王辉；张月兰；张颖；张晋；钟书声；罗书荣
1.天花的危害及威胁天花是由天花病毒引起的急性病毒性传染病,是对人类具危害的疾病之一,在过去的几个世纪使千百万人丧生.在疫苗前时代,天花已成为婴幼儿的主要杀手.天花的感染者30%死亡,65%～80%的生存者留有深深的疤痕,且大部分集中在脸部.失明是天花的另一个后遗症.在18世纪的欧洲,三分之一的失明病例是由天花引起的.
作者：安焕宇；过琴媛 刊期： 2006年第03期
目的探讨合成含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG ODN2006)对乙型肝炎疫苗增强小鼠特异性抗体产生的效应.方法采用BALB/c小鼠,经后腿胫骨前肌注免疫2次,ELISA法检测血清中抗-HBs IgG效价.结果疫苗+CpG组较疫苗组和空白对照组的抗-HBs IgG效价明显增高,且维持时间长.结论 CpG ODN2006对小鼠抗-HBs IgG的产生具有明显的增强作用.
作者：郑源强；石艳春；杨贵贞 刊期： 2006年第03期
目的重组表达Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白(Surface immunogenic protein,SIP)基因,为进一步免疫学研究提供目标蛋白.方法用PCR的方法从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出SIP基因,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体,构建原核表达载体pET32a-SIP,用BI21(DE3)/pET系统表达Trix-SIP融合蛋白,SDS-PAGE和质谱分析鉴定表达产物,并对表达蛋白进行初步纯化.结果 PCR扩增产物经测序,证实与GenBank中I a/c型GBS的SIP的基因序列同源性为99%.SDS-PAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET32a-SIP总蛋白中出现一条相对分子质量为66 000的新蛋白带.质谱分析和蛋白质库的比较证实其为B族链球菌表面免疫相关蛋白(SIP)的可能性分数为74.结论已成功表达并初步纯化SIP,为SIP在细菌致病中的作用研究以及相关疫苗的制备奠定了基础.
作者：岳丽琴；沈叙庄；张华捷；王咏红；俞桑洁；杨永弘 刊期： 2006年第03期
目的探讨Apoptin、HN和IL-18融合基因的重组鸡痘病毒(vFV3)对骨肉瘤细胞S180的抑制效应.方法 以vFV3感染人骨肉瘤细胞S180,应用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪分析vFV3感染致S180细胞周期变化,并用Rhodamine123染色结合FCM检测线粒体跨膜电位,从细胞生物学角度探讨vFV3致S180肿瘤细胞凋亡的途径.结果 vFV3感染可有效抑制S180肿瘤细胞,杀伤率达46.8%.感染使S180肿瘤细胞线粒体膜电位下降,导致S180肿瘤细胞凋亡.结论 vFV3可诱导S180肿瘤细胞凋亡,并主要通过线粒体途径诱导凋亡.
作者：张治宇；金宁一；李霄；张新；金毅；杨英欣；李力卓 刊期： 2006年第03期
目的探讨甲1(A1)型流感病毒在Vero细胞和MDCK细胞培养的可行性,确定佳培养条件.方法将流感病毒接种于Vero细胞和MDCK细胞,在含有不同浓度胎牛血清或胰酶维持液中培养,于不同时间收获病毒液,检测血凝素滴度(HA).结果胎牛血清对病毒的繁殖有明显抑制作用.加入适量胰酶(约5μg/ml)可提高病毒产量.佳收获病毒时间为72～96 h.在MDCK细胞上的病毒HA滴度高于Vero细胞.结论两种组织细胞培养流感病毒结果相近,Vero细胞和MDCK细胞均可用于培养流感病毒.
作者：戚凤春；汪春义；张雪梅；王亚军；李晓波；贾媛；赵大鹏；盛军 刊期： 2006年第03期
目的构建可以指导外源基因在动物乳腺组织特异表达的调控序列--牛α-S1酪蛋白基因调控序列.方法 提取新生小牛肝组织的DNA,应用PCR分段扩增牛α-S1酪蛋白基因调控序列,经琼脂糖凝胶电泳鉴定后测序,再将各基因片段连接成完整的序列.并将外源基因ALB亚克隆入该调控序列内,转染C127细胞,经免疫组化法检测其表达情况.结果 乳腺生物反应器特异调控序列--牛α-S1酪蛋白基因调控序列,包括其1.8kb上游序列、第一外显子、第一内含子、包含翻译起始位点的第二外显子和部分第二内含子,及其后一个内含子的大部分、后一个不翻译的外显子(含多聚A信号)及侧翼区全长5.8kb.位于该调控序列内的ALB高效表达.结论成功构建乳腺生物反应器特异调控序列--牛α-S1酪蛋白基因调控序列,此调控序列对外源基因的表达有正调控作用.
