张丽
目的 获得高纯度的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.方法 以Vif/VR1o12质粒为模板,PCR扩增出Vif-△N28基因并插入pRSETB质粒.将构建的原核表达载体Vif-△N28/pRSETB以及已有的Cullin5-N138/pRSETB质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,产物经Ni-NTA离子纯化柱纯化、复性.结果 所表达的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白约占各自菌体总蛋白的20%,纯化后蛋白纯度均可达90%以上.结论 已成功构建了Vif-△N28原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达,获得了可溶性的纯化的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.
作者：张文艳；楼朝平；朱可彤；张帆；姜春来；吴永革；于湘晖；孔维 刊期： 2006年第05期
目的 在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力.方法 构建11kD蛋白编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白.以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定.结果 结核分枝杆菌11kD蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白占总菌体蛋白的33%以上,纯化后纯度达95%以上,并可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,5 μg/ml11kD蛋白的效力与50 IU/ml TB-PPD相当.结论 重组11 kD蛋白已在大肠杆菌中成功表达,并有望成为结核病皮试鉴别诊断用新试剂.
作者：陈保文；徐苗；徐敬华；沈小兵；苏城；王国治 刊期： 2006年第05期
体外诊断试剂质量研究工作是产品研发的重要内容之一,也是技术审评中的重点内容.质量研究的结果是制定产品标准的重要依据.同时,其中的部分内容也将收录入使用说明书中,有助于正确使用产品和准确判断检验结果.
作者：张丽 刊期： 2006年第05期
目的 分离纯化癌细胞中热休克蛋白70(HSP70)-多肽复合物.方法 以食管癌组织为材料,通过一系列的层析柱(ConA-Sepharose、ADP-Agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱)进行分离及纯化.结果 所分离纯化的HSP70-多肽复合物相对分子质量与预期相符.结论 为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了具体方法,并为研制多肽疫苗奠定了基础.
作者：陈兰英；高富荣；张玉焕；谢素嫩 刊期： 2006年第05期
目的 对大连地区不同人群的HLA-DR/DQ基因型与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性进行初步分析.方法 利用微量聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,分别检测乙型肝炎后肝硬化患者、乙型肝炎病毒携带者和正常对照人群的HLA-DR/DQ基因型.结果 随机选择的乙型肝炎后肝硬化患者的HLA-DR7的抗原频率与正常对照人群比较显著升高(P＜0.05);乙型肝炎病毒携带者的HLA-DQ8的抗原频率与正常对照人群比较显著升高(P＜0.05);乙型肝炎后肝硬化患者与乙型肝炎病毒携带者比较,后者的HLA-DQ8抗原频率明显高于前者,差异有显著意义(P＜0.05).其它HLA等位基因频率在不同人群中差异无显著意义(P＞0.05).结论 HLA-DR7/DQ8基因型与HBV感染之间可能存在一定相关性.
作者：王波；王欣；谢风 刊期： 2006年第05期
本文就乙型肝炎免疫球蛋白应用效果、作用机理及应用中存在的问题等作了全面综述.
作者：周海云；曾鸣 刊期： 2006年第05期
目的 建立大规模制备天花疫苗的方法.方法 用SPF鸡胚细胞培养痘苗病毒,经细胞破碎、膜过滤提取痘苗病毒,加保护剂制得天花疫苗.结果 疫苗经检测,动物免疫效果和疫苗稳定性良好.结论 此方法可以用于大规模制备天花疫苗,疫苗质量符合1979版<中国生物制品规程>要求.
作者：安焕宇；范淑兰；安丽颖；韩亚儒；过琴媛 刊期： 2006年第05期
目的 研究人用皮内注射布氏菌活疫苗的毒理及药效学作用,以评价其可行性.方法 对布氏菌活疫苗进行小白鼠急性毒性试验、局部刺激试验、全身过敏试验、长期毒性试验及豚鼠皮肤变态反应试验并免疫小鼠,进行血清抗体检测.结果 小鼠皮内注射布氏菌活疫苗的大耐受量为1.0×109个菌,用布氏菌素注射足底,可引起明显的迟发型变态反应.局部刺激试验,只有注射1.0×109个菌的部位会在48 h后化脓,但在1～2周内可自愈.全身过敏试验均未出现任何异常反应,毒性试验、各项血常规、血生化检查均未见显著差异,各脏器组织的病理学检查亦未见病理改变.免疫12周后,对豚鼠骨髓造血细胞亦无影响.对皮内免疫12周的豚鼠作背部皮肤变态反应试验,24～48 h结果为阳性.皮内免疫小鼠14 d后可测得小鼠体内有抗体产生,50 d后测得小鼠体内抗体均呈强阳性,对照组小鼠14 d与50 d抗体检测均为阴性.结论 毒理和药效学试验结果显示,布氏菌活疫苗用皮内注射的途径进行免疫是可行的.
