刘令九；谢宝生；官桂范；李淑焱；薛勇；岳丹；刘景晔；王鹏富
目的 建立重组人红细胞生成素二聚体工程细胞株.方法 用重组人红细胞生成素二聚体表达载体转染COS-7细胞,通过dot blot进行检定.然后对CHO-dhfr-细胞进行稳定转染,再经过稀释克隆和MTX的加压扩增,筛选二聚体工程细胞株并进行传代及无血清培养基培养、目的蛋白纯化及检测.结果 瞬时转染70 h细胞有目的蛋白表达.稳定转染后选取表达量高的细胞株为工程细胞株.该细胞株连续传15代及经无血清培养基培养,目的蛋白表达量均无明显下降.所表达的目的蛋白相对分子质量为70 000,并具有高度特异性.结论 已获得稳定高效表达重组人红细胞生成素二聚体的工程细胞株.
作者：李秋生；张春莉；李金凤；有红霞；李景利 刊期： 2006年第05期
目的 对乳鼠的心肌细胞进行原代培养方法的改进.方法 参照乳鼠心肌细胞原代培养方法,并进行改进,选用Ⅱ型胶原蛋白酶及IMDM培养液进行消化和培养,减少了消化及离心时间,差速贴壁分离纯化后,加入5-溴脱氧核苷抑制成纤维细胞污染.结果 本方法培养的心肌细胞存活率为95.6%,培养2～5 d观察,视野中绝大多数为已搏动的心肌细胞和心肌细胞团,成纤维细胞无明显增殖.结论 本方法是一种较为理想的乳鼠心肌细胞原代培养方法.
作者：陈妍；王振远；郭秀侠；于洪涛；邓英杰 刊期： 2006年第05期
目的 对转基因人参CS83细胞系表达HBsAg的特异性、稳定性及表达效率进行分析.方法 提取CS83细胞表达蛋白,分别以Lowry法和ELISA法检测总蛋白含量和HBsAg含量,SDS-PAGE和Western blot分析表达蛋白的HBsAg特异性.采用冷冻干燥、干燥和低温处理方法检测CS83细胞中HBsAg的稳定性.结果 CS83细胞表达产物中总蛋白含量为2.024 mg/g,HBsAg含量为504 ng/g,占总蛋白含量的0.025%.表达的目的蛋白相对分子质量约为25 000,具有HBsAg特异性.经不同方法处理后的保存结果表明,冻干保存稳定性好.结论 所建立的CS83细胞系能够稳定地表达特异性HBsAg.
作者：吉海滨；刘丹；刘黎红；李娟；于海鹏；富锐丽；李铮；盛军 刊期： 2006年第05期
目的 获得丙型肝炎病毒(HCV)C-NS3嵌合抗原,以提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量.方法 应用SOE-PCR(拼接重叠延伸PCR)的方法,构建了HCV的C区和NS3区的嵌合基因,克隆于表达载体pGEX-4T3,并转化于大肠杆菌BL21,经筛选,IPTG诱导HCV的C-NS3嵌合抗原的表达.经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测抗原特异性.结果 SOE-PCR构建的HCV C区和NS3区嵌合基因在BL21中获得表达.经鉴定,其相对分子质量约为75 000,并具有高度特异性.结论 已获得HCV C-NS3嵌合抗原,为提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量奠定了基础.
作者：彭祥兵；余健；黄仕和；周志军；李健；朱华松；张爱华；闭兰；赵亚杰；余模松 刊期： 2006年第05期
钩端螺旋体外膜蛋白在钩端螺旋体的致病与免疫应答过程中起着十分重要的作用,它在疾病感染时既可以作为一种外膜毒性物质,又可以作为一种特异性抗原而诱导免疫应答.本文作者对钩端螺旋体外膜蛋白的生物学特性、致病机理和免疫原性作了全面的综述,为有效地筛选特异的钩体候选疫苗提供可靠的依据,也为特异地诊断和预防钩体病奠定基础.
