黄镇；钱雯；袁琳；施競；陈燕；陈南萍；周红军；李文春；杨美峰；刘红岩
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)体外作用于骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)后,诱导其向神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞定向分化的情况.方法从鼠骨髓中获得MSCs,培养传代,用MTT法检测bFGF对骨髓MSCs生长的影响.10ng/ml bFGF作用2 d后,通过IBMX、细胞因子bFGF、GDNF、IL-1β、中脑神经胶质细胞条件培养基和中脑神经细胞膜碎片等分组联合诱导骨髓MSCs向神经元样细胞、多巴胺能神经元样细胞分化,免疫细胞化学方法鉴定特异标志NSE、MAP-2a,b和TH的表达.结果在一定范围内,bFGF对骨髓MSCs具有明显的促增殖作用.分化的神经元样细胞表达NSE、MAP-2a,b和TH,联合应用GDNF、IL-1β、中脑条件培养基和中脑神经细胞膜碎片诱导7 d后,NSE阳性率为(27.774±2.747)%,MAP-2a,b为(28.006±3.080)%,TH为(3.098±0.352)%.结论体外骨髓MSCs被诱导分化成神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞,为帕金森等中枢神经系统疾病的细胞移植治疗奠定了基础.
作者：郭丽；尹飞；王欣；凌翎；呼和塔娜；李鹏；段德生；范洪学 刊期： 2005年第06期
目的研究在KMB17细胞中培养脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒及其用于生产疫苗的可行性.方法应用悬浮吸附和添加血清的方法,在KMB17细胞上培养Sabin Ⅰ、Ⅱ、中Ⅲ2型病毒,用微量法检测病毒滴度.结果在悬浮吸附加10%血清培养条件下,Sabin Ⅰ滴度可达8.125 LgCCID50,SabinⅡ滴度可达7.5 LgCCID50,中Ⅲ2滴度可达7.583 LgCCID50.与传统的猴肾原代细胞培养的病毒滴度比较,差异无显著意义(P＞0.05).结论可进一步研究应用KMB17细胞进行疫苗生产.
作者：胡凝珠；王荣福；瞿素；刘国栋；姬秋彦；胡云章 刊期： 2005年第06期
目的观察森林脑炎纯化疫苗接种反应和免疫效果.方法选择目标人群,并用原制疫苗作对照,观测疫苗注射后的反应,并采集疫苗免疫前后血清,用蚀斑减少法检测中和抗体,评价疫苗的免疫效果.结果森林脑炎纯化疫苗接种后无全身副反应,局部反应率仅为0.82%.血清中和抗体阳转率高于85%.结论森林脑炎纯化疫苗较原制同类疫苗反应轻微,而中和抗体阳转率明显高于原制疫苗,是现用原制灭活疫苗理想的替代产品.
作者：董关木；宋宗明；刘文雪；安祺；王晓理；王显军；韩亮；涛波；孔艳；杨立宏 刊期： 2005年第06期
目的研制敏感、特异的人类免疫缺陷病毒Ⅰ+Ⅱ型(HIV Ⅰ+Ⅱ)化学发光免疫试剂盒.方法采用碱性磷酶标记重组gp120、gp41和合成肽gp6抗原,金刚烷胺增敏化学发光体系作为酶底物,采用ELISA双抗原夹心法检测.结果敏感度为0.1 ncu;检测范围为0.1～100 ncu;HIV浓度为0.5、1.2、5.1、19.8 ncu时,批内变异系数3%～8%(n=20),批间变异系数5%～9%(n=20);与anti-HAV、anti-HBV、anti-HCV、anti-HEV无交叉反应;具有良好的稳定性,在1年的效期内(4℃保存)其整体变化幅度＜10%.结论该试剂盒灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性.
作者：买制刚；杨青；李振勇；李建军；屈凌波 刊期： 2005年第06期
目的观察丙酮处理的短棒状杆菌制剂的毒性和免疫激活功能.方法用丙酮脱脂方法去掉短棒状菌的部分外膜蛋白及附着在菌体上的杂蛋白,制成制剂,与现用短棒制剂同时进行异常毒性试验、毒性试验、脾激活试验、抑瘤试验.结果丙酮处理后短棒状制剂比原短棒状制剂的毒性反应明显降低,免疫激活功能明显提高.结论丙酮处理后的短棒状制剂质量明显提高.
作者：曹瑞堂；程晓耕；王桂荣；朱燕；杨林 刊期： 2005年第06期
目的探讨生物可降解材料聚乳酸-聚乙醇酸-聚乙二醇(PLGA-PEG)与血管平滑肌的细胞相容性,为可降解血管支架材料的研究提供依据.方法采用体外培养的兔血管平滑肌细胞种植在PLGA-PEG膜片上,用相差显微镜观察细胞的生长情况,每天计数,绘制细胞生长曲线,用MTT法测定细胞增殖指数,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果兔血管平滑肌细胞在PLGA-PEG膜片上生长良好,与对照组差异无显著意义;MTT法检测细胞增殖指数,与对照组差异无显著意义;流式细胞仪检测细胞周期显示对细胞增殖活性无明显影响.结论 PLGA-PEG与兔血管平滑肌细胞具有良好的细胞相容性,可以用于可降解血管支架的制备.
