刘汉平；宴萍；方志正
本文就乙型肝炎免疫球蛋白应用效果、作用机理及应用中存在的问题等作了全面综述.
作者：周海云；曾鸣 刊期： 2006年第05期
目的 构建H.pylori细胞空泡毒素VacA与黏附素HpaA融合基因的原核表达载体,诱导其表达融合蛋白,并检测表达产物的抗原性与免疫原性.方法 用PCR从pQE30-VacA质粒扩增出VacA基因,克隆至pTrc99A-HpaA载体中,与HpaA基因融合后,插入原核表达载体pQE30中,再将pQE30-VacA-HpaA转化入大肠杆菌DH5α,诱导表达并提纯融合蛋白,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,Bradford法检测融合蛋白含量,Western blot鉴定特异性.将融合蛋白免疫家兔,得到多克隆抗血清,用双向免疫扩散和ELISA检测免疫原性.结果 SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量约为65 000,表达量在35%以上,主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0.72 mg/ml,具有良好的VacA和HpaA抗原性与免疫原性.结论 VacA-HpaA融合蛋白已成功表达,且具有良好的免疫原性,为进一步研究制备H.pylori疫苗创造了条件.
作者：叶翠莲；杨致邦；黄进；邓颖；刘淼；吴利先 刊期： 2006年第05期
预防接种乙型肝炎疫苗是控制乙肝发生科学、经济和有效的手段.为了解人群乙肝疫苗接种状况,找出影响疫苗接种的因素,我们于2003～2005年,在新乡铁路社区进行了乙型肝炎疫苗接种情况调查,现将调查结果报道如下.
作者：王增朝；车淑丽 刊期： 2006年第05期
目的 建立重组人红细胞生成素二聚体工程细胞株.方法 用重组人红细胞生成素二聚体表达载体转染COS-7细胞,通过dot blot进行检定.然后对CHO-dhfr-细胞进行稳定转染,再经过稀释克隆和MTX的加压扩增,筛选二聚体工程细胞株并进行传代及无血清培养基培养、目的蛋白纯化及检测.结果 瞬时转染70 h细胞有目的蛋白表达.稳定转染后选取表达量高的细胞株为工程细胞株.该细胞株连续传15代及经无血清培养基培养,目的蛋白表达量均无明显下降.所表达的目的蛋白相对分子质量为70 000,并具有高度特异性.结论 已获得稳定高效表达重组人红细胞生成素二聚体的工程细胞株.
作者：李秋生；张春莉；李金凤；有红霞；李景利 刊期： 2006年第05期
目的 对在大肠杆菌中表达的重组人肝再生增强因子(rhALR)进行分离纯化及生物学活性分析.方法 以大肠杆菌DH5α发酵表达重组人肝再生增强因子,经包涵体洗涤、变性、目的蛋白复性,以离子交换、分子筛等技术纯化,并进行一系列检定.结果 目的 蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及柱层析纯化,纯度大于98%,SDS-PAGE测定相对分子质量为30 000,MOLDI-TOF-MS测定其相对分子质量为30 780.522,N-末端15个氨基酸与理论序列一致.Western blot证实rhALR正确表达,等电点5.85～6.85,氨基酸含量与理论值基本符合.动物实验证实rhALR具有明显的促进CCl4毒性肝损伤小鼠肝细胞修复活性.结论 经柱层析纯化的rhALR具有促进小鼠CCl4肝损伤肝细胞修复的活性.
作者：李茹冰；王治伟；傅泳航；易学瑞；曾平鲁；邹清雁；佟明华；潘韵；杨联萍；孔祥平 刊期： 2006年第05期
钩端螺旋体外膜蛋白在钩端螺旋体的致病与免疫应答过程中起着十分重要的作用,它在疾病感染时既可以作为一种外膜毒性物质,又可以作为一种特异性抗原而诱导免疫应答.本文作者对钩端螺旋体外膜蛋白的生物学特性、致病机理和免疫原性作了全面的综述,为有效地筛选特异的钩体候选疫苗提供可靠的依据,也为特异地诊断和预防钩体病奠定基础.
作者：林玮；谭立志；郭晓奎 刊期： 2006年第05期
目的 建立在大肠杆菌中高效表达SARS-CoV蛋白的表达系统.方法 PCR扩增BCG分子伴侣10基因,并将其连接到pET28a载体上,构建成分子伴侣10融合蛋白表达载体.在该载体Chaperonin 10基因的3'端克隆SARS-N、SARS～E、SARS-S和SARS-M基因,在BL2.1(DE3)中进行诱导表达.结果 SARS-E、SARS-N在与分子伴侣10融合后能获得高效表达.结论 该表达系统可使部分在大肠杆菌中难于表达的SARS-CoV蛋白获得高表达.