作者：蒋小玲；张红梅；徐六妹；王火生；乐晓华；李丽雄；周伯平 刊期： 2006年第03期
目的分析CD109基因在正常组织及脑癌组织中的分布.方法采用实时荧光定量PCR方法,分析CD109在人、鼠正常组织及脑癌中的表达,以18S rRNA作为内标.结果 CD109蛋白的mRNA丰度在睾丸组织中高,在其它组织中较低,在12份脑癌标本中,检测到9份CD109表达上调.结论 CD109基因在多数正常组织中表达很少,有可能是治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点.
作者：张静敏；金宁一；连海；李宵；孙迎春；安汝国；高桥雅英 刊期： 2006年第03期
目的分离纯化Pichia酵母表达的重组人可溶性TRAIL,并检测其生物活性.方法以Pichia酵母分泌型表达TRAIL,采用硫酸铵沉淀和柱层析纯化可溶性TRAIL蛋白.以SDS-PAGE、ESI-MS和Western blot法鉴定其纯度及特异性.以细胞透射电镜、DNA Ladder和MTT法检测其诱导肿瘤细胞凋亡活性.结果目的蛋白以可溶形式存在,蛋白相对分子质量22 000,纯化后纯度95%.Western blot证实为TRAIL蛋白.电镜、DNA Ladder和MTT均证实其具有诱导肿瘤细胞凋亡活性.结论 Pichia酵母表达rhsTRAIL可用柱层析法纯化,并具有诱导肿瘤细胞凋亡的生物活性.
作者：李茹冰；傅泳航；李继东；佟明华；杨联萍；孔祥平 刊期： 2006年第03期
目的建立HIV抗体国家参考品(胶体金类试剂)并对其应用效果进行分析.方法通过对阳性和阴性样品的筛选,确定候选参考品的组成,经标定,确定参考品的质量标准,并以此为标准对试剂的质量进行检测和评估.结果参考品由20份阳性、20份阴性、3份低检测限和1份精密性样品组成.质量标准为20份阳性样品,应均为阳性,20份阴性样品中应至少18份为阴性,低检测限样品应至少1份为阳性,且稀释用血浆应为阴性,精密度样品检测10次,其颜色反应一致.共检测进口注册、国内注册以及常规检定样品189批,其中进口注册样品合格率为81.8%,国内注册样品合格率为80.8%,常规检定样品合格率为96.2%.结论该参考品可反映试剂的质量水平,对保证试剂的质量具有重要作用.
作者：李秀华；宋爱京；尹红章；王佑春 刊期： 2006年第03期
目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达HBV PreS2-MBP融合蛋白,并对其进行鉴定和纯化.方法利用DNA重组技术,将全长的HBV PreS2蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-P2x中,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测,并经阴离子交换层析、Amylose Resin亲和层析纯化.结果成功构建了重组载体pMAL-P2x/S2,诱导蛋白为MBP标记的可溶性的PreS2-MBP融合蛋白,具有良好的抗原性,可经Amylose Resin亲和层析纯化.结论 pMAL-P2x系统可成功表达PreS2-MBP融合蛋白.
作者：邵丽军；刘照惠；金立杰；李利；李猛；谷丽娟；赵晓林；杨屹 刊期： 2006年第03期
目的研究麻疹乙脑二联减毒活疫苗的安全性及免疫原性.方法采用麻疹沪191毒株和乙型脑炎SA14-14-2毒株分别制备的病毒原液,进行配比和干扰试验,制备成二联疫苗,冻干后免疫小白鼠和猴子,观察安全性和免疫原性,然后进行人体观察.结果麻疹病毒原液与乙脑病毒原液的佳混合比例(体积比)为1:2.注射小白鼠后安全性良好,且产生较好的乙脑免疫应答.注射猴子后无异常反应,神经组织病理学变化轻微,麻疹和乙脑中和抗体效价与各自的单价苗差异无显著意义.人体临床观察一般情况良好,无局部及全身反应.结论所研制的麻疹乙脑二联减毒活疫苗安全性及免疫原性良好,可推广使用.