作者：李恪梅；王秉翔；薛晓红；肖忻；王燕；徐苗；陈保文；沈小兵；王国治 刊期： 2006年第05期
目的 研究黄芪多糖对狂犬病疫苗免疫应答的影响.方法 将BALB/c小鼠和昆明小鼠各自随机分为2组,即试验组与对照组,分别于0、7 d接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞).对照组疫苗用灭菌注射用水稀释,试验组疫苗用10%黄芪多糖(APS)溶液稀释,每只腹腔免疫0.5 ml.BALB/c小鼠于15 d无菌取脾,进行淋巴细胞转化实验;昆明小鼠在免疫前和第1针免疫后4、7、14、30、45和60d眶静脉采血,分别进行外周血淋巴细胞CTL试验和小鼠中和抗体水平测定.结果 试验组疫苗诱导小鼠产生的中和抗体和细胞免疫水平均高于对照组疫苗,二者差异有显著意义.结论 黄芪多糖能提高狂犬病疫苗的免疫原性.
作者：崔颖杰；吴晓娟；郭岩；袁延宝；代长海；鲁文艳；于洪涛 刊期： 2006年第05期
目的 调查四川地区宫颈癌患者组织中高危人乳头瘤病毒(HPV)33、52和58亚型的感染状况及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的HPV疫苗提供流行病学资料.方法 采用PCR技术,并结合基因测序分析.结果 对四川地区2003～2004年60份宫颈癌患者癌组织DNA进行HPV检测,获得HPV52和HPV58亚型各4份,检出率为6.7%;HPV33亚型1份,检出率为1.7%.对所获得的各份HPV33、52和58E6基因测序,均有碱基突变.结论 HPV52型感染率在四川地区相对较高.与GenBank标准株相比,四川地区发现的HPV33和HPV52 E6基因有多处突变,与日本发现的HPV33和HPV52突变株相近.
作者：邱爱东；乌恩奇；任源；于湘晖；吴永革；金英花；姜春来；查晓；孔维 刊期： 2006年第05期
目的 构建稳定表达HIV-1 Gag-Pol蛋白的DNA疫苗,提高目的基因的表达效率.方法 对HIV-1野生型Gag-Pol基因序列进行优化,使用本室构建的表达载体VR,构建重组质粒VR-GPCINS.将构建的重组质粒VR-GPCINS转染HEK293细胞,Western blot鉴定表达产物.用构建的DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,Western blot检测体液免疫反应.结果 成功构建能稳定高效表达HIV-1 Gag-Pol蛋白的VR-GPCINS质粒,Western blot在免疫小鼠的血清中检测到抗p24的特异性抗体.结论 含优化Gag-Pol基因序列的质粒DNA疫苗VR-GPCINS在细胞表达和体液免疫方面均明显优于含野生型Gag-Pol基因序列的质粒DNA疫苗VR-GP.
作者：滕红刚；姜春来；于湘晖；孔维 刊期： 2006年第05期
预防接种乙型肝炎疫苗是控制乙肝发生科学、经济和有效的手段.为了解人群乙肝疫苗接种状况,找出影响疫苗接种的因素,我们于2003～2005年,在新乡铁路社区进行了乙型肝炎疫苗接种情况调查,现将调查结果报道如下.
作者：王增朝；车淑丽 刊期： 2006年第05期
目的 研制高效价、高特异性的抗细胞空泡毒素VacA的鸡蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌(H. Pylori)治疗性抗体奠定基础.方法 用纯化的重组细胞空泡毒素抗原免疫22周龄洛曼产蛋母鸡,取免后所产鸡蛋,将蛋黄稀释、离心,收集上清,加硫酸铵沉淀.以ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测蛋白含量,SDS-PAGE法检测相对分子质量及纯度.结果 母鸡初次免疫后76 d,抗体效价达到1:6 400,高可达1:12 800.蛋黄抗体经纯化浓缩后,用SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度可达80%以上,其含量为25.66 mg/ml.结论 已成功制备了抗重组细胞空泡毒素的特异性蛋黄抗体.
