陈兰英；高富荣；张玉焕；谢素嫩
目的 获得高纯度的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.方法 以Vif/VR1o12质粒为模板,PCR扩增出Vif-△N28基因并插入pRSETB质粒.将构建的原核表达载体Vif-△N28/pRSETB以及已有的Cullin5-N138/pRSETB质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,产物经Ni-NTA离子纯化柱纯化、复性.结果 所表达的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白约占各自菌体总蛋白的20%,纯化后蛋白纯度均可达90%以上.结论 已成功构建了Vif-△N28原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达,获得了可溶性的纯化的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.
作者：张文艳；楼朝平；朱可彤；张帆；姜春来；吴永革；于湘晖；孔维 刊期： 2006年第05期
目的 建立PC12细胞检测蛇毒NGF活性的方法.方法 在有血清条件下,观察NGF诱导PC12细胞分化情况.在无血清条件下,以SRB染色定量NGF维持PC12细胞存活数量,计算NGF效价,并与鸡胚背根神经节法比较.结果 在有血清条件下,NGF能诱导PC12细胞分化,出现神经突触样生长.在无血清条件下,NGF浓度对数值与PC12细胞数呈直线相关,标准品与样品的生物效应平行性良好,以量反应平行线法可计算样品的NGF平均效价为1 108.3 U/ml,与鸡胚背根神经节法检测结果相符.结论 该法简便易行,定量准确,重复性好,实验周期短.
作者：骆鹏；谭亚军；田霖；张庶民 刊期： 2006年第05期
目的 研究重组人血白蛋白与小分子药物的结合功能.方法 在366 nm下检测地西泮与人血白蛋白结合前后吸收值的变化,计算二者的结合常数;华法令与人血白蛋白结合后,用SephadexG-25 HPLC柱进行分离,对游离华法令和二者结合产物分别积分,得到华法令与人血白蛋白的结合率.结果 重组人血白蛋白与地西泮的结合常数为14.68 mol Diazepam/mol rHSA,天然人血白蛋白与地西泮结合常数为12.82 mol Diazepam/mol HAS.重组人血白蛋白中华法令的结合率为8.69%,而天然人血白蛋白中华法令的结合率为6.73%.结论 重组人血白蛋白与天然人血白蛋白小分子药物结合功能基本一致.
作者：陶苒；李梅彦；王慧欣；董爱华；贾茜 刊期： 2006年第05期
目的 研究冻干甲乙型肝炎联合疫苗组分的相容性.方法 将所制备的联合疫苗与同批单价甲型肝炎减毒活疫苗及重组乙型肝炎疫苗进行甲肝病毒滴度和乙肝疫苗效力检测,同时分别以联合疫苗与甲型肝炎减毒活疫苗及重组乙型肝炎疫苗接种恒河猴,检测甲肝抗体和HBsAb阳转率.结果 该联合疫苗与同批单价疫苗的甲肝病毒滴度和乙肝疫苗效力及诱导猴体的甲肝抗体和HBsAb阳转率差异均无显著意义.结论 冻干甲乙型肝炎联合疫苗组分间无拮抗作用,具有相容性.
作者：刘令九；谢宝生；官桂范；李淑焱；薛勇；岳丹；刘景晔；王鹏富 刊期： 2006年第05期
目的 对在大肠杆菌中表达的重组人肝再生增强因子(rhALR)进行分离纯化及生物学活性分析.方法 以大肠杆菌DH5α发酵表达重组人肝再生增强因子,经包涵体洗涤、变性、目的蛋白复性,以离子交换、分子筛等技术纯化,并进行一系列检定.结果 目的 蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及柱层析纯化,纯度大于98%,SDS-PAGE测定相对分子质量为30 000,MOLDI-TOF-MS测定其相对分子质量为30 780.522,N-末端15个氨基酸与理论序列一致.Western blot证实rhALR正确表达,等电点5.85～6.85,氨基酸含量与理论值基本符合.动物实验证实rhALR具有明显的促进CCl4毒性肝损伤小鼠肝细胞修复活性.结论 经柱层析纯化的rhALR具有促进小鼠CCl4肝损伤肝细胞修复的活性.
作者：李茹冰；王治伟；傅泳航；易学瑞；曾平鲁；邹清雁；佟明华；潘韵；杨联萍；孔祥平 刊期： 2006年第05期
目的 在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力.方法 构建11kD蛋白编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白.以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定.结果 结核分枝杆菌11kD蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白占总菌体蛋白的33%以上,纯化后纯度达95%以上,并可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,5 μg/ml11kD蛋白的效力与50 IU/ml TB-PPD相当.结论 重组11 kD蛋白已在大肠杆菌中成功表达,并有望成为结核病皮试鉴别诊断用新试剂.