作者：张秀霞；向泽敏；李娟；王宣军；盛军 刊期： 2006年第05期
目的 比较体外软琼脂克隆法与裸鼠体内接种法检测细胞致瘤性的敏感性及相关性.方法 用软琼脂克隆法检测不同种类、不同来源的细胞的致瘤性,并与裸鼠体内接种法的结果进行比较.结果 不同的细胞在体外软琼脂中形成细胞集落的能力及集落形态明显不同.肿瘤细胞在体外可形成肉眼可见的细胞集落,而人二倍体细胞及组织工程用细胞在体外不形成或仅形成极少的细胞集落克隆,其集落形成率与细胞代次没有相关性,在裸鼠体内亦不形成瘤.重组CHO细胞经过遗传改造后,有的在裸鼠体内的致瘤性减弱,但体外软琼脂克隆行为没有发生明显改变.从128至169代次的Vero细胞均可在体外软琼脂中形成不同的细胞集落克隆,高代次细胞的集落形成率明显高于低代次细胞,但所有检测代次的细胞在裸鼠体内均未形成瘤.结论 用软琼脂克隆法检测细胞的致瘤性与裸鼠体内接种法不仅具有良好的相关性,而且敏感性高于裸鼠体内接种法.
作者：孟淑芳；林林；李修兰；冯建平；王佑春；李德富 刊期： 2006年第05期
目的 在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力.方法 构建11kD蛋白编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白.以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定.结果 结核分枝杆菌11kD蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白占总菌体蛋白的33%以上,纯化后纯度达95%以上,并可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,5 μg/ml11kD蛋白的效力与50 IU/ml TB-PPD相当.结论 重组11 kD蛋白已在大肠杆菌中成功表达,并有望成为结核病皮试鉴别诊断用新试剂.
作者：陈保文；徐苗；徐敬华；沈小兵；苏城；王国治 刊期： 2006年第05期
目的 研究黄芪多糖对狂犬病疫苗免疫应答的影响.方法 将BALB/c小鼠和昆明小鼠各自随机分为2组,即试验组与对照组,分别于0、7 d接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞).对照组疫苗用灭菌注射用水稀释,试验组疫苗用10%黄芪多糖(APS)溶液稀释,每只腹腔免疫0.5 ml.BALB/c小鼠于15 d无菌取脾,进行淋巴细胞转化实验;昆明小鼠在免疫前和第1针免疫后4、7、14、30、45和60d眶静脉采血,分别进行外周血淋巴细胞CTL试验和小鼠中和抗体水平测定.结果 试验组疫苗诱导小鼠产生的中和抗体和细胞免疫水平均高于对照组疫苗,二者差异有显著意义.结论 黄芪多糖能提高狂犬病疫苗的免疫原性.
作者：崔颖杰；吴晓娟；郭岩；袁延宝；代长海；鲁文艳；于洪涛 刊期： 2006年第05期
目的 构建产气荚膜梭菌α-β2-β1融合蛋白基因表达载体,并对表达产物进行鉴定.方法 利用PCR技术,从含α毒素基因的质粒pXCPA02中扩增出α毒素基因,经NcoⅠ酶切,回收0.95kb的α基因片段,再与经NcoⅠ酶切并含融合基因β1-β2的质粒pXETB1B2连接,获得重组质粒pXETAB2B1,经Nco Ⅰ、BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切鉴定,并对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 重组质粒pXETAB2B1含有α-β2-β1融合基因.表达产物相对分子质量约为95 000,并可被特异性抗体识别.结论 已获得高效表达α-β2-β1的重组菌株.
作者：韩学波；许崇波；曾瑾；王玉炯 刊期： 2006年第05期
目的 研制治疗慢性乙型肝炎的重组修饰的Ankara痘病毒(MVA)载体疫苗.方法 将HBV的表面抗原基因克隆到MVA病毒的重组载体pSC11上,重组质粒与空MVA病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组.经过10轮筛选,挑选出阳性的重组MVA病毒.经PCR鉴定,感染不同细胞系,确定病毒表达量.结果 获得目的重组MVA病毒,ELISA检测到表面抗原在不同细胞系中的表达.结论 已成功地构建了表达HBV表面抗原的重组MVA病毒.
作者：陈宇；杨小松；李惟；孔维 刊期： 2006年第05期
目的 对转基因人参CS83细胞系表达HBsAg的特异性、稳定性及表达效率进行分析.方法 提取CS83细胞表达蛋白,分别以Lowry法和ELISA法检测总蛋白含量和HBsAg含量,SDS-PAGE和Western blot分析表达蛋白的HBsAg特异性.采用冷冻干燥、干燥和低温处理方法检测CS83细胞中HBsAg的稳定性.结果 CS83细胞表达产物中总蛋白含量为2.024 mg/g,HBsAg含量为504 ng/g,占总蛋白含量的0.025%.表达的目的蛋白相对分子质量约为25 000,具有HBsAg特异性.经不同方法处理后的保存结果表明,冻干保存稳定性好.结论 所建立的CS83细胞系能够稳定地表达特异性HBsAg.
