王增朝；车淑丽
目的 研究重组人血白蛋白与小分子药物的结合功能.方法 在366 nm下检测地西泮与人血白蛋白结合前后吸收值的变化,计算二者的结合常数;华法令与人血白蛋白结合后,用SephadexG-25 HPLC柱进行分离,对游离华法令和二者结合产物分别积分,得到华法令与人血白蛋白的结合率.结果 重组人血白蛋白与地西泮的结合常数为14.68 mol Diazepam/mol rHSA,天然人血白蛋白与地西泮结合常数为12.82 mol Diazepam/mol HAS.重组人血白蛋白中华法令的结合率为8.69%,而天然人血白蛋白中华法令的结合率为6.73%.结论 重组人血白蛋白与天然人血白蛋白小分子药物结合功能基本一致.
作者：陶苒；李梅彦；王慧欣；董爱华；贾茜 刊期： 2006年第05期
目的 构建乙型肝炎病毒X基因DNA(xDNA)竞争子L180,为竞争PCR定量分析xDNA打下基础.方法 以扩增的xDNA片段为模板,用引物1434和Lx PCR扩增竞争子DNA,并将扩增产物克隆到pUCm-T载体,转化感受态大肠杆菌DH5α,酶切鉴定和测序,筛选阳性竞争子质粒,并建立竞争PCR定量分析xDNA的方法.结果 所构建xDNA竞争子L180,经测序及PCR定量分析证实,PCR扩增的产物即为目的xDNA.初步建立了竞争PCR定量分析xDNA的方法.结论 已成功构建乙肝病毒xDNA竞争子.
作者：刘汉平；宴萍；方志正 刊期： 2006年第05期
目的 建立黄热疫苗病毒17D株的Vero细胞适应株.方法 将2批鸡胚黄热疫苗病毒在Vero细胞上进行2次蚀斑筛选,并连续传代培养,然后对获得的4株Vero细胞适应株病毒YFV-Vero(5)-A1、YFV-Vero(5)-A2、YFV-Vero(5)-B1和YFV-Vero(5)-B2进行稳定性和免疫原性检测.结果 4株Vero细胞适应株病毒可被黄热病毒(17D)猴免疫血清中和.在传代过程中,不同代次的病毒滴度稳定在6.90LgPFU/ml以上,高峰病变出现时间为5～7 d.家兔和小鼠的免疫血清中和抗体效价分别为1:640～1:5 120和1:640～1:2 560.结论 4株Vero细胞适应株病毒生物学性状稳定,免疫原性良好.
作者：董翊；刘保奎 刊期： 2006年第05期
预防接种乙型肝炎疫苗是控制乙肝发生科学、经济和有效的手段.为了解人群乙肝疫苗接种状况,找出影响疫苗接种的因素,我们于2003～2005年,在新乡铁路社区进行了乙型肝炎疫苗接种情况调查,现将调查结果报道如下.
作者：王增朝；车淑丽 刊期： 2006年第05期
目的 研究黄芪多糖对狂犬病疫苗免疫应答的影响.方法 将BALB/c小鼠和昆明小鼠各自随机分为2组,即试验组与对照组,分别于0、7 d接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞).对照组疫苗用灭菌注射用水稀释,试验组疫苗用10%黄芪多糖(APS)溶液稀释,每只腹腔免疫0.5 ml.BALB/c小鼠于15 d无菌取脾,进行淋巴细胞转化实验;昆明小鼠在免疫前和第1针免疫后4、7、14、30、45和60d眶静脉采血,分别进行外周血淋巴细胞CTL试验和小鼠中和抗体水平测定.结果 试验组疫苗诱导小鼠产生的中和抗体和细胞免疫水平均高于对照组疫苗,二者差异有显著意义.结论 黄芪多糖能提高狂犬病疫苗的免疫原性.
作者：崔颖杰；吴晓娟；郭岩；袁延宝；代长海；鲁文艳；于洪涛 刊期： 2006年第05期
钩端螺旋体外膜蛋白在钩端螺旋体的致病与免疫应答过程中起着十分重要的作用,它在疾病感染时既可以作为一种外膜毒性物质,又可以作为一种特异性抗原而诱导免疫应答.本文作者对钩端螺旋体外膜蛋白的生物学特性、致病机理和免疫原性作了全面的综述,为有效地筛选特异的钩体候选疫苗提供可靠的依据,也为特异地诊断和预防钩体病奠定基础.
作者：林玮；谭立志；郭晓奎 刊期： 2006年第05期
目的 分离纯化癌细胞中热休克蛋白70(HSP70)-多肽复合物.方法 以食管癌组织为材料,通过一系列的层析柱(ConA-Sepharose、ADP-Agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱)进行分离及纯化.结果 所分离纯化的HSP70-多肽复合物相对分子质量与预期相符.结论 为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了具体方法,并为研制多肽疫苗奠定了基础.