作者：林玮；谭立志；郭晓奎 刊期： 2006年第05期
预防接种乙型肝炎疫苗是控制乙肝发生科学、经济和有效的手段.为了解人群乙肝疫苗接种状况,找出影响疫苗接种的因素,我们于2003～2005年,在新乡铁路社区进行了乙型肝炎疫苗接种情况调查,现将调查结果报道如下.
作者：王增朝；车淑丽 刊期： 2006年第05期
目的 研究重组人血白蛋白与小分子药物的结合功能.方法 在366 nm下检测地西泮与人血白蛋白结合前后吸收值的变化,计算二者的结合常数;华法令与人血白蛋白结合后,用SephadexG-25 HPLC柱进行分离,对游离华法令和二者结合产物分别积分,得到华法令与人血白蛋白的结合率.结果 重组人血白蛋白与地西泮的结合常数为14.68 mol Diazepam/mol rHSA,天然人血白蛋白与地西泮结合常数为12.82 mol Diazepam/mol HAS.重组人血白蛋白中华法令的结合率为8.69%,而天然人血白蛋白中华法令的结合率为6.73%.结论 重组人血白蛋白与天然人血白蛋白小分子药物结合功能基本一致.
作者：陶苒；李梅彦；王慧欣；董爱华；贾茜 刊期： 2006年第05期
目的 研究人用皮内注射布氏菌活疫苗的毒理及药效学作用,以评价其可行性.方法 对布氏菌活疫苗进行小白鼠急性毒性试验、局部刺激试验、全身过敏试验、长期毒性试验及豚鼠皮肤变态反应试验并免疫小鼠,进行血清抗体检测.结果 小鼠皮内注射布氏菌活疫苗的大耐受量为1.0×109个菌,用布氏菌素注射足底,可引起明显的迟发型变态反应.局部刺激试验,只有注射1.0×109个菌的部位会在48 h后化脓,但在1～2周内可自愈.全身过敏试验均未出现任何异常反应,毒性试验、各项血常规、血生化检查均未见显著差异,各脏器组织的病理学检查亦未见病理改变.免疫12周后,对豚鼠骨髓造血细胞亦无影响.对皮内免疫12周的豚鼠作背部皮肤变态反应试验,24～48 h结果为阳性.皮内免疫小鼠14 d后可测得小鼠体内有抗体产生,50 d后测得小鼠体内抗体均呈强阳性,对照组小鼠14 d与50 d抗体检测均为阴性.结论 毒理和药效学试验结果显示,布氏菌活疫苗用皮内注射的途径进行免疫是可行的.
作者：李恪梅；王秉翔；薛晓红；肖忻；王燕；徐苗；陈保文；沈小兵；王国治 刊期： 2006年第05期
本文应用放射性示踪技术对大鼠口服3H-RNA药代动力学参数和吸收规律进行了分析,现报道如下.
作者：李恕；刘庆莹；李怀芬；牛惠生 刊期： 2006年第05期
目的 制备酶联免疫乙型脑炎病毒抗原定量检测试剂,用于乙型脑炎灭活疫苗中抗原定量检测.方法 分别用2株杂交瘤细胞分泌的抗乙型脑炎病毒单克隆抗体作为包被和标记物,配以辅助试剂,建立酶联免疫检测系统,用经标化的乙型脑炎疫苗参考品绘制定量标准曲线,对试剂各项技术指标进行验证.结果 试剂对乙型脑炎病毒抗原的佳定量范围是0.131～0.666 ELISA单位(EU/ml),标准曲线相关系数r=0.996,平均变异系数CV小于10%.与NIH法测定结果相比较,相关有非常显著意义(P＜0.01).对2批乙型脑炎疫苗9次测定,变异系数分别为2.7%和4.4%.结论 试剂的精密性和准确度高,特异性和稳定性可靠,可用于乙型脑炎疫苗中的抗原定量检测.
作者：张国强；冯素英；沈淑芹；王晋；施彤；张月兰；张影 刊期： 2006年第05期
细菌生物膜是细菌自身分泌的胞外多糖与菌体粘连而成的结构群体.生物膜赋予了细菌许多新的生物学性状,它通过黏附、定量、抗吞噬和对环境的高耐受性而突现其在医学中的重要意义,且对常用抗菌素都不敏感.