作者：毛小琴；杨致邦；黄伟；张绍兰；田一玲；叶翠莲 刊期： 2006年第05期
目的 考察蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)存放于不同温度、不同时期的质量稳定性,以及内包装材料对制品质量稳定性的影响.方法 将静注人免疫球蛋白(pH4)分别放置于2～8℃和20～25℃的条件下,定期取样.依照<中国生物制品规程>(2000年版)的相应标准进行检测,并比较进口与国产模制瓶灌装对产品质量的影响.结果 静注人免疫球蛋白(pH4)在2～8℃条件下存放2年后,与出厂时的检验结果比较,质量指标无显著变化;在20～25℃条件下存放2年后,分子大小分布、抗-HBs效价、浊度等质量指标变化显著.静注人免疫球蛋白(pH4)灌装于进口模制瓶的质量稳定性优于国产模制瓶.结论 蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)保存在2～8℃在有效期内质量稳定.
作者：江砚芳；贺娟；苏志芬；王黔川；张月星；刘素芳；杨汇川；曲蓬 刊期： 2006年第05期
本文应用放射性示踪技术对大鼠口服3H-RNA药代动力学参数和吸收规律进行了分析,现报道如下.
作者：李恕；刘庆莹；李怀芬；牛惠生 刊期： 2006年第05期
目的 比较体外软琼脂克隆法与裸鼠体内接种法检测细胞致瘤性的敏感性及相关性.方法 用软琼脂克隆法检测不同种类、不同来源的细胞的致瘤性,并与裸鼠体内接种法的结果进行比较.结果 不同的细胞在体外软琼脂中形成细胞集落的能力及集落形态明显不同.肿瘤细胞在体外可形成肉眼可见的细胞集落,而人二倍体细胞及组织工程用细胞在体外不形成或仅形成极少的细胞集落克隆,其集落形成率与细胞代次没有相关性,在裸鼠体内亦不形成瘤.重组CHO细胞经过遗传改造后,有的在裸鼠体内的致瘤性减弱,但体外软琼脂克隆行为没有发生明显改变.从128至169代次的Vero细胞均可在体外软琼脂中形成不同的细胞集落克隆,高代次细胞的集落形成率明显高于低代次细胞,但所有检测代次的细胞在裸鼠体内均未形成瘤.结论 用软琼脂克隆法检测细胞的致瘤性与裸鼠体内接种法不仅具有良好的相关性,而且敏感性高于裸鼠体内接种法.
作者：孟淑芳；林林；李修兰；冯建平；王佑春；李德富 刊期： 2006年第05期
目的 建立黄热疫苗病毒17D株的Vero细胞适应株.方法 将2批鸡胚黄热疫苗病毒在Vero细胞上进行2次蚀斑筛选,并连续传代培养,然后对获得的4株Vero细胞适应株病毒YFV-Vero(5)-A1、YFV-Vero(5)-A2、YFV-Vero(5)-B1和YFV-Vero(5)-B2进行稳定性和免疫原性检测.结果 4株Vero细胞适应株病毒可被黄热病毒(17D)猴免疫血清中和.在传代过程中,不同代次的病毒滴度稳定在6.90LgPFU/ml以上,高峰病变出现时间为5～7 d.家兔和小鼠的免疫血清中和抗体效价分别为1:640～1:5 120和1:640～1:2 560.结论 4株Vero细胞适应株病毒生物学性状稳定,免疫原性良好.
作者：董翊；刘保奎 刊期： 2006年第05期
目的 建立碘化钾快速提取外周血基因组DNA的方法.方法 采用碘化钾法和酚/氯仿提取法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行人类生长激素(HGH)基因片段的扩增及鉴定.结果 此方法提取的DNA量大,DNA体外扩增结果稳定.结论 该方法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备.
作者：鞠海英；刘亚珍；刘永茂；李勇 刊期： 2006年第05期
细菌生物膜是细菌自身分泌的胞外多糖与菌体粘连而成的结构群体.生物膜赋予了细菌许多新的生物学性状,它通过黏附、定量、抗吞噬和对环境的高耐受性而突现其在医学中的重要意义,且对常用抗菌素都不敏感.
作者：胡晓梅；贾鸣；孙卫忠；胡福泉 刊期： 2006年第05期
目的 建立破伤风抗毒素细菌内毒素的检测方法.方法 确定内毒素限值和供试品溶液的大有效稀释倍数,制备供试品溶液;用细菌内毒素工作标准品作鲎试剂灵敏度复核试验,用供试品溶液在大有效稀释倍数下作干扰试验,在前者试验有效,且后者试验无干扰作用时,在该浓度下对供试品进行凝胶限量试验,并与热原检查法比较.结果 检测的10批破伤风抗毒素细菌内毒素的限量与热原检查法热原的限度完全相符.结论 凝胶限量法可以替代热原检查法,对破伤风抗毒素进行细菌内毒素的限量检测.
作者：白春杰；夏天瑶；薛向光；张梅；柳春红；杨琳 刊期： 2006年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