作者：吉海滨；刘丹；刘黎红；李娟；于海鹏；富锐丽；李铮；盛军 刊期： 2006年第05期
目的 获得丙型肝炎病毒(HCV)C-NS3嵌合抗原,以提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量.方法 应用SOE-PCR(拼接重叠延伸PCR)的方法,构建了HCV的C区和NS3区的嵌合基因,克隆于表达载体pGEX-4T3,并转化于大肠杆菌BL21,经筛选,IPTG诱导HCV的C-NS3嵌合抗原的表达.经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测抗原特异性.结果 SOE-PCR构建的HCV C区和NS3区嵌合基因在BL21中获得表达.经鉴定,其相对分子质量约为75 000,并具有高度特异性.结论 已获得HCV C-NS3嵌合抗原,为提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量奠定了基础.
作者：彭祥兵；余健；黄仕和；周志军；李健；朱华松；张爱华；闭兰；赵亚杰；余模松 刊期： 2006年第05期
目的 对乳鼠的心肌细胞进行原代培养方法的改进.方法 参照乳鼠心肌细胞原代培养方法,并进行改进,选用Ⅱ型胶原蛋白酶及IMDM培养液进行消化和培养,减少了消化及离心时间,差速贴壁分离纯化后,加入5-溴脱氧核苷抑制成纤维细胞污染.结果 本方法培养的心肌细胞存活率为95.6%,培养2～5 d观察,视野中绝大多数为已搏动的心肌细胞和心肌细胞团,成纤维细胞无明显增殖.结论 本方法是一种较为理想的乳鼠心肌细胞原代培养方法.
作者：陈妍；王振远；郭秀侠；于洪涛；邓英杰 刊期： 2006年第05期
目的 分离纯化癌细胞中热休克蛋白70(HSP70)-多肽复合物.方法 以食管癌组织为材料,通过一系列的层析柱(ConA-Sepharose、ADP-Agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱)进行分离及纯化.结果 所分离纯化的HSP70-多肽复合物相对分子质量与预期相符.结论 为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了具体方法,并为研制多肽疫苗奠定了基础.
作者：陈兰英；高富荣；张玉焕；谢素嫩 刊期： 2006年第05期
本文应用放射性示踪技术对大鼠口服3H-RNA药代动力学参数和吸收规律进行了分析,现报道如下.
作者：李恕；刘庆莹；李怀芬；牛惠生 刊期： 2006年第05期
目的 建立PC12细胞检测蛇毒NGF活性的方法.方法 在有血清条件下,观察NGF诱导PC12细胞分化情况.在无血清条件下,以SRB染色定量NGF维持PC12细胞存活数量,计算NGF效价,并与鸡胚背根神经节法比较.结果 在有血清条件下,NGF能诱导PC12细胞分化,出现神经突触样生长.在无血清条件下,NGF浓度对数值与PC12细胞数呈直线相关,标准品与样品的生物效应平行性良好,以量反应平行线法可计算样品的NGF平均效价为1 108.3 U/ml,与鸡胚背根神经节法检测结果相符.结论 该法简便易行,定量准确,重复性好,实验周期短.
作者：骆鹏；谭亚军；田霖；张庶民 刊期： 2006年第05期
目的 构建乙型肝炎病毒X基因DNA(xDNA)竞争子L180,为竞争PCR定量分析xDNA打下基础.方法 以扩增的xDNA片段为模板,用引物1434和Lx PCR扩增竞争子DNA,并将扩增产物克隆到pUCm-T载体,转化感受态大肠杆菌DH5α,酶切鉴定和测序,筛选阳性竞争子质粒,并建立竞争PCR定量分析xDNA的方法.结果 所构建xDNA竞争子L180,经测序及PCR定量分析证实,PCR扩增的产物即为目的xDNA.初步建立了竞争PCR定量分析xDNA的方法.结论 已成功构建乙肝病毒xDNA竞争子.
作者：刘汉平；宴萍；方志正 刊期： 2006年第05期
目的 建立重组人白介素-12(rhIL-12)的生物学活性检测方法.方法 采用重组人白介素-12刺激外周血淋巴细胞分泌IFN-γ,并用国际标准品校正,进行生物学活性检测.结果 用该方法对重组人白介素-12成品及原液进行检测,成品比活性平均值为1 037 460 IU/mg,变异系数为26.0%(n=5);原液比活性平均值为1 262 270 IU/mg,变异系数为16.8%(n=5).结论 该方法检测结果准确、客观,重复性好,可用于重组人白介素-12生物学活性的常规检测.
作者：王威；饶春明；王军志 刊期： 2006年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