作者：胡晓梅；贾鸣；孙卫忠；胡福泉 刊期： 2006年第05期
目的 建立破伤风抗毒素细菌内毒素的检测方法.方法 确定内毒素限值和供试品溶液的大有效稀释倍数,制备供试品溶液;用细菌内毒素工作标准品作鲎试剂灵敏度复核试验,用供试品溶液在大有效稀释倍数下作干扰试验,在前者试验有效,且后者试验无干扰作用时,在该浓度下对供试品进行凝胶限量试验,并与热原检查法比较.结果 检测的10批破伤风抗毒素细菌内毒素的限量与热原检查法热原的限度完全相符.结论 凝胶限量法可以替代热原检查法,对破伤风抗毒素进行细菌内毒素的限量检测.
作者：白春杰；夏天瑶；薛向光；张梅；柳春红；杨琳 刊期： 2006年第05期
目的 建立PC12细胞检测蛇毒NGF活性的方法.方法 在有血清条件下,观察NGF诱导PC12细胞分化情况.在无血清条件下,以SRB染色定量NGF维持PC12细胞存活数量,计算NGF效价,并与鸡胚背根神经节法比较.结果 在有血清条件下,NGF能诱导PC12细胞分化,出现神经突触样生长.在无血清条件下,NGF浓度对数值与PC12细胞数呈直线相关,标准品与样品的生物效应平行性良好,以量反应平行线法可计算样品的NGF平均效价为1 108.3 U/ml,与鸡胚背根神经节法检测结果相符.结论 该法简便易行,定量准确,重复性好,实验周期短.
作者：骆鹏；谭亚军；田霖；张庶民 刊期： 2006年第05期
目的 对大连地区不同人群的HLA-DR/DQ基因型与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性进行初步分析.方法 利用微量聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,分别检测乙型肝炎后肝硬化患者、乙型肝炎病毒携带者和正常对照人群的HLA-DR/DQ基因型.结果 随机选择的乙型肝炎后肝硬化患者的HLA-DR7的抗原频率与正常对照人群比较显著升高(P＜0.05);乙型肝炎病毒携带者的HLA-DQ8的抗原频率与正常对照人群比较显著升高(P＜0.05);乙型肝炎后肝硬化患者与乙型肝炎病毒携带者比较,后者的HLA-DQ8抗原频率明显高于前者,差异有显著意义(P＜0.05).其它HLA等位基因频率在不同人群中差异无显著意义(P＞0.05).结论 HLA-DR7/DQ8基因型与HBV感染之间可能存在一定相关性.
作者：王波；王欣；谢风 刊期： 2006年第05期
目的 建立重组人白介素-12(rhIL-12)的生物学活性检测方法.方法 采用重组人白介素-12刺激外周血淋巴细胞分泌IFN-γ,并用国际标准品校正,进行生物学活性检测.结果 用该方法对重组人白介素-12成品及原液进行检测,成品比活性平均值为1 037 460 IU/mg,变异系数为26.0%(n=5);原液比活性平均值为1 262 270 IU/mg,变异系数为16.8%(n=5).结论 该方法检测结果准确、客观,重复性好,可用于重组人白介素-12生物学活性的常规检测.
作者：王威；饶春明；王军志 刊期： 2006年第05期
目的 比较体外软琼脂克隆法与裸鼠体内接种法检测细胞致瘤性的敏感性及相关性.方法 用软琼脂克隆法检测不同种类、不同来源的细胞的致瘤性,并与裸鼠体内接种法的结果进行比较.结果 不同的细胞在体外软琼脂中形成细胞集落的能力及集落形态明显不同.肿瘤细胞在体外可形成肉眼可见的细胞集落,而人二倍体细胞及组织工程用细胞在体外不形成或仅形成极少的细胞集落克隆,其集落形成率与细胞代次没有相关性,在裸鼠体内亦不形成瘤.重组CHO细胞经过遗传改造后,有的在裸鼠体内的致瘤性减弱,但体外软琼脂克隆行为没有发生明显改变.从128至169代次的Vero细胞均可在体外软琼脂中形成不同的细胞集落克隆,高代次细胞的集落形成率明显高于低代次细胞,但所有检测代次的细胞在裸鼠体内均未形成瘤.结论 用软琼脂克隆法检测细胞的致瘤性与裸鼠体内接种法不仅具有良好的相关性,而且敏感性高于裸鼠体内接种法.