作者：邢玥；李淑梅；张基昌；景瑕斌；迟宝荣；徐效义 刊期： 2005年第06期
目的在CHO细胞中共表达二氢叶酸还原酶(DHFR)基因及人神经生长因子β亚基(β-hNGF)基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析.方法克隆DHFR和β-hNGF基因,测序,酶切,连接到真核表达载体pBudCE4.1中,构建人NGF基因重组表达质粒pBudCE4.1/DHFR/β-hNGF,经电转染法导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-DHFR-)中,经添加Zeocin抗生素和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)双筛选,获得了DHFR+细胞克隆.经MTX加压筛选高表达β-hNGF的CHO细胞株.SDS-PAGE、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定,并利用鸡胚背根神经节法检测表达蛋白的生物活性.结果人神经生长因子在CHO细胞中得到较高表达,表达量达0.3μg/ml,且表达产物具有良好的生物活性.结论为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了基础.
作者：陈勇；蒋琳；杨军；李萍；梁凌宇；沈心亮；谢云飞 刊期： 2005年第06期
目的进行治疗性肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的质量控制研究.方法用细胞计数、ELISA和FCM分别检测细胞生长、抗体生成速度和抗原结合活性;冻存细胞复苏后及体外传代3个月,检测抗体分泌稳定性和克隆阳性率;进行无菌检查、细胞核型和同工酶谱分析,了解细胞遗传稳定性、外源因子污染和细胞间交叉污染情况.结果肝癌单克隆抗体HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速度分别为0.047～0.052/h和1.1～1.4 pg/cell·h,与靶细胞FHCC98结合的阳性率达99%,平均荧光强度在200以上.冻存细胞复苏后及体外连续传代3个月后,其特异性抗体生成速度维持在1.0 pg/cell·h以上,培养上清抗体效价仍为1:1000.不同批次的生成细胞核型均符合杂交瘤细胞特征,外源因子检查阴性,无细胞间交叉污染.结论HAb18生产用种子细胞的细胞生长和抗体生成速率、抗体稳定性和特异性均符合已建立的规模化放大培养的种子细胞质控标准.
作者：李玲；米力；刘蓉；汪莉；徐力青；冯强；田蓉；陈志南 刊期： 2005年第06期
目的研究静压力对CHO细胞系DR1000L4N表达hGM-CSF的影响.方法应用25cm2T形瓶,装入5.0ml培养基,接种2.4×105cells/ml,在37℃、5%CO2孵箱中培养24h后,移入压力器中加压培养(0.1～0.9 Mpa),并分别检测细胞浓度和hGM-CSF的表达.结果当静压力从0.15 MPa升到0.9 MPa时,细胞的比生长速度几乎不受影响,而hGM-CSF的表达量从1.23×10-13 mg/cell·h提高到1.62×10-13 mg/cell·h.结论静压力可提高CHO细胞对hGM-CSF的表达.
作者：于玉根；傅水林；宫衡；高木睦 刊期： 2005年第06期
目的研究聚乙二醇(PEG)修饰重组人干扰素-β(rhIFN-β)的免疫原性和药物代谢动力学性质.方法按照rhIFN-β的临床治疗程序免疫家兔,分别用ELISA方法和中和实验法检测家兔血清中的抗体水平;给家兔单剂量注射rhIFN-β及其3种修饰物,建立ELISA双抗体夹心法,检测血清中样品浓度.结果 3种修饰物在家兔体内诱导产生的抗体水平均明显低于rhIFN-β诱导产生的抗体水平,半衰期分别较原来提高5.927倍、14.204倍和14.708倍.结论 PEG修饰rhIFN-β可明显降低其免疫原性,改善了rhIFN-β的药物代谢动力学性质.
作者：徐静；倪道明；张振龙 刊期： 2005年第06期
目的制备甲型肝炎病毒抗原定量参比品.方法依据<甲型肝炎灭活疫苗制造及检定规程>制备了1批甲肝病毒抗原参比品,并进行蛋白质含量测定、HAV蛋白纯度分析和酶标抗原含量标化.结果经纯化,杂蛋白去除率达99.9%,参比品的纯度大于95%;抗原含量在20～80EU/ml范围内,抗原含量的对数与其A值呈剂量-效应关系.结论该参比品可用于甲肝病毒ELISA定性及定量标定.
作者：刘建生；庞伟；孟明耀；马进；王萍；杨丽仙；陈统球；侯宗柳 刊期： 2005年第06期
目的观察人巨细胞病毒(HCMV)gB基因真核表达载体在小鼠中的免疫效果.方法大量提取目的质粒,分3个剂量组进行多点肌肉注射免疫小鼠,利用MTT法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,ELISA法检测小鼠血清中HCMV特异性抗体,中和试验检测小鼠血清中和抗体.结果 ELISA检测结果表明,与空白对照、空载体对照组相比,3个剂量组pcDNA3.1/gB质粒免疫后小鼠血浆中抗HCMV IgG抗体水平均明显增高(P＜0.05),中和抗体水平为1:20～1:40,而对照组血清中无中和抗体存在.淋巴细胞增殖指数免疫小鼠与正常小鼠差异无显著意义.结论已构建的HCMVgB基因真核表达载体可以诱导小鼠产生明显的体液免疫,为核酸疫苗研究奠定了基础.