作者：姚亚夫；张卓光；周本立；曾立学；刘瑛；王洪彬；廖轶；卢德芬 刊期： 2006年第03期
目的观察连续静脉注射重组毒素LHRH-PE40所引起的家兔抗LHRH-PE40抗体产生的规律以及该抗体对细胞毒作用的影响.方法将家兔分为3组,第1组隔日连续静脉注射LHRH-PE40,第2组用弗氏佐剂乳化的LHRH-PE40皮下注射为阳性对照组,第3组静脉注射人血白蛋白为阴性对照组.用ELISA检测血清中的抗体水平,XTT检测LHRH-PE40与血清中和后对Hela细胞的细胞毒作用.结果抗LHRH-PE40抗体水平随静脉注射时间的延长而升高,8 d可以检测到抗LHRH-PE40抗体,在24 d基本达到高水平.血清中和后LHRH-PE40对Hela细胞的半数抑制量较阴性血清提高1～2倍,而阳性血清较阴性血清提高14倍.结论连续静脉注射LHRH-PE40产生较低水平的抗体,这种抗体未造成LHRH-PE40对Hela细胞半数抑制量产生严重影响,这为临床连续使用LHRH-PE40提供了依据.
作者：吴广谋；张国利；岳玉环；何畅；孟锐奇；李俊植；朱平 刊期： 2006年第03期
目的利用凋亡素和IL-18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL-7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法.方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,构建重组质粒pVVP3IL-18,经脂质体介导,转染人肝癌细胞BEL-7402,AO/EB染色,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,透射电镜分析凋亡细胞超微结构变化.结果随着转染时间的延长,重组质粒pVVP3IL-18所表达的目的蛋白对BEL-7402细胞的杀伤作用逐渐增强,作用48 h,形态学观察表明BEL-7402细胞发生明显的凋亡,凋亡率可达(56.5±11.9)%,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,透射电镜观察可见细胞核固缩、染色质聚集等典型的凋亡超微结构变化.结论联合应用凋亡素与hIL-18基因,在体外对人肝癌细胞BEL-7402具有明显的凋亡诱导作用.
作者：连海；金宁一；李霄；陈立刚；张静敏；管国芳；孙丽丽；李雪梅；郑洪玲 刊期： 2006年第03期
目的应用生物反应器培养细胞和病毒,大规模生产人用狂犬病疫苗.方法以巴斯德PV2061为毒种,以143代以内Vero细胞为培养基质,应用生物反应器,每升投放25g微载体,灌流式细胞培养,连续收获病毒液,经浓缩、灭活、纯化,制成Vero细胞狂犬病疫苗.结果细胞培养密度达1.2×107～1.5×107个/ml,病毒感染后可连续收获18～22 d,病毒高滴度8.5 LogLD50/ml,平均滴度7.6 LogLD50/ml.经柱层析纯化,杂蛋白去除率达99.95%以上,总蛋白含量≤80μg/g,DNA含量≤10 pg/0.5ml,GP含量3.5～4.5 IU/0.5ml,效力≥4.5 IU/0.5ml.结论应用生物反应器细胞培养,可以大规模生产优质Vero细胞人用狂犬病疫苗.
作者：查力；高军；侯剑英；白珠穆；袁德明；杨俊伟；李旭；李庆岸；陈焕玉；孙非非；赵红梅；周德水 刊期： 2006年第03期
目的分析Hib结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性.方法制备的Hib结合物经Sepharose CL-4B层析柱纯化,从中选5个不同位点取样,检测其生化特性及免疫原性.结果 1、2和3部分多糖蛋白质比例在0.4左右,高分子结合物含量均在80%以上,经高压液相分析,这3部分的相对分子质量均在1 400 000以上,免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答.第4部分高分子结合物含量在70%左右,相对分子质量约在670 000,免疫小鼠后也能产生较好的免疫应答.第5部分高分子结合物含量为23.7%,相对分子质量在50 000左右,基本是以游离状态存在的多糖和载体蛋白,免疫小鼠后仅能产生很低的免疫应答.结论 1、2和3部分是Hib结合物纯化中需收集的部分,第4部分虽也以结合状态存在,但相对分子质量相对较低,第5部分主要是游离的多糖和蛋白质.