作者：陈兰英；高富荣；张玉焕；谢素嫩 刊期： 2006年第05期
目的 建立大规模制备天花疫苗的方法.方法 用SPF鸡胚细胞培养痘苗病毒,经细胞破碎、膜过滤提取痘苗病毒,加保护剂制得天花疫苗.结果 疫苗经检测,动物免疫效果和疫苗稳定性良好.结论 此方法可以用于大规模制备天花疫苗,疫苗质量符合1979版<中国生物制品规程>要求.
作者：安焕宇；范淑兰；安丽颖；韩亚儒；过琴媛 刊期： 2006年第05期
目的 探讨红系细胞分化中细胞生长及相关转录因子表达的变化.方法 利用红白血病细胞株HB60-5的生长特性,通过改变培养条件,促使细胞向成熟细胞分化.绘制细胞生长曲线,应用Northern blot方法检测诱导分化过程中红系造血相关基因表达变化.结果 HB60-5细胞随着诱导分化时间的延长,生长减慢,红系分化标记α-珠蛋白表达逐渐升高,同时伴有GATA-1、p45NF-E2、EDRF等基因表达上调,Fli-1基因表达下调.结论 红系分化过程中,细胞增殖受到抑制,红系细胞分化的基因表达上调,红系细胞增殖的基因表达下调.
作者：谭业辉；王畅；王冠军 刊期： 2006年第05期
目的 建立PC12细胞检测蛇毒NGF活性的方法.方法 在有血清条件下,观察NGF诱导PC12细胞分化情况.在无血清条件下,以SRB染色定量NGF维持PC12细胞存活数量,计算NGF效价,并与鸡胚背根神经节法比较.结果 在有血清条件下,NGF能诱导PC12细胞分化,出现神经突触样生长.在无血清条件下,NGF浓度对数值与PC12细胞数呈直线相关,标准品与样品的生物效应平行性良好,以量反应平行线法可计算样品的NGF平均效价为1 108.3 U/ml,与鸡胚背根神经节法检测结果相符.结论 该法简便易行,定量准确,重复性好,实验周期短.
作者：骆鹏；谭亚军；田霖；张庶民 刊期： 2006年第05期
目的 调查四川地区宫颈癌患者组织中高危人乳头瘤病毒(HPV)33、52和58亚型的感染状况及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的HPV疫苗提供流行病学资料.方法 采用PCR技术,并结合基因测序分析.结果 对四川地区2003～2004年60份宫颈癌患者癌组织DNA进行HPV检测,获得HPV52和HPV58亚型各4份,检出率为6.7%;HPV33亚型1份,检出率为1.7%.对所获得的各份HPV33、52和58E6基因测序,均有碱基突变.结论 HPV52型感染率在四川地区相对较高.与GenBank标准株相比,四川地区发现的HPV33和HPV52 E6基因有多处突变,与日本发现的HPV33和HPV52突变株相近.
作者：邱爱东；乌恩奇；任源；于湘晖；吴永革；金英花；姜春来；查晓；孔维 刊期： 2006年第05期
目的 获得高纯度的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.方法 以Vif/VR1o12质粒为模板,PCR扩增出Vif-△N28基因并插入pRSETB质粒.将构建的原核表达载体Vif-△N28/pRSETB以及已有的Cullin5-N138/pRSETB质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,产物经Ni-NTA离子纯化柱纯化、复性.结果 所表达的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白约占各自菌体总蛋白的20%,纯化后蛋白纯度均可达90%以上.结论 已成功构建了Vif-△N28原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达,获得了可溶性的纯化的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.
作者：张文艳；楼朝平；朱可彤；张帆；姜春来；吴永革；于湘晖；孔维 刊期： 2006年第05期
目的 建立碘化钾快速提取外周血基因组DNA的方法.方法 采用碘化钾法和酚/氯仿提取法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行人类生长激素(HGH)基因片段的扩增及鉴定.结果 此方法提取的DNA量大,DNA体外扩增结果稳定.结论 该方法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备.
作者：鞠海英；刘亚珍；刘永茂；李勇 刊期： 2006年第05期
细菌生物膜是细菌自身分泌的胞外多糖与菌体粘连而成的结构群体.生物膜赋予了细菌许多新的生物学性状,它通过黏附、定量、抗吞噬和对环境的高耐受性而突现其在医学中的重要意义,且对常用抗菌素都不敏感.