作者：张中洋；李秀玲；何薇薇 刊期： 2005年第06期
1.临床资料患者,罗××,男,56岁.2004年3月27日消化道出血.查体:体温36.1℃,脉搏60次/min,呼吸18次/min,血压10.74/4.86 kPa.化验检查:RBC 1.82×1012 cells/L,Hb54g/L,WBC 4.5×109cells/L,总胆红素40.2 μmol/L,直接胆红素25.3μmol/L.临床诊断:消化道出血,伴有自身免疫溶血性贫血(AIHA).为纠正贫血需输血治疗,医院与数名献血者交叉配血,主次侧均出现凝集,送本站鉴定及交叉配血.
作者：胡继征 刊期： 2005年第06期
治疗性疫苗的用途主要是诱导抗原特异性T细胞反应,增强保护性细胞免疫应答.本文就各类治疗性疫苗的特点、应用情况、存在问题及研究趋势等做了全面综述.
作者：闫东梅；朱迅 刊期： 2005年第06期
目的在毕赤酵母中表达HBsAg/GM-CSF融合蛋白.方法利用PCR扩增HBsAg和GM-CSF基因,通过15个氨基酸的连接肽将两个片段连接,获得融合基因S-GM,克隆入酵母穿梭质粒pPIC9K中.将重组质粒9K-S-GM电转化毕赤酵母后,G418筛选,甲醇诱导,HBsAg/GM-CSF融合蛋白表达.经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测表达产物特异性.结果 PCR扩增的片段与预期大小一致,HBsAg/GM-CSF融合蛋白在毕赤酵母中获得了表达.Western blot检测,该融合蛋白同时具有HBsAg和GM-CSF的特异性.结论该融合蛋白的获得为提高乙肝疫苗的免疫原性奠定了科学基础.
作者：席晓蓉；李鼎锋；孙强明；杨芳；易山；孙茂盛 刊期： 2005年第06期
目的制备重组人干扰素-βSer17(rhIFN-βSer17),并检测其对SARS病毒的抑制作用.方法通过发酵收集菌体,经高压匀浆破碎收集包涵体、有机溶剂抽提、酸沉淀、柱层析纯化重组蛋白,通过细胞病变抑制法检测其对SARS病毒的抑制作用.结果研制的rhIFN-βSer17的纯度超过95%,比活性超过2.0×107 IU/mg蛋白,在体外对SARS病毒具有明显的抑制作用.结论已成功制备rhIFN-β Ser17,并在体外对SARS病毒具有抑制作用.
作者：张振龙；刘建源；杨云凯；邓宛明；崔春青；王淑芳；汤燕文；赵建英 刊期： 2005年第06期
目的通过对国产人血白蛋白制品的铝含量分析,使该制品适应即将执行的<中国药典>相关标准的要求.方法以<欧洲药典>的铝含量(200μg/L)为标准,采用原子吸收分光光度法检测制品中的铝含量.结果国内压滤生产的人血白蛋白制品合格率为54%,离心法为28%,生产工艺改进后,铝含量下降幅度平均为62%,且基本达到了欧洲药典的合格标准.结论国内人血白蛋白生产厂家通过对生产工艺的改进,铝含量完全可以控制在欧洲药典的合格标准内.
作者：肖林；程雅琴 刊期： 2005年第06期
献血者,男,39岁,在我站献血过程中,因其红细胞与抗-A、抗-B均不凝集,但血清凝集A、B、O红细胞,经进一步血清学检测和基因分析,确定为类孟买型ABhm,现报道如下.
作者：刘芳兰；王振卿；周海江 刊期： 2005年第06期
目的在大肠杆菌中高效表达SARS核衣壳蛋白.方法将已合成的SARS-CoV N蛋白基因片段,克隆至pUG18载体,与pET28质粒连接,转化大肠杆菌,进行SARS-CoV核衣壳融合蛋白表达.用SARS患者恢复期血清进行表达产物鉴定.用色谱方法进行表达产物的层析纯化.结果SARS病毒N基因在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量占总蛋白的30%以上;经三步纯化后纯度达90%以上.结论已获得了SARS核衣壳蛋白样品.
作者：李洋；王宣军；张秀霞；吉海滨；王志武；方勇；盛军 刊期： 2005年第06期
为分析甲肝病毒疫苗株(L-A-1株)在连续传代过程中的稳定性,选择了第11代(P11)和23代疫苗病毒进行部分核苷酸测序,通过对核苷酸序列和其氨基酸序列比较,来考察病毒的变异性.
作者：姜春来；王鹏富；刘景晔；刘大维 刊期： 2005年第06期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