作者：杜琳；谭小梅；宣俊文；蒋奕；刘月萍；谢贵林 刊期： 2006年第03期
目的探讨免疫化疗在肾癌根治术后的远期疗效.方法将50名经手术和病理证实为肾透明细胞癌的患者随机分成2组,化疗组25名,肾癌根治术后应用白细胞介素-2、干扰素和5-氟尿嘧啶治疗;对照组25名,行单纯肾癌根治术.比较2组术后生存率.结果观察1年,2组间生存率差异无显著意义(P＞0.05),而3年及5年化疗组生存率分别为92.0%和84.0%,明显高于对照组(分别为68.0%和48.0%),差异均有显著意义(P＜0.05).化疗组患者未发生严重副反应,药物治疗耐受性良好.结论肾癌术后免疫化疗可提高生存率.
作者：王家强；王焱民；李义；孙文涛；谢英林 刊期： 2006年第03期
目的人工合成人GnRH及转运肽(TRS)基因.方法根据已发表的人GnRH基因mRNA序列以及转运肽(9个左旋精氨酸)基因核苷酸序列,设计一对核苷酸,再用含7 mol/L尿素的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化,然后以这对核苷酸3′末端短互补序列退火、补齐,合成长达90 bp的目的序列GnRH/TRS.将其亚克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pYC1.酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC1,并测序.结果 GnRH/TRS序列由90个核苷酸组成,扩增产物与原设计序列同源性达100%.结论已成功合成人GnRH/TRS基因,为进一步研究和应用奠定基础.
作者：金元昌；刘利；苏晓艳；李景鹏；李会东；向育君；周建红 刊期： 2006年第03期
目的了解冻干Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的稳定性.方法将冻干Vero细胞乙脑纯化疫苗分别放置在4℃、25℃、37℃和40℃下,按规定时间取样.用ELISA双抗体夹心法和小鼠效力试验检测其抗原单位和效力水平.结果在4℃下72周效力损失4.2%,25℃下24周效力损失4.5%,37℃下12周效力损失9.1%,40℃下4周效力损失15.2%.疫苗溶解后室温放置24h,效力无明显改变.结论冻干Vero细胞乙脑纯化疫苗在室温下稳定性良好.
作者：王辉；张月兰；张颖；张晋；钟书声；罗书荣 刊期： 2006年第03期
目的观察干扰素α2a联合美能治疗慢性丙型肝炎的疗效.方法 52名临床确诊为慢性丙型肝炎的患者接受干扰素α2a与美能的联合治疗,以同期49名慢性丙型肝炎患者单独接受干扰素α2a治疗为对照组,治疗前后观察肝功能、肝纤维化指标、HCV RNA及肝穿活检结果.结果总胆红素、ALT、AST、HA、LN、IVC的改善程度治疗组明显优于对照组(P＜0.05),病毒清除率治疗组为53.8%,对照组为38.8%(P＜0.05),肝穿活检结果改善情况治疗组与对照组差异有非常显著意义(P＜0.01).结论干扰素α2a联合美能对慢性丙型肝炎的临床及病理学指标均有明显改善,优于单独使用干扰素.
作者：王明；孙海英 刊期： 2006年第03期
目的探讨CCK-8对RSC-364细胞株TNF受体基因表达的影响.方法采用RT-PCR法检测不同浓度的八肽胆囊收缩素(CCK-8)对在TNF-α诱导下的大鼠滑膜细胞BSC-364 TNF受体(Tumor necrosisfactor receptor,TNFR)mRNA表达的影响.结果 CCK-8在10-6mol/L和10-7mol/L浓度时可抑制TNF-α诱导的TNFR2 mRNA在RSC-364细胞的表达,且表现了一定的剂量和时间依赖性,CCK受体拮抗剂丙谷胺则可抑制此作用.结论 CCK-8可抑制TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞RSC-364株TNFR2基因的表达.
作者：金玉怀；赵占胜；丛斌；徐锦荣；姚玉霞；李淑瑾；凌亦凌 刊期： 2006年第03期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