作者：陈保文；徐苗；徐敬华；沈小兵；苏城；王国治 刊期： 2006年第05期
目的 探讨红系细胞分化中细胞生长及相关转录因子表达的变化.方法 利用红白血病细胞株HB60-5的生长特性,通过改变培养条件,促使细胞向成熟细胞分化.绘制细胞生长曲线,应用Northern blot方法检测诱导分化过程中红系造血相关基因表达变化.结果 HB60-5细胞随着诱导分化时间的延长,生长减慢,红系分化标记α-珠蛋白表达逐渐升高,同时伴有GATA-1、p45NF-E2、EDRF等基因表达上调,Fli-1基因表达下调.结论 红系分化过程中,细胞增殖受到抑制,红系细胞分化的基因表达上调,红系细胞增殖的基因表达下调.
作者：谭业辉；王畅；王冠军 刊期： 2006年第05期
目的 分离纯化癌细胞中热休克蛋白70(HSP70)-多肽复合物.方法 以食管癌组织为材料,通过一系列的层析柱(ConA-Sepharose、ADP-Agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱)进行分离及纯化.结果 所分离纯化的HSP70-多肽复合物相对分子质量与预期相符.结论 为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了具体方法,并为研制多肽疫苗奠定了基础.
作者：陈兰英；高富荣；张玉焕；谢素嫩 刊期： 2006年第05期
目的 考察蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)存放于不同温度、不同时期的质量稳定性,以及内包装材料对制品质量稳定性的影响.方法 将静注人免疫球蛋白(pH4)分别放置于2～8℃和20～25℃的条件下,定期取样.依照<中国生物制品规程>(2000年版)的相应标准进行检测,并比较进口与国产模制瓶灌装对产品质量的影响.结果 静注人免疫球蛋白(pH4)在2～8℃条件下存放2年后,与出厂时的检验结果比较,质量指标无显著变化;在20～25℃条件下存放2年后,分子大小分布、抗-HBs效价、浊度等质量指标变化显著.静注人免疫球蛋白(pH4)灌装于进口模制瓶的质量稳定性优于国产模制瓶.结论 蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)保存在2～8℃在有效期内质量稳定.
作者：江砚芳；贺娟；苏志芬；王黔川；张月星；刘素芳；杨汇川；曲蓬 刊期： 2006年第05期
目的 制备酶联免疫乙型脑炎病毒抗原定量检测试剂,用于乙型脑炎灭活疫苗中抗原定量检测.方法 分别用2株杂交瘤细胞分泌的抗乙型脑炎病毒单克隆抗体作为包被和标记物,配以辅助试剂,建立酶联免疫检测系统,用经标化的乙型脑炎疫苗参考品绘制定量标准曲线,对试剂各项技术指标进行验证.结果 试剂对乙型脑炎病毒抗原的佳定量范围是0.131～0.666 ELISA单位(EU/ml),标准曲线相关系数r=0.996,平均变异系数CV小于10%.与NIH法测定结果相比较,相关有非常显著意义(P＜0.01).对2批乙型脑炎疫苗9次测定,变异系数分别为2.7%和4.4%.结论 试剂的精密性和准确度高,特异性和稳定性可靠,可用于乙型脑炎疫苗中的抗原定量检测.
作者：张国强；冯素英；沈淑芹；王晋；施彤；张月兰；张影 刊期： 2006年第05期
目的 比较体外软琼脂克隆法与裸鼠体内接种法检测细胞致瘤性的敏感性及相关性.方法 用软琼脂克隆法检测不同种类、不同来源的细胞的致瘤性,并与裸鼠体内接种法的结果进行比较.结果 不同的细胞在体外软琼脂中形成细胞集落的能力及集落形态明显不同.肿瘤细胞在体外可形成肉眼可见的细胞集落,而人二倍体细胞及组织工程用细胞在体外不形成或仅形成极少的细胞集落克隆,其集落形成率与细胞代次没有相关性,在裸鼠体内亦不形成瘤.重组CHO细胞经过遗传改造后,有的在裸鼠体内的致瘤性减弱,但体外软琼脂克隆行为没有发生明显改变.从128至169代次的Vero细胞均可在体外软琼脂中形成不同的细胞集落克隆,高代次细胞的集落形成率明显高于低代次细胞,但所有检测代次的细胞在裸鼠体内均未形成瘤.结论 用软琼脂克隆法检测细胞的致瘤性与裸鼠体内接种法不仅具有良好的相关性,而且敏感性高于裸鼠体内接种法.
作者：孟淑芳；林林；李修兰；冯建平；王佑春；李德富 刊期： 2006年第05期
本文应用放射性示踪技术对大鼠口服3H-RNA药代动力学参数和吸收规律进行了分析,现报道如下.
作者：李恕；刘庆莹；李怀芬；牛惠生 刊期： 2006年第05期
本文就乙型肝炎免疫球蛋白应用效果、作用机理及应用中存在的问题等作了全面综述.
作者：周海云；曾鸣 刊期： 2006年第05期
目的 建立破伤风抗毒素细菌内毒素的检测方法.方法 确定内毒素限值和供试品溶液的大有效稀释倍数,制备供试品溶液;用细菌内毒素工作标准品作鲎试剂灵敏度复核试验,用供试品溶液在大有效稀释倍数下作干扰试验,在前者试验有效,且后者试验无干扰作用时,在该浓度下对供试品进行凝胶限量试验,并与热原检查法比较.结果 检测的10批破伤风抗毒素细菌内毒素的限量与热原检查法热原的限度完全相符.结论 凝胶限量法可以替代热原检查法,对破伤风抗毒素进行细菌内毒素的限量检测.