作者：孟淑芳；林林；李修兰；冯建平；王佑春；李德富 刊期： 2006年第05期
目的 在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力.方法 构建11kD蛋白编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白.以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定.结果 结核分枝杆菌11kD蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白占总菌体蛋白的33%以上,纯化后纯度达95%以上,并可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,5 μg/ml11kD蛋白的效力与50 IU/ml TB-PPD相当.结论 重组11 kD蛋白已在大肠杆菌中成功表达,并有望成为结核病皮试鉴别诊断用新试剂.
作者：陈保文；徐苗；徐敬华；沈小兵；苏城；王国治 刊期： 2006年第05期
目的 考察蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)存放于不同温度、不同时期的质量稳定性,以及内包装材料对制品质量稳定性的影响.方法 将静注人免疫球蛋白(pH4)分别放置于2～8℃和20～25℃的条件下,定期取样.依照<中国生物制品规程>(2000年版)的相应标准进行检测,并比较进口与国产模制瓶灌装对产品质量的影响.结果 静注人免疫球蛋白(pH4)在2～8℃条件下存放2年后,与出厂时的检验结果比较,质量指标无显著变化;在20～25℃条件下存放2年后,分子大小分布、抗-HBs效价、浊度等质量指标变化显著.静注人免疫球蛋白(pH4)灌装于进口模制瓶的质量稳定性优于国产模制瓶.结论 蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)保存在2～8℃在有效期内质量稳定.
作者：江砚芳；贺娟；苏志芬；王黔川；张月星；刘素芳；杨汇川；曲蓬 刊期： 2006年第05期
目的 对在大肠杆菌中表达的重组人肝再生增强因子(rhALR)进行分离纯化及生物学活性分析.方法 以大肠杆菌DH5α发酵表达重组人肝再生增强因子,经包涵体洗涤、变性、目的蛋白复性,以离子交换、分子筛等技术纯化,并进行一系列检定.结果 目的 蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及柱层析纯化,纯度大于98%,SDS-PAGE测定相对分子质量为30 000,MOLDI-TOF-MS测定其相对分子质量为30 780.522,N-末端15个氨基酸与理论序列一致.Western blot证实rhALR正确表达,等电点5.85～6.85,氨基酸含量与理论值基本符合.动物实验证实rhALR具有明显的促进CCl4毒性肝损伤小鼠肝细胞修复活性.结论 经柱层析纯化的rhALR具有促进小鼠CCl4肝损伤肝细胞修复的活性.
作者：李茹冰；王治伟；傅泳航；易学瑞；曾平鲁；邹清雁；佟明华；潘韵；杨联萍；孔祥平 刊期： 2006年第05期
目的 构建稳定表达HIV-1 Gag-Pol蛋白的DNA疫苗,提高目的基因的表达效率.方法 对HIV-1野生型Gag-Pol基因序列进行优化,使用本室构建的表达载体VR,构建重组质粒VR-GPCINS.将构建的重组质粒VR-GPCINS转染HEK293细胞,Western blot鉴定表达产物.用构建的DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,Western blot检测体液免疫反应.结果 成功构建能稳定高效表达HIV-1 Gag-Pol蛋白的VR-GPCINS质粒,Western blot在免疫小鼠的血清中检测到抗p24的特异性抗体.结论 含优化Gag-Pol基因序列的质粒DNA疫苗VR-GPCINS在细胞表达和体液免疫方面均明显优于含野生型Gag-Pol基因序列的质粒DNA疫苗VR-GP.
作者：滕红刚；姜春来；于湘晖；孔维 刊期： 2006年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