作者：胡晓梅；贾鸣；孙卫忠；胡福泉 刊期： 2006年第05期
目的 研制治疗慢性乙型肝炎的重组修饰的Ankara痘病毒(MVA)载体疫苗.方法 将HBV的表面抗原基因克隆到MVA病毒的重组载体pSC11上,重组质粒与空MVA病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组.经过10轮筛选,挑选出阳性的重组MVA病毒.经PCR鉴定,感染不同细胞系,确定病毒表达量.结果 获得目的重组MVA病毒,ELISA检测到表面抗原在不同细胞系中的表达.结论 已成功地构建了表达HBV表面抗原的重组MVA病毒.
作者：陈宇；杨小松；李惟；孔维 刊期： 2006年第05期
目的 建立破伤风抗毒素细菌内毒素的检测方法.方法 确定内毒素限值和供试品溶液的大有效稀释倍数,制备供试品溶液;用细菌内毒素工作标准品作鲎试剂灵敏度复核试验,用供试品溶液在大有效稀释倍数下作干扰试验,在前者试验有效,且后者试验无干扰作用时,在该浓度下对供试品进行凝胶限量试验,并与热原检查法比较.结果 检测的10批破伤风抗毒素细菌内毒素的限量与热原检查法热原的限度完全相符.结论 凝胶限量法可以替代热原检查法,对破伤风抗毒素进行细菌内毒素的限量检测.
作者：白春杰；夏天瑶；薛向光；张梅；柳春红；杨琳 刊期： 2006年第05期
目的 对大连地区不同人群的HLA-DR/DQ基因型与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性进行初步分析.方法 利用微量聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,分别检测乙型肝炎后肝硬化患者、乙型肝炎病毒携带者和正常对照人群的HLA-DR/DQ基因型.结果 随机选择的乙型肝炎后肝硬化患者的HLA-DR7的抗原频率与正常对照人群比较显著升高(P＜0.05);乙型肝炎病毒携带者的HLA-DQ8的抗原频率与正常对照人群比较显著升高(P＜0.05);乙型肝炎后肝硬化患者与乙型肝炎病毒携带者比较,后者的HLA-DQ8抗原频率明显高于前者,差异有显著意义(P＜0.05).其它HLA等位基因频率在不同人群中差异无显著意义(P＞0.05).结论 HLA-DR7/DQ8基因型与HBV感染之间可能存在一定相关性.
作者：王波；王欣；谢风 刊期： 2006年第05期
目的 建立在大肠杆菌中高效表达SARS-CoV蛋白的表达系统.方法 PCR扩增BCG分子伴侣10基因,并将其连接到pET28a载体上,构建成分子伴侣10融合蛋白表达载体.在该载体Chaperonin 10基因的3'端克隆SARS-N、SARS～E、SARS-S和SARS-M基因,在BL2.1(DE3)中进行诱导表达.结果 SARS-E、SARS-N在与分子伴侣10融合后能获得高效表达.结论 该表达系统可使部分在大肠杆菌中难于表达的SARS-CoV蛋白获得高表达.
作者：张秀霞；向泽敏；李娟；王宣军；盛军 刊期： 2006年第05期
目的 制备酶联免疫乙型脑炎病毒抗原定量检测试剂,用于乙型脑炎灭活疫苗中抗原定量检测.方法 分别用2株杂交瘤细胞分泌的抗乙型脑炎病毒单克隆抗体作为包被和标记物,配以辅助试剂,建立酶联免疫检测系统,用经标化的乙型脑炎疫苗参考品绘制定量标准曲线,对试剂各项技术指标进行验证.结果 试剂对乙型脑炎病毒抗原的佳定量范围是0.131～0.666 ELISA单位(EU/ml),标准曲线相关系数r=0.996,平均变异系数CV小于10%.与NIH法测定结果相比较,相关有非常显著意义(P＜0.01).对2批乙型脑炎疫苗9次测定,变异系数分别为2.7%和4.4%.结论 试剂的精密性和准确度高,特异性和稳定性可靠,可用于乙型脑炎疫苗中的抗原定量检测.
作者：张国强；冯素英；沈淑芹；王晋；施彤；张月兰；张影 刊期： 2006年第05期
目的 获得丙型肝炎病毒(HCV)C-NS3嵌合抗原,以提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量.方法 应用SOE-PCR(拼接重叠延伸PCR)的方法,构建了HCV的C区和NS3区的嵌合基因,克隆于表达载体pGEX-4T3,并转化于大肠杆菌BL21,经筛选,IPTG诱导HCV的C-NS3嵌合抗原的表达.经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测抗原特异性.结果 SOE-PCR构建的HCV C区和NS3区嵌合基因在BL21中获得表达.经鉴定,其相对分子质量约为75 000,并具有高度特异性.结论 已获得HCV C-NS3嵌合抗原,为提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量奠定了基础.
作者：彭祥兵；余健；黄仕和；周志军；李健；朱华松；张爱华；闭兰；赵亚杰；余模松 刊期： 2006年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