作者：白春杰；夏天瑶；薛向光；张梅；柳春红；杨琳 刊期： 2006年第05期
目的 研究人用皮内注射布氏菌活疫苗的毒理及药效学作用,以评价其可行性.方法 对布氏菌活疫苗进行小白鼠急性毒性试验、局部刺激试验、全身过敏试验、长期毒性试验及豚鼠皮肤变态反应试验并免疫小鼠,进行血清抗体检测.结果 小鼠皮内注射布氏菌活疫苗的大耐受量为1.0×109个菌,用布氏菌素注射足底,可引起明显的迟发型变态反应.局部刺激试验,只有注射1.0×109个菌的部位会在48 h后化脓,但在1～2周内可自愈.全身过敏试验均未出现任何异常反应,毒性试验、各项血常规、血生化检查均未见显著差异,各脏器组织的病理学检查亦未见病理改变.免疫12周后,对豚鼠骨髓造血细胞亦无影响.对皮内免疫12周的豚鼠作背部皮肤变态反应试验,24～48 h结果为阳性.皮内免疫小鼠14 d后可测得小鼠体内有抗体产生,50 d后测得小鼠体内抗体均呈强阳性,对照组小鼠14 d与50 d抗体检测均为阴性.结论 毒理和药效学试验结果显示,布氏菌活疫苗用皮内注射的途径进行免疫是可行的.
作者：李恪梅；王秉翔；薛晓红；肖忻；王燕；徐苗；陈保文；沈小兵；王国治 刊期： 2006年第05期
目的 调查四川地区宫颈癌患者组织中高危人乳头瘤病毒(HPV)33、52和58亚型的感染状况及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的HPV疫苗提供流行病学资料.方法 采用PCR技术,并结合基因测序分析.结果 对四川地区2003～2004年60份宫颈癌患者癌组织DNA进行HPV检测,获得HPV52和HPV58亚型各4份,检出率为6.7%;HPV33亚型1份,检出率为1.7%.对所获得的各份HPV33、52和58E6基因测序,均有碱基突变.结论 HPV52型感染率在四川地区相对较高.与GenBank标准株相比,四川地区发现的HPV33和HPV52 E6基因有多处突变,与日本发现的HPV33和HPV52突变株相近.
作者：邱爱东；乌恩奇；任源；于湘晖；吴永革；金英花；姜春来；查晓；孔维 刊期： 2006年第05期
目的 构建产气荚膜梭菌α-β2-β1融合蛋白基因表达载体,并对表达产物进行鉴定.方法 利用PCR技术,从含α毒素基因的质粒pXCPA02中扩增出α毒素基因,经NcoⅠ酶切,回收0.95kb的α基因片段,再与经NcoⅠ酶切并含融合基因β1-β2的质粒pXETB1B2连接,获得重组质粒pXETAB2B1,经Nco Ⅰ、BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切鉴定,并对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 重组质粒pXETAB2B1含有α-β2-β1融合基因.表达产物相对分子质量约为95 000,并可被特异性抗体识别.结论 已获得高效表达α-β2-β1的重组菌株.
作者：韩学波；许崇波；曾瑾；王玉炯 刊期： 2006年第05期
目的 建立大规模制备天花疫苗的方法.方法 用SPF鸡胚细胞培养痘苗病毒,经细胞破碎、膜过滤提取痘苗病毒,加保护剂制得天花疫苗.结果 疫苗经检测,动物免疫效果和疫苗稳定性良好.结论 此方法可以用于大规模制备天花疫苗,疫苗质量符合1979版<中国生物制品规程>要求.
作者：安焕宇；范淑兰；安丽颖；韩亚儒；过琴媛 刊期： 2006年第05期
目的 建立碘化钾快速提取外周血基因组DNA的方法.方法 采用碘化钾法和酚/氯仿提取法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行人类生长激素(HGH)基因片段的扩增及鉴定.结果 此方法提取的DNA量大,DNA体外扩增结果稳定.结论 该方法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备.
作者：鞠海英；刘亚珍；刘永茂；李勇 刊期： 2006年第05期
目的 建立重组人白介素-12(rhIL-12)的生物学活性检测方法.方法 采用重组人白介素-12刺激外周血淋巴细胞分泌IFN-γ,并用国际标准品校正,进行生物学活性检测.结果 用该方法对重组人白介素-12成品及原液进行检测,成品比活性平均值为1 037 460 IU/mg,变异系数为26.0%(n=5);原液比活性平均值为1 262 270 IU/mg,变异系数为16.8%(n=5).结论 该方法检测结果准确、客观,重复性好,可用于重组人白介素-12生物学活性的常规检测.
作者：王威；饶春明；王军志 刊期： 2006年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
