虽也以结合状态存在,但相对分子质量相对较低,第5部分主要是游离的多糖和蛋白质.
作者：杜琳；谭小梅；宣俊文；蒋奕；刘月萍；谢贵林 刊期： 2006年第03期
目的探讨合成含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG ODN2006)对乙型肝炎疫苗增强小鼠特异性抗体产生的效应.方法采用BALB/c小鼠,经后腿胫骨前肌注免疫2次,ELISA法检测血清中抗-HBs IgG效价.结果疫苗+CpG组较疫苗组和空白对照组的抗-HBs IgG效价明显增高,且维持时间长.结论 CpG ODN2006对小鼠抗-HBs IgG的产生具有明显的增强作用.
作者：郑源强；石艳春；杨贵贞 刊期： 2006年第03期
目的制备对人肝癌细胞具有特异性杀伤活性的抗肝癌重组免疫毒素.方法利用大肠杆菌系统表达抗肝癌hdsFv-hEDN基因重组免疫毒素.表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化后,进行特异性杀伤活性检测.结果抗肝癌hdsFvhEDN重组免疫毒素以可溶性形式表达于大肠杆菌培养上清中,并获得有效纯化.ELISA法检测证实其具有与相应抗原特异性结合的活性.细胞毒试验表明对肝癌细胞具有杀伤作用,而对正常肝细胞无损伤.结论已成功地制备了具有特异性结合和杀伤活性的抗肝癌hdsFv-hEDN基因重组免疫毒素,为其进一步应用奠定基础.
作者：付勇；苏雪梅；刘彦仿；杨守京；赵君；邹赛英 刊期： 2006年第03期
超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内的一种清除超氧离子的重要酶类.人类的多种疾病与SOD的活性变化有关.本文以中华稻蝗为原料,经丙酮沉淀和硫酸铵盐析提纯SOD,取得了较好的效果,现简述如下.
作者：周艳利；李建科 刊期： 2006年第03期
目的克隆格氏菌素T基因,在原核细胞中表达,并检测其抑菌活性.方法通过PCR技术,从3株L.gasseri北京分离株中特异性扩增格氏菌素T的成熟肽DNA编码片段(V1-1/gatA和V44-1/gatA),经TA克隆和序列测定后,进行同源比较分析.双酶切后的目的片段与表达载体pGEX-6P-1连接,得到高效融合表达质粒pGEX-gatA/V1-1和pGEX-gatA/V44-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,IPTG诱导表达,并检测表达产物的抑菌活性.结果目的蛋白以包涵体形式表达,表达量约29%.重组格氏菌素对于金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、痢疾志贺氏菌和伤寒沙门氏菌具有明显的抑制生长作用.结论 所获得的重组格氏乳杆菌素具有明显的抑菌活性,有望成为新型抗菌素.
作者：李向红；赵建增；崔云龙；闫述翠；万阜昌 刊期： 2006年第03期
目的构建原核表达载体pET15b-PEP-1-SOD1,并进行PEP-1-SOD1融合蛋白表达和纯化.方法以pBluescript Ⅱ SK-SOD1质粒为模板,PCR扩增SOD1 cDNA.经酶切后,分别构建原核表达载体pET15b-SOD1和pET15b-PEP-1-SOD1,经测序证实构建成功后,分别转化E.coli BL21(DE3),表达SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白,并进行鉴定.结果 SDS-PAGE和Western blot分析表明,分别在相对分子质量22 000和26 000处出现SOD1和PEP-1-SOD1目标表达条带,目的蛋白占菌体总蛋白的30%,两种表达蛋白以天然的、可溶性的形式存在.结论已成功地制备出SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白.
作者：丁鹏；王家宁；杨波；黄永章；骆丽娜 刊期： 2006年第03期
目的利用凋亡素和IL-18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL-7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法.方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,构建重组质粒pVVP3IL-18,经脂质体介导,转染人肝癌细胞BEL-7402,AO/EB染色,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,透射电镜分析凋亡细胞超微结构变化.结果随着转染时间的延长,重组质粒pVVP3IL-18所表达的目的蛋白对BEL-7402细胞的杀伤作用逐渐增强,作用48 h,形态学观察表明BEL-7402细胞发生明显的凋亡,凋亡率可达(56.5±11.9)%,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,透射电镜观察可见细胞核固缩、染色质聚集等典型的凋亡超微结构变化.结论联合应用凋亡素与hIL-18基因,在体外对人肝癌细胞BEL-7402具有明显的凋亡诱导作用.
作者：连海；金宁一；李霄；陈立刚；张静敏；管国芳；孙丽丽；李雪梅；郑洪玲 刊期： 2006年第03期
目的了解冻干Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的稳定性.方法将冻干Vero细胞乙脑纯化疫苗分别放置在4℃、25℃、37℃和40℃下,按规定时间取样.用ELISA双抗体夹心法和小鼠效力试验检测其抗原单位和效力水平.结果在4℃下72周效力损失4.2%,25℃下24周效力损失4.5%,37℃下12周效力损失9.1%,40℃下4周效力损失15.2%.疫苗溶解后室温放置24h,效力无明显改变.结论冻干Vero细胞乙脑纯化疫苗在室温下稳定性良好.
作者：王辉；张月兰；张颖；张晋；钟书声；罗书荣 刊期： 2006年第03期
目的分析三个代次CTN-1-V病毒株糖蛋白(GP)基因部分序列,并与代表性街毒株进行比较.方法利用RT-PCR反应,从感染了CTN-1-V病毒的小鼠脑内获得GP cDNA的部分片段,并进行序列测定.结果三个代次的CTN-1-V病毒株GP cDNA序列的690个核苷酸与代表性狂犬病毒GP核苷酸相应序列同源性为83.2%～96.8%,氨基酸序列同源性为90.0%～97.4%.CTN-1-V株三代之间的核苷酸序列几乎相同.结论 CTN-1-V株在传代过程中GP基因结构基本稳定,与中国流行的代表性街毒株的同源性高于aG株和PV株.
作者：明平刚；孙文；徐葛林；吴杰；杨晓明；严家新 刊期： 2006年第03期
目的克隆宫颈癌病理组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)晚期蛋白(L1)的基因,并构建真核表达质粒,为制备预防性疫苗奠定基础.方法采用PCR法从宫颈癌病理标本中扩增出HPV16 L1基因,与pMD18-T载体连接,测序并构建真核表达质粒(pVAX1-L1),瞬时转染Cos-7细胞,利用免疫组化技术检测表达产物.通过小鼠淋巴细胞转化试验检测免疫原性.结果所得L1基因的序列与GenBank中序列比较存在若干变异,并由此引起相应的氨基酸发生变化.pVAX1-L1瞬时转染Cos-7细胞,经免疫组化技术检测到棕黄色免疫复合物的形成,说明有表达产物L1蛋白产生.淋巴细胞转化试验结果显示,试验组与对照组差异有显著意义.结论宫颈癌病理组织中HPV16 L1基因序列存在一定程度的变异,所得L1基因表达产物具有生物学活性.
作者：刘大维；刘景晔；王鹏富；姜春来；于湘晖；孔维 刊期： 2006年第03期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
